Name: protocol for developing a femur osteotomy model in wistar albino rats
Uploaded: 2022-08-31T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Protocol for Developing a Femur Osteotomy Model in Wistar Albino Rats at JoVE.com

המחברים רוצים להודות למועצה המרכזית למחקר בהומאופתיה (CCRH), משרד איו"ש, ממשלת הודו, על מימון המחקר. המחברים מודים על העזרה והתמיכה של מתקן החיות המרכזי, AIIMS, ניו דלהי, על עזרתם ותמיכתם בניסויים בבעלי חיים ו- CMET, AIIMS, ניו דלהי, על עזרתם ותמיכתם בצילום ווידאוגרפיה.

ניסויים בבעלי חיים נעשו לאחר קבלת אישור אתי מהוועדה המוסדית לאתיקה בבעלי חיים (IAEC), AIIMS, ניו דלהי, הודו (286/IAEC-1/2021).
1. הליך טרום ניתוחי
<ol><li>בית זכר Wistar חולדות לבקנים 6-8 שבועות של גיל, במשקל בין 150-200 גרם כל אחד, במתקן בעלי חיים מרכזי (CAF) בכלובים נפרדים. זה מבטיח שלא תהיה פג...

<ol>
	<li>Wang, T., Zhang, X., Bikle, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteogenic+differentiation+of+periosteal+cells+during+fracture+healing.">Osteogenic differentiation of periosteal cells during fracture healing.</a> Journal of Cellular Physiology. 232 (5), 913-921 (2017).</li><li>Fakhry, M., Hamade, E., Badran, B., Buchet, R., Magne, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+mesenchymal+stem+cell+differentiation+towards+osteoblasts.">Molecular mechanisms of mesenchymal stem cell differentiation towards osteoblasts.</a> World Journal of Stem Cells. 5 (4), 136-148 (2013).</li><li>Bishop, J. A., Palanca, A. A., Bellino, M. J., Lowenberg, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+compromised+fracture+healing.">Assessment of compromised fracture healing.</a> JAAOS - Journal of the American Academy of Orthopaedic Surgeons. 20 (5), 273-282 (2012).</li><li>Fong, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predictors+of+nonunion+and+reoperation+in+patients+with+fractures+of+the+tibia:+an+observational+study.">Predictors of nonunion and reoperation in patients with fractures of the tibia: an observational study.</a> BMC Musculoskeletal Disorders. 14 (1), 103 (2013).</li><li>Ramoutar, D. N., Rodrigues, J., Quah, C., Boulton, C., Moran, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Judet+decortication+and+compression+plate+fixation+of+long+bone+nonunion:+Is+bone+graft+necessary.">Judet decortication and compression plate fixation of long bone nonunion: Is bone graft necessary.</a> Injury. 42 (12), 1430-1434 (2011).</li><li>Goulet, J. A., Senunas, L. E., DeSilva, G. L., Greenfield, M. L. V. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autogenous+iliac+crest+bone+graft:+Complications+and+functional+assessment.">Autogenous iliac crest bone graft: Complications and functional assessment.</a> Clinical Orthopaedics and Related Research. 339, 76-81 (1997).</li><li>Stevenson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+review+and+economic+evaluation+of+alendronate,+etidronate,+risedronate,+raloxifene+and+teriparatide+for+the+prevention+and+treatment+of+postmenopausal+osteoporosis.">A systematic review and economic evaluation of alendronate, etidronate, risedronate, raloxifene and teriparatide for the prevention and treatment of postmenopausal osteoporosis.</a> Health Technology Assessment. 9 (22), 1 (2005).</li><li>Haffner-Luntzer, M., Kovtun, A., Rapp, A. E., Ignatius, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+in+bone+fracture+healing+research.">Mouse models in bone fracture healing research.</a> Current Molecular Biology Reports. 2 (2), 101-111 (2016).</li><li>Mills, L. A., Simpson, A. H. R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+models+of+bone+repair.">In vivo models of bone repair.</a> The Journal of Bone and Joint Surgery. British Volume. 94 (7), 865-874 (2012).</li><li>Houdebine, L. -. M., Sioud, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+Animal+Models+in+Biomedical+Research.">Transgenic Animal Models in Biomedical Research.</a> Target Discovery and Validation Reviews and Protocols: Volume 1, Emerging Strategies for Targets and Biomarker Discovery. , (2007).