Name: assessing mitochondrial function in sciatic nerve by high-resolution respirometry
Uploaded: 2022-05-05T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Mitochondrial Function in Sciatic Nerve by High-Resolution Respirometry at JoVE.com

Deze studie werd gefinancierd door Instituto Serrapilheira, Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro (FAPERJ), Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) en Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior-Brasil (CAPES). We zijn Dr. Antonio Galina Filho, Dr. Monica Montero Lomeli en Dr. Claudio Masuda dankbaar voor de ondersteuning met laboratoriumfaciliteiten, en Dr. Martha Sorenson voor vriendelijke en waardevolle opmerkingen bij het verbeteren van het artikel.

Dit protocol is goedgekeurd door de Ethische Commissie voor het gebruik van dieren in onderzoek, CCS/UFRJ (CEUA-101/19) en de richtlijnen van de National Institutes of Health voor de verzorging en het gebruik van proefdieren. De heupzenuw wordt geïsoleerd van vier maanden oude mannelijke C57BL / 6-muizen, geëuthanaseerd door cervicale dislocatie volgens de institutionele richtlijnen. De protocolstappen zijn geoptimaliseerd om mitochondriale achteruitgang te voorkomen. Daarom werd in dit protocol kalibratie van polarogr...

Verschillende ziekten of aandoeningen die gepaard gaan met neuropathieën hebben mitochondriale disfunctie als risicofactor. De evaluatie van de mitochondriale functie in perifere zenuwen is essentieel om op te helderen hoe de mitochondriën werken in deze neurodegeneratieve aandoeningen. De beoordeling van de mitochondriale functie is bewerkelijk vanwege de moeilijkheid van de isolatiemethode en de schaarste aan materiaal. De ontwikkeling van weefselpermeabilisatietechnieken die geen isolatie van mitochondriën vereisen...

