Name: protocol for developing a femur osteotomy model in wistar albino rats
Uploaded: 2022-08-31T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Protocol for Developing a Femur Osteotomy Model in Wistar Albino Rats at JoVE.com

Os autores gostariam de agradecer ao Conselho Central de Pesquisa em Homeopatia (CCRH), Ministério da AYUSH, Governo da Índia, pelo financiamento da pesquisa. Os autores são gratos pela ajuda e apoio da Central Animal Facility, AIIMS, Nova Delhi, por sua ajuda e apoio com os experimentos com animais e CMET, AIIMS, Nova Delhi, por sua ajuda e apoio em fotografia e videografia.

Experimentos com animais foram feitos após aprovação ética do Comitê Institucional de Ética Animal (IAEC), AIIMS, Nova Delhi, Índia (286/IAEC-1/2021).
1. Procedimento pré-operatório
<ol><li>Ratos albinos Wistar machos domésticos de 6 a 8 semanas de idade, pesando entre 150-200 g cada, em uma Central Animal Facility (CAF) em gaiolas individuais separadas. Isso garante que não haja lesão cirúrgica/no local da fratura quando vários ratos compartilham gaiolas.</li>...

<ol>
	<li>Wang, T., Zhang, X., Bikle, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteogenic+differentiation+of+periosteal+cells+during+fracture+healing.">Osteogenic differentiation of periosteal cells during fracture healing.</a> Journal of Cellular Physiology. 232 (5), 913-921 (2017).</li><li>Fakhry, M., Hamade, E., Badran, B., Buchet, R., Magne, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+mesenchymal+stem+cell+differentiation+towards+osteoblasts.">Molecular mechanisms of mesenchymal stem cell differentiation towards osteoblasts.</a> World Journal of Stem Cells. 5 (4), 136-148 (2013).</li><li>Bishop, J. A., Palanca, A. A., Bellino, M. J., Lowenberg, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+compromised+fracture+healing.">Assessment of compromised fracture healing.</a> JAAOS - Journal of the American Academy of Orthopaedic Surgeons. 20 (5), 273-282 (2012).</li><li>Fong, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predictors+of+nonunion+and+reoperation+in+patients+with+fractures+of+the+tibia:+an+observational+study.">Predictors of nonunion and reoperation in patients with fractures of the tibia: an observational study.</a> BMC Musculoskeletal Disorders. 14 (1), 103 (2013).</li><li>Ramoutar, D. N., Rodrigues, J., Quah, C., Boulton, C., Moran, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Judet+decortication+and+compression+plate+fixation+of+long+bone+nonunion:+Is+bone+graft+necessary.">Judet decortication and compression plate fixation of long bone nonunion: Is bone graft necessary.</a> Injury. 42 (12), 1430-1434 (2011).</li><li>Goulet, J. A., Senunas, L. E., DeSilva, G. L., Greenfield, M. L. V. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autogenous+iliac+crest+bone+graft:+Complications+and+functional+assessment.">Autogenous iliac crest bone graft: Complications and functional assessment.</a> Clinical Orthopaedics and Related Research. 339, 76-81 (1997).</li><li>Stevenson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+review+and+economic+evaluation+of+alendronate,+etidronate,+risedronate,+raloxifene+and+teriparatide+for+the+prevention+and+treatment+of+postmenopausal+osteoporosis.">A systematic review and economic evaluation of alendronate, etidronate, risedronate, raloxifene and teriparatide for the prevention and treatment of postmenopausal osteoporosis.</a> Health Technology Assessment. 9 (22), 1 (2005).</li><li>Haffner-Luntzer, M., Kovtun, A., Rapp, A. E., Ignatius, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+in+bone+fracture+healing+research.">Mouse models in bone fracture healing research.</a> Current Molecular Biology Reports. 2 (2), 101-111 (2016).</li><li>Mills, L. A., Simpson, A. H. R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+models+of+bone+repair.">In vivo models of bone repair.</a> The Journal of Bone and Joint Surgery. British Volume. 94 (7), 865-874 (2012).</li><li>Houdebine, L. -. M., Sioud, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+Animal+Models+in+Biomedical+Research.">Transgenic Animal Models in Biomedical Research.</a> Target Discovery and Validation Reviews and Protocols: Volume 1, Emerging Strategies for Targets and Biomarker Discovery. , (2007).