Name: protocol for developing a femur osteotomy model in wistar albino rats
Uploaded: 2022-08-31T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Protocol for Developing a Femur Osteotomy Model in Wistar Albino Rats at JoVE.com

Gli autori desiderano ringraziare il Consiglio centrale per la ricerca in omeopatia (CCRH), il Ministero dell'AYUSH, il governo dell'India, per il finanziamento della ricerca. Gli autori sono grati per l'aiuto e il supporto di Central Animal Facility, AIIMS, Nuova Delhi, per il loro aiuto e supporto con gli esperimenti sugli animali e CMET, AIIMS, Nuova Delhi, per il loro aiuto e supporto nella fotografia e nella videografia.

Gli esperimenti sugli animali sono stati condotti dopo aver ottenuto l'approvazione etica dall'Institutional Animal Ethics Committee (IAEC), AIIMS, Nuova Delhi, India (286 / IAEC-1 / 2021).
1. Procedura preoperatoria
<ol><li>Ratti albini Wistar maschi di 6-8 settimane di età, del peso compreso tra 150-200 g ciascuno, in una struttura animale centrale (CAF) in gabbie individuali separate. Ciò garantisce l'assenza di lesioni chirurgiche / fratture quando più ratti condivido...

<ol>
	<li>Wang, T., Zhang, X., Bikle, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteogenic+differentiation+of+periosteal+cells+during+fracture+healing.">Osteogenic differentiation of periosteal cells during fracture healing.</a> Journal of Cellular Physiology. 232 (5), 913-921 (2017).</li><li>Fakhry, M., Hamade, E., Badran, B., Buchet, R., Magne, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+mesenchymal+stem+cell+differentiation+towards+osteoblasts.">Molecular mechanisms of mesenchymal stem cell differentiation towards osteoblasts.</a> World Journal of Stem Cells. 5 (4), 136-148 (2013).</li><li>Bishop, J. A., Palanca, A. A., Bellino, M. J., Lowenberg, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+compromised+fracture+healing.">Assessment of compromised fracture healing.</a> JAAOS - Journal of the American Academy of Orthopaedic Surgeons. 20 (5), 273-282 (2012).</li><li>Fong, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predictors+of+nonunion+and+reoperation+in+patients+with+fractures+of+the+tibia:+an+observational+study.">Predictors of nonunion and reoperation in patients with fractures of the tibia: an observational study.</a> BMC Musculoskeletal Disorders. 14 (1), 103 (2013).</li><li>Ramoutar, D. N., Rodrigues, J., Quah, C., Boulton, C., Moran, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Judet+decortication+and+compression+plate+fixation+of+long+bone+nonunion:+Is+bone+graft+necessary.">Judet decortication and compression plate fixation of long bone nonunion: Is bone graft necessary.</a> Injury. 42 (12), 1430-1434 (2011).</li><li>Goulet, J. A., Senunas, L. E., DeSilva, G. L., Greenfield, M. L. V. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autogenous+iliac+crest+bone+graft:+Complications+and+functional+assessment.">Autogenous iliac crest bone graft: Complications and functional assessment.</a> Clinical Orthopaedics and Related Research. 339, 76-81 (1997).</li><li>Stevenson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+review+and+economic+evaluation+of+alendronate,+etidronate,+risedronate,+raloxifene+and+teriparatide+for+the+prevention+and+treatment+of+postmenopausal+osteoporosis.">A systematic review and economic evaluation of alendronate, etidronate, risedronate, raloxifene and teriparatide for the prevention and treatment of postmenopausal osteoporosis.</a> Health Technology Assessment. 9 (22), 1 (2005).</li><li>Haffner-Luntzer, M., Kovtun, A., Rapp, A. E., Ignatius, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+in+bone+fracture+healing+research.">Mouse models in bone fracture healing research.</a> Current Molecular Biology Reports. 2 (2), 101-111 (2016).</li><li>Mills, L. A., Simpson, A. H. R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+models+of+bone+repair.">In vivo models of bone repair.</a> The Journal of Bone and Joint Surgery. British Volume. 94 (7), 865-874 (2012).</li><li>Houdebine, L. -. M., Sioud, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+Animal+Models+in+Biomedical+Research.">Transgenic Animal Models in Biomedical Research.</a> Target Discovery and Validation Reviews and Protocols: Volume 1, Emerging Strategies for Targets and Biomarker Discovery. , (2007).