Name: assessing mitochondrial function in sciatic nerve by high-resolution respirometry
Uploaded: 2022-05-05T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Mitochondrial Function in Sciatic Nerve by High-Resolution Respirometry at JoVE.com

Bu çalışma Instituto Serrapilheira, Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro (FAPERJ), Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) ve Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior-Brasil (CAPES) tarafından finanse edilmiştir. Dr. Antonio Galina Filho, Dr. Monica Montero Lomeli ve Dr. Claudio Masuda'ya laboratuvar tesislerine verdikleri destek için ve Dr. Martha Sorenson'a makalenin geliştirilmesinde nazik ve değerli yorumları için minnettarız.

Bu protokol, Araştırmada Hayvanların Kullanımı Etik Komitesi, CCS/UFRJ (CEUA-101/19) ve Ulusal Sağlık Enstitüleri deney hayvanlarının bakımı ve kullanımı için kılavuzlar tarafından onaylanmıştır. Siyatik sinir, dört aylık erkek C57BL / 6 farelerinden izole edilir ve kurumsal kılavuzlara göre servikal çıkık ile ötenazi yapılır. Protokol adımları, mitokondriyal bozulmayı önlemek için optimize edilmiştir. Bu nedenle bu protokolde polarografik oksijen sensörlerinin kalibrasyonu fare siyat...

Nöropatilere eşlik eden çeşitli hastalıklar veya durumlar risk faktörü olarak mitokondriyal disfonksiyona sahiptir. Periferik sinirlerde mitokondriyal fonksiyonun değerlendirilmesi, mitokondrinin bu nörodejeneratif koşullarda nasıl davrandığını aydınlatmak için gereklidir. Mitokondriyal fonksiyonun değerlendirilmesi, izolasyon yönteminin zorluğu ve malzeme kıtlığı nedeniyle zahmetlidir. Bu nedenle, mitokondri izolasyonunu gerektirmeyen doku geçirgenleştirme tekniklerinin geliştirilmesi esastır...