</li><li>Histing, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+animal+bone+healing+models:+Standards,+tips+and+pitfalls+results+of+a+consensus+meeting.">Small animal bone healing models: Standards, tips and pitfalls results of a consensus meeting.</a> Bone. 49 (4), 591-599 (2011).</li><li>Bonnarens, F., Einhorn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+a+standard+closed+fracture+in+laboratory+animal+bone.">Production of a standard closed fracture in laboratory animal bone.</a> Journal of Orthopaedic Research. 2 (1), 97-101 (1984).</li><li>Klein, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+healing+process+in+open+osteotomy+model+and+open+fracture+model:+delayed+healing+of+osteotomies+after+intramedullary+screw+fixation.">Comparison of healing process in open osteotomy model and open fracture model: delayed healing of osteotomies after intramedullary screw fixation.</a> Journal of Orthopaedic Research. 33 (7), 971-978 (2015).</li><li>Kolios, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Do+estrogen+and+alendronate+improve+metaphyseal+fracture+healing+when+applied+as+osteoporosis+prophylaxis.">Do estrogen and alendronate improve metaphyseal fracture healing when applied as osteoporosis prophylaxis.</a> Calcified Tissue International. 86 (1), 23-32 (2010).</li><li>Holstein, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+establishment+of+defined+mouse+models+for+the+study+of+fracture+healing+and+bone+regeneration.">Advances in the establishment of defined mouse models for the study of fracture healing and bone regeneration.</a> Journal of Orthopaedic Trauma. 23, 31-38 (2009).</li><li>Umiatin, U., Dilogo, I. H., Sari, P., Wijaya, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histological+analysis+of+bone+callus+in+delayed+union+model+fracture+healing+stimulated+with+pulsed+electromagnetic+fields+(PEMF).">Histological analysis of bone callus in delayed union model fracture healing stimulated with pulsed electromagnetic fields (PEMF).</a> Scientifica. 2021, 4791172 (2021).</li><li>Han, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+osteogenic+potential+of+human+bone+callus.">The osteogenic potential of human bone callus.</a> Scientific Reports. 6, 36330 (2016).</li><li>Haffner-Luntzer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mouse+model+to+study+fracture+healing+of+the+proximal+femur.">A novel mouse model to study fracture healing of the proximal femur.</a> Journal of Orthopaedic Research. 38 (10), 2131-2138 (2020).</li><li>Aur&#233;gan, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+rat+model+of+femur+fracture+for+bone+and+mineral+research:+An+improved+description+of+expected+comminution,+quantity+of+soft+callus+and+incidence+of+complications.">The rat model of femur fracture for bone and mineral research: An improved description of expected comminution, quantity of soft callus and incidence of complications.</a> Bone &amp; Joint Research. 2 (8), 149-154 (2013).</li><li>Li, Z., Helms, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drill+hole+models+to+investigate+bone+repair.">Drill hole models to investigate bone repair.</a> Methods in Molecular Biology. 2221, 193-204 (2021).</li><li>Handool, K. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+a+closed+rat+tibial+fracture+model.">Optimization of a closed rat tibial fracture model.</a> Journal of Experimental Orthopaedics. 5 (1), 13 (2018).</li><li>Kobata, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+bone+infection+after+open+fracture+using+a+chitosan+with+ciprofloxacin+implant+in+animal+model.">Prevention of bone infection after open fracture using a chitosan with ciprofloxacin implant in animal model.</a> Acta Cirurgica Brasileira. 35 (8), 202000803 (2020).</li></ol>

Este método descreve com lucidez os detalhes necessários para desenvolver um modelo de osteotomia de fratura em ratos albinos Wistar. Este modelo pode ser usado para avaliar o efeito osteogênico de uma droga osteoanabólica promissora na cicatrização de fraturas, bem como compreender os meandros da cicatrização óssea. A característica saliente deste método é que ele é simples e não precisa de muito tempo ou equipamentos sofisticados. Neste método, ratos albinos Wistar machos adultos foram selecionados como ...