</li><li>Histing, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+animal+bone+healing+models:+Standards,+tips+and+pitfalls+results+of+a+consensus+meeting.">Small animal bone healing models: Standards, tips and pitfalls results of a consensus meeting.</a> Bone. 49 (4), 591-599 (2011).</li><li>Bonnarens, F., Einhorn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+a+standard+closed+fracture+in+laboratory+animal+bone.">Production of a standard closed fracture in laboratory animal bone.</a> Journal of Orthopaedic Research. 2 (1), 97-101 (1984).</li><li>Klein, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+healing+process+in+open+osteotomy+model+and+open+fracture+model:+delayed+healing+of+osteotomies+after+intramedullary+screw+fixation.">Comparison of healing process in open osteotomy model and open fracture model: delayed healing of osteotomies after intramedullary screw fixation.</a> Journal of Orthopaedic Research. 33 (7), 971-978 (2015).</li><li>Kolios, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Do+estrogen+and+alendronate+improve+metaphyseal+fracture+healing+when+applied+as+osteoporosis+prophylaxis.">Do estrogen and alendronate improve metaphyseal fracture healing when applied as osteoporosis prophylaxis.</a> Calcified Tissue International. 86 (1), 23-32 (2010).</li><li>Holstein, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+establishment+of+defined+mouse+models+for+the+study+of+fracture+healing+and+bone+regeneration.">Advances in the establishment of defined mouse models for the study of fracture healing and bone regeneration.</a> Journal of Orthopaedic Trauma. 23, 31-38 (2009).</li><li>Umiatin, U., Dilogo, I. H., Sari, P., Wijaya, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histological+analysis+of+bone+callus+in+delayed+union+model+fracture+healing+stimulated+with+pulsed+electromagnetic+fields+(PEMF).">Histological analysis of bone callus in delayed union model fracture healing stimulated with pulsed electromagnetic fields (PEMF).</a> Scientifica. 2021, 4791172 (2021).</li><li>Han, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+osteogenic+potential+of+human+bone+callus.">The osteogenic potential of human bone callus.</a> Scientific Reports. 6, 36330 (2016).</li><li>Haffner-Luntzer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mouse+model+to+study+fracture+healing+of+the+proximal+femur.">A novel mouse model to study fracture healing of the proximal femur.</a> Journal of Orthopaedic Research. 38 (10), 2131-2138 (2020).</li><li>Aur&#233;gan, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+rat+model+of+femur+fracture+for+bone+and+mineral+research:+An+improved+description+of+expected+comminution,+quantity+of+soft+callus+and+incidence+of+complications.">The rat model of femur fracture for bone and mineral research: An improved description of expected comminution, quantity of soft callus and incidence of complications.</a> Bone &amp; Joint Research. 2 (8), 149-154 (2013).</li><li>Li, Z., Helms, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drill+hole+models+to+investigate+bone+repair.">Drill hole models to investigate bone repair.</a> Methods in Molecular Biology. 2221, 193-204 (2021).</li><li>Handool, K. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+a+closed+rat+tibial+fracture+model.">Optimization of a closed rat tibial fracture model.</a> Journal of Experimental Orthopaedics. 5 (1), 13 (2018).</li><li>Kobata, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+bone+infection+after+open+fracture+using+a+chitosan+with+ciprofloxacin+implant+in+animal+model.">Prevention of bone infection after open fracture using a chitosan with ciprofloxacin implant in animal model.</a> Acta Cirurgica Brasileira. 35 (8), 202000803 (2020).</li></ol>

שיטה זו מתארת בבהירות את הפרטים הדרושים לפיתוח מודל אוסטאוטומיה של שבר בחולדות לבקנים של Wistar. מודל זה יכול לשמש כדי להעריך את ההשפעה האוסטאוגנית של תרופה אוסטאואנבולית מבטיחה בריפוי שברים, כמו גם להבין את המורכבות של ריפוי עצם. התכונה הבולטת של שיטה זו היא שהיא פשוטה ואינה זקוקה ליותר מדי ...