</li><li>Histing, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+animal+bone+healing+models:+Standards,+tips+and+pitfalls+results+of+a+consensus+meeting.">Small animal bone healing models: Standards, tips and pitfalls results of a consensus meeting.</a> Bone. 49 (4), 591-599 (2011).</li><li>Bonnarens, F., Einhorn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+a+standard+closed+fracture+in+laboratory+animal+bone.">Production of a standard closed fracture in laboratory animal bone.</a> Journal of Orthopaedic Research. 2 (1), 97-101 (1984).</li><li>Klein, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+healing+process+in+open+osteotomy+model+and+open+fracture+model:+delayed+healing+of+osteotomies+after+intramedullary+screw+fixation.">Comparison of healing process in open osteotomy model and open fracture model: delayed healing of osteotomies after intramedullary screw fixation.</a> Journal of Orthopaedic Research. 33 (7), 971-978 (2015).</li><li>Kolios, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Do+estrogen+and+alendronate+improve+metaphyseal+fracture+healing+when+applied+as+osteoporosis+prophylaxis.">Do estrogen and alendronate improve metaphyseal fracture healing when applied as osteoporosis prophylaxis.</a> Calcified Tissue International. 86 (1), 23-32 (2010).</li><li>Holstein, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+establishment+of+defined+mouse+models+for+the+study+of+fracture+healing+and+bone+regeneration.">Advances in the establishment of defined mouse models for the study of fracture healing and bone regeneration.</a> Journal of Orthopaedic Trauma. 23, 31-38 (2009).</li><li>Umiatin, U., Dilogo, I. H., Sari, P., Wijaya, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histological+analysis+of+bone+callus+in+delayed+union+model+fracture+healing+stimulated+with+pulsed+electromagnetic+fields+(PEMF).">Histological analysis of bone callus in delayed union model fracture healing stimulated with pulsed electromagnetic fields (PEMF).</a> Scientifica. 2021, 4791172 (2021).</li><li>Han, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+osteogenic+potential+of+human+bone+callus.">The osteogenic potential of human bone callus.</a> Scientific Reports. 6, 36330 (2016).</li><li>Haffner-Luntzer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mouse+model+to+study+fracture+healing+of+the+proximal+femur.">A novel mouse model to study fracture healing of the proximal femur.</a> Journal of Orthopaedic Research. 38 (10), 2131-2138 (2020).</li><li>Aur&#233;gan, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+rat+model+of+femur+fracture+for+bone+and+mineral+research:+An+improved+description+of+expected+comminution,+quantity+of+soft+callus+and+incidence+of+complications.">The rat model of femur fracture for bone and mineral research: An improved description of expected comminution, quantity of soft callus and incidence of complications.</a> Bone &amp; Joint Research. 2 (8), 149-154 (2013).</li><li>Li, Z., Helms, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drill+hole+models+to+investigate+bone+repair.">Drill hole models to investigate bone repair.</a> Methods in Molecular Biology. 2221, 193-204 (2021).</li><li>Handool, K. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+a+closed+rat+tibial+fracture+model.">Optimization of a closed rat tibial fracture model.</a> Journal of Experimental Orthopaedics. 5 (1), 13 (2018).</li><li>Kobata, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+bone+infection+after+open+fracture+using+a+chitosan+with+ciprofloxacin+implant+in+animal+model.">Prevention of bone infection after open fracture using a chitosan with ciprofloxacin implant in animal model.</a> Acta Cirurgica Brasileira. 35 (8), 202000803 (2020).</li></ol>

Questo metodo descrive lucidamente i dettagli necessari per sviluppare un modello di osteotomia per frattura nei ratti albini Wistar. Questo modello può essere utilizzato per valutare l'effetto osteogenico di un promettente farmaco osteoanabolico nella guarigione delle fratture, nonché per comprendere la complessità della guarigione ossea. La caratteristica saliente di questo metodo è che è semplice e non richiede troppo tempo o attrezzature sofisticate. In questo metodo, i ratti albini maschi adulti Wistar sono sta...