Mitokondri, hücre canlılığını korumak için gereklidir ve enerji metabolizması (glikoz, amino asit, lipit ve nükleotid metabolizma yolları) gibi çok sayıda hücre fonksiyonunu yerine getirir. Reaktif oksijen türlerinin (ROS) üretiminin birincil yeri olan mitokondri, apoptoz gibi çeşitli hücre sinyal süreçlerinde merkezidir ve demir-kükürt (Fe-S) kümelerinin sentezine, mitokondriyal protein ithalatına ve olgunlaşmasına ve genomlarının ve ribozomlarının korunmasına katılır 1,2,3. Mitokondriyal membran dinamiği ağı, füzyon ve fisyon süreçleri tarafından kontrol edilir ve ayrıca kalite kontrol ve mitofi 4,5,6 için makinelere sahiptir.
Mitokondriyal disfonksiyon, kanser, diyabet ve obezite gibi çeşitli patolojik durumların ortaya çıkmasıyla ilişkilidir7. Mitokondriyal fonksiyondaki bozukluklar, Alzheimer hastalığı8,9, Parkinson hastalığı10,11, amiyotrofik lateral skleroz12,13 ve Huntington hastalığı 14,15'te olduğu gibi, merkezi sinir sistemini etkileyen nörodejeneratif bozukluklarda tespit edilir. . Periferik sinir sisteminde, Guillain-Barré sendromu 16,17 gibi immün nöropatilerde aksonlarda mitokondriyal fonksiyon kaybı gözlenir ve aksonlara yüksek mitokondriyal ROS üretimi ile birlikte, bu olaylar Schwann hücrelerinde MAP Kinaz aktivasyonuna yol açar18. Bu, mitokondriyal fizyolojinin sadece bölgeye özgü bir hücre için değil, tüm doku için gerekli olabileceğini göstermektedir. HIV ile ilişkili distal duyusal polinöropatide (HIV-DSP), mitokondri, transkriptasyon transaktivatörü (HIV-TAT) proteininin HIV'in etkili bir şekilde çoğalmasına izin verdiği mekanizmada ve HIV enfeksiyonu patogenezinde diğer birçok rolde rol oynamaktadır19,20.
Siyatik sinir mitokondriyal fizyolojisinin değerlendirilmesi, nöropatinin araştırılmasında temel bir hedef olarak ortaya çıkmıştır 7,21,22. Diyabetik nöropatide, proteomik ve metabolomik analizler, diyabetteki moleküler değişikliklerin çoğunun siyatik sinir mitokondriyal oksidatif fosforilasyonunu ve lipid metabolizmasını etkilediğini düşündürmektedir7. Bu değişiklikler aynı zamanda obeziteye bağlı diyabetin erken belirtileri gibi görünmektedir21. Kemoterapiye bağlı ağrılı nöropatinin bir fare modelinde, siyatik sinirdeki mitokondriyal bozulma, oksidatif fosforilasyon22'de bir azalma ve mitokondriyal komplekslerin aktivitelerinin, membran potansiyelinin ve ATP içeriğinin azalması olarak tespit edilir23. Bununla birlikte, birkaç grup nöropatilerde mitokondriyal disfonksiyondan bahsetmiş olsa da, bu çalışmalar mitokondriyal membranların korunmadığı, mitokondriyal bütünlüğün değerlendirilmesi veya mitokondriyal ATP üretimi için bir parametre olarak ATP içeriğinin ölçülmemesi ile mitokondriyal komplekslerdeki aktivite ölçümleri ile sınırlıdır. Genel olarak, mitokondriyal oksijen tüketiminin ve ROS üretiminin uygun bir değerlendirmesi, bir perkoll/sakkaroz gradyanında diferansiyel santrifüjleme ile mitokondrinin izolasyonunu gerektirir. Mitokondrinin izolasyonu, ihtiyaç duyulan büyük miktarda doku ve mitokondri kaybı ve bozulması nedeniyle siyatik sinir dokusu için sınırlayıcı bir faktör olabilir.
Bu çalışma, mitokondriyal fizyolojiyi siyatik sinirde mitokondriyal oksijen tüketimi ve ROS üretimi olarak ölçmek, mitokondriyal membranları korumak ve mitokondri izoline ihtiyaç duymadan ölçmek için bir protokol sağlamayı amaçlamaktadır. Bu protokol, geçirgenleştirilmiş kas lifleri24'teki oksijen tüketimi ölçümlerinden yüksek çözünürlüklü respirometri (HRR) ile uyarlanmıştır. Bu prosedürün avantajları, siyatik sinir gibi az miktarda dokuda mitokondrinin değerlendirilmesi ve mitokondriyal parametrelerin in situ olarak değerlendirilmesi, böylece mitokondriyal ortamın, yapının ve biyoenerjetik profilin korunması, fizyolojik olarak güvenilir bir sonuç elde edilmesidir. Mitokondriyal solunum durumları, mitokondriyal membran bütünlüğü için mitokondriyal biyoenerjetik ve sitokrom c katsayısını doğru bir şekilde değerlendirmek için siyatik sinir geçirgenizasyonundan sonra substratlar ve inhibitörler ile belirlendi ve mitokondriyal elektron taşıma sisteminin (ETS) değerlendirilmesi ve temel parametrelerin hesaplanması adımları için bir rehber sağladı. Bu çalışma, periferik nöropatiler gibi siyatik sinir metabolizmasının rol oynadığı patofizyolojik mekanizmalardaki soruları cevaplamak için araçlar sağlayabilir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adenosine 5&#39; triphosphate dissodium salt hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A26209</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenosine 5&#8242;-diphosphate sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2754</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amplex Red Reagent</td>