O osso é um tecido conjuntivo denso que consiste em células formadoras de osso, os osteoblastos, e células de reabsorção óssea, os osteoclastos. A cicatrização de fraturas é um processo fisiológico que resulta na regeneração de defeitos ósseos pela ação coordenada de osteoblastos e osteoclastos1. Quando há fratura, a atividade osteoblástica e osteoclástica no local da fratura são alguns dos fatores importantes que determinam a cicatrização óssea2. Quando a cicatrização da fratura se desvia de seu curso normal, resulta em uma união atrasada, desunião ou não união. Diz-se que uma fratura está em não união quando há uma falha de união da fratura por 9 meses, sem progressão do reparo nos últimos 3 meses3. Aproximadamente 10%-15% de todas as fraturas experimentam um atraso no reparo que pode progredir para a não união4. A taxa de não consolidação para todas as fraturas é de 5%-10% e varia dependendo do osso envolvido e do local da fratura5.
O regime atual para o tratamento da não consolidação da fratura compreende modalidades cirúrgicas e/ou médicas. Atualmente, a tardia ou não união de fraturas pode ser superada por estratégias cirúrgicas como o enxerto ósseo. No entanto, o enxerto ósseo tem suas limitações e complicações como disponibilidade de tecido do enxerto, dor no local doador, morbidade e infecção6. O tratamento médico compreende drogas osteoanabólicas como proteína morfogenética óssea (BMP) e teriparatida (análogo do paratormônio). Os agentes osteoanabólicos atualmente utilizados têm o potencial de aumentar o reparo de fraturas, mas apresentam restrições como custos exorbitantes ou efeitos colaterais indesejáveis7. Assim, há espaço para identificar alternativas custo-efetivas e não cirúrgicas para a cicatrização óssea. O potencial de cicatrização óssea de uma droga pode inicialmente ser determinado por estudos in vitro , mas estudos in vivo são necessários para a prova final de conceito. Uma droga que é conhecida por melhorar a cicatrização óssea deve ser avaliada in vitro e, se considerada promissora, pode ser usada para estudos in vivo em modelos animais. Se a droga provar promover a formação óssea e a remodelação no modelo in vivo , ela poderá prosseguir para o próximo estágio (ou seja, ensaios clínicos).
Avaliar a cicatrização de fraturas em animais é um passo lógico para avaliar um novo agente introduzido para a cicatrização óssea antes de passar por testes em humanos. Para estudos in vivo de modelos animais de cicatrização de fraturas, os roedores tornaram-se um modelo cada vez mais popular8. Os modelos de roedores têm gerado crescente interesse devido aos baixos custos operacionais, à necessidade limitada de espaço e ao menor tempo necessário para a cicatrização óssea9. Além disso, os roedores possuem um amplo espectro de anticorpos e alvos gênicos, que permitem estudos sobre os mecanismos moleculares de cicatrização e regeneração óssea10. Uma reunião de consenso destacou de forma abrangente vários modelos de cicatrização óssea de pequenos animais e enfocou os diferentes parâmetros que influenciam a cicatrização óssea, além de enfatizar vários modelos e implantes de fraturas de pequenos animais11.
Os modelos básicos de fratura podem ser amplamente divididos em modelos abertos ou fechados. Os modelos de fratura fechada usam uma força de flexão de três ou quatro pontos no osso e não requerem uma abordagem cirúrgica convencional. Levam a fraturas oblíquas ou espirais, assemelhando-se a fraturas de ossos longos em humanos, mas a falta de padronização da localização e das dimensões da fratura pode atuar como fator de confusão nelas12. Os modelos de fratura exposta requerem acesso cirúrgico para osteotomia óssea, ajudam a alcançar um padrão de fratura mais consistente no local da fratura, mas estão associados à cicatrização tardia em comparação com os modelos fechados13. A escolha do osso utilizado para estudar a cicatrização da fratura continua sendo principalmente a tíbia e o fêmur devido às suas dimensões e acessibilidade. A escolha do local da fratura é geralmente a diáfise ou metáfise. A região metafisária é especialmente escolhida nos casos em que a cicatrização da fratura é estudada em indivíduos osteoporóticos, pois a metáfise é mais afetada pela osteoporose14. Vários implantes como pinos intramedulares e fixadores externos podem ser utilizados para estabilizar a fratura11,15.
O objetivo deste estudo foi desenvolver um modelo de roedores simples e fácil de seguir que pudesse ajudar os pesquisadores não apenas a entender o desenvolvimento do calo após a fratura do fêmur, mas também a determinar se uma droga potencial tem propriedades curativas ósseas, entendendo o mecanismo pelo qual ela age.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alcohol</td>
			<td>Raman &#38; Weil Pvt. Ltd, Mumbai, Maharashtra, India</td>
			<td>MFG/MD/2019/000189</td>
			<td>Sterillium hand disinfectant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artery forceps&#160;</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>G.105.05S</td>
			<td>5&#34;, straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bard-Parker handle&#160;</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>G.103.03</td>
			<td>Size number 3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine solution</td>
			<td>Win-medicare New Delhi, India</td>
			<td>UP14250000001</td>
			<td>10% w/v Povidone iodine solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cat&#39;s-paw skin retractor&#160;</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>908.S</td>
			<td>Small</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sisco research laboratories Pvt. Ltd, Maharashtra, India</td>
			<td>43272</td>
			<td>Disodium salt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>Sigma Aldrich, Merck Life Sciences Pvt Ltd, Mumbai, Maharashtra, India</td>
			<td>115935</td>
			<td>For preparing the staining solution&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps (plain)</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>115.06</td>