L'osso è un tessuto connettivo denso costituito da cellule che formano l'osso, gli osteoblasti e le cellule che riassorbono l'osso, gli osteoclasti. La guarigione delle fratture è un processo fisiologico che porta alla rigenerazione dei difetti ossei mediante l'azione coordinata di osteoblasti e osteoclasti1. Quando c'è una frattura, l'attività osteoblastica e osteoclastica nel sito della frattura sono alcuni dei fattori importanti che determinano la guarigione ossea2. Quando la guarigione delle fratture devia dal suo corso normale, si traduce in un'unione ritardata, in una malunione o in una non unione. Una frattura si dice non unione quando c'è un fallimento dell'unione della frattura per 9 mesi, senza progressione di riparazione negli ultimi 3 mesi3. Circa il 10%-15% di tutte le fratture subisce un ritardo nella riparazione che può progredire fino alla non-unione4. Il tasso di non unione per tutte le fratture è del 5% -10% e varia a seconda dell'osso coinvolto e del sito di frattura5.
L'attuale regime per il trattamento della non unione delle fratture comprende modalità chirurgiche e/o mediche. Attualmente, il ritardo o la mancata unione delle fratture può essere superato da strategie chirurgiche come l'innesto osseo. Tuttavia, l'innesto osseo ha i suoi limiti e complicazioni come la disponibilità di tessuto di innesto, il dolore del sito donatore, la morbilità e l'infezione6. Il trattamento medico comprende farmaci osteoanabolizzanti come la proteina morfogenetica ossea (BMP) e teriparatide (analogo paratormonale). Gli agenti osteoanabolizzanti attualmente utilizzati hanno il potenziale per aumentare la riparazione delle fratture, ma hanno vincoli come costi esorbitanti o effetti collaterali indesiderati7. Quindi, c'è spazio per identificare alternative economiche e non chirurgiche per la guarigione ossea. Il potenziale di guarigione ossea di un farmaco può inizialmente essere determinato da studi in vitro , ma sono necessari studi in vivo per la prova finale del concetto. Un farmaco noto per migliorare la guarigione ossea deve essere valutato in vitro e, se trovato promettente, può essere utilizzato per studi su modelli animali in vivo . Se il farmaco dimostra di promuovere la formazione e il rimodellamento osseo nel modello in vivo , potrebbe procedere alla fase successiva (cioè studi clinici).
Valutare la guarigione delle fratture negli animali è un passo avanti logico per valutare un nuovo agente introdotto per la guarigione ossea prima che venga sottoposto a prove umane. Per gli studi in vivo su modelli animali di guarigione delle fratture, i roditori sono diventatiun modello 8 sempre più popolare. I modelli di roditori hanno generato un crescente interesse a causa dei bassi costi operativi, della limitata necessità di spazio e del minor tempo necessario per la guarigione delle ossa9. Inoltre, i roditori hanno un ampio spettro di anticorpi e bersagli genici, che consentono studi sui meccanismi molecolari di guarigione e rigenerazione ossea10. Una riunione di consenso ha evidenziato in modo completo vari modelli di guarigione delle ossa di piccoli animali e si è concentrata sui diversi parametri che influenzano la guarigione ossea, oltre a sottolineare diversi modelli di fratture e impianti di piccoli animali11.
I modelli di frattura di base possono essere ampiamente suddivisi in modelli aperti o chiusi. I modelli di frattura chiusa utilizzano una forza di flessione a tre o quattro punti sull'osso e non richiedono un approccio chirurgico convenzionale. Portano a fratture oblique o a spirale, simili a fratture ossee lunghe negli esseri umani, ma la mancanza di standardizzazione della posizione e delle dimensioni della frattura può agire come fattore di confusione in loro12. I modelli di frattura aperti richiedono l'accesso chirurgico per l'osteotomia dell'osso, aiutano a raggiungere un modello di frattura più coerente nel sito di frattura, ma sono associati a una guarigione ritardata rispetto ai modelli chiusi13. La scelta dell'osso utilizzato per studiare la guarigione delle fratture rimane principalmente la tibia e il femore a causa delle loro dimensioni e accessibilità. La scelta del sito di frattura è di solito la diafisi o metafisi. La regione metafisaria è appositamente scelta nei casi in cui la guarigione delle fratture è studiata in soggetti osteoporotici, poiché la metafisi è più influenzata dall'osteoporosi14. Diversi impianti come perni intramidollari e fissatori esterni possono essere utilizzati per stabilizzare la frattura11,15.
