Name: assessing mitochondrial function in sciatic nerve by high-resolution respirometry
Uploaded: 2022-05-05T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Mitochondrial Function in Sciatic Nerve by High-Resolution Respirometry at JoVE.com

وقد مول هذه الدراسة كل من المعهد السريبيليهيرا، ومؤسسة إنفاذ الحقوق الدستورية في ريو دي جانيرو، والمجلس الوطني للتنمية المدنية والتكنولوجية (CNPq)، وتنسيقية الأعمال الصديقة للفيزياء في نيفيل العليا - البرازيل. نحن ممتنون للدكتور أنطونيو غالينا فيلهو والدكتورة مونيكا مونتيرو لوميلي والدكتور كلاوديو ماسودا على الدعم مع مرافق المختبر ، والدكتورة مارثا سورنسون على التعليقات اللطيفة والقيمة في تحسين المقالة.

تمت الموافقة على هذا البروتوكول من قبل لجنة الأخلاقيات المعنية باستخدام الحيوانات في البحوث، CCS/UFRJ (CEUA-101/19)، والمبادئ التوجيهية للمعاهد الوطنية للصحة لرعاية واستخدام التجارب. يتم عزل العصب الوركي من الفئران الذكور C57BL / 6 البالغة من العمر أربعة أشهر ، ويتم قتلها الرحيم عن طريق خلع عنق الرحم...

العديد من الأمراض أو الحالات المصاحبة للاعتلالات العصبية لديها خلل وظيفي في الميتوكوندريا كعامل خطر. يعد تقييم وظيفة الميتوكوندريا في الأعصاب الطرفية أمرا ضروريا لتوضيح كيفية عمل الميتوكوندريا في هذه الحالات التنكسية العصبية. تقييم وظيفة الميتوكوندريا شاق بسبب صعوبة طريقة العزل وندرة ...