			<td>6&#34;, plain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps (toothed)</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>117.06</td>
			<td>6&#34;, toothed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Sisco research laboratories Pvt. Ltd, Maharashtra, India</td>
			<td>84439</td>
			<td>For preparing the neutral buffered formalin&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Haematoxylin</td>
			<td>Sigma Aldrich, Merck Life Sciences Pvt Ltd, Mumbai, Maharashtra, India</td>
			<td>104302</td>
			<td>For preparing the staining solution&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hammer</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>401.M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection Cefuroxime</td>
			<td>Akumentis Healthcare Ltd, Thane, Maharashtra, India</td>
			<td>48/UA/SC/P-2013</td>
			<td>Cefuroxime sodium IP, 1.5 g/vial&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection Ketamine</td>
			<td>Baxter Pharmaceuticals India Private Limited, Gujarat, India</td>
			<td>G/28-B/6</td>
			<td>Ketamine hydrochloride IP, 50 mg/mL&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection Xylazine</td>
			<td>Indian Immunologicals Limited, Hyderabad, Telangana, India</td>
			<td>28/RR/AP/2009/F/G</td>
			<td>Xylazine hydrochloride USP, 20 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection Lignocaine</td>
			<td>Jackson laboratories Pvt Limited, Punjab, India&#160;</td>
			<td>1308-B</td>
			<td>2% Lignocaine Hydrochloride IP, 21.3 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection Tramadol&#160;</td>
			<td>Intas Pharmaceuticals Limited, Ahmedabad, Gujarat, India</td>
			<td>MB/07/500</td>
			<td>Tramadol hydrochloride IP, 50 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K-wire&#160;</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>166 (1mm)</td>
			<td>12&#34;, double ended</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mechanical drill for inserting K-wire</td>
			<td>&#8206;Bosch, Germany&#160;</td>
			<td>06019F70K4</td>
			<td>GSR 120-LI Professional</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum cutting scissors&#160;</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>G.121.06S</td>
			<td>6&#34;, straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>G.108.06</td>
			<td>6&#34;, straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic ointment&#160;</td>
			<td>GlaxoSmithKline Pharmaceutical Limited, Bengaluru, Karnataka, India</td>
			<td>KTK/28a/467/2001</td>
			<td>Neomycin, Polymixin B sulfate and Bacitracin zinc ophthalmic ointment USP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osteotome (chisel)</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>1001.S.10</td>
			<td>10 mm, straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Periosteal elevator&#160;</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>918.10.S</td>
			<td>10 mm, straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pliers cum wire cutter</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>604.65</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reynold&#8217;s scissors</td>
			<td>Nebula surgical, Gujarat, India</td>
			<td>G.110.06S</td>
			<td>6&#34;, straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard semi-synthetic diet&#160;</td>
			<td>Ashirvad Industries, Chandigarh, India</td>
			<td>No catalog number available</td>
			<td>Detailed composition provided in materials used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steel cup for keeping betadine for application</td>
			<td>Local purchase</td>
			<td>No catalog number available</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steel tray with lid for autoclaving instruments</td>
			<td>Local purchase</td>
			<td>No catalog number available</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gauze</td>
			<td>Ideal Healthcare Industries, Delhi, India&#160;</td>
			<td>E(0047)/14/MNB/7951</td>
			<td>Sterile, 5cmx5cm, 12 ply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile marble block for support</td>
			<td>Local purchase</td>
			<td>No catalog number available</td>
			<td>Locally fabricated; autoclavable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe and needle (1 mL)&#160;</td>
			<td>Becton Dickinson India Pvt. Ltd., Haryana, India</td>
			<td>REF 303060</td>
			<td>1 mL sterile Syringe with 26 G x 1/2 (0.45 mm x 13 mm) needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe and needle (2 mL)&#160;</td>
			<td>Becton Dickinson India Pvt. Ltd., Haryana, India</td>
			<td>REF 307749</td>
			<td>2 mL sterile syringe with 24 G x 1&#39;&#39; (0.55 mm x 25 mm) needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe and needle (10 mL)&#160;</td>
			<td>Hindustan Syringes &#38; Medical Devices Ltd. Faridabad, India&#160;</td>
			<td>334-B(H)</td>
			<td>10 mL sterile syringe with 21 G x1.5&#34; (0.80 mm x 38 mm) needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical blades (size no.15)</td>
			<td>Paramount Surgimed Ltd, New Delhi, India for Medline Industries Inc, IL, USA</td>
			<td>REF MDS15115E</td>
			<td>Sterile, Single use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical blades (size no.24)</td>
			<td>Paramount Surgimed Ltd, New Delhi, India for Medline Industries Inc, IL, USA</td>
			<td>REF MDS15124E</td>
			<td>Sterile, Single use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures</td>
			<td>Healthium Medtech Pvt Ltd, Bangalore, Karnataka, India</td>
			<td>SN 3318</td>
			<td>4-0, 16 mm, 3/8 circle cutting needle, monofilament polyamide suture&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wax block in aluminium tray&#160;</td>
			<td>Locally fabricated</td>
			<td>No catalog number available</td>
			<td>30 cm x 30 cm x 4 cm aluminium tray containing wax (to prevent animal from slipping)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray machine</td>
			<td>Philips India Ltd, Gurugram, Haryana</td>
			<td>SN19861013</td>
			<td>Model: Philips Digital Diagnost R 4.2&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