L'obiettivo di questo studio era quello di sviluppare un modello di roditore semplice e facile da seguire che potesse aiutare i ricercatori non solo a comprendere lo sviluppo del callo dopo la frattura del femore, ma potrebbe aiutare a determinare se un potenziale farmaco ha proprietà di guarigione ossea comprendendo il meccanismo con cui agisce.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alcohol</td>
			<td>Raman &#38; Weil Pvt. Ltd, Mumbai, Maharashtra, India</td>
			<td>MFG/MD/2019/000189</td>
			<td>Sterillium hand disinfectant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artery forceps&#160;</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>G.105.05S</td>
			<td>5&#34;, straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bard-Parker handle&#160;</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>G.103.03</td>
			<td>Size number 3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine solution</td>
			<td>Win-medicare New Delhi, India</td>
			<td>UP14250000001</td>
			<td>10% w/v Povidone iodine solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cat&#39;s-paw skin retractor&#160;</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>908.S</td>
			<td>Small</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sisco research laboratories Pvt. Ltd, Maharashtra, India</td>
			<td>43272</td>
			<td>Disodium salt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>Sigma Aldrich, Merck Life Sciences Pvt Ltd, Mumbai, Maharashtra, India</td>
			<td>115935</td>
			<td>For preparing the staining solution&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps (plain)</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>115.06</td>
			<td>6&#34;, plain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps (toothed)</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>117.06</td>
			<td>6&#34;, toothed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Sisco research laboratories Pvt. Ltd, Maharashtra, India</td>
			<td>84439</td>
			<td>For preparing the neutral buffered formalin&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Haematoxylin</td>
			<td>Sigma Aldrich, Merck Life Sciences Pvt Ltd, Mumbai, Maharashtra, India</td>
			<td>104302</td>
			<td>For preparing the staining solution&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hammer</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>401.M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection Cefuroxime</td>
			<td>Akumentis Healthcare Ltd, Thane, Maharashtra, India</td>
			<td>48/UA/SC/P-2013</td>
			<td>Cefuroxime sodium IP, 1.5 g/vial&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection Ketamine</td>
			<td>Baxter Pharmaceuticals India Private Limited, Gujarat, India</td>
			<td>G/28-B/6</td>
			<td>Ketamine hydrochloride IP, 50 mg/mL&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection Xylazine</td>
			<td>Indian Immunologicals Limited, Hyderabad, Telangana, India</td>
			<td>28/RR/AP/2009/F/G</td>
			<td>Xylazine hydrochloride USP, 20 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection Lignocaine</td>
			<td>Jackson laboratories Pvt Limited, Punjab, India&#160;</td>
			<td>1308-B</td>
			<td>2% Lignocaine Hydrochloride IP, 21.3 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection Tramadol&#160;</td>
			<td>Intas Pharmaceuticals Limited, Ahmedabad, Gujarat, India</td>
			<td>MB/07/500</td>
			<td>Tramadol hydrochloride IP, 50 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K-wire&#160;</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>166 (1mm)</td>
			<td>12&#34;, double ended</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mechanical drill for inserting K-wire</td>
