Name: assessing mitochondrial function in sciatic nerve by high-resolution respirometry
Uploaded: 2022-05-05T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Mitochondrial Function in Sciatic Nerve by High-Resolution Respirometry at JoVE.com

이 연구는 Instituto Serrapilheira, Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro (FAPERJ), Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) 및 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior-Brasil (CAPES)에 의해 자금을 지원받았다. 우리는 안토니오 갈리나 필로 박사, 모니카 몬테로 로멜리 박사와 클라우디오 마수다 박사에게 실험실 시설에 대한 지원과 마사 소렌슨 박사에게 기사 개선에 친절하고 가치있는 의견을 주신 것에 감사드립니다.

본 프로토콜은 연구에서 동물 사용에 관한 윤리위원회, CCS/UFRJ (CEUA-101/19) 및 실험 동물의 관리 및 사용에 대한 국립 보건원 지침에 의해 승인되었습니다. 좌골 신경은 4 개월 된 수컷 C57BL / 6 마우스에서 분리되며, 기관 지침에 따라 자궁 경부 탈구에 의해 안락사됩니다. 프로토콜 단계는 미토콘드리아 악화를 피하기 위해 최적화되어 있습니다. 따라서, 이 프로토콜에서, 편광 산소 센서의 교정은 마...

신경 병증을 동반하는 여러 질병 또는 상태는 위험 인자로서 미토콘드리아 기능 장애를 갖는다. 말초 신경에서 미토콘드리아 기능의 평가는 미토콘드리아가 이러한 신경 퇴행성 조건에서 어떻게 작용하는지 밝히는 데 필수적입니다. 미토콘드리아 기능의 평가는 분리 방법의 어려움과 물질의 부족으로 인해 힘들다. 따라서, 미토콘드리아의 단리를 필요로 하지 않는 조직 투과화 기술의 개발이 필...