protocol for developing a femur osteotomy model in wistar albino rats

A cicatrização de fraturas é um processo fisiológico que resulta na regeneração de defeitos ósseos pela ação coordenada de osteoblastos e osteoclastos. As drogas osteoanabólicas têm o potencial de aumentar o reparo de fraturas, mas têm restrições como altos custos ou efeitos colaterais indesejáveis. O potencial de cicatrização óssea de uma droga pode inicialmente ser determinado por estudos in vitro , mas estudos in vivo são necessários para a prova final de conceito. Nosso objetivo era desenvolver um modelo de roedor de osteotomia do fêmur que pudesse ajudar os pesquisadores a entender o desenvolvimento da formação de calos após a fratura da diáfise do fêmur e que pudesse ajudar a estabelecer se uma droga potencial tem propriedades curativas ósseas. Ratos albinos Wistar machos adultos foram utilizados após liberação do Comitê de Ética Animal Institucional. Os roedores foram anestesiados e, em condições assépticas, fraturas transversais completas no terço médio das hastes dos fêmures foram criadas por osteotomia aberta. As fraturas foram reduzidas e fixadas internamente usando fios K intramedulares, e a cicatrização secundária da fratura foi permitida. Após a cirurgia, analgésicos intraperitoneais e antibióticos foram administrados por 5 dias. Raios-x semanais sequenciais avaliaram a formação de calos. Os ratos foram sacrificados com base em pontos de tempo radiologicamente pré-determinados, e o desenvolvimento do calo de fratura foi analisado radiologicamente e usando imuno-histoquímica.