Mitochondriën zijn essentieel voor het behoud van de levensvatbaarheid van cellen en voeren tal van celfuncties uit, zoals energiemetabolisme (glucose-, aminozuur-, lipide- en nucleotidemetabolismeroutes). Als de primaire plaats van productie van reactieve zuurstofsoorten (ROS), staan mitochondriën centraal in verschillende celsignaleringsprocessen zoals apoptose en nemen ze deel aan de synthese van ijzer-zwavel (Fe-S) clusters, mitochondriale eiwitimport en -rijping, en onderhoud van hun genoom en ribosomen 1,2,3. Het mitochondriale membraandynamicanetwerk wordt gecontroleerd door fusie- en splijtingsprocessen en ze hebben ook machines voor kwaliteitscontrole en mitofagie 4,5,6.
Mitochondriale disfunctie wordt geassocieerd met het verschijnen van verschillende pathologische aandoeningen zoals kanker, diabetes en obesitas7. Verstoringen in de mitochondriale functie worden gedetecteerd bij neurodegeneratieve aandoeningen die het centrale zenuwstelsel aantasten, zoals bij de ziekte van Alzheimer 8,9, de ziekte van Parkinson10,11, amyotrofische laterale sclerose12,13 en de ziekte van Huntington14,15 . In het perifere zenuwstelsel wordt verlies van mitochondriale functie in axonen waargenomen bij immuunneuropathieën, zoals Guillain-Barré-syndroom16,17, en in combinatie met een hoge mitochondriale ROS-productie in axonen leiden deze gebeurtenissen tot MAP Kinase-activering in Schwann-cellen18. Dit toont aan dat mitochondriale fysiologie niet alleen essentieel kan zijn voor een plaatsspecifieke cel, maar voor een heel weefsel. Bij HIV-geassocieerde distale sensorische polyneuropathie (HIV-DSP) spelen mitochondriën een rol in het mechanisme waarmee het trans-activator van transcriptie (HIV-TAT) eiwit HIV in staat stelt zich efficiënt te repliceren, evenals verschillende andere rollen in hiv-infectie pathogenese19,20.
Evaluatie van de mitochondriale fysiologie van de heupzenuw is naar voren gekomen als een essentieel doelwit voor het onderzoeken van neuropathie 7,21,22. Bij diabetische neuropathie suggereren proteomische en metabolomische analyses dat de meeste moleculaire veranderingen in diabetes de mitochondriale oxidatieve fosforylering van de heupzenuw en het lipidenmetabolisme beïnvloeden7. Deze veranderingen lijken ook vroege tekenen te zijn van door obesitas veroorzaakte diabetes21. In een muismodel van door chemotherapie geïnduceerde pijnlijke neuropathie wordt mitochondriale stoornissen in de heupzenuw gedetecteerd als een afname van oxidatieve fosforylering22 en een vermindering van mitochondriale complexenactiviteiten, membraanpotentiaal en ATP-gehalte23. Hoewel verschillende groepen mitochondriale disfunctie in neuropathieën hebben aangehaald, zijn deze studies beperkt tot de metingen van activiteit in mitochondriale complexen zonder behoud van de mitochondriale membranen, zonder evaluatie van mitochondriale integriteit of metingen van ATP-inhoud als parameter voor mitochondriale ATP-productie. Over het algemeen vereist een goede beoordeling van mitochondriaal zuurstofverbruik en ROS-productie de isolatie van mitochondriën door differentiële centrifugatie in een percoll / sucrosegradiënt. Isolatie van mitochondriën kan ook een beperkende factor zijn voor ischiaszenuwweefsel vanwege de grote hoeveelheid weefsel die nodig is en mitochondriaal verlies en verstoring.
De huidige studie heeft tot doel een protocol te bieden om mitochondriale fysiologie te meten als mitochondriaal zuurstofverbruik en ROS-productie in de heupzenuw, met behoud van mitochondriale membranen en zonder de noodzaak van isolerende mitochondriën. Dit protocol is aangepast van zuurstofverbruiksmetingen in gepermeabiliseerde spiervezels24 door middel van hoge resolutie respirometrie (HRR). De voordelen van deze procedure zijn de mogelijkheid om mitochondriën in kleine hoeveelheden weefsel zoals de heupzenuw te evalueren en mitochondriale parameters in situ te evalueren, waardoor de mitochondriale omgeving, structuur en bio-energetisch profiel behouden blijven, om een fysiologisch betrouwbaar resultaat te verkrijgen. De mitochondriale ademhalingstoestanden werden bepaald met substraten en remmers na ischiaszenuwpermeabilisatie om mitochondriale bio-energetica en cytochroom c-coëfficiënt voor mitochondriale membraanintegriteit goed te beoordelen, wat een gids biedt voor stappen van de mitochondriale elektronentransportsysteem (ETS) evaluatie en berekening van essentiële parameters. Deze studie kan hulpmiddelen bieden voor het beantwoorden van vragen in pathofysiologische mechanismen waarbij het metabolisme van de heupzenuw betrokken is, zoals perifere neuropathieën.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adenosine 5&#39; triphosphate dissodium salt hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A26209</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenosine 5&#8242;-diphosphate sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2754</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amplex Red Reagent</td>
			<td>Thermo Fisher scientific</td>
			<td>A12222</td>
			<td>Amplex Red is prepared in DMSO accordindly with product datasheet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antimycin A (from Streptomyces sp.)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A8674</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7030</td>
			<td>heat shock fraction, protease free, fatty acid free, essentially globulin free, pH 7, &#8805;98%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium carbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C6763</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbonyl cyanide 4-(trifluoromethoxy)phenylhydrazone (FCCP)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C2920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytochrome c</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C7752</td>
			<td>(from equine heart; small hemeprotein)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DataLab version 5.1.1.91</td>
			<td>OROBOROS INSTRUMENTS, Austria</td>
			<td></td>
			<td>Copyright (c) 2002 - 13 by Dr. Erich Gnaiger</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital orbital microplate shaker 120V</td>
			<td>Thermo Fisher scientific</td>
			<td>88882005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DL-Dithiothreitol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>43819</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGTA sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E8145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HAM80075</td>
			<td>10 uL, 25 uL and 50 uL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogen peroxide solution 30% W/W</td>
			<td>Merck</td>
			<td>H1009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imidazole</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I2399</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-(&#8722;)-Malic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M7397</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride hexahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M2393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MES sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M3885</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting forceps, curved</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting forceps, straight</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O2K - Filter set Amplex Red</td>
			<td>OROBOROS INSTRUMENTS, Austria</td>
			<td>44321-01</td>
			<td>Fasching M, Sumbalova Z, Gnaiger E (2013) O2k-Fluorometry: HRR and H2O2 production in mouse brain mitochondria. Mitochondr Physiol Network 17.17.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O2K - Fluorescence LED2 - module component Fluorscence-Sensor Green</td>
			<td>OROBOROS INSTRUMENTS, Austria</td>
			<td>44210-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oligomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>O4876</td>
			<td>(from Streptomyces diastatochromogenes; mixture of oligomycins A, B, and C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OROBOROS Oxygraph-2k</td>
			<td>OROBOROS INSTRUMENTS, Austria</td>
			<td>http://www.oroboros.at</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Palmitoylcarnitine (Palmitoyl-DL-carnitine-HCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4509</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peroxidase from horseradish</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P8375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes, polystyrene</td>
			<td>MERCK</td>
			<td>P5606</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphocreatine disodium salt hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7936</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium dihydrogen phosphate monobasic</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>PHR1330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium hydroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>221473</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotenone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R8875</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saponin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SAE0073</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5280</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium succinate dibasic hexahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taurine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T0625</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing mitochondrial function in sciatic nerve by high-resolution respirometry