미토콘드리아는 세포 생존력을 유지하고 에너지 대사 (포도당, 아미노산, 지질 및 뉴클레오티드 대사 경로)와 같은 수많은 세포 기능을 수행하는 데 필수적입니다. 반응성 산소 종 (ROS) 생산의 주요 부위로서, 미토콘드리아는 아폽토시스와 같은 여러 세포 신호 전달 과정에서 중심이며 철 - 황 (Fe-S) 클러스터의 합성, 미토콘드리아 단백질 수입 및 성숙, 게놈 및 리보솜 1,2,3의 유지에 참여합니다. 미토콘드리아 막 역학 네트워크는 융합 및 분열 과정에 의해 제어되며, 품질 관리 및 미토파지 4,5,6 용 기계도 갖추고 있습니다.
미토콘드리아 기능 장애는 암, 당뇨병 및 비만과 같은 여러 병리학 적 상태의 출현과 관련이 있습니다7. 미토콘드리아 기능의 교란은 알츠하이머 병 8,9, 파킨슨 병10,11, 근위축성 측삭 경화증 12,13 및 헌팅턴 병 14,15에서와 같이 중추 신경계에 영향을 미치는 신경 퇴행성 장애에서 발견됩니다. . 말초 신경계에서, 축색돌기에서의 미토콘드리아 기능의 상실은 길랑-바레 증후군16,17과 같은 면역 신경병증에서 관찰되고, 축색돌기에서의 높은 미토콘드리아 ROS 생산과 관련하여, 이러한 사건은 슈완 세포18에서 MAP 키나제 활성화를 유도한다. 이것은 미토콘드리아 생리학이 부위 특이적 세포뿐만 아니라 전체 조직에 필수적 일 수 있음을 보여줍니다. HIV-관련 원위 감각 다발성 신경병증 (HIV-DSP)에서, 미토콘드리아는 전사의 트랜스-활성화제 (HIV-TAT) 단백질이 HIV가 효율적으로 복제할 수 있게 하는 기작에서 역할을 할 뿐만 아니라, HIV 감염 병인에서 몇 가지 다른 역할도한다 19,20.
좌골 신경 미토콘드리아 생리학의 평가는 신경병증 7,21,22를 조사하기 위한 필수적인 표적으로서 등장하였다. 당뇨병성 신경병증에서, 프로테오믹 및 대사체 분석은 당뇨병의 대부분의 분자 변화가 좌골 신경 미토콘드리아 산화 인산화 및 지질 대사에 영향을 미친다는 것을 시사한다7. 이러한 변화는 또한 비만으로 인한 당뇨병21의 초기 징후 인 것으로 보입니다. 화학요법-유도된 통증성 신경병증의 마우스 모델에서, 좌골 신경의 미토콘드리아 손상은 산화적 인산화(22)의 감소, 및 미토콘드리아 복합체 활성, 막 전위, 및 ATP 함량(23)의 감소로서 검출된다. 그러나 여러 그룹이 신경 병증에서 미토콘드리아 기능 장애를 언급했지만, 이러한 연구는 미토콘드리아 막의 보존이없는 미토콘드리아 복합체에서의 활성 측정으로 제한되며, 미토콘드리아 무결성에 대한 평가가 부족하거나 미토콘드리아 ATP 생산을위한 매개 변수로서 ATP 함량의 측정이 부족합니다. 일반적으로 미토콘드리아 산소 소비량과 ROS 생산에 대한 적절한 평가는 퍼콜/수크로오스 구배에서 차등 원심분리에 의한 미토콘드리아의 분리를 필요로 합니다. 미토콘드리아의 분리는 또한 다량의 조직이 필요하고 미토콘드리아의 손실 및 파괴로 인해 좌골 신경 조직에 대한 제한 요소가 될 수 있습니다.
본 연구는 좌골 신경에서 미토콘드리아 산소 소비 및 ROS 생산으로 미토콘드리아 생리학을 측정하여 미토콘드리아 막을 보존하고 미토콘드리아를 분리 할 필요없이 미토콘드리아 생리학을 측정하는 프로토콜을 제공하는 것을 목표로합니다. 이 프로토콜은 고분해능 호흡측정법(HRR)에 의해 투과된 근섬유(24 )에서의 산소 소비 측정으로부터 적응된다. 이 절차의 장점은 좌골 신경과 같은 소량의 조직에서 미토콘드리아를 평가하고 현장에서 미토콘드 리아 매개 변수를 평가하여 미토콘드리아 환경, 구조 및 생물 에너지 프로파일을 보존하여 생리적으로 신뢰할 수있는 결과를 얻을 수 있다는 것입니다. 미토콘드리아 호흡 상태는 좌골 신경 투과 후 기질 및 억제제로 결정되어 미토콘드리아 막 완전성에 대한 미토콘드리아 생물 에너지 및 시토크롬 c 계수를 적절하게 평가하여 미토콘드리아 전자 수송 시스템 (ETS) 평가 및 필수 매개 변수 계산의 단계에 대한 가이드를 제공했습니다. 이 연구는 좌골 신경 대사가 수반되는 병리 생리학 적 메커니즘의 질문에 대답하기위한 도구를 제공 할 수 있습니다 (예 : 말초 신경 병증).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adenosine 5&#39; triphosphate dissodium salt hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A26209</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenosine 5&#8242;-diphosphate sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2754</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amplex Red Reagent</td>
			<td>Thermo Fisher scientific</td>
			<td>A12222</td>
			<td>Amplex Red is prepared in DMSO accordindly with product datasheet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antimycin A (from Streptomyces sp.)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A8674</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7030</td>
			<td>heat shock fraction, protease free, fatty acid free, essentially globulin free, pH 7, &#8805;98%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium carbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C6763</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbonyl cyanide 4-(trifluoromethoxy)phenylhydrazone (FCCP)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C2920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytochrome c</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C7752</td>
			<td>(from equine heart; small hemeprotein)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DataLab version 5.1.1.91</td>
			<td>OROBOROS INSTRUMENTS, Austria</td>
			<td></td>
			<td>Copyright (c) 2002 - 13 by Dr. Erich Gnaiger</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital orbital microplate shaker 120V</td>