			<td>Thermo Fisher scientific</td>
			<td>A12222</td>
			<td>Amplex Red is prepared in DMSO accordindly with product datasheet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antimycin A (from Streptomyces sp.)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A8674</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7030</td>
			<td>heat shock fraction, protease free, fatty acid free, essentially globulin free, pH 7, &#8805;98%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium carbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C6763</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbonyl cyanide 4-(trifluoromethoxy)phenylhydrazone (FCCP)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C2920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytochrome c</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C7752</td>
			<td>(from equine heart; small hemeprotein)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DataLab version 5.1.1.91</td>
			<td>OROBOROS INSTRUMENTS, Austria</td>
			<td></td>
			<td>Copyright (c) 2002 - 13 by Dr. Erich Gnaiger</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital orbital microplate shaker 120V</td>
			<td>Thermo Fisher scientific</td>
			<td>88882005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DL-Dithiothreitol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>43819</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGTA sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E8145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HAM80075</td>
			<td>10 uL, 25 uL and 50 uL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogen peroxide solution 30% W/W</td>
			<td>Merck</td>
			<td>H1009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imidazole</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I2399</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-(&#8722;)-Malic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M7397</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride hexahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M2393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MES sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M3885</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting forceps, curved</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting forceps, straight</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O2K - Filter set Amplex Red</td>
			<td>OROBOROS INSTRUMENTS, Austria</td>
			<td>44321-01</td>
			<td>Fasching M, Sumbalova Z, Gnaiger E (2013) O2k-Fluorometry: HRR and H2O2 production in mouse brain mitochondria. Mitochondr Physiol Network 17.17.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O2K - Fluorescence LED2 - module component Fluorscence-Sensor Green</td>
			<td>OROBOROS INSTRUMENTS, Austria</td>
			<td>44210-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oligomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>O4876</td>
			<td>(from Streptomyces diastatochromogenes; mixture of oligomycins A, B, and C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OROBOROS Oxygraph-2k</td>
			<td>OROBOROS INSTRUMENTS, Austria</td>
			<td>http://www.oroboros.at</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Palmitoylcarnitine (Palmitoyl-DL-carnitine-HCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4509</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peroxidase from horseradish</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P8375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes, polystyrene</td>
			<td>MERCK</td>
			<td>P5606</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphocreatine disodium salt hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7936</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium dihydrogen phosphate monobasic</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>PHR1330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium hydroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>221473</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotenone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R8875</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saponin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SAE0073</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5280</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium succinate dibasic hexahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taurine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T0625</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing mitochondrial function in sciatic nerve by high-resolution respirometry