Mitochondriale disfunctie in perifere zenuwen gaat gepaard met verschillende ziekten geassocieerd met perifere neuropathie, die kan worden veroorzaakt door meerdere oorzaken, waaronder auto-immuunziekten, diabetes, infecties, erfelijke aandoeningen en tumoren. Het beoordelen van de mitochondriale functie in perifere zenuwen van muizen kan een uitdaging zijn vanwege de kleine steekproefomvang, een beperkt aantal mitochondriën in het weefsel en de aanwezigheid van een myelineschede. De techniek die in dit werk wordt beschreven, minimaliseert deze uitdagingen door een uniek permeabilisatieprotocol te gebruiken dat is aangepast aan een protocol dat wordt gebruikt voor spiervezels, om de mitochondriale functie van de heupzenuw te beoordelen in plaats van de mitochondriën uit het weefsel te isoleren. Door de productie van fluorimetrische reactieve soorten te meten met Amplex Red / Peroxidase en verschillende mitochondriale substraten en remmers in saponine-permeabilized zenuwen te vergelijken, was het mogelijk om mitochondriale ademhalingstoestanden, reactieve zuurstofsoorten (ROS) en de activiteit van mitochondriale complexen tegelijkertijd te detecteren. Daarom biedt de hier gepresenteerde methode voordelen in vergelijking met de beoordeling van de mitochondriale functie door andere technieken.

Het mitochondriale zuurstofverbruik door de gepermeabiliseerde heupzenuw is weergegeven in figuur 2. Het rode spoor vertegenwoordigt de O2 flux per massa-eenheid in pmol/s.mg. Na het registreren van een basaal zuurstofverbruik met endogene substraten (routinematige ademhaling), wordt succinaat (SUCC) geïnjecteerd om complexe II (succinaatdehydrogenase) aangedreven ademhaling te registreren, wat resulteert in een toename van het zuurstofverbruik. In volgorde wordt een verzadigings...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Mitochondrial Function in Sciatic Nerve by High-Resolution Respirometry at JoVE.com

Assessing Mitochondrial Function in Sciatic Nerve by High-Resolution Respirometry

Hoge resolutie respirometrie gekoppeld aan fluorescentiesensoren bepaalt mitochondriaal zuurstofverbruik en reactieve zuurstofsoorten (ROS) generatie. Het huidige protocol beschrijft een techniek om mitochondriale ademhalingssnelheden en ROS-productie in de gepermeabiliseerde heupzenuw te beoordelen.

Beoordeling van mitochondriale functie in heupzenuw door middel van hoge resolutie respirometrie

Mitochondrial dysfunction in peripheral nerves accompanies several diseases associated with peripheral neuropathy, which can be triggered by multiple ...