			<td>Thermo Fisher scientific</td>
			<td>88882005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DL-Dithiothreitol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>43819</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGTA sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E8145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HAM80075</td>
			<td>10 uL, 25 uL and 50 uL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogen peroxide solution 30% W/W</td>
			<td>Merck</td>
			<td>H1009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imidazole</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I2399</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-(&#8722;)-Malic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M7397</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride hexahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M2393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MES sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M3885</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting forceps, curved</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting forceps, straight</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O2K - Filter set Amplex Red</td>
			<td>OROBOROS INSTRUMENTS, Austria</td>
			<td>44321-01</td>
			<td>Fasching M, Sumbalova Z, Gnaiger E (2013) O2k-Fluorometry: HRR and H2O2 production in mouse brain mitochondria. Mitochondr Physiol Network 17.17.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O2K - Fluorescence LED2 - module component Fluorscence-Sensor Green</td>
			<td>OROBOROS INSTRUMENTS, Austria</td>
			<td>44210-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oligomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>O4876</td>
			<td>(from Streptomyces diastatochromogenes; mixture of oligomycins A, B, and C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OROBOROS Oxygraph-2k</td>
			<td>OROBOROS INSTRUMENTS, Austria</td>
			<td>http://www.oroboros.at</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Palmitoylcarnitine (Palmitoyl-DL-carnitine-HCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4509</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peroxidase from horseradish</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P8375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes, polystyrene</td>
			<td>MERCK</td>
			<td>P5606</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphocreatine disodium salt hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7936</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium dihydrogen phosphate monobasic</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>PHR1330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium hydroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>221473</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotenone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R8875</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saponin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SAE0073</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5280</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium succinate dibasic hexahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taurine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T0625</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing mitochondrial function in sciatic nerve by high-resolution respirometry