الميتوكوندريا ضرورية للحفاظ على صلاحية الخلية وأداء العديد من وظائف الخلية مثل استقلاب الطاقة (الجلوكوز والأحماض الأمينية والدهون ومسارات استقلاب النيوكليوتيدات). باعتبارها الموقع الرئيسي لإنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) ، فإن الميتوكوندريا مركزية في العديد من عمليات إشارات الخلايا مثل موت الخلايا المبرمج وتشارك في تخليق مجموعات الحديد والكبريت (Fe-S) ، واستيراد بروتين الميتوكوندريا ونضجه ، والحفاظ على الجينوم والريبوسومات1،2،3. يتم التحكم في شبكة ديناميكيات غشاء الميتوكوندريا عن طريق عمليات الاندماج والانشطار ، ولديهم أيضا آلات لمراقبة الجودة و mitophagy 4,5,6.
يرتبط خلل الميتوكوندريا بظهور العديد من الحالات المرضية مثل السرطان والسكري والسمنة7. يتم الكشف عن اضطرابات في وظيفة الميتوكوندريا في الاضطرابات العصبية التنكسية التي تؤثر على الجهاز العصبي المركزي ، كما هو الحال في مرض الزهايمر 8,9 ، ومرض باركنسون 10,11 ، والتصلب الجانبي الضموري 12,13 ، ومرض هنتنغتون 14,15 . في الجهاز العصبي المحيطي ، لوحظ فقدان وظيفة الميتوكوندريا في المحاور العصبية في الاعتلالات العصبية المناعية ، مثل متلازمة غيلان باريه 16,17 ، وبالاقتران مع ارتفاع إنتاج ROS الميتوكوندريا في المحاور العصبية ، تؤدي هذه الأحداث إلى تنشيط كيناز MAP في خلايا شوان18. هذا يدل على أن فسيولوجيا الميتوكوندريا قد تكون ضرورية ليس فقط لخلية خاصة بالموقع ، ولكن لنسيج بأكمله. في اعتلال الأعصاب الحسي البعيد المرتبط بفيروس نقص المناعة البشرية (HIV-DSP) ، يكون للميتوكوندريا دور في الآلية التي يسمح من خلالها المنشط العابر لبروتين النسخ (HIV-TAT) لفيروس نقص المناعة البشرية بالتكاثر بكفاءة ، بالإضافة إلى العديد من الأدوار الأخرى في التسبب في عدوى فيروس نقص المناعة البشرية19,20.
ظهر تقييم فسيولوجيا الميتوكوندريا العصبية الوركية كهدف أساسي للتحقيق في الاعتلال العصبي7،21،22. في الاعتلال العصبي السكري ، تشير التحليلات البروتينية والأيضية إلى أن معظم التغيرات الجزيئية في مرض السكري تؤثر على الفسفرة التأكسدية للميتوكوندريا الوركية للعصب الوركي واستقلاب الدهون7. يبدو أن هذه التعديلات هي أيضا علامات مبكرة لمرض السكري الناجم عن السمنة21. في نموذج الفأر للاعتلال العصبي المؤلم الناجم عن العلاج الكيميائي ، يتم الكشف عن ضعف الميتوكوندريا في العصب الوركي كانخفاض في الفسفرة التأكسدية22 ، وانخفاض في أنشطة مجمعات الميتوكوندريا ، وإمكانات الغشاء ، ومحتوى ATP23. ومع ذلك ، على الرغم من أن العديد من المجموعات قد استشهدت بخلل الميتوكوندريا في الاعتلالات العصبية ، إلا أن هذه الدراسات تقتصر على قياسات النشاط في مجمعات الميتوكوندريا دون الحفاظ على أغشية الميتوكوندريا ، وتفتقر إلى تقييم سلامة الميتوكوندريا أو قياسات محتوى ATP كمعلمة لإنتاج ATP الميتوكوندريا. بشكل عام ، يتطلب التقييم السليم لاستهلاك أكسجين الميتوكوندريا وإنتاج ROS عزل الميتوكوندريا عن طريق الطرد المركزي التفاضلي في تدرج percoll / sucrose. يمكن أن يكون عزل الميتوكوندريا أيضا عاملا مقيدا للأنسجة العصبية الوركية بسبب الكمية الكبيرة من الأنسجة اللازمة وفقدان الميتوكوندريا وتعطيلها.
تهدف هذه الدراسة إلى توفير بروتوكول لقياس فسيولوجيا الميتوكوندريا مثل استهلاك أكسجين الميتوكوندريا وإنتاج ROS في العصب الوركي ، والحفاظ على أغشية الميتوكوندريا ودون الحاجة إلى عزل الميتوكوندريا. تم تكييف هذا البروتوكول من قياسات استهلاك الأكسجين في ألياف العضلات المتخلل24 بواسطة قياس التنفس عالي الدقة (HRR). تتمثل مزايا هذا الإجراء في إمكانية تقييم الميتوكوندريا في كميات صغيرة من الأنسجة مثل العصب الوركي وتقييم معلمات الميتوكوندريا في الموقع ، وبالتالي الحفاظ على بيئة الميتوكوندريا وهيكلها وملف تعريف الطاقة الحيوية ، للحصول على نتيجة جديرة بالثقة من الناحية الفسيولوجية. تم تحديد الحالات التنفسية للميتوكوندريا باستخدام ركائز ومثبطات بعد نفاذية العصب الوركي لتقييم الطاقة الحيوية للميتوكوندريا ومعامل السيتوكروم ج بشكل صحيح لسلامة غشاء الميتوكوندريا ، مما يوفر دليلا لخطوات تقييم نظام نقل إلكترون الميتوكوندريا (ETS) وحساب المعلمات الأساسية. يمكن أن توفر هذه الدراسة أدوات للإجابة على الأسئلة في الآليات الفسيولوجية المرضية التي يتورط فيها استقلاب العصب الوركي ، مثل الاعتلالات العصبية المحيطية.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adenosine 5&#39; triphosphate dissodium salt hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A26209</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenosine 5&#8242;-diphosphate sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2754</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amplex Red Reagent</td>
			<td>Thermo Fisher scientific</td>
			<td>A12222</td>
			<td>Amplex Red is prepared in DMSO accordindly with product datasheet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antimycin A (from Streptomyces sp.)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A8674</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7030</td>