Dit protocol maakt de evaluatie van de mitochondriale functie in de zenuw mogelijk door verkaveling van de geïsoleerde mitochondriën, een uitdagende procedure in een klein weefsel dat een beperkt aantal mitochondriën bevat. De techniek biedt de mogelijkheid om mitochondriale functies zoals zuurstofverbruik en ROS-productie gelijktijdig te analyseren in een bewaard gebleven mitochondriën in situ. Met meerdere substraten, remmers en uncoupler-ontwerpprotocollen.Verschillende ziekten delen de mitochondriale functie, met name neuropathieën veroorzaakt door diabetes type twee of chemotherapie. Bij deze ziekten is een aantasting van mitochondriale oxidatieve fosforylering het enige teken dat de ontwikkeling van ziekten dicteert. Deze methode biedt inzicht in neurobiologie, biochemie en farmacologie, met het onderzoek van mitochondriale ziektemechanismen, het zoeken naar therapieën, zoals mitochondriale boosters of verbeterde neuropathische pijn.Kalibreer om te beginnen de zuurstofsensoren door 2,1 milliliter MR-buffer in elke kamer te pipetteren. Sluit het met de stoppers en zuig lucht in de kamer totdat er een bel is gevormd. Roer gedurende een uur in de kalibratiemodus op 37 graden Celsius totdat de zuurstofflux per massa stabiliseert.Voer met behulp van de HRR-software een luchtkalibratie uit van de polarografische zuurstofsensoren volgens de instructies van de fabrikant. Plaats voor weefselvoorbereiding de heupzenuw in een petrischaaltje met voldoende TP-buffer om het te bedekken. Houd het ene uiteinde van de zenuw vast met een tang en trek met een ander paar tangen de zenuwbundels horizontaal uit.Breng eerst het weergegeven weefsel over in een kleine schaal met één milliliter TP-buffer voor weefselpermeabilisatie. Om permeabilisatie te starten, brengt u het weefsel met een tang over naar een andere schaal met één milliliter TP-buffer, die 50 microgram per milliliter saponine bevat. Plaats het bord in een microplate shaker en laat het 30 minuten zachtjes roeren.Breng vervolgens het weefsel met een tang over naar een vers gerecht met één milliliter MR-buffer en laat het gedurende 10 minuten voorzichtig roeren. Breng het weefsel met een tang over naar een gekalibreerde HRR-kamer. Vul de HRR-kamers met 2,1 milliliter MR-buffer.Voeg Amplex Red en peroxidase toe aan een eindconcentratie van respectievelijk vijf micromol en twee eenheden per milliliter. Voeg vervolgens de doorlatende heupzenuw toe. Bevestig de fluorescentiesensoren van het instrument.Schakel vervolgens de lichten uit in het besturingsgedeelte van de software en klik op verbinden met oxygraph "Ga protocollen bewerken" in de software en plaats het weefselgewicht. Ga naar lay-out en kies de specifieke flux per eenheid monster"optie. Selecteer vervolgens percelen om tegelijkertijd toegang te krijgen tot de uitlezing van het zuurstofverbruik en, indien nodig, de waterstofperoxideproductie.Wacht ongeveer 10 minuten. Injecteer twee pulsen waterstofperoxide, elk tot een eindconcentratie van 260 micromolair voor kalibratie van de kamer. Injecteer 20 microliter succinaat, een mitochondriaal complex II substraat, om het mitochondriale elektronentransportsysteem te activeren.Voeg 20 microliter ADP toe om de ATP-synthese te activeren. Voeg achtereenvolgens vijf microliter cytochroom c toe als indicator voor de membraanintegriteit. Titreer met aliquots van 0,2 microgram per milliliter oligomycine totdat er geen verdere afname van het zuurstofverbruik wordt waargenomen.Titreer met aliquots van 0,5 micromol per liter FCCP, de mitochondriale ontkoppelaar, totdat er geen verdere toename van het zuurstofverbruik wordt waargenomen. Om het experiment te beëindigen, injecteert u twee microliter antimycine A, doet u een eindconcentratie van vijf millimolar en wacht u tot de stroom stabiliseert. Ga naar de opdrachtbalk.Zoek naar multisensorisch"in de software. Klik op control"en druk vervolgens op bestand opslaan" en verbreek de verbinding. Open het opgeslagen bestand en selecteer de zuurstofflux per massabakken om de resultaten van het experimentele zuurstofverbruik te verkrijgen.Selecteer handmatig het venster tussen injecties door op de shift plus linkermuisknop te drukken. Ga naar markeringen en selecteer statistieken om de resultaten voor elke injectie van substraten, remmers en ontkoppelingsprotocol te visualiseren. Voer voor waterstofperoxideproductie dezelfde procedure uit met het versterkerhellingspoor.De afname van het membraanpotentieel bevorderd door ATP-sythase-activiteit versnelde het zuurstofverbruik. De toevoeging van exogene cytochroom C bevorderde slechts minimale stimulatie van de ademhaling, waardoor de mitochondriale buitenmembraanintegriteit voor dit preparaat werd gecertificeerd. Absolute zuurstofstromen werden geregistreerd en slechts een toename van 6,3% in de ademhaling werd waargenomen, wat wijst op een goede kwaliteit van het weefselpreparaat.Het zuurstofverbruik en de ROS-productie werden gelijktijdig gemeten in aanwezigheid van verschillende substraten die brandstof leveren voor het elektronentransportsysteem. De toevoeging van pyruvaat en malaat voor mitochondriaal complex I verhoogde de ademhaling. En verdere toevoeging van succinaat voor complex II verhoogt ook het zuurstofverbruik.Daarom konden andere substraten worden getest. De ROS-productie nam ook toe, wat wijst op het lekken van zuurstof uit het elektronentransportsysteem. De toevoeging van adenosinedifosfaat in verzadigingsconcentratie verhoogde het zuurstofverbruik en veroorzaakte atp-vorming en verminderde de ROS-productie.Oligotitratie daarentegen verminderde het zuurstofverbruik en verhoogde de ROS-productie. Dit suggereerde dat geameteniseerde heupzenuw de standaardrelatie in de mitochondriale fysiologie zou kunnen repliceren. De toevoeging van FCCP en retinon, afgestemd op de verwachte veranderingen in de zuurstofflux, bevestigen dat mitochondriale fysiologie en bio-energetisch profiel bewaard zijn gebleven in de gepermatiseerde heupzenuw.De belangrijkste stap is om het weefselgedeelte voorzichtig voor te bereiden, ervoor te zorgen dat alle kameropeningen goed worden schoongemaakt. Veranderingen in de mitochondriale functie kunnen te wijten zijn aan disfunctie of een lager mitochondriaal aantal. daarom worden geciteerde synthase-activiteit en mitochondriale DNA-inhoudsbevestiging door PCR aanbevolen.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Gebruik Steiger Liposomen lipide-proximale eiwit-eiwit interacties reconstitueren<em&gt; In Vitro</em