עצם היא רקמת חיבור צפופה המורכבת מתאים יוצרי עצם, אוסטאובלסטים, ותאים סופגי עצמות, האוסטאוקלסטים. ריפוי שברים הוא תהליך פיזיולוגי המביא להתחדשות פגמים בעצמות על ידי פעולה מתואמת של אוסטאובלסטים ואוסטאוקלסטים1. כאשר יש שבר, פעילות אוסטאובלסטית ואוסטאוקלסטית באתר השבר הם חלק מהגורמים החשובים הקובעים את ריפוי העצם2. כאשר ריפוי שברים חורג ממסלולו הרגיל, הוא גורם לעיכוב באיחוד, אי-איחוד או אי-איחוד. שבר אמור להיות ב- nonunion כאשר יש כשל של איחוד של השבר במשך 9 חודשים, ללא התקדמות של תיקון ב 3 החודשים האחרונים3. כ-10%-15% מכלל השברים חווים עיכוב בתיקון שעלול להתקדםל-nonunion 4. שיעור אי-האיחוד של כל השברים הוא 5%-10% ומשתנה בהתאם לעצם המעורבת ולאתר השבר5.
המשטר הנוכחי לטיפול בשברים כולל שיטות כירורגיות ו/או רפואיות. נכון לעכשיו, עיכוב או nonunion של שברים ניתן להתגבר על ידי אסטרטגיות כירורגיות כמו השתלת עצם. עם זאת, להשתלת עצם יש מגבלות וסיבוכים כמו זמינות של רקמת השתל, כאבים באתר התורם, תחלואה וזיהום6. הטיפול הרפואי כולל תרופות אוסטאואנאבוליות כמו חלבון מורפוגנטי של העצם (BMP) וטריפראטיד (אנלוגי פאראטמונרלי). לחומרים אוסטאואנבוליים הנמצאים בשימוש כיום יש פוטנציאל להגביר את תיקון השברים אך יש להם אילוצים כמו עלויות מופקעות או תופעות לוואי לא רצויות7. לפיכך, יש מקום לזיהוי חלופות חסכוניות ולא כירורגיות לריפוי עצם. פוטנציאל ריפוי העצם של תרופה יכול להיקבע בתחילה על ידי מחקרים במבחנה , אך מחקרי in vivo נדרשים להוכחת ההיתכנות הסופית. תרופה הידועה כמשפרת את ריפוי העצם צריכה לעבור הערכה במבחנה , ואם היא נמצאת מבטיחה, ניתן להשתמש בה למחקרי מודל של חיות in vivo . אם התרופה תוכיח שהיא מקדמת היווצרות עצם ושיפוץ מחדש במודל in vivo , היא תוכל להמשיך לשלב הבא (כלומר, ניסויים קליניים).
הערכת ריפוי שברים בבעלי חיים היא צעד הגיוני קדימה כדי להעריך סוכן חדש שהוכנס לריפוי עצם לפני שהוא עובר ניסויים בבני אדם. עבור מחקרי מודל בעלי חיים in vivo של ריפוי שברים, מכרסמים הפכו למודל8 פופולרי יותר ויותר. דגמי המכרסמים עוררו עניין הולך וגובר בשל עלויות התפעול הנמוכות, הצורך המוגבל במקום ופחות זמן הדרוש לריפוי עצם9. בנוסף, למכרסמים יש ספקטרום רחב של נוגדנים ומטרות גנטיות, המאפשרים מחקרים על המנגנונים המולקולריים של ריפוי והתחדשות עצם10. ישיבת קונצנזוס הדגישה באופן מקיף מודלים שונים לריפוי עצמות של בעלי חיים קטנים והתמקדה בפרמטרים השונים המשפיעים על ריפוי העצם, כמו גם בדגש על מספר מודלים של שברים ושתלים של בעלי חיים קטנים11.
ניתן לחלק את מודלי השבר הבסיסיים באופן רחב למודלים פתוחים או סגורים. מודלים של שבר סגור משתמשים בכוח כיפוף של שלוש או ארבע נקודות על העצם ואינם דורשים גישה כירורגית קונבנציונלית. הם מובילים לשברים אלכסוניים או ספירליים, הדומים לשברים ארוכים בעצמות בבני אדם, אך היעדר סטנדרטיזציה של מיקום השבר ומממדיו עשוי לשמש גורם מבלבל בהם12. מודלים של שבר פתוח דורשים גישה כירורגית לאוסטאוטומיה של העצם, עוזרים להשיג דפוס שבר עקבי יותר באתר השבר, אך קשורים להחלמה מאוחרת בהשוואה למודלים הסגורים13. הבחירה בעצם המשמשת לחקר ריפוי שברים נותרה בעיקר השוקה ועצם הירך בשל מידותיהם ונגישותם. הבחירה של אתר השבר היא בדרך כלל diaphysis או metaphysis. האזור המטאפיזיאלי נבחר במיוחד במקרים בהם ריפוי שברים נלמד בנושאים אוסטאופורוטיים, שכן המטאפיזה מושפעת יותר מאוסטאופורוזיס14. ניתן להשתמש במספר שתלים כמו פינים תוך-מדולריים וקיבועים חיצוניים כדי לייצב את השבר11,15.
מטרת המחקר הייתה לפתח מודל מכרסמים פשוט וקל למעקב, שיוכל לסייע לחוקרים לא רק להבין את התפתחות היבלת בעקבות שבר בעצם הירך, אלא גם לסייע לקבוע אם לתרופה פוטנציאלית יש תכונות ריפוי עצם על ידי הבנת המנגנון שבאמצעותו היא פועלת.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alcohol</td>
			<td>Raman &#38; Weil Pvt. Ltd, Mumbai, Maharashtra, India</td>
			<td>MFG/MD/2019/000189</td>
			<td>Sterillium hand disinfectant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artery forceps&#160;</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>G.105.05S</td>