			<td>&#8206;Bosch, Germany&#160;</td>
			<td>06019F70K4</td>
			<td>GSR 120-LI Professional</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum cutting scissors&#160;</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>G.121.06S</td>
			<td>6&#34;, straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>G.108.06</td>
			<td>6&#34;, straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic ointment&#160;</td>
			<td>GlaxoSmithKline Pharmaceutical Limited, Bengaluru, Karnataka, India</td>
			<td>KTK/28a/467/2001</td>
			<td>Neomycin, Polymixin B sulfate and Bacitracin zinc ophthalmic ointment USP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osteotome (chisel)</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>1001.S.10</td>
			<td>10 mm, straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Periosteal elevator&#160;</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>918.10.S</td>
			<td>10 mm, straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pliers cum wire cutter</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>604.65</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reynold&#8217;s scissors</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>G.110.06S</td>
			<td>6&#34;, straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard semi-synthetic diet&#160;</td>
			<td>Ashirvad Industries, Chandigarh, India</td>
			<td>No catalog number available</td>
			<td>Detailed composition provided in materials used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steel cup for keeping betadine for application</td>
			<td>Local purchase</td>
			<td>No catalog number available</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steel tray with lid for autoclaving instruments</td>
			<td>Local purchase</td>
			<td>No catalog number available</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gauze</td>
			<td>Ideal Healthcare Industries, Delhi, India&#160;</td>
			<td>E(0047)/14/MNB/7951</td>
			<td>Sterile, 5cmx5cm, 12 ply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile marble block for support</td>
			<td>Local purchase</td>
			<td>No catalog number available</td>
			<td>Locally fabricated; autoclavable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe and needle (1 mL)&#160;</td>
			<td>Becton Dickinson India Pvt. Ltd., Haryana, India</td>
			<td>REF 303060</td>
			<td>1 mL sterile Syringe with 26 G x 1/2 (0.45 mm x 13 mm) needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe and needle (2 mL)&#160;</td>
			<td>Becton Dickinson India Pvt. Ltd., Haryana, India</td>
			<td>REF 307749</td>
			<td>2 mL sterile syringe with 24 G x 1&#39;&#39; (0.55 mm x 25 mm) needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe and needle (10 mL)&#160;</td>
			<td>Hindustan Syringes &#38; Medical Devices Ltd. Faridabad, India&#160;</td>
			<td>334-B(H)</td>
			<td>10 mL sterile syringe with 21 G x1.5&#34; (0.80 mm x 38 mm) needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical blades (size no.15)</td>
			<td>Paramount Surgimed Ltd, New Delhi, India for Medline Industries Inc, IL, USA</td>
			<td>REF MDS15115E</td>
			<td>Sterile, Single use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical blades (size no.24)</td>
			<td>Paramount Surgimed Ltd, New Delhi, India for Medline Industries Inc, IL, USA</td>
			<td>REF MDS15124E</td>
			<td>Sterile, Single use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures</td>
			<td>Healthium Medtech Pvt Ltd, Bangalore, Karnataka, India</td>
			<td>SN 3318</td>
			<td>4-0, 16 mm, 3/8 circle cutting needle, monofilament polyamide suture&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wax block in aluminium tray&#160;</td>
			<td>Locally fabricated</td>
			<td>No catalog number available</td>
			<td>30 cm x 30 cm x 4 cm aluminium tray containing wax (to prevent animal from slipping)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray machine</td>
			<td>Philips India Ltd, Gurugram, Haryana</td>
			<td>SN19861013</td>
			<td>Model: Philips Digital Diagnost R 4.2&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