Periferik sinirlerdeki mitokondriyal disfonksiyon, otoimmün hastalıklar, diyabet, enfeksiyonlar, kalıtsal bozukluklar ve tümörler dahil olmak üzere birçok nedenden dolayı tetiklenebilen periferik nöropati ile ilişkili çeşitli hastalıklara eşlik eder. Fare periferik sinirlerinde mitokondriyal fonksiyonun değerlendirilmesi, küçük örneklem büyüklüğü, dokuda bulunan sınırlı sayıda mitokondri ve bir miyelin kılıfının varlığı nedeniyle zor olabilir. Bu çalışmada açıklanan teknik, mitokondrileri dokudan izole etmek yerine siyatik sinir mitokondriyal fonksiyonunu değerlendirmek için kas lifleri için kullanılandan uyarlanmış benzersiz bir geçirgenlik protokolü kullanarak bu zorlukları en aza indirir. Amplex Red/Peroksidaz ile florimetrik reaktif tür üretimini ölçerek ve saponin-geçirgenleştirilmiş sinirlerdeki farklı mitokondriyal substratları ve inhibitörleri karşılaştırarak, mitokondriyal solunum durumlarını, reaktif oksijen türlerini (ROS) ve mitokondriyal komplekslerin aktivitesini aynı anda tespit etmek mümkün olmuştur. Bu nedenle, burada sunulan yöntem, mitokondriyal fonksiyonun diğer tekniklerle değerlendirilmesine kıyasla avantajlar sunmaktadır.

Permeabilize siyatik sinir tarafından mitokondriyal oksijen tüketimi Şekil 2'de gösterilmiştir. Kırmızı iz, pmol / s.mg cinsinden birim kütle başınaO2 akısını temsil eder. Endojen substratlarla (rutin solunum) bazal oksijen tüketimini kaydettikten sonra, kompleks II (süksinat dehidrogenaz) güdümlü solunumu kaydetmek için süksinat (SUCC) enjekte edilir ve bu da oksijen tüketim oranında bir artışa neden olur. Sırayla, ATP sentazı aktive eden ve oksidatif f...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Mitochondrial Function in Sciatic Nerve by High-Resolution Respirometry at JoVE.com

Assessing Mitochondrial Function in Sciatic Nerve by High-Resolution Respirometry

Floresan sensörlerine bağlı yüksek çözünürlüklü respirometri, mitokondriyal oksijen tüketimini ve reaktif oksijen türlerinin (ROS) oluşumunu belirler. Bu protokol, geçirgenleştirilmiş siyatik sinirde mitokondriyal solunum hızlarını ve ROS üretimini değerlendirmek için bir teknik tanımlamaktadır.

