Omvendt genetik til at konstruere RNA-virusvarianter med positiv sans

1.1K Views

•

15:49 min

•

June 9th, 2022

DOI :

10.3791/63685-v

June 9th, 2022

•

1,072 Views

Shalini Soni¹, Shubhra Agarwal¹, Rakesh Aggarwal², Naga Suresh Veerapu¹

¹Virology Section, Department of Life Sciences, Shiv Nadar University, ²Gastroenterology, Sanjay Gandhi Postgraduate Institute of Medical Sciences

Chapters

0:04

Introduction

1:01

Genome‐Wide Substitution Mutagenesis of JFH1 Using Error‐Prone PCR

2:46

Estimation of the Proportion of Mutations in ep‐PCR Products (Mutant Libraries)

6:08

Viral RNA Transfection of the Huh7.5 Cell Line

7:57

Quantification of Virus Titers

11:59

Drug‐Resistant Viral Variant Selection

13:33

Results: Integration of ep‐PCR and Virus Reverse Genetics to Generate HCV Mutants

15:17

Conclusion

Transcript

Protokollen beskrevet her tillader generering af tilfældigt mutageniserede RNA-biblioteker i fuld længde af enkeltstrengede positive RNA-virale genomer op til 10 kilobyte i længden og udvælgelse af fænotyper af interesse under ønskede eksperimente

Summary

Protokollen beskriver en metode til at indføre kontrollerbar genetisk mangfoldighed i hepatitis C-virusgenomet ved at kombinere mutant RNA-syntese i fuld længde ved hjælp af fejlbehæftet PCR og omvendt genetik. Metoden giver en model for fænotypeselektion og kan bruges til 10 kb lange RNA-virusgenomer med positiv sans.

Explore More Videos

Omvendt genetik

RNA virus med positiv sans

f notyper af interesse

mutant RNA syntese i fuld l ngde FL MRS

bibliotek

genetisk mangfoldighed