			<td>5&#34;, straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bard-Parker handle&#160;</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>G.103.03</td>
			<td>Size number 3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine solution</td>
			<td>Win-medicare New Delhi, India</td>
			<td>UP14250000001</td>
			<td>10% w/v Povidone iodine solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cat&#39;s-paw skin retractor&#160;</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>908.S</td>
			<td>Small</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sisco research laboratories Pvt. Ltd, Maharashtra, India</td>
			<td>43272</td>
			<td>Disodium salt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>Sigma Aldrich, Merck Life Sciences Pvt Ltd, Mumbai, Maharashtra, India</td>
			<td>115935</td>
			<td>For preparing the staining solution&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps (plain)</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>115.06</td>
			<td>6&#34;, plain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps (toothed)</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>117.06</td>
			<td>6&#34;, toothed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Sisco research laboratories Pvt. Ltd, Maharashtra, India</td>
			<td>84439</td>
			<td>For preparing the neutral buffered formalin&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Haematoxylin</td>
			<td>Sigma Aldrich, Merck Life Sciences Pvt Ltd, Mumbai, Maharashtra, India</td>
			<td>104302</td>
			<td>For preparing the staining solution&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hammer</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>401.M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection Cefuroxime</td>
			<td>Akumentis Healthcare Ltd, Thane, Maharashtra, India</td>
			<td>48/UA/SC/P-2013</td>
			<td>Cefuroxime sodium IP, 1.5 g/vial&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection Ketamine</td>
			<td>Baxter Pharmaceuticals India Private Limited, Gujarat, India</td>
			<td>G/28-B/6</td>
			<td>Ketamine hydrochloride IP, 50 mg/mL&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection Xylazine</td>
			<td>Indian Immunologicals Limited, Hyderabad, Telangana, India</td>
			<td>28/RR/AP/2009/F/G</td>
			<td>Xylazine hydrochloride USP, 20 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection Lignocaine</td>
			<td>Jackson laboratories Pvt Limited, Punjab, India&#160;</td>
			<td>1308-B</td>
			<td>2% Lignocaine Hydrochloride IP, 21.3 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection Tramadol&#160;</td>
			<td>Intas Pharmaceuticals Limited, Ahmedabad, Gujarat, India</td>
			<td>MB/07/500</td>
			<td>Tramadol hydrochloride IP, 50 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K-wire&#160;</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>166 (1mm)</td>
			<td>12&#34;, double ended</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mechanical drill for inserting K-wire</td>
			<td>&#8206;Bosch, Germany&#160;</td>
			<td>06019F70K4</td>
			<td>GSR 120-LI Professional</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum cutting scissors&#160;</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>G.121.06S</td>
			<td>6&#34;, straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>G.108.06</td>
			<td>6&#34;, straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic ointment&#160;</td>
			<td>GlaxoSmithKline Pharmaceutical Limited, Bengaluru, Karnataka, India</td>