Este estudo foi realizado para desenvolver um modelo de osteotomia do fêmur em ratos albinos Wistar. Este modelo pode ser usado para avaliar a cicatrização óssea, bem como o efeito osteogênico de uma droga osteoanabólica promissora na cicatrização óssea. Precauções e protocolos cirúrgicos padrão foram seguidos. Aventais estéreis, cortinas e equipamentos cirúrgicos foram utilizados para o procedimento (Figura 1). O equipamento (Tabela 1) foi esterilizado 48 h a...

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Protocol for Developing a Femur Osteotomy Model in Wistar Albino Rats

Aqui, apresentamos um protocolo para fraturar iatrogenicamente a diáfise do fêmur de ratos albinos Wistar e acompanhar o desenvolvimento do calo. Este modelo de osteotomia do fêmur pode ajudar os pesquisadores a avaliar o processo de cicatrização da fratura e estudar como uma droga pode influenciar a cicatrização da fratura.

Protocolo para o Desenvolvimento de um Modelo de Osteotomia do Fêmur em Ratos Albinos Wistar

Fracture healing is a physiological process resulting in the regeneration of bone defects by the coordinated action of osteoblasts and osteoclasts. ...

Este modelo de osteotomia do fêmur pode ajudar os pesquisadores a estudar o processo de cicatrização de fraturas e avaliar como uma droga pode influenciar a cicatrização de fraturas. É um modelo de roedores simples e fácil de seguir que pode ajudar os pesquisadores a identificar se uma droga tem propriedades curativas dos ossos e entender seu mecanismo de ação. Embora se concentre principalmente na observação e análise da cicatrização de fraturas, também pode fornecer insights sobre a patogênese da doença.Este método pode orientar futuras pesquisas sobre a cura óssea na saúde e na doença. Pode ser usado para avaliar o efeito de potenciais drogas osteoanabolizantes. Induzir uma linha de fratura adequada e fixação de fratura com um fio K é um desafio.Algumas sessões de prática devem ajudar. A simplicidade e a reprodutibilidade deste método são evidentes em sua demonstração visual Pawan Pagaku, um residente júnior do meu laboratório, ajudará a demonstrar o procedimento. Para começar, coloque o bloco de cera contendo cera até uma profundidade de 2,5 centímetros na mesa de operação e cubra-o com cortinas estéreis.Depois de fazer uma incisão vertical de um centímetro na pele no lado lateral da coxa direita, exponha o músculo vasto lateral separando a fáscia profunda usando uma tesoura Metzenbaum. Divida o vasto lateral de acordo com as fibras musculares até que a diáfise do fêmur seja atingida. Em seguida, use o elevador periosteal para liberar o osso dos músculos ligados a ele.Depois de injetar anestesia local dentro e ao redor do periósteo, crie um recuo no terço médio da diáfise do fêmur usando a lâmina cirúrgica número 15. Coloque um cinzel no recuo e bata suavemente no cinzel com um martelo para fraturar completamente o osso no terço médio do eixo. Fixe internamente a fratura usando um fio K estéril de um milímetro mantido com a ajuda de uma furadeira elétrica operada por bateria.Passe o fio K para o canal medular do fragmento distal através do local da fratura. Em seguida, perfure o fio K através da extremidade distal do fêmur. Após a redução da fratura, avançar o fio K da extremidade distal para o canal do fragmento proximal até obter a compra na região trocantérica.Corte a parte distal do fio K que se projeta através da pele usando um cortador de fio. Dobre a ponta do fio K a cerca de 90 graus usando um alicate e use uma atadura de gaze embebida em Betadine para o curativo do local do pino. O fio K atua como uma tala intramedular para manter a fratura em uma posição reduzida.Aplique pressão sobre a área de sangramento usando gaze estéril ou pinça arterial para parar qualquer sangramento. Certifique-se de hemostasia completa antes de fechar a pele usando uma sutura de nylon 4-0. Limpe a ferida com Betadine e cubra-a com gaze estéril e fita adesiva de microporos.Para cuidados pós-operatórios, devolva os ratos às suas gaiolas e continue a dar uma dieta semissintética padrão, bem como antibióticos e analgésicos por via intraperitoneal por cinco dias após o procedimento. Finalmente, avalie a cicatrização óssea por raio-X do local fraturado uma vez por semana. Raios-X do fêmur do rato com o fio K NC2 antes de induzir a fratura, e um dia após a cirurgia são mostrados aqui.A cicatrização da fratura é monitorada radiologicamente por meio da realização de radiografias semanais sequenciais do local operado para avaliar a formação de calos. A fratura permanece reduzida e imobilizada com o fio K intramedular. Após o sacrifício em um momento pré-determinado, o fêmur foi cuidadosamente preservado em formol, seguido de descalcificação óssea.O osso com calo foi obtido após a descalcificação ideal. O calo intacto e a seção sagital do calo são mostrados aqui. O calo é intermitentemente avaliado para garantir a descalcificação ideal antes de avaliá-lo usando outras técnicas.Imagens de baixa ampliação e alta ampliação da seção corada com hematoxilina e eosina do local da fratura são mostradas aqui. As seções coradas do local da fratura mostram um calo duro com a formação de cartilagem e osso novo. A extremidade fraturada do osso e a segunda região cortical podem ser vistas aqui.A parte do periósteo mais sensível à dor da ferida, e é essencial infiltrar-se no periósteo no local da fratura com um anestésico local antes da osteotomia. Pode ser seguida por análise imuno-histoquímica e radiológica da micro-TC calosa para histomorfometria quantitativa, analisando a resistência biomecânica da análise do calo do soro. Esta técnica é útil para determinar o potencial osteogênico, o mecanismo de ação e a análise comparativa de drogas osteoanabólicas promissoras.

