Name: assessing mitochondrial function in sciatic nerve by high-resolution respirometry
Uploaded: 2022-05-05T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Mitochondrial Function in Sciatic Nerve by High-Resolution Respirometry at JoVE.com

Denne undersøgelse blev finansieret af Instituto Serrapilheira, Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro (FAPERJ), Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) og Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior-Brasil (CAPES). Vi er taknemmelige for Dr. Antonio Galina Filho, Dr. Monica Montero Lomeli og Dr. Claudio Masuda for støtten med laboratoriefaciliteter og Dr. Martha Sorenson for venlige og værdifulde kommentarer til forbedring af artiklen.

Denne protokol er godkendt af Den Etiske Komité for Anvendelse af Dyr i Forskning, CCS/UFRJ (CEUA-101/19), og National Institutes of Health retningslinjer for pasning og anvendelse af forsøgsdyr. Iskiasnerven er isoleret fra fire måneder gamle mandlige C57BL /6-mus, aflivet ved cervikal dislokation i henhold til de institutionelle retningslinjer. Protokoltrinnene er optimeret for at undgå forringelse af mitokondrie. Derfor blev kalibrering af polarografiske iltsensorer i denne protokol udført før dissektion og perm...

Flere sygdomme eller tilstande, der ledsager neuropatier, har mitokondrie dysfunktion som en risikofaktor. Evalueringen af mitokondriefunktionen i perifere nerver er afgørende for at belyse, hvordan mitokondrierne virker i disse neurodegenerative tilstande. Vurderingen af mitokondriefunktionen er besværlig på grund af vanskeligheden ved isolationsmetoden og manglen på materiale. Således er udviklingen af vævspermeabiliseringsteknikker, der ikke kræver isolering af mitokondrier, afgørende.
<p class="jove_conte...