			<td>KTK/28a/467/2001</td>
			<td>Neomycin, Polymixin B sulfate and Bacitracin zinc ophthalmic ointment USP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osteotome (chisel)</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>1001.S.10</td>
			<td>10 mm, straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Periosteal elevator&#160;</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>918.10.S</td>
			<td>10 mm, straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pliers cum wire cutter</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>604.65</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reynold&#8217;s scissors</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>G.110.06S</td>
			<td>6&#34;, straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard semi-synthetic diet&#160;</td>
			<td>Ashirvad Industries, Chandigarh, India</td>
			<td>No catalog number available</td>
			<td>Detailed composition provided in materials used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steel cup for keeping betadine for application</td>
			<td>Local purchase</td>
			<td>No catalog number available</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steel tray with lid for autoclaving instruments</td>
			<td>Local purchase</td>
			<td>No catalog number available</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gauze</td>
			<td>Ideal Healthcare Industries, Delhi, India&#160;</td>
			<td>E(0047)/14/MNB/7951</td>
			<td>Sterile, 5cmx5cm, 12 ply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile marble block for support</td>
			<td>Local purchase</td>
			<td>No catalog number available</td>
			<td>Locally fabricated; autoclavable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe and needle (1 mL)&#160;</td>
			<td>Becton Dickinson India Pvt. Ltd., Haryana, India</td>
			<td>REF 303060</td>
			<td>1 mL sterile Syringe with 26 G x 1/2 (0.45 mm x 13 mm) needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe and needle (2 mL)&#160;</td>
			<td>Becton Dickinson India Pvt. Ltd., Haryana, India</td>
			<td>REF 307749</td>
			<td>2 mL sterile syringe with 24 G x 1&#39;&#39; (0.55 mm x 25 mm) needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe and needle (10 mL)&#160;</td>
			<td>Hindustan Syringes &#38; Medical Devices Ltd. Faridabad, India&#160;</td>
			<td>334-B(H)</td>
			<td>10 mL sterile syringe with 21 G x1.5&#34; (0.80 mm x 38 mm) needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical blades (size no.15)</td>
			<td>Paramount Surgimed Ltd, New Delhi, India for Medline Industries Inc, IL, USA</td>
			<td>REF MDS15115E</td>
			<td>Sterile, Single use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical blades (size no.24)</td>
			<td>Paramount Surgimed Ltd, New Delhi, India for Medline Industries Inc, IL, USA</td>
			<td>REF MDS15124E</td>
			<td>Sterile, Single use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures</td>
			<td>Healthium Medtech Pvt Ltd, Bangalore, Karnataka, India</td>
			<td>SN 3318</td>
			<td>4-0, 16 mm, 3/8 circle cutting needle, monofilament polyamide suture&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wax block in aluminium tray&#160;</td>
			<td>Locally fabricated</td>
			<td>No catalog number available</td>
			<td>30 cm x 30 cm x 4 cm aluminium tray containing wax (to prevent animal from slipping)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray machine</td>
			<td>Philips India Ltd, Gurugram, Haryana</td>
			<td>SN19861013</td>
			<td>Model: Philips Digital Diagnost R 4.2&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