			<td>heat shock fraction, protease free, fatty acid free, essentially globulin free, pH 7, &#8805;98%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium carbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C6763</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbonyl cyanide 4-(trifluoromethoxy)phenylhydrazone (FCCP)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C2920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytochrome c</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C7752</td>
			<td>(from equine heart; small hemeprotein)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DataLab version 5.1.1.91</td>
			<td>OROBOROS INSTRUMENTS, Austria</td>
			<td></td>
			<td>Copyright (c) 2002 - 13 by Dr. Erich Gnaiger</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital orbital microplate shaker 120V</td>
			<td>Thermo Fisher scientific</td>
			<td>88882005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DL-Dithiothreitol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>43819</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGTA sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E8145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HAM80075</td>
			<td>10 uL, 25 uL and 50 uL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogen peroxide solution 30% W/W</td>
			<td>Merck</td>
			<td>H1009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imidazole</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I2399</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-(&#8722;)-Malic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M7397</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride hexahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M2393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MES sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M3885</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting forceps, curved</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting forceps, straight</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O2K - Filter set Amplex Red</td>
			<td>OROBOROS INSTRUMENTS, Austria</td>
			<td>44321-01</td>
			<td>Fasching M, Sumbalova Z, Gnaiger E (2013) O2k-Fluorometry: HRR and H2O2 production in mouse brain mitochondria. Mitochondr Physiol Network 17.17.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O2K - Fluorescence LED2 - module component Fluorscence-Sensor Green</td>
			<td>OROBOROS INSTRUMENTS, Austria</td>
			<td>44210-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oligomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>O4876</td>
			<td>(from Streptomyces diastatochromogenes; mixture of oligomycins A, B, and C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OROBOROS Oxygraph-2k</td>
			<td>OROBOROS INSTRUMENTS, Austria</td>
			<td>http://www.oroboros.at</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Palmitoylcarnitine (Palmitoyl-DL-carnitine-HCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4509</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peroxidase from horseradish</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P8375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes, polystyrene</td>
			<td>MERCK</td>
			<td>P5606</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphocreatine disodium salt hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7936</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium dihydrogen phosphate monobasic</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>PHR1330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium hydroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>221473</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotenone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R8875</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saponin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SAE0073</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5280</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium succinate dibasic hexahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taurine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T0625</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing mitochondrial function in sciatic nerve by high-resolution respirometry

