Genome‐Wide Substitution Mutagenesis of JFH1 Using Error‐Prone PCR
2:46
Estimation of the Proportion of Mutations in ep‐PCR Products (Mutant Libraries)
6:08
Viral RNA Transfection of the Huh7.5 Cell Line
7:57
Quantification of Virus Titers
11:59
Drug‐Resistant Viral Variant Selection
13:33
Results: Integration of ep‐PCR and Virus Reverse Genetics to Generate HCV Mutants
15:17
Conclusion
Transcript
여기에 설명된 프로토콜은 최대 10KB 길이의 단일 가닥 양성 RNA 바이러스 게놈의 무작위로 돌연변이화된 전체 길이 RNA 라이브러리를 생성하고 원하는 실험 조건에서 관심 표현형을 선택할 수 있습니다. 이 기술은 클로닝이 필요 없는 접근 방식을 사용하여 짧은 시간에 다양한 수준의 유전적 다양성을 가진 전장 바이러스 RNA 라이브러리를 생성할 수 있습니다. 이 기술은 라이브러리 합성을 위해 저렴하고 널리 사용 가능한 시약을 사용합니다.</
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이 프로토콜은 오류가 발생하기 쉬운 PCR과 역유전학을 사용하여 전장 돌연변이 RNA 합성을 결합하여 C형 간염 바이러스 게놈에 제어 가능한 유전적 다양성을 도입하는 방법을 설명합니다. 이 방법은 표현형 선택을 위한 모델을 제공하며 10kb 길이의 양성 감지 RNA 바이러스 게놈에 사용할 수 있습니다.