말초 신경의 미토콘드리아 기능 장애는 말초 신경 병증과 관련된 여러 질병을 동반하며,자가 면역 질환, 당뇨병, 감염, 유전 장애 및 종양을 포함한 여러 원인에 의해 유발 될 수 있습니다. 마우스 말초 신경에서 미토콘드리아 기능을 평가하는 것은 작은 표본 크기, 조직에 존재하는 제한된 수의 미토콘드리아, 및 미엘린 외피의 존재로 인해 어려울 수 있습니다. 이 연구에 설명 된 기술은 근육 섬유에 사용되는 것으로부터 적응 된 독특한 투과 프로토콜을 사용하여 미토콘드리아를 조직으로부터 분리하는 대신 좌골 신경 미토콘드리아 기능을 평가함으로써 이러한 도전을 최소화합니다. Amplex Red/Peroxidase로 플루오르 반응성 종 생산을 측정하고 사포닌 투과 신경에서 다른 미토콘드리아 기질과 억제제를 비교함으로써 미토콘드리아 호흡 상태, 반응성 산소 종 (ROS) 및 미토콘드리아 복합체의 활성을 동시에 감지 할 수있었습니다. 따라서, 여기에 제시된 방법은 다른 기술에 의한 미토콘드리아 기능의 평가와 비교하여 이점을 제공한다.

투과된 좌골 신경에 의한 미토콘드리아 산소 소비량은 도 2에 나타내었다. 적색 트레이스는 단위 질량당O2 플럭스를 pmol/s.mg로 나타낸다. 내인성 기질로 기저 산소 소비를 기록한 후(일상적인 호흡), 숙시네이트(SUCC)는 콤플렉스 II(숙시네이트 데하이드로게나제)-구동 호흡을 기록하기 위해 주입되어, 산소 소모율의 증가를 초래한다. 순차적으로, ADP의 포화 농도가 첨?...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Mitochondrial Function in Sciatic Nerve by High-Resolution Respirometry at JoVE.com

Assessing Mitochondrial Function in Sciatic Nerve by High-Resolution Respirometry

형광 센서에 결합된 고분해능 호흡법은 미토콘드리아 산소 소비량과 반응성 산소 종(ROS) 생성을 결정합니다. 본 프로토콜은 투과화된 좌골 신경에서 미토콘드리아 호흡률 및 ROS 생산을 평가하는 기술을 기술한다.