Mitokondrier er afgørende for at opretholde celle levedygtighed og udføre talrige cellefunktioner såsom energimetabolisme (glukose, aminosyre, lipid og nukleotid metabolisme veje). Som det primære sted for produktion af reaktive iltarter (ROS) er mitokondrier centrale i flere cellesignaleringsprocesser såsom apoptose og deltager i syntesen af jern-svovl (Fe-S) klynger, mitokondrieproteinimport og modning og vedligeholdelse af deres genom og ribosomer 1,2,3. Mitokondriemembrandynamiknetværket styres af fusions- og fissionsprocesser, og de har også maskiner til kvalitetskontrol ogmitofagi 4,5,6.
Mitokondrie dysfunktion er forbundet med udseendet af flere patologiske tilstande såsom kræft, diabetes og fedme7. Forstyrrelser i mitokondriefunktionen påvises i neurodegenerative lidelser, der påvirker centralnervesystemet, som i Alzheimers sygdom 8,9, Parkinsons sygdom10,11, amyotrofisk lateral sklerose12,13 og Huntingtons sygdom14,15 . I det perifere nervesystem observeres tab af mitokondriefunktion i axoner i immunneuropatier, såsom Guillain-Barré syndrom16,17, og i forbindelse med høj mitokondrie ROS-produktion i axoner fører disse begivenheder til MAP Kinase-aktivering i Schwann-celler18. Dette viser, at mitokondriefysiologi kan være afgørende ikke kun for en stedsspecifik celle, men for et helt væv. I HIV-associeret distal sensorisk polyneuropati (HIV-DSP) har mitokondrier en rolle i den mekanisme, hvormed transaktivatoren af transkriptionsprotein (HIV-TAT) tillader HIV at replikere effektivt, såvel som flere andre roller i HIV-infektionspatogenese19,20.
Evaluering af iskiasnerven mitokondrie fysiologi har vist sig som et væsentligt mål for undersøgelse af neuropati 7,21,22. I diabetisk neuropati tyder proteomiske og metabolomiske analyser på, at de fleste molekylære ændringer i diabetes påvirker iskiasnerven mitokondriel oxidativ phosphorylering og lipidmetabolisme7. Disse ændringer synes også at være tidlige tegn på fedme-induceret diabetes21. I en musemodel af kemoterapi-induceret smertefuld neuropati detekteres mitokondrieforringelse i iskiasnerven som et fald i oxidativ phosphorylering22 og en reduktion af mitokondriekomplekser aktiviteter, membranpotentiale og ATP-indhold23. Selvom flere grupper har citeret mitokondrie dysfunktion i neuropatier, er disse undersøgelser begrænset til målinger af aktivitet i mitokondriekomplekser uden bevarelse af mitokondriemembranerne, manglende evaluering af mitokondrieintegritet eller målinger af ATP-indhold som parameter for mitokondrie-ATP-produktion. Generelt kræver en korrekt vurdering af mitokondrie iltforbrug og ROS-produktion isolering af mitokondrier ved differentiel centrifugering i en percoll / saccharosegradient. Isolering af mitokondrier kan også være en begrænsende faktor for iskiasnervevæv på grund af den store mængde væv, der er nødvendig, og mitokondrier tab og forstyrrelse.
Denne undersøgelse har til formål at tilvejebringe en protokol til måling af mitokondriefysiologi som mitokondrie iltforbrug og ROS-produktion i iskiasnerven, bevare mitokondriemembraner og uden behov for isolering af mitokondrier. Denne protokol er tilpasset fra iltforbrugsmålinger i permeabiliserede muskelfibre24 ved respirometri med høj opløsning (HRR). Fordelene ved denne procedure er muligheden for at evaluere mitokondrier i små mængder væv såsom iskiasnerven og evaluere mitokondrieparametre in situ og derved bevare mitokondriemiljøet, strukturen og den bioenergetiske profil for at opnå et fysiologisk pålideligt resultat. De mitokondrielle respiratoriske tilstande blev bestemt med substrater og hæmmere efter iskiasnervepermeabilitet for korrekt at vurdere mitokondriebioenergetik og cytokrom c-koefficient for mitokondriemembranintegritet, hvilket giver en vejledning til trin i mitokondrieelektrontransportsystemet (ETS) evaluering og beregning af væsentlige parametre. Denne undersøgelse kan give værktøjer til at besvare spørgsmål i patofysiologiske mekanismer, hvor iskiasnervenmetabolisme er impliceret, såsom perifere neuropatier.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adenosine 5&#39; triphosphate dissodium salt hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A26209</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenosine 5&#8242;-diphosphate sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2754</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amplex Red Reagent</td>
			<td>Thermo Fisher scientific</td>
			<td>A12222</td>
			<td>Amplex Red is prepared in DMSO accordindly with product datasheet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antimycin A (from Streptomyces sp.)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A8674</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7030</td>
			<td>heat shock fraction, protease free, fatty acid free, essentially globulin free, pH 7, &#8805;98%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium carbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C6763</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbonyl cyanide 4-(trifluoromethoxy)phenylhydrazone (FCCP)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C2920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytochrome c</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C7752</td>
			<td>(from equine heart; small hemeprotein)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DataLab version 5.1.1.91</td>
			<td>OROBOROS INSTRUMENTS, Austria</td>
			<td></td>
			<td>Copyright (c) 2002 - 13 by Dr. Erich Gnaiger</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital orbital microplate shaker 120V</td>
			<td>Thermo Fisher scientific</td>
			<td>88882005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DL-Dithiothreitol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>43819</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGTA sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E8145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HAM80075</td>
			<td>10 uL, 25 uL and 50 uL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogen peroxide solution 30% W/W</td>
			<td>Merck</td>
			<td>H1009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imidazole</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I2399</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-(&#8722;)-Malic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M7397</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride hexahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M2393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MES sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M3885</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting forceps, curved</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting forceps, straight</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O2K - Filter set Amplex Red</td>
			<td>OROBOROS INSTRUMENTS, Austria</td>
			<td>44321-01</td>
			<td>Fasching M, Sumbalova Z, Gnaiger E (2013) O2k-Fluorometry: HRR and H2O2 production in mouse brain mitochondria. Mitochondr Physiol Network 17.17.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O2K - Fluorescence LED2 - module component Fluorscence-Sensor Green</td>
			<td>OROBOROS INSTRUMENTS, Austria</td>
			<td>44210-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oligomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>O4876</td>
			<td>(from Streptomyces diastatochromogenes; mixture of oligomycins A, B, and C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OROBOROS Oxygraph-2k</td>
			<td>OROBOROS INSTRUMENTS, Austria</td>
			<td>http://www.oroboros.at</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Palmitoylcarnitine (Palmitoyl-DL-carnitine-HCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4509</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peroxidase from horseradish</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P8375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes, polystyrene</td>
			<td>MERCK</td>
			<td>P5606</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphocreatine disodium salt hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7936</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium dihydrogen phosphate monobasic</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>PHR1330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium hydroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>221473</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotenone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R8875</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saponin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SAE0073</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5280</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium succinate dibasic hexahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taurine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T0625</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing mitochondrial function in sciatic nerve by high-resolution respirometry