يصاحب خلل الميتوكوندريا في الأعصاب الطرفية العديد من الأمراض المرتبطة بالاعتلال العصبي المحيطي ، والذي يمكن أن يحدث لأسباب متعددة ، بما في ذلك أمراض المناعة الذاتية والسكري والالتهابات والاضطرابات الموروثة والأورام. يمكن أن يكون تقييم وظيفة الميتوكوندريا في الأعصاب الطرفية للفأر أمرا صعبا بسبب صغر حجم العينة ، وعدد محدود من الميتوكوندريا الموجودة في الأنسجة ، ووجود غمد المايلين. تقلل التقنية الموصوفة في هذا العمل من هذه التحديات باستخدام بروتوكول نفاذية فريد من نوعه مقتبس من بروتوكول يستخدم لألياف العضلات ، لتقييم وظيفة الميتوكوندريا العصبية الوركية بدلا من عزل الميتوكوندريا عن الأنسجة. من خلال قياس إنتاج الأنواع التفاعلية الفلورية باستخدام Amplex Red / Peroxidase ومقارنة ركائز ومثبطات الميتوكوندريا المختلفة في الأعصاب النفاذة للسابونين ، كان من الممكن اكتشاف حالات الجهاز التنفسي للميتوكوندريا ، وأنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) ، ونشاط مجمعات الميتوكوندريا في وقت واحد. لذلك ، فإن الطريقة المعروضة هنا تقدم مزايا مقارنة بتقييم وظيفة الميتوكوندريا بواسطة تقنيات أخرى.

يتم تمثيل استهلاك أكسجين الميتوكوندريا بواسطة العصب الوركي المتخلل في الشكل 2. يمثل التتبع الأحمر تدفق O2 لكل وحدة كتلة في pmol / s.mg. بعد تسجيل استهلاك الأكسجين القاعدي مع الركائز الداخلية (التنفس الروتيني) ، يتم حقن السكسينات (SUCC) لتسجيل التنفس المعقد الثاني (نازعة هيدرو...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Mitochondrial Function in Sciatic Nerve by High-Resolution Respirometry at JoVE.com

Assessing Mitochondrial Function in Sciatic Nerve by High-Resolution Respirometry

يحدد قياس التنفس عالي الدقة إلى جانب مستشعرات التألق استهلاك أكسجين الميتوكوندريا وتوليد أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS). يصف هذا البروتوكول تقنية لتقييم معدلات التنفس الميتوكوندريا وإنتاج ROS في العصب الوركي المتغلغل.