Siyatik Sinirde Mitokondriyal Fonksiyonun Yüksek Rezolüsyonlu Respirometri ile Değerlendirilmesi

Mitochondrial dysfunction in peripheral nerves accompanies several diseases associated with peripheral neuropathy, which can be triggered by multiple ...

Bu protokol, sınırlı sayıda mitokondri içeren küçük bir dokuda zorlu bir prosedür olan izole mitokondrinin parselasyonu ile sinir içindeki mitokondriyal fonksiyonun değerlendirilmesine izin verir. Bu teknik, oksijen tüketimi ve ROS üretimi gibi mitokondri fonksiyonlarını aynı anda korunmuş bir mitokondri in situ içinde analiz etme imkanı sağlar. Çoklu substratlar, inhibitörler ve uncoupler tasarım protokolleri ile.Bazı hastalıklar mitokondriyal fonksiyonu, özellikle de tip iki diyabet veya kemoterapinin neden olduğu nöropatileri paylaşır. Bu hastalıklarda, mitokondriyal oksidatif fosforilasyonun bozulması, hastalık gelişimini belirleyen tek işarettir. Bu yöntem, mitokondriyal hastalık mekanizmalarının araştırılması, mitokondriyal güçlendiriciler veya iyileştirilmiş nöropatik ağrı gibi tedavilerin araştırılması ile nörobiyoloji, biyokimya ve farmakoloji hakkında fikir verir.Başlamak için, her bir odaya 2,1 mililitre MR tamponu pipetleyerek oksijen sensörlerini kalibre edin. Tapalarla kapatın ve bir kabarcık oluşana kadar odaya hava çekin. Kütle başına oksijen akışı stabilize olana kadar kalibrasyon modunda bir saat boyunca 37 santigrat derecede karıştırın.HRR yazılımını kullanarak, üreticinin talimatlarına göre polarografik oksijen sensörlerinin hava kalibrasyonunu gerçekleştirin. Doku hazırlığı için, siyatik siniri, onu örtmek için yeterli TP tamponuna sahip bir Petri kabına yerleştirin. Forseps ile sinirin bir ucunu tutun ve başka bir çift forseps ile sinir demetlerini yatay olarak çekin.İlk olarak, görüntülenen dokuyu doku geçirgenliği için bir mililitre TP tamponu içeren küçük bir kaba aktarın. Permeabilizasyonu başlatmak için, forsepsli dokuyu, mililitre saponin başına 50 mikrogram içeren, bir mililitre TP tamponu içeren başka bir kaba aktarın. Plakayı bir mikro plaka çalkalayıcıya yerleştirin ve 30 dakika boyunca hafifçe karıştırın.Daha sonra, forseps içeren dokuyu bir mililitre MR tamponu içeren taze bir kaba aktarın ve 10 dakika boyunca hafifçe karıştırın. Forseps ile dokuyu kalibre edilmiş bir HRR odasına aktarın. HRR odalarını 2,1 mililitre MR tamponu ile doldurun.Amplex Red ve peroksidaz'ı sırasıyla beş mikromolar ve mililitre başına iki birim nihai konsantrasyonuna ekleyin. Ardından, geçirgen siyatik siniri ekleyin. Cihazın floresan sensörlerini takın.Ardından, yazılımın kontrol bölümündeki ışıkları kapatın ve yazılımdaki oksigrafa bağlan'a tıklayın "Protokolleri düzenlemeye git" ve doku ağırlığını ekleyin. Mizanpaja gidin ve birim numune başına belirli akıyı seçin" seçeneği. Ardından, oksijen tüketimi okumasına ve gerekirse hidrojen peroksit üretimine aynı anda erişmek için grafikleri seçin.Yaklaşık 10 dakika bekleyin. Odanın kalibrasyonu için her biri 260 mikromolar'lık son konsantrasyona iki hidrojen peroksit darbesi enjekte edin. Mitokondriyal elektron taşıma sistemini aktive etmek için bir mitokondriyal kompleks II substratı olan 20 mikrolitre süksinat enjekte edin.ATP sentezini aktive etmek için 20 mikrolitre ADP ekleyin. Sırayla, membran bütünlüğünün bir göstergesi olarak beş mikrolitre sitokrom c ekleyin. Oksijen tüketiminde daha fazla azalma gözlenene kadar mililitre oligomisin başına 0.2 mikrogram alikotlarla titre edin.Litre başına 0.5 mikromol alikotlu titre edici FCCP, mitokondriyal uncoupler, oksijen tüketiminde daha fazla artış gözlenmeyene kadar. Deneyi bitirmek için iki mikrolitre antimisin A enjekte edin, beş milimolar son konsantrasyonda yapın ve akışın stabilize olmasını bekleyin. Komut çubuğuna gidin.Yazılımda "multisensory" araması yapın. Kontrol'e tıklayın", ardından dosyayı kaydet" e basın ve bağlantıyı kesin. Kaydedilen dosyayı açın ve deneysel oksijen tüketimi sonuçlarını elde etmek için kütle tepsileri başına oksijen akışını seçin.Shift artı farenin sol düğmesine basarak enjeksiyonlar arasındaki pencereyi manuel olarak seçin. İşaretlere gidin ve her substrat, inhibitör ve uncoupler protokolü enjeksiyonunun sonuçlarını görselleştirmek için istatistikleri seçin. Hidrojen peroksit üretimi için amplifikatör eğim izi ile aynı prosedürü uygulayın.ATP sitaz aktivitesi tarafından teşvik edilen membran potansiyelindeki azalma, oksijen tüketimini hızlandırdı. Eksojen sitokrom C'nin eklenmesi, solunumun sadece minimal uyarılmasını teşvik etti ve bu preparat için mitokondriyal dış membran bütünlüğünü onayladı. Mutlak oksijen akışları kaydedildi ve solunumda sadece% 6.3'lük bir artış gözlendi, bu da doku preparatının kalitesini gösterdi.Oksijen tüketimi ve ROS üretimi, elektron taşıma sistemi için yakıt sağlayan farklı substratların varlığında aynı anda ölçüldü. Mitokondriyal kompleks için piruvat ve malat ilavesi solunumu arttırdı. Ve kompleks II için süksinat ilavesi de oksijen tüketimini arttırır.Bu nedenle diğer substratlar test edilebilir. ROS üretimi de arttı ve elektron taşıma sisteminden oksijen sızıntısını gösterdi. Doygunluk konsantrasyonuna adenozin difosfat ilavesi, ATP oluşumunu tetikleyen oksijen tüketimini arttırdı ve ROS üretimini azalttı.Buna karşılık, oligo titrasyonu oksijen tüketimini azalttı ve ROS üretimini artırdı. Bu, permeablize siyatik sinirin mitokondriyal fizyolojideki standart ilişkiyi kopyalayabileceğini düşündürmektedir. Beklenen oksijen akısı değişiklikleriyle uyumlu FCCP ve retinon ilavesi, mitokondriyal fizyolojinin ve biyoenerjetik profilin geçirgen siyatik sinirde korunduğunu doğrulamaktadır.En önemli adım, doku bölümünü nazikçe hazırlamak, tüm oda açıklıklarının uygun şekilde temizlendiğinden emin olmaktır. Mitokondri fonksiyonundaki değişiklikler, işlev bozukluğuna veya daha düşük bir mitokondriyal sayıya bağlı olabilir. bu nedenle belirtilen sentaz aktivitesi ve PCR ile mitokondriyal DNA içeriği doğrulaması önerilmektedir.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

İskele Lipozomlar kullanarak Lipid-proksimal protein-protein etkileşimleri Sulandırın için<em&gt; İn Vitro</em

Studies of integral membrane proteins in vitro are frequently complicated by the presence of a hydrophobic transmembrane domain. Further complicating ...