Mitokondrie dysfunktion i perifere nerver ledsager flere sygdomme forbundet med perifer neuropati, som kan udløses af flere årsager, herunder autoimmune sygdomme, diabetes, infektioner, arvelige lidelser og tumorer. Vurdering af mitokondriefunktion i musens perifere nerver kan være udfordrende på grund af den lille prøvestørrelse, et begrænset antal mitokondrier, der er til stede i vævet, og tilstedeværelsen af en myelinskede. Teknikken beskrevet i dette arbejde minimerer disse udfordringer ved at bruge en unik permeabiliseringsprotokol tilpasset fra en, der anvendes til muskelfibre, til at vurdere iskiasnervens mitokondriefunktion i stedet for at isolere mitokondrierne fra vævet. Ved at måle fluorimetrisk reaktiv artsproduktion med Amplex Red/Peroxidase og sammenligne forskellige mitokondrie substrater og inhibitorer i saponinpermeabiliserede nerver var det muligt at detektere mitokondrie respiratoriske tilstande, reaktive iltarter (ROS) og aktiviteten af mitokondriekomplekser samtidigt. Derfor giver metoden, der præsenteres her, fordele i forhold til vurderingen af mitokondriefunktionen ved andre teknikker.

Mitokondrie iltforbrug af den permeabiliserede iskiasnerve er repræsenteret i figur 2. Det røde spor repræsentererO2-fluxen pr. masseenhed i pmol/s.mg. Efter registrering af et basalt iltforbrug med endogene substrater (rutinemæssig respiration) injiceres succinat (SUCC) for at registrere kompleks II (succinat dehydrogenase) -drevet respiration, hvilket resulterer i en stigning i iltforbruget. I rækkefølge tilsættes en mættende koncentration af ADP, der aktiverer ATP-synta...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Mitochondrial Function in Sciatic Nerve by High-Resolution Respirometry at JoVE.com

Assessing Mitochondrial Function in Sciatic Nerve by High-Resolution Respirometry

Respirometri med høj opløsning koblet til fluorescenssensorer bestemmer mitokondrie iltforbrug og reaktive iltarter (ROS) generation. Den nuværende protokol beskriver en teknik til at vurdere mitokondrie respiratoriske satser og ROS produktion i den permeabiliserede iskiasnerve.

Vurdering af mitokondriefunktion i iskiasnerven ved respirometri i høj opløsning

Mitochondrial dysfunction in peripheral nerves accompanies several diseases associated with peripheral neuropathy, which can be triggered by multiple ...