고해상도 호흡 측정법에 의한 좌골 신경의 미토콘드리아 기능 평가

Mitochondrial dysfunction in peripheral nerves accompanies several diseases associated with peripheral neuropathy, which can be triggered by multiple ...

이 프로토콜은 제한된 수의 미토콘드리아를 포함하는 작은 조직에서 까다로운 절차인 분리된 미토콘드리아의 파셀레이션에 의해 신경 내부의 미토콘드리아 기능을 평가할 수 있게 해줍니다. 이 기술은 현장에서 보존 된 미토콘드리아에서 산소 소비 및 ROS 생산과 같은 미토콘드리아 기능을 동시에 분석 할 수있는 가능성을 제공합니다. 여러 기판, 억제제 및 언커플러 설계 프로토콜이 있습니다.몇몇 질병은 미토콘드리아 기능, 특히 두 가지 당뇨병 또는 화학요법에 의해 유도되는 신경병증을 공유한다. 이러한 질병에서 미토콘드리아 산화 인산화의 손상은 질병 발생을 지시하는 유일한 신호입니다. 이 방법은 미토콘드리아 질병 메커니즘의 조사, 미토콘드리아 부스터 또는 개선 된 신경 병증 성 통증과 같은 치료법 검색을 통해 신경 생물학, 생화학 및 약리학에 대한 통찰력을 제공합니다.시작하려면 2.1 밀리리터의 MR 버퍼를 각 챔버에 피펫팅하여 산소 센서를 교정하십시오. 마개로 닫고 거품이 형성 될 때까지 챔버로 공기를 끌어들입니다. 질량당 산소 플럭스가 안정화될 때까지 교정 모드에서 섭씨 37도에서 한 시간 동안 저어줍니다.HRR 소프트웨어를 사용하여 제조업체의 지침에 따라 편광 산소 센서의 공기 교정을 수행합니다. 조직 준비를 위해, 좌골 신경을 TP 완충액이 충분한 페트리 접시에 넣어 덮으십시오. 포셉으로 신경의 한쪽 끝을 잡고 다른 포셉으로 신경 번들을 수평으로 당깁니다.먼저, 표시된 조직을 조직 투과를 위해 하나의 밀리리터 TP 버퍼가 들어있는 작은 접시로 옮깁니다. 투과를 시작하려면 포셉으로 조직을 사포닌 밀리리터 당 50 마이크로 그램의 TP 버퍼가 들어있는 다른 접시로 옮깁니다. 플레이트를 마이크로플레이트 진탕기에 넣고 30분 동안 부드럽게 저어준다.그런 다음 포셉으로 조직을 1 밀리리터 MR 버퍼가 들어있는 신선한 접시에 옮기고 10 분 동안 부드럽게 저어줍니다. 포셉으로 조직을 교정된 HRR 챔버로 옮깁니다. HRR 챔버를 2.1 밀리리터의 MR 버퍼로 채 웁니다.Amplex Red와 peroxidase를 각각 다섯 마이크로 몰의 최종 농도와 밀리리터 당 두 단위로 첨가하십시오. 그런 다음 투과성 좌골 신경을 추가하십시오. 기기의 형광 센서를 부착합니다.그런 다음 소프트웨어의 제어 섹션에서 조명을 끄고 소프트웨어에서 옥시 그래프에 연결"프로토콜 편집으로 이동"을 클릭하고 조직 무게를 삽입하십시오. 레이아웃으로 이동하여 단위 샘플 당 특정 플럭스 "옵션을 선택하십시오. 그런 다음 플롯을 선택하여 산소 소비량 판독값에 동시에 액세스하고, 필요한 경우 과산화수소 생산에 액세스합니다.약 10분 정도 기다립니다. 챔버의 교정을 위해 두 개의 펄스의 과산화수소를 주입하고, 각각 260 마이크로 몰의 최종 농도로 주입하십시오. 미토콘드리아 콤플렉스 II 기질인 숙시네이트 20마이크로리터를 주입하여 미토콘드리아 전자 수송 시스템을 활성화시킨다.ATP 합성을 활성화하기 위해 20 마이크로 리터의 ADP를 추가하십시오. 순차적으로, 막 완전성의 지표로서 다섯 마이크로리터의 시토크롬 c를 첨가한다. 산소 소비의 더 이상의 감소가 관찰되지 않을 때까지 올리고마이신 밀리리터 당 0.2 마이크로그램의 분취량으로 적정한다.산소 소비의 더 이상의 증가가 관찰되지 않을 때까지 리터 FCCP 당 0.5 마이크로몰의 분취량으로 적정하고, 미토콘드리아 언커플러. 실험을 끝내려면 두 마이크로 리터의 안티마이신 A를 주입하고 다섯 밀리몰의 최종 농도를 수행하고 흐름이 안정화 될 때까지 기다리십시오. 명령 모음으로 이동합니다.소프트웨어에서 다중 감각 검색". 컨트롤을 클릭하십시오"그런 다음 파일 저장을 누르고 연결을 끊습니다. 저장된 파일을 열고 질량 트레이당 산소 플럭스를 선택하여 실험적 산소 소비 결과를 얻습니다.Shift + 마우스 왼쪽 버튼을 눌러 주사 사이의 창을 수동으로 선택합니다. 마크로 이동하여 통계를 선택하여 기질, 억제제 및 언커플러 프로토콜의 각 주입에 대한 결과를 시각화합니다. 과산화수소 생산을 위해 앰프 기울기 트레이스와 동일한 절차를 수행하십시오.ATP 시타제 활성에 의해 촉진된 막 전위의 감소는 산소 소비를 가속화시켰다. 외인성 시토크롬 C의 첨가는 호흡의 최소한의 자극만을 촉진하여, 이 준비에 대한 미토콘드리아 외막 완전성을 인증하였다. 절대 산소 흐름이 기록되었고 호흡에서 6.3 % 증가 만 관찰되어 조직 준비의 양질을 나타냅니다.산소 소비 및 ROS 생산은 전자 수송 시스템에 연료를 제공하는 상이한 기판의 존재 하에 동시에 측정되었다. 미토콘드리아 복합체에 대한 피루베이트와 말레이트의 첨가는 호흡을 증가시켰다. 콤플렉스 II에 대한 숙시네이트의 추가의 첨가는 또한 산소 소비를 증가시킨다.따라서 다른 기판을 테스트 할 수 있습니다. ROS 생산도 증가하여 전자 수송 시스템에서 산소가 누출되었음을 나타냅니다. 포화 농도에서 아데노신 디포스페이트의 첨가는 ATP 형성을 유도하는 산소 소비를 증가시키고, ROS 생산을 감소시켰다.대조적으로, 올리고 적정은 산소 소비를 감소시키고 ROS 생산을 증가시켰다. 이것은 permeablized 좌골 신경이 미토콘드리아 생리학에서 표준 관계를 복제 할 수 있음을 시사했다. 예상되는 산소 플럭스 변화에 부합하는 FCCP 및 레티논의 첨가는 미토콘드리아 생리학 및 생체 에너지 프로파일이 투과 된 좌골 신경에서 보존되었음을 확인합니다.가장 중요한 단계는 조직 섹션을 부드럽게 준비하고 모든 챔버 개구부가 제대로 청소되었는지 확인하는 것입니다. 미토콘드리아 기능의 변화는 기능 장애 또는 낮은 미토콘드리아 수 때문일 수 있습니다. 따라서 인용 된 합성 효소 활성 및 PCR에 의한 미토콘드리아 DNA 함량 확인이 권장됩니다.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

비계 리포좀을 사용하여 근위 지질 단백질 - 단백질 상호 작용을 재구성<em&gt; 체외</em

Studies of integral membrane proteins in vitro are frequently complicated by the presence of a hydrophobic transmembrane domain. Further complicating ...