protocol for developing a femur osteotomy model in wistar albino rats

ריפוי שברים הוא תהליך פיזיולוגי המביא להתחדשות פגמים בעצמות על ידי פעולה מתואמת של אוסטאובלסטים ואוסטאוקלסטים. לתרופות אוסטאואנבוליות יש פוטנציאל להגביר את תיקון השברים, אך יש להן אילוצים כמו עלויות גבוהות או תופעות לוואי לא רצויות. פוטנציאל ריפוי העצם של תרופה יכול להיקבע בתחילה על ידי מחקרים במבחנה , אך מחקרי in vivo נדרשים להוכחת ההיתכנות הסופית. מטרתנו הייתה לפתח מודל מכרסם אוסטאוטומיה של עצם הירך שיוכל לסייע לחוקרים להבין את התפתחות היווצרות היבלות בעקבות שבר בפיר עצם הירך, ושיוכל לעזור לקבוע אם לתרופה פוטנציאלית יש תכונות ריפוי עצם. חולדות לבקנים זכרים בוגרים של Wistar שימשו לאחר אישור ועדת האתיקה של בעלי החיים המוסדיים. המכרסמים הורדמו, ובתנאים אספטיים נוצרו שברים רוחביים שלמים בשליש האמצעי של פירי עצם הירך באמצעות אוסטאוטומיה פתוחה. השברים צומצמו וקובעו פנימית באמצעות חוטי K תוך-מדולריים, וריפוי שברים משני הותר להתרחש. לאחר הניתוח, משככי כאבים intraperitoneal ואנטיביוטיקה ניתנו במשך 5 ימים. צילומי רנטגן שבועיים רציפים העריכו היווצרות יבלות. החולדות הוקרבו על סמך נקודות זמן רדיולוגיות שנקבעו מראש, והתפתחות יבלת השבר נותחה באופן רדיולוגי ובאמצעות אימונוהיסטוכימיה.

מחקר זה נערך כדי לפתח מודל של אוסטאוטומיה של עצם הירך בחולדות לבקנים של Wistar. מודל זה יכול לשמש להערכת ריפוי עצם, כמו גם את ההשפעה האוסטאוגנית של תרופה אוסטאואנאבולית מבטיחה בריפוי עצם. אמצעי זהירות ופרוטוקולים כירורגיים סטנדרטיים ננקטו. חלוקים סטריליים, וילונות וציוד כירורגי שימשו להליך (...

Watch this Scientific Journal Video about Protocol for Developing a Femur Osteotomy Model in Wistar Albino Rats at JoVE.com

Protocol for Developing a Femur Osteotomy Model in Wistar Albino Rats

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לשבר יאטרוגני של פיר עצם הירך של חולדות לבקנים Wistar ומעקב אחר התפתחות היבלת. מודל זה של אוסטאוטומיה של עצם הירך יכול לסייע לחוקרים להעריך את תהליך ריפוי השבר ולחקור כיצד תרופה יכולה להשפיע על ריפוי שברים.

פרוטוקול לפיתוח מודל אוסטאוטומיה של עצם הירך בחולדות ויסטאר אלבינו

Fracture healing is a physiological process resulting in the regeneration of bone defects by the coordinated action of osteoblasts and osteoclasts. ...