تقييم وظيفة الميتوكوندريا في العصب الوركي عن طريق قياس التنفس عالي الدقة

Mitochondrial dysfunction in peripheral nerves accompanies several diseases associated with peripheral neuropathy, which can be triggered by multiple ...

يسمح هذا البروتوكول بتقييم وظيفة الميتوكوندريا داخل العصب عن طريق تقسيم الميتوكوندريا المعزولة ، وهو إجراء صعب في نسيج صغير يحتوي على عدد محدود من الميتوكوندريا. توفر هذه التقنية إمكانية تحليل وظائف الميتوكوندريا مثل استهلاك الأكسجين وإنتاج ROS في وقت واحد في الميتوكوندريا المحفوظة في الموقع. مع العديد من الركائز والمثبطات وبروتوكولات تصميم غير المقترنة.تشترك العديد من الأمراض في وظيفة الميتوكوندريا ، ولا سيما الاعتلالات العصبية الناجمة عن مرض السكري من النوع الثاني أو العلاج الكيميائي. في هذه الأمراض ، تعد ضعف الفسفرة التأكسدية للميتوكوندريا هي العلامة الوحيدة التي تملي تطور المرض. توفر هذه الطريقة نظرة ثاقبة في علم الأحياء العصبية والكيمياء الحيوية وعلم الأدوية ، مع التحقيق في آليات مرض الميتوكوندريا ، والبحث عن العلاجات ، مثل معززات الميتوكوندريا أو آلام الأعصاب المخففة.للبدء ، قم بمعايرة مستشعرات الأكسجين عن طريق سحب 2.1 ملليلتر من المخزن المؤقت MR في كل غرفة. أغلقه بالسدادات واسحب الهواء إلى الغرفة حتى يتم تشكيل فقاعة. يحرك المزيج على درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة في وضع المعايرة حتى يستقر تدفق الأكسجين لكل كتلة.باستخدام برنامج HRR ، قم بإجراء معايرة الهواء لمستشعرات الأكسجين المستقطبة وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. لإعداد الأنسجة ، ضع العصب الوركي في طبق بتري مع ما يكفي من TP العازلة لتغطيته. امسك أحد طرفي العصب باستخدام ملقط ومع زوج آخر من الملقط اسحب الحزم العصبية أفقيا.أولا ، انقل الأنسجة المعروضة إلى طبق صغير يحتوي على مخزن مؤقت TP ملليلتر واحد لتخلل الأنسجة. لبدء النفاذية ، انقل الأنسجة مع الملقط إلى طبق آخر يحتوي على ملليلتر واحد من TP buffer ، يحتوي على 50 ميكروغرام لكل ملليلتر من الصابونين. ضع الطبق في شاكر صفيحة صغيرة واتركه يحرك بلطف لمدة 30 دقيقة.ثم ، انقل الأنسجة مع الملقط إلى طبق طازج يحتوي على مخزن مؤقت MR ملليلتر واحد ، واتركه يحرك بلطف لمدة 10 دقائق. انقل الأنسجة باستخدام الملقط إلى غرفة HRR معايرة. املأ غرف HRR ب 2.1 ملليلتر من المخزن المؤقت MR.أضف Amplex Red و peroxidase إلى تركيز نهائي من خمسة ميكرومولار ، ووحدتين لكل ملليلتر ، على التوالي. ثم أضف العصب الوركي القابل للاختراق. قم بتوصيل مستشعرات الفلورسنت الخاصة بالجهاز.ثم ، أطفئ الأضواء في قسم التحكم في البرنامج وانقر فوق الاتصال ب oxygraph"انتقل إلى تحرير البروتوكولات" في البرنامج وأدخل وزن الأنسجة. انتقل إلى التخطيط واختر خيار التدفق المحدد لكل عينة وحدة. ثم حدد المؤامرات للوصول في وقت واحد إلى قراءة استهلاك الأكسجين ، وإذا لزم الأمر ، إنتاج بيروكسيد الهيدروجين.انتظر لمدة 10 دقائق تقريبا. حقن نبضتين من بيروكسيد الهيدروجين ، كل واحدة إلى تركيز نهائي من 260 ميكرومولار لمعايرة الغرفة. حقن 20 ميكرولتر من السكسينات ، وهي ركيزة مجمع الميتوكوندريا II ، لتنشيط نظام نقل إلكترون الميتوكوندريا.أضف 20 ميكرولتر من ADP لتنشيط توليف ATP. في التسلسل ، أضف خمسة ميكرولترات من السيتوكروم c كمؤشر على سلامة الغشاء. معايرة مع aliquots من 0.2 ميكروغرام لكل ملليلتر من oligomycin حتى لا يلاحظ أي انخفاض آخر في استهلاك الأكسجين.معايرة مع aliquots من 0.5 ميكرومول لكل لتر FCCP ، والميتوكوندريا غير المقترنة ، حتى لا يلاحظ أي زيادة أخرى في استهلاك الأكسجين. لإنهاء التجربة ، قم بحقن ميكرولترين من antimycin A ، وقم بتركيز نهائي قدره خمسة ملليمولات وانتظر حتى يستقر التدفق. انتقل إلى شريط الأوامر.البحث عن الحواس المتعددة"في البرنامج. انقر فوق عنصر التحكم"ثم اضغط على حفظ الملف"وقطع الاتصال. افتح الملف المحفوظ وحدد تدفق الأكسجين لكل صواني كتلة للحصول على نتائج استهلاك الأكسجين التجريبية.حدد النافذة يدويا بين الحقن عن طريق الضغط على زر الماوس الأيسر shift plus left. انتقل إلى العلامات، وحدد الإحصائيات لتصور النتائج لكل حقنة من الركائز والمثبطات وبروتوكول فك الاقتران. لإنتاج بيروكسيد الهيدروجين تنفيذ نفس الإجراء مع تتبع منحدر أمبير.أدى الانخفاض في إمكانات الغشاء التي يعززها نشاط سيثاز ATP إلى تسريع استهلاك الأكسجين. إن إضافة السيتوكروم C الخارجي المنشأ لم يعزز سوى الحد الأدنى من تحفيز التنفس ، مما يشهد على سلامة الغشاء الخارجي للميتوكوندريا لهذا التحضير. تم تسجيل تدفقات الأكسجين المطلقة ولوحظ زيادة بنسبة 6.3٪ فقط في التنفس ، مما يشير إلى نوعية جيدة من إعداد الأنسجة.تم قياس استهلاك الأكسجين وإنتاج ROS في وقت واحد في وجود ركائز مختلفة توفر الوقود لنظام نقل الإلكترون. إضافة البيروفات والمالات لمجمع الميتوكوندريا أنا زيادة التنفس. وإضافة المزيد من السكسينات للمجمع II يزيد أيضا من استهلاك الأكسجين.لذلك يمكن اختبار ركائز أخرى. كما زاد إنتاج ROS ، مما يشير إلى تسرب الأكسجين من نظام نقل الإلكترون. أدت إضافة الأدينوسين ثنائي الفوسفات في تركيز التشبع إلى زيادة استهلاك الأكسجين مما أدى إلى تكوين ATP ، وتقليل إنتاج ROS.في المقابل ، قللت معايرة الأوليغو من استهلاك الأكسجين وزادت من إنتاج ROS. هذا يشير إلى أن العصب الوركي المتخلل يمكن أن يكرر العلاقة القياسية في فسيولوجيا الميتوكوندريا. تؤكد إضافة FCCP والريتينون ، المتوافقة مع التغيرات المتوقعة في تدفق الأكسجين ، أن فسيولوجيا الميتوكوندريا وملف الطاقة الحيوية قد تم الحفاظ عليهما في العصب الوركي المتغلغل.الخطوة الأكثر أهمية هي إعداد قسم الأنسجة بلطف ، وضمان تنظيف جميع فتحات الغرفة بشكل صحيح. يمكن أن تكون التعديلات في وظيفة الميتوكوندريا بسبب خلل وظيفي أو انخفاض عدد الميتوكوندريا. لذلك يوصى باستخدام نشاط synthase المذكور وتأكيد محتوى الحمض النووي للميتوكوندريا بواسطة PCR.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

باستخدام سقالة الليبوزومات لإعادة تفاعلات البروتين البروتين، الدهون القريب<em&gt; في المختبر</em

Studies of integral membrane proteins in vitro are frequently complicated by the presence of a hydrophobic transmembrane domain. Further complicating ...