protocol for developing a femur osteotomy model in wistar albino rats

La guarigione delle fratture è un processo fisiologico che porta alla rigenerazione dei difetti ossei mediante l'azione coordinata di osteoblasti e osteoclasti. I farmaci osteoanabolizzanti hanno il potenziale per aumentare la riparazione delle fratture, ma hanno vincoli come costi elevati o effetti collaterali indesiderati. Il potenziale di guarigione ossea di un farmaco può inizialmente essere determinato da studi in vitro , ma sono necessari studi in vivo per la prova finale del concetto. Il nostro obiettivo era quello di sviluppare un modello di roditore osteotomia del femore che potesse aiutare i ricercatori a comprendere lo sviluppo della formazione di callo dopo la frattura dell'albero del femore e che potesse aiutare a stabilire se un potenziale farmaco ha proprietà di guarigione ossea. I ratti albini Wistar maschi adulti sono stati utilizzati dopo l'autorizzazione del Comitato etico istituzionale per gli animali. I roditori sono stati anestetizzati e, in condizioni asettiche, sono state create fratture trasversali complete al terzo centrale degli alberi dei femori utilizzando l'osteotomia aperta. Le fratture sono state ridotte e fissate internamente utilizzando fili K intramidollari e la guarigione secondaria delle fratture è stata consentita. Dopo l'intervento chirurgico, analgesici intraperitoneali e antibiotici sono stati somministrati per 5 giorni. Le radiografie settimanali sequenziali hanno valutato la formazione di callo. I ratti sono stati sacrificati sulla base di punti temporali radiologicamente predeterminati e lo sviluppo del callo della frattura è stato analizzato radiologicamente e utilizzando l'immunoistochimica.

Questo studio è stato intrapreso per sviluppare un modello di osteotomia del femore in ratti albini Wistar. Questo modello può essere utilizzato per valutare la guarigione ossea, così come l'effetto osteogenico di un promettente farmaco osteoanabolico nella guarigione ossea. Sono state seguite le precauzioni chirurgiche e i protocolli standard. Per la procedura sono stati utilizzati camici sterili, tende e attrezzature chirurgiche (Figura 1). L'apparecchiatura (Tabella 1)...

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Protocol for Developing a Femur Osteotomy Model in Wistar Albino Rats

Qui, presentiamo un protocollo per fratturare iatrogenicamente l'asta del femore dei ratti albini Wistar e seguire lo sviluppo del callo. Questo modello di osteotomia del femore può aiutare i ricercatori a valutare il processo di guarigione delle fratture e a studiare come un farmaco potrebbe influenzare la guarigione delle fratture.

Protocollo per lo sviluppo di un modello di osteotomia femorale in ratti albini Wistar

Fracture healing is a physiological process resulting in the regeneration of bone defects by the coordinated action of osteoblasts and osteoclasts. ...