Denne protokol tillader evaluering af mitokondriefunktionen inde i nerven ved pakning af de isolerede mitokondrier, en udfordrende procedure i et lille væv, der indeholder et begrænset antal mitokondrier. Teknikken giver mulighed for at analysere mitokondrier funktioner som iltforbrug og ROS produktion samtidigt i en konserveret mitokondrier in situ. Med flere substrater, hæmmere og uncoupler designprotokoller.Flere sygdomme deler mitokondriefunktion, især neuropatier induceret af type to diabetes eller kemoterapi. I disse sygdomme er forringelser af mitokondriel oxidativ phosphorylering det eneste tegn, der dikterer sygdomsudvikling. Denne metode giver indsigt i neurobiologi, biokemi og farmakologi med undersøgelse af mitokondriesygdomsmekanismer, søgning efter terapier, såsom mitokondrieforstærkere eller forbedret neuropatisk smerte.Til at begynde med kalibreres iltfølerne ved at pipettere 2,1 ml MR-buffer i hvert kammer. Luk det med propperne og træk luft ind i kammeret, indtil der dannes en boble. Der omrøres ved 37 grader Celsius i en time i kalibreringstilstand, indtil iltfluxen pr. masse stabiliseres.Brug af HRR-softwaren til at udføre en luftkalibrering af de polarografiske iltfølere i henhold til producentens anvisninger. Til vævsforberedelse skal du placere iskiasnerven i en petriskål med tilstrækkelig TP-buffer til at dække den. Hold den ene ende af nerven med tang og med et andet par tang træk nervebundterne vandret ud.Overfør først det viste væv til en lille skål indeholdende en milliliter TP-buffer til vævspermeabilitet. For at starte permeabilisering overføres vævet med tang til en anden skål indeholdende en milliliter TP-buffer, der indeholder 50 mikrogram pr. Milliliter saponin. Læg pladen i en mikropladeryster og lad den røre forsigtigt i 30 minutter.Overfør derefter vævet med tang til en frisk skål indeholdende en milliliter MR-buffer, og lad det røre forsigtigt i 10 minutter. Overfør vævet med tang til et kalibreret HRR-kammer. Fyld HRR-kamrene med 2,1 ml MR-buffer.Tilsæt Amplex Rød og peroxidase til en slutkoncentration på henholdsvis fem mikromolar og to enheder pr. Milliliter. Tilføj derefter den permeable iskiasnerve. Fastgør instrumentets fluorescerende sensorer.Sluk derefter lysene i kontrolafsnittet i softwaren, og klik på Opret forbindelse til oxygraph"Gå for at redigere protokoller"i softwaren, og indsæt vævsvægten. Gå til layout, og vælg den specifikke flux pr. Prøveenhed "mulighed. Vælg derefter plots for samtidig at få adgang til iltforbrugsaflæsningen og om nødvendigt hydrogenperoxidproduktionen.Vent i ca. 10 minutter. Injicer to impulser af hydrogenperoxid, hver til en slutkoncentration på 260 mikromolar til kalibrering af kammeret. Injicer 20 mikroliter succinat, et mitokondriekompleks II substrat, for at aktivere mitokondrie elektrontransportsystemet.Tilføj 20 mikroliter ADP for at aktivere ATP-syntese. I rækkefølge tilsættes fem mikroliter cytokrom c som en indikator for membranintegritet. Titrere med alikvoter på 0,2 mikrogram pr. milliliter oligomycin, indtil der ikke observeres yderligere fald i iltforbruget.Titrere med aliquoter på 0,5 mikromol pr. liter FCCP, mitokondrie uncoupler, indtil der ikke observeres yderligere stigning i iltforbruget. For at afslutte eksperimentet injiceres to mikroliter antimycin A, lav en endelig koncentration på fem millimolar og vent på, at strømmen stabiliseres. Gå til kommandolinjen.Søg efter multisensorisk "i softwaren. Klik på kontrol "tryk derefter på gem fil" og afbryd forbindelsen. Åbn den gemte fil, og vælg iltfluxen pr. massebakke for at opnå resultaterne af det eksperimentelle iltforbrug.Vælg vinduet manuelt mellem injektioner ved at trykke på shift plus venstre museknap. Gå til mærker, og vælg statistik for at visualisere resultaterne for hver injektion af substrater, hæmmere og uncoupler-protokol. Til hydrogenperoxidproduktion udføres den samme procedure med amphældningssporet.Faldet i membranpotentialet fremmet af ATP-sythaseaktivitet accelererede iltforbruget. Tilsætningen af eksogen cytokrom C fremmede kun minimal stimulering af respiration, hvilket certificerede mitokondrie ydre membranintegritet for dette præparat. Absolutte iltstrømme blev registreret, og kun en stigning på 6,3% blev observeret i respiration, hvilket indikerer god kvalitet af vævspræparatet.Iltforbruget og ROS-produktionen blev målt samtidigt i nærværelse af forskellige substrater, der leverede brændstof til elektrontransportsystemet. Tilsætningen af pyruvat og malat til mitokondriekompleks I øgede respirationen. Og yderligere tilsætning af succinat til kompleks II øger også iltforbruget.Derfor kunne andre substrater testes. ROS-produktionen steg også, hvilket indikerer lækagen af ilt fra elektrontransportsystemet. Tilsætningen af adenosindiphosphat i mættende koncentration øgede iltforbruget, der drev ATP-dannelse og reducerede ROS-produktionen.I modsætning hertil reducerede oligotitrering iltforbruget og øgede ROS-produktionen. Dette antydede, at permeablized iskiasnerven kunne replikere standardrelationen i mitokondriefysiologi. Tilsætningen af FCCP og retinon, justeret med de forventede iltfluxændringer, bekræfter, at mitokondriefysiologi og bioenergetisk profil blev bevaret i den permeabliserede iskiasnerve.Det vigtigste trin er at forsigtigt forberede vævsafsnittet, sikre, at alle kammeråbninger rengøres ordentligt. Ændringer i mitokondriefunktionen kan skyldes dysfunktion eller et lavere mitokondrietal. derfor anbefales citeret syntaseaktivitet og mitokondrie-DNA-indholdsbekræftelse ved PCR.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Brug Stillads Liposomer at Rekonstituer Lipid-proksimal protein-protein interaktioner<em&gt; In vitro</em

