La génétique inverse pour concevoir des variants du virus à ARN à sens positif

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June 9th, 2022

DOI :

10.3791/63685-v

June 9th, 2022

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Shalini Soni¹, Shubhra Agarwal¹, Rakesh Aggarwal², Naga Suresh Veerapu¹

¹Virology Section, Department of Life Sciences, Shiv Nadar University, ²Gastroenterology, Sanjay Gandhi Postgraduate Institute of Medical Sciences

Chapters

0:04

Introduction

1:01

Genome‐Wide Substitution Mutagenesis of JFH1 Using Error‐Prone PCR

2:46

Estimation of the Proportion of Mutations in ep‐PCR Products (Mutant Libraries)

6:08

Viral RNA Transfection of the Huh7.5 Cell Line

7:57

Quantification of Virus Titers

11:59

Drug‐Resistant Viral Variant Selection

13:33

Results: Integration of ep‐PCR and Virus Reverse Genetics to Generate HCV Mutants

15:17

Conclusion

Transcript

Le protocole décrit ici permet de générer des banques d’ARN pleine longueur mutagènes aléatoirement de génomes viraux à ARN simple brin positif jusqu’à 10 kilo-octets de longueur, et de sélectionner les phénotypes d’intérêt dans les conditions exp

Summary

Le protocole décrit une méthode permettant d’introduire une diversité génétique contrôlable dans le génome du virus de l’hépatite C en combinant la synthèse d’ARN mutant sur toute la longueur à l’aide de la PCR sujette aux erreurs et de la génétique inverse. La méthode fournit un modèle pour la sélection phénotypique et peut être utilisée pour les génomes de virus à ARN à sens positif de 10 kb de long.

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G n tique inverse

Virus ARN de sens positif

Variants

volution dirig e

G nome de l ARN

PCR sujette aux erreurs

Mutants viraux

Ph notypes d int r t

Synth se d ARN mutant pleine longueur FL MRS

Biblioth que

Diversit g n tique