Questo modello di osteotomia del femore può aiutare i ricercatori a studiare il processo di guarigione delle fratture e valutare come un farmaco potrebbe influenzare la guarigione delle fratture. È un modello di roditore semplice e facile da seguire che può aiutare i ricercatori a identificare se un farmaco ha proprietà di guarigione ossea e comprendere il suo meccanismo d'azione. Anche se si concentra principalmente sull'osservazione e l'analisi della guarigione delle fratture, può anche fornire informazioni sulla patogenesi della malattia.Questo metodo può guidare la ricerca futura sulla guarigione delle ossa in salute e malattia. Può essere utilizzato per valutare l'effetto di potenziali farmaci osteoanabolizzanti. Indurre una corretta linea di frattura e la fissazione della frattura con un K-wire sono impegnativi.Un paio di sessioni di pratica dovrebbero aiutare. La semplicità e la riproducibilità di questo metodo sono evidenti nella sua dimostrazione visiva Pawan Pagaku, un giovane residente del mio laboratorio, aiuterà a dimostrare la procedura. Per iniziare posizionare il blocco di cera contenente cera fino a una profondità di 2,5 centimetri sul tavolo operatorio e coprirlo con tende sterili.Dopo aver praticato un'incisione cutanea verticale di un centimetro sul lato laterale della coscia destra, esporre il muscolo vasto laterale separando la fascia profonda usando le forbici Metzenbaum. Dividere il vasto laterale in linea con le fibre muscolari fino a raggiungere l'asta del femore. Quindi, utilizzare l'ascensore periostale per liberare l'osso dai muscoli ad esso collegati.Dopo aver iniettato l'anestesia locale dentro e intorno al periostio, creare una rientranza nel terzo centrale dell'asta del femore usando la lama chirurgica numero 15. Posizionare uno scalpello sulla rientranza e picchiettare delicatamente lo scalpello con un martello per fratturare completamente l'osso nel terzo centrale dell'albero. Fissare internamente la frattura utilizzando un filo K sterile di un millimetro tenuto con l'aiuto di un trapano elettrico a batteria.Passare il filo K nel canale midollare del frammento distale attraverso il sito di frattura. Quindi, perforare il filo K attraverso l'estremità distale del femore. Dopo aver ridotto la frattura, far avanzare il filo K dall'estremità distale nel canale del frammento prossimale fino a quando non ottiene l'acquisto nella regione trocanterica.Tagliare la parte distale del filo K che sporge attraverso la pelle usando un tagliafilo. Piegare la punta del filo K a circa 90 gradi usando le pinze e utilizzare una benda di garza imbevuta di Betadine per la medicazione del sito di spillo. Il filo K agisce come una stecca intramidollare per mantenere la frattura in una posizione ridotta.Applicare pressione sull'area sanguinante utilizzando una garza sterile o una pinza arteriosa per fermare qualsiasi sanguinamento. Assicurarsi un'emostasi completa prima di chiudere la pelle utilizzando una sutura di nylon 4-0. Pulire la ferita con Betadine e coprirla con garza sterile e nastro adesivo a micropore.Per la cura postoperatoria, riportare i ratti nelle loro gabbie e continuare a dare una dieta semi-sintetica standard, nonché antibiotici e analgesici per via intraperitoneale per cinque giorni dopo la procedura. Infine, valutare la guarigione ossea mediante radiografia del sito fratturato una volta alla settimana. Qui vengono mostrati i raggi X del femore del ratto con il filo K NC2 prima di indurre la frattura e un giorno dopo l'intervento chirurgico.La guarigione della frattura viene monitorata radiologicamente eseguendo radiografie settimanali sequenziali del sito operato per valutare la formazione del callo. La frattura rimane ridotta e immobilizzata con il filo K intramidollare. Dopo il sacrificio in un punto temporale predeterminato, il femore è stato accuratamente conservato in formalina, seguito dalla decalcificazione ossea.L'osso con callo è stato ottenuto dopo una decalcificazione ottimale. Il callo intatto e la sezione sagittale del callo sono mostrati qui. Il callo viene valutato in modo intermittente per garantire una decalcificazione ottimale prima di valutarlo utilizzando altre tecniche.Qui sono mostrate immagini a basso ingrandimento e ad alto ingrandimento della sezione colorata con ematossilina ed eosina del sito di frattura. Le sezioni macchiate del sito di frattura mostrano un callo duro con formazione di cartilagine e nuovo osso. L'estremità fratturata dell'osso e la seconda regione corticale possono essere viste qui.Il periostio più sensibile al dolore della ferita, ed è essenziale infiltrare il periostio nel sito di frattura con un anestetico locale prima dell'osteotomia. Può essere seguito da analisi immunoistochimiche e radiologiche del calloso, micro-CT per istomorfometria quantitativa, analizzando la forza biomeccanica del callo analizza del siero. Questa tecnica è utile per determinare il potenziale osteogenico, il meccanismo d'azione e l'analisi comparativa di promettenti farmaci osteoanabolizzanti.

Research

JoVE Journal

Medicine

Quantifying Glomerular Permeability of Fluorescent Macromolecules Using 2-Photon Microscopy in Munich Wistar Rats

Quantificare permeabilità glomerulare delle Macromolecole fluorescenti usando la microscopia a due fotoni a Monaco di Baviera ratti Wistar

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Ricerca

Medicina

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