연구

생화학

High-resolution Single Particle Analysis from Electron Cryo-microscopy Images Using SPHIRE

SPHIRE를 사용한 전자 저온 현미경 이미지의 고해상도 단일 입자 분석

SPHIRE (SPARX for High-Resolution Electron Microscopy) is a novel open-source, user-friendly software suite for the semi-automated processing of single ...

Measuring Liver Mitochondrial Oxygen Consumption and Proton Leak Kinetics to Estimate Mitochondrial Respiration in Holstein Dairy Cattle

홀스타인 젖소에서 미토 콘 드리 아 호흡 추정 간 미토 콘 드리 아 산소 소비와 양성자 누출 속도 론 측정

Oxygen consumption, proton motive force (PMF) and proton leak are measurements of mitochondrial respiration, or how well mitochondria are able to convert ...

Human Peripheral Blood Neutrophil Isolation for Interrogating the Parkinson's Associated LRRK2 Kinase Pathway by Assessing Rab10 Phosphorylation

Rab10 인산화를 평가하여 파킨슨병 관련 LRRK2 키나아제 경로를 심문하기 위한 인간 말초 혈액 호중구 격리

The leucine rich repeat kinase 2 (LRRK2) is the most frequently mutated gene in hereditary Parkinson&#8217; disease (PD) and all pathogenic LRRK2 ...

High-Resolution Complexome Profiling by Cryoslicing BN-MS Analysis

BN-MS 분석에 의한 고분해능 컴플렉스 프로파일링

Proteins generally exert biological functions through interactions with other proteins, either in dynamic protein assemblies or as a part of stably formed ...

Routine Collection of High-Resolution cryo-EM Datasets Using 200 KV Transmission Electron Microscope

200KV 투과 전자 현미경을 사용한 고해상도 cryo-EM 데이터 세트의 일상적인 수집

Cryo-electron microscopy (cryo-EM) has been established as a routine method for protein structure determination during the past decade, taking an ...

High-Resolution Neutron Spectroscopy to Study Picosecond-Nanosecond Dynamics of Proteins and Hydration Water

단백질과 수화수의 피코초-나노초 역학을 연구하기 위한 고분해능 중성자 분광법

Neutron scattering offers the possibility to probe the dynamics within samples for a wide range of energies in a nondestructive manner and without ...

Advancing High-Resolution Imaging of Virus Assemblies in Liquid and Ice

액체와 얼음에서 바이러스 어셈블리의 고해상도 이미징 향상

Interest in liquid-electron microscopy (liquid-EM) has skyrocketed in recent years as scientists can now observe real-time processes at the nanoscale. It ...

High-Throughput Quantification of the Synthesis and Distribution of mtDNA

High-Throughput Image-Based Quantification of Mitochondrial DNA Synthesis and Distribution

High-Throughput Image-Based Quantification of Mitochondrial DNA Synthesis and Distribution (Video) | JoVE 

미토콘드리아 DNA 합성 및 분포의 고처리량 이미지 기반 정량화

The vast majority of cellular processes require a continuous supply of energy, the most common carrier of which is the ATP molecule. Eukaryotic cells ...

Stable Isotope Tracing & LC-MS Analysis to Measure DHODH and SDH Activities

Oxygen-Independent Assays to Measure Mitochondrial Function in Mammals

Oxygen-Independent Assays to Measure Mitochondrial Function in Mammals (Video) | JoVE 

포유류의 미토콘드리아 기능을 측정하기 위한 산소 비의존적 분석

The flow of electrons in the mitochondrial electron transport chain (ETC) supports multifaceted biosynthetic, bioenergetic, and signaling functions in ...