מודל זה של אוסטאוטומיה של עצם הירך יכול לסייע לחוקרים לחקור את תהליך ריפוי השבר ולהעריך כיצד תרופה יכולה להשפיע על ריפוי שברים. זהו מודל מכרסמים פשוט וקל למעקב שיכול לעזור לחוקרים לזהות אם לתרופה יש תכונות ריפוי עצם ולהבין את מנגנון הפעולה שלה. למרות שהוא מתמקד בעיקר בהתבוננות וניתוח של ריפוי שברים, הוא יכול גם לתת תובנות על פתוגנזה של מחלות.שיטה זו יכולה להנחות מחקרים עתידיים על ריפוי עצמות בבריאות ובמחלות. זה יכול לשמש כדי להעריך את ההשפעה של תרופות אוסטאואנבוליות פוטנציאליות. גרימת קו שבר תקין וקיבוע שבר עם חוט K הם מאתגרים.כמה מפגשי תרגול אמורים לעזור. הפשטות והשכפול של שיטה זו ניכרים בהדגמה החזותית שלה Pawan Pagaku, תושב זוטר מהמעבדה שלי, יעזור להדגים את ההליך. כדי להתחיל מניחים את גוש השעווה המכיל שעווה עד לעומק של 2.5 ס"מ על שולחן הניתוחים ומכסים אותו בווילונות סטריליים.לאחר ביצוע חתך עור אנכי של סנטימטר אחד בצד הצדדי של ירך ימין, חושפים את שריר ה-vastus lateralis על ידי הפרדת החיתולית העמוקה באמצעות מספריים של מצנבאום. פיצול vastus lateralis בקנה אחד עם סיבי השריר עד פיר של עצם הירך הוא הגיע. לאחר מכן, השתמש במעלית periosteal כדי לשחרר את העצם מן השרירים המחוברים אליו.לאחר הזרקת הרדמה מקומית בתוך ומסביב לפריוסטאום, יש ליצור כניסה בשליש האמצעי של פיר עצם הירך באמצעות להב כירורגי מספר 15. מניחים אזמל על הכניסה ומקישים בעדינות על האזמל עם פטיש כדי לשבור לחלוטין את העצם בשליש האמצעי של הפיר. לתקן באופן פנימי את השבר באמצעות חוט K סטרילי של מילימטר אחד המוחזק בעזרת מקדחה כוח המופעלת על ידי סוללה.מעבירים את חוט ה- K לתעלה המדולרית של השבר הדיסטלי דרך אתר השבר. לאחר מכן, קדחו את חוט ה-K דרך הקצה הדיסטלי של עצם הירך. לאחר הפחתת השבר, לקדם את חוט K מן הקצה הדיסטלי לתוך התעלה של שבר פרוקסימלי עד שהוא מקבל רכישה באזור trochanteric.חותכים את החלק הדיסטלי של חוט K הבולט דרך העור באמצעות חותך חוטים. כופפו את קצה חוט ה-K לכ-90 מעלות באמצעות צבתות והשתמשו בתחבושת גזה ספוגה בבטאדין לחבישת סיכות. חוט K פועל כמו סד intramedullary לשמירה על השבר במצב מופחת.הפעל לחץ על אזור הדימום באמצעות גזה סטרילית או מלקחיים עורקים כדי לעצור כל דימום. יש להבטיח המוסטזיס מלא לפני סגירת העור באמצעות תפר ניילון 4-0. נקה את הפצע עם Betadine ולכסות אותו עם גזה סטרילית סרט דבק micropore.לטיפול לאחר הניתוח, החזירו את החולדות לכלובים שלהן והמשיכו לתת תזונה חצי סינתטית סטנדרטית, כמו גם אנטיביוטיקה ומשככי כאבים תוך צפק במשך חמישה ימים לאחר ההליך. לבסוף, להעריך ריפוי העצם על ידי צילום רנטגן של האתר השבור פעם בשבוע. צילומי רנטגן של עצם הירך של החולדה עם חוט K NC2 לפני גרימת השבר, ויום אחד לאחר הניתוח מוצגים כאן.ריפוי השבר מנוטר באופן רדיולוגי על ידי ביצוע צילומי רנטגן שבועיים רציפים של האתר המנותח כדי להעריך את היווצרות היבלות. השבר נשאר מופחת ומשותק עם חוט K intramedullary. לאחר ההקרבה בנקודת זמן שנקבעה מראש, עצם הירך נשמרה בקפידה בפורמלין, ולאחר מכן פירוק עצם.עצם עם יבלת הושגה לאחר decalcification אופטימלי. החלק השלם של היבלה, והחלק הסגיטלי של היבלת מוצגים כאן. היבלת מוערכת לסירוגין כדי להבטיח דה-קלקציה אופטימלית לפני הערכתה באמצעות טכניקות אחרות.תמונות הגדלה נמוכה והגדלה גבוהה של החלק המוכתם בהמטוקסילין ובאוזין של אתר השבר מוצגות כאן. החלקים המוכתמים של אתר השבר מראים יבלת קשה עם היווצרות סחוס ועצם חדשה. ניתן לראות כאן את הקצה השבור של העצם ואת האזור השני בקליפת המוח.החלק הרגיש ביותר לכאב של הפצע, והוא חיוני כדי לחדור את periosteum באתר השבר עם הרדמה מקומית לפני osteotomy. זה יכול להיות ואחריו ניתוח אימונוהיסטוכימי ורדיולוגי של callous, מיקרו-CT עבור histomorphometry כמותי, ניתוח הכוח הביומכני של ניתוח יבלות של סרום. טכניקה זו שימושית כדי לקבוע את הפוטנציאל האוסטאוגני, מנגנון הפעולה והניתוח ההשוואתי של תרופות אוסטאואנאבוליות מבטיחות.