Research

JoVE Journal

Medicine

Quantifying Glomerular Permeability of Fluorescent Macromolecules Using 2-Photon Microscopy in Munich Wistar Rats

Quantificar glomerular Permeabilidade de Macromoléculas fluorescentes Usando Microscopia 2-Photon em Munique Ratos Wistar

Kidney  diseases involving urinary loss of large essential macromolecules, such as  serum albumin, have long been thought to be caused by alterations in ...

Medicina

A Contusion Model of Severe Spinal Cord Injury in Rats

Um modelo de contusão grave de lesão medular em ratos

The translational potential of novel treatments should be investigated in severe spinal cord injury (SCI) contusion models. A detailed methodology is ...

Ascending Aortic Constriction in Rats for Creation of Pressure Overload Cardiac Hypertrophy Model

Aorta ascendente constrição em ratos para a criação de sobrecarga de pressão Cardíaca Hipertrofia Modelo

Ascending aortic constriction is the most common and successful surgical model for creating pressure overload induced cardiac hypertrophy and heart ...

Adjustable Stiffness, External Fixator for the Rat Femur Osteotomy and Segmental Bone Defect Models

A rigidez ajustável, Fixador Externo para os Rat Femur Osteotomia e segmentar defeito ósseo Models

The mechanical environment around the healing of broken bone is very important as it determines the way the fracture will heal. Over the past decade there ...

A Novel Model of Mild Traumatic Brain Injury for Juvenile Rats

Um novo modelo de Mild Traumatic Brain Injury para ratos jovens

Despite growing evidence that childhood represents a major risk period for mild traumatic brain injury (mTBI) from sports-related concussions, motor ...

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Método de Isolado<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Perfusão pulmonar em um modelo de rato: Lições aprendidas com o desenvolvimento de um Programa PPEV Rat

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Estudar o cancro do pâncreas Stem características celulares para desenvolver estratégias Novo tratamento

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Heterotopic Renal Autotransplantation in a Porcine Model: A Step-by-Step Protocol

Heterotópico Renal autotransplante em um modelo suíno: Um Protocolo Passo-a-Passo

Kidney transplantation is the treatment of choice for patients suffering from end-stage renal disease. It offers better life expectancy and higher quality ...

A Model of Glaucoma Induced by Circumlimbal Suture in Rats and Mice

Um modelo de Glaucoma induzido por sutura Circumlimbal em ratos e camundongos

The circumlimbal suture is a technique for inducing experimental glaucoma in rodents by chronically elevating intraocular pressure (IOP), a well-known ...

A Reproducible Intensive Care Unit-Oriented Endotoxin Model in Rats

Um modelo de endotoxina de unidade de terapia intensiva reprodutível em ratos

Sepsis and septic shock remain the leading cause of death in intensive care units. Despite significant improvements in sepsis management, mortality still ...