Studies of integral membrane proteins in vitro are frequently complicated by the presence of a hydrophobic transmembrane domain. Further complicating ...

High-resolution Single Particle Analysis from Electron Cryo-microscopy Images Using SPHIRE

Hoge resolutie single particle analyse van elektroncryo-microscopie beelden met behulp van SPHIRE

SPHIRE (SPARX for High-Resolution Electron Microscopy) is a novel open-source, user-friendly software suite for the semi-automated processing of single ...

Measuring Liver Mitochondrial Oxygen Consumption and Proton Leak Kinetics to Estimate Mitochondrial Respiration in Holstein Dairy Cattle

Meten lever mitochondriale zuurstofverbruik en Proton lek kinetiek te schatten van mitochondriale ademhaling in Holstein melkvee

Oxygen consumption, proton motive force (PMF) and proton leak are measurements of mitochondrial respiration, or how well mitochondria are able to convert ...

Human Peripheral Blood Neutrophil Isolation for Interrogating the Parkinson's Associated LRRK2 Kinase Pathway by Assessing Rab10 Phosphorylation

Menselijke perifere bloed neutrofiele isolatie voor het ondervragen van de Parkinson Geassocieerde LRRK2 Kinase Pathway door de beoordeling van Rab10 fosforylatie

The leucine rich repeat kinase 2 (LRRK2) is the most frequently mutated gene in hereditary Parkinson&#8217; disease (PD) and all pathogenic LRRK2 ...

High-Resolution Complexome Profiling by Cryoslicing BN-MS Analysis

Hoge-resolutie Complexome profilering door Cryoslicing BN-MS analyse

Proteins generally exert biological functions through interactions with other proteins, either in dynamic protein assemblies or as a part of stably formed ...

Routine Collection of High-Resolution cryo-EM Datasets Using 200 KV Transmission Electron Microscope

Routinematige verzameling van cryo-EM-datasets met hoge resolutie met behulp van 200 KV transmissie-elektronenmicroscoop

Cryo-electron microscopy (cryo-EM) has been established as a routine method for protein structure determination during the past decade, taking an ...

High-Resolution Neutron Spectroscopy to Study Picosecond-Nanosecond Dynamics of Proteins and Hydration Water

Neutronenspectroscopie met hoge resolutie om picoseconde-nanosecondedynamiek van eiwitten en hydratatiewater te bestuderen

Neutron scattering offers the possibility to probe the dynamics within samples for a wide range of energies in a nondestructive manner and without ...

Advancing High-Resolution Imaging of Virus Assemblies in Liquid and Ice

Geavanceerde beeldvorming met hoge resolutie van virusassemblages in vloeistof en ijs

Interest in liquid-electron microscopy (liquid-EM) has skyrocketed in recent years as scientists can now observe real-time processes at the nanoscale. It ...

High-Throughput Quantification of the Synthesis and Distribution of mtDNA

High-Throughput Image-Based Quantification of Mitochondrial DNA Synthesis and Distribution

High-Throughput Image-Based Quantification of Mitochondrial DNA Synthesis and Distribution (Video) | JoVE 

High-throughput image-based kwantificering van mitochondriale DNA-synthese en -distributie

The vast majority of cellular processes require a continuous supply of energy, the most common carrier of which is the ATP molecule. Eukaryotic cells ...

Stable Isotope Tracing & LC-MS Analysis to Measure DHODH and SDH Activities

Oxygen-Independent Assays to Measure Mitochondrial Function in Mammals

Oxygen-Independent Assays to Measure Mitochondrial Function in Mammals (Video) | JoVE 

Zuurstofonafhankelijke assays om de mitochondriale functie bij zoogdieren te meten

The flow of electrons in the mitochondrial electron transport chain (ETC) supports multifaceted biosynthetic, bioenergetic, and signaling functions in ...