Studies of integral membrane proteins in vitro are frequently complicated by the presence of a hydrophobic transmembrane domain. Further complicating ...

High-resolution Single Particle Analysis from Electron Cryo-microscopy Images Using SPHIRE

High-resolution single particle analyse fra elektronkryo-mikroskopi billeder ved hjælp af SPHIRE

SPHIRE (SPARX for High-Resolution Electron Microscopy) is a novel open-source, user-friendly software suite for the semi-automated processing of single ...

Measuring Liver Mitochondrial Oxygen Consumption and Proton Leak Kinetics to Estimate Mitochondrial Respiration in Holstein Dairy Cattle

Måling af leveren mitokondrie iltforbrug og Proton lækage kinetik for at anslå mitokondrie Respiration i Holsten malkekvæg

Oxygen consumption, proton motive force (PMF) and proton leak are measurements of mitochondrial respiration, or how well mitochondria are able to convert ...

Human Peripheral Blood Neutrophil Isolation for Interrogating the Parkinson's Associated LRRK2 Kinase Pathway by Assessing Rab10 Phosphorylation

Human perifert blod Neutrofile Isolation for at forhøre Parkinsons Associated LRRK2 Kinase Pathway ved at vurdere Rab10 fosforylering

The leucine rich repeat kinase 2 (LRRK2) is the most frequently mutated gene in hereditary Parkinson&#8217; disease (PD) and all pathogenic LRRK2 ...

High-Resolution Complexome Profiling by Cryoslicing BN-MS Analysis

Complexome-profilering med høj opløsning ved Cryoslicing BN-MS-analyse

Proteins generally exert biological functions through interactions with other proteins, either in dynamic protein assemblies or as a part of stably formed ...

Routine Collection of High-Resolution cryo-EM Datasets Using 200 KV Transmission Electron Microscope

Rutinemæssig indsamling af kryo-EM-datasæt i høj opløsning ved hjælp af 200 KV transmissionselektronmikroskop

Cryo-electron microscopy (cryo-EM) has been established as a routine method for protein structure determination during the past decade, taking an ...

High-Resolution Neutron Spectroscopy to Study Picosecond-Nanosecond Dynamics of Proteins and Hydration Water

Neutronspektroskopi med høj opløsning til undersøgelse af picosekund-nanosekunddynamik af proteiner og hydreringsvand

Neutron scattering offers the possibility to probe the dynamics within samples for a wide range of energies in a nondestructive manner and without ...

Advancing High-Resolution Imaging of Virus Assemblies in Liquid and Ice

Fremme af højopløsningsbilleddannelse af virussamlinger i væske og is

Interest in liquid-electron microscopy (liquid-EM) has skyrocketed in recent years as scientists can now observe real-time processes at the nanoscale. It ...

High-Throughput Quantification of the Synthesis and Distribution of mtDNA

High-Throughput Image-Based Quantification of Mitochondrial DNA Synthesis and Distribution

High-Throughput Image-Based Quantification of Mitochondrial DNA Synthesis and Distribution (Video) | JoVE 

Billedbaseret kvantificering med høj kapacitet af mitokondrie-DNA-syntese og -distribution

The vast majority of cellular processes require a continuous supply of energy, the most common carrier of which is the ATP molecule. Eukaryotic cells ...

Stable Isotope Tracing & LC-MS Analysis to Measure DHODH and SDH Activities

Oxygen-Independent Assays to Measure Mitochondrial Function in Mammals

Oxygen-Independent Assays to Measure Mitochondrial Function in Mammals (Video) | JoVE 

Oxygenuafhængige assays til måling af mitokondriefunktion hos pattedyr

The flow of electrons in the mitochondrial electron transport chain (ETC) supports multifaceted biosynthetic, bioenergetic, and signaling functions in ...