Research

JoVE Journal

Medicine

Quantifying Glomerular Permeability of Fluorescent Macromolecules Using 2-Photon Microscopy in Munich Wistar Rats

כימות חדירות גלומרולרי של מקרומולקולות פלורסנט באמצעות מיקרוסקופ 2-פוטון בחולדות Wistar מינכן

Kidney  diseases involving urinary loss of large essential macromolecules, such as  serum albumin, have long been thought to be caused by alterations in ...

A Contusion Model of Severe Spinal Cord Injury in Rats

דגם חבורה של פגיעה בחוט השדרה חמורה בחולדות

The translational potential of novel treatments should be investigated in severe spinal cord injury (SCI) contusion models. A detailed methodology is ...

Ascending Aortic Constriction in Rats for Creation of Pressure Overload Cardiac Hypertrophy Model

עולה אבי העורקים תעוקה בחולדות ליצירת עומס יתר לחץ לב היפרטרופיה הדגם

Ascending aortic constriction is the most common and successful surgical model for creating pressure overload induced cardiac hypertrophy and heart ...

Adjustable Stiffness, External Fixator for the Rat Femur Osteotomy and Segmental Bone Defect Models

נוקשות מתכוונן, תופסנים חיצוניים למודלים של עכברי ירך osteotomy ומגזרי עצם הפגם

The mechanical environment around the healing of broken bone is very important as it determines the way the fracture will heal. Over the past decade there ...

A Novel Model of Mild Traumatic Brain Injury for Juvenile Rats

דגם רומן של טראומטית קל פגיעה מוחית לחולדות לנוער

Despite growing evidence that childhood represents a major risk period for mild traumatic brain injury (mTBI) from sports-related concussions, motor ...

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

שיטה של ​​מבודד<em&gt; Ex Vivo</em&gt; ריאות זלוף במודל עכברוש: ​​לקחים מפיתוח תכנית EVLP עכברוש

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

לומד סרטן לבלב גזע מאפייני תא לפיתוח טיפול חדש אסטרטגיות

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Heterotopic Renal Autotransplantation in a Porcine Model: A Step-by-Step Protocol

Heterotopic כליה Autotransplantation במודל חזירי: פרוטוקול צעד-אחר-צעד

Kidney transplantation is the treatment of choice for patients suffering from end-stage renal disease. It offers better life expectancy and higher quality ...

A Model of Glaucoma Induced by Circumlimbal Suture in Rats and Mice

דגם של גלאוקומה המושרה על ידי תפרים Circumlimbal אצל חולדות ועכברים

The circumlimbal suture is a technique for inducing experimental glaucoma in rodents by chronically elevating intraocular pressure (IOP), a well-known ...

A Reproducible Intensive Care Unit-Oriented Endotoxin Model in Rats

מודל אנדוטוקסין מוכוון יחידת טיפול נמרץ הניתנת לשחזור בחולדות

Sepsis and septic shock remain the leading cause of death in intensive care units. Despite significant improvements in sepsis management, mortality still ...