High-resolution Single Particle Analysis from Electron Cryo-microscopy Images Using SPHIRE

عالية الدقة تحليل الجسيمات واحد من البريد الإلكتروني المجهر الصور باستخدام سفير

SPHIRE (SPARX for High-Resolution Electron Microscopy) is a novel open-source, user-friendly software suite for the semi-automated processing of single ...

Measuring Liver Mitochondrial Oxygen Consumption and Proton Leak Kinetics to Estimate Mitochondrial Respiration in Holstein Dairy Cattle

قياس استهلاك الأوكسجين المتقدرية الكبد وحركية تسرب بروتون لتقدير التنفس المتقدرية في الأبقار الحلوب هولشتاين

Oxygen consumption, proton motive force (PMF) and proton leak are measurements of mitochondrial respiration, or how well mitochondria are able to convert ...

Human Peripheral Blood Neutrophil Isolation for Interrogating the Parkinson's Associated LRRK2 Kinase Pathway by Assessing Rab10 Phosphorylation

الإنسان المحيطية عزل العدلات الدم لاستجواب باركنسون المرتبطة LRRK2 مسار كيناز من خلال تقييم Rab10 الفوسفور

The leucine rich repeat kinase 2 (LRRK2) is the most frequently mutated gene in hereditary Parkinson&#8217; disease (PD) and all pathogenic LRRK2 ...

High-Resolution Complexome Profiling by Cryoslicing BN-MS Analysis

التنميط العالي الاستبانة بواسطة Cryoslicing BN-MS التحليل

Proteins generally exert biological functions through interactions with other proteins, either in dynamic protein assemblies or as a part of stably formed ...

Routine Collection of High-Resolution cryo-EM Datasets Using 200 KV Transmission Electron Microscope

الجمع الروتيني لمجموعات بيانات التبريد EM عالية الدقة باستخدام المجهر الإلكتروني الناقل 200 كيلو فولت

Cryo-electron microscopy (cryo-EM) has been established as a routine method for protein structure determination during the past decade, taking an ...

High-Resolution Neutron Spectroscopy to Study Picosecond-Nanosecond Dynamics of Proteins and Hydration Water

مطيافية نيوترونية عالية الدقة لدراسة ديناميكيات بيكو ثانية-نانوثانية للبروتينات ومياه الترطيب

Neutron scattering offers the possibility to probe the dynamics within samples for a wide range of energies in a nondestructive manner and without ...

Advancing High-Resolution Imaging of Virus Assemblies in Liquid and Ice

تطوير التصوير عالي الدقة لتجميعات الفيروسات في السائل والجليد

Interest in liquid-electron microscopy (liquid-EM) has skyrocketed in recent years as scientists can now observe real-time processes at the nanoscale. It ...

High-Throughput Quantification of the Synthesis and Distribution of mtDNA

High-Throughput Image-Based Quantification of Mitochondrial DNA Synthesis and Distribution

High-Throughput Image-Based Quantification of Mitochondrial DNA Synthesis and Distribution (Video) | JoVE 

القياس الكمي عالي الإنتاجية القائم على الصور لتخليق وتوزيع الحمض النووي للميتوكوندريا

The vast majority of cellular processes require a continuous supply of energy, the most common carrier of which is the ATP molecule. Eukaryotic cells ...

Stable Isotope Tracing & LC-MS Analysis to Measure DHODH and SDH Activities

Oxygen-Independent Assays to Measure Mitochondrial Function in Mammals

Oxygen-Independent Assays to Measure Mitochondrial Function in Mammals (Video) | JoVE 

المقايسات المستقلة عن الأكسجين لقياس وظيفة الميتوكوندريا في الثدييات

The flow of electrons in the mitochondrial electron transport chain (ETC) supports multifaceted biosynthetic, bioenergetic, and signaling functions in ...