High-resolution Single Particle Analysis from Electron Cryo-microscopy Images Using SPHIRE

SPHIRE Kullanılarak Elektron Kriyo-mikroskopi Görüntülerinden Yüksek Çözünürlüklü Tek Parçacık Analizi

SPHIRE (SPARX for High-Resolution Electron Microscopy) is a novel open-source, user-friendly software suite for the semi-automated processing of single ...

Measuring Liver Mitochondrial Oxygen Consumption and Proton Leak Kinetics to Estimate Mitochondrial Respiration in Holstein Dairy Cattle

Karaciğer mitokondrial oksijen tüketimi ve Proton sızıntı kinetik Holstein süt sığır mitokondrial solunum tahmin etmek için ölçme

Oxygen consumption, proton motive force (PMF) and proton leak are measurements of mitochondrial respiration, or how well mitochondria are able to convert ...

Human Peripheral Blood Neutrophil Isolation for Interrogating the Parkinson's Associated LRRK2 Kinase Pathway by Assessing Rab10 Phosphorylation

Rab10 Fosforilasyon Değerlendirilmesi tarafından Parkinson İlişkili LRRK2 Kinas yolu Sorgulama için İnsan Periferik Kan Nötrofil İzolasyon

The leucine rich repeat kinase 2 (LRRK2) is the most frequently mutated gene in hereditary Parkinson&#8217; disease (PD) and all pathogenic LRRK2 ...

High-Resolution Complexome Profiling by Cryoslicing BN-MS Analysis

BN-MS Analizi Cryoslicing tarafından Yüksek Çözünürlüklü Complexome Profilleme

Proteins generally exert biological functions through interactions with other proteins, either in dynamic protein assemblies or as a part of stably formed ...

Routine Collection of High-Resolution cryo-EM Datasets Using 200 KV Transmission Electron Microscope

200 KV İletim Elektron Mikroskobu Kullanarak Yüksek Çözünürlüklü Kriyo-EM Veri Kümelerinin Rutin Toplanması

Cryo-electron microscopy (cryo-EM) has been established as a routine method for protein structure determination during the past decade, taking an ...

High-Resolution Neutron Spectroscopy to Study Picosecond-Nanosecond Dynamics of Proteins and Hydration Water

Proteinlerin ve hidrasyon suyunun pikosaniye-nanosaniye dinamiklerini incelemek için yüksek çözünürlüklü nötron spektroskopisi

Neutron scattering offers the possibility to probe the dynamics within samples for a wide range of energies in a nondestructive manner and without ...

Advancing High-Resolution Imaging of Virus Assemblies in Liquid and Ice

Sıvı ve Buzdaki Virüs Düzeneklerinin Yüksek Çözünürlüklü Görüntülenmesinin İlerlemesi

Interest in liquid-electron microscopy (liquid-EM) has skyrocketed in recent years as scientists can now observe real-time processes at the nanoscale. It ...

High-Throughput Quantification of the Synthesis and Distribution of mtDNA

High-Throughput Image-Based Quantification of Mitochondrial DNA Synthesis and Distribution

High-Throughput Image-Based Quantification of Mitochondrial DNA Synthesis and Distribution (Video) | JoVE 

Mitokondriyal DNA Sentezi ve Dağılımının Yüksek Verimli Görüntü Tabanlı Nicelleştirilmesi

The vast majority of cellular processes require a continuous supply of energy, the most common carrier of which is the ATP molecule. Eukaryotic cells ...

Stable Isotope Tracing & LC-MS Analysis to Measure DHODH and SDH Activities

Oxygen-Independent Assays to Measure Mitochondrial Function in Mammals

Oxygen-Independent Assays to Measure Mitochondrial Function in Mammals (Video) | JoVE 

Memelilerde Mitokondriyal Fonksiyonu Ölçmek için Oksijenden Bağımsız Tahliller

The flow of electrons in the mitochondrial electron transport chain (ETC) supports multifaceted biosynthetic, bioenergetic, and signaling functions in ...