Name: improved renal denervation mitigated hypertension induced by angiotensin ii infusion
Uploaded: 2022-05-26T13:00:00
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Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (81770420), Comissão de Ciência e Tecnologia do Município de Xangai (20140900600), Laboratório Chave de Medicina Geriátrica Clínica de Xangai (13dz2260700), Especialidade Clínica Chave Municipal de Xangai (shslczdzk02801) e Centro de Doença Arterial Coronária geriátrica, Hospital Huadong Afiliado à Universidade de Fudan.

Todos os procedimentos experimentais em animais cumpriram o Guia Ético relevante para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório (NIH Publication no. 85-23, revisado em 2011) e foram aprovados pelos comitês de pesquisa animal do Hospital Huadong, afiliado à Universidade de Fudan. Camundongos C57BL/6 machos de quatorze semanas de idade (28-30g) foram divididos aleatoriamente em quatro grupos: grupo Sham, grupo Sham+Ang II, grupo RDN, grupo RDN+Ang II, n = 6 em cada grupo. Todos os animais foram mantidos sob condições...

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(103), e53191 (2015).</li><li>Wilde, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tail-cuff+technique+and+its+influence+on+central+blood+pressure+in+the+mouse.">Tail-cuff technique and its influence on central blood pressure in the mouse.</a> Journal of the American Heart Association. 6 (6), 005204 (2017).</li><li>Daugherty, A., Rateri, D., Hong, L., Balakrishnan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+blood+pressure+in+mice+using+volume+pressure+recording,+a+tail-cuff+method.">Measuring blood pressure in mice using volume pressure recording, a tail-cuff method.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (27), e1291 (2009).</li><li>Esler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Illusions+of+truths+in+the+Symplicity+HTN-3+trial:+generic+design+strengths+but+neuroscience+failings.">Illusions of truths in the Symplicity HTN-3 trial: generic design strengths but neuroscience failings.</a> Journal of the American Society of Hypertension. 8 (8), 593-598 (2014).</li><li>Han, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-dose+sustained-release+deoxycorticosterone+acetate-induced+hypertension+in+Bama+miniature+pigs+for+renal+sympathetic+nerve+denervation.">Low-dose sustained-release deoxycorticosterone acetate-induced hypertension in Bama miniature pigs for renal sympathetic nerve denervation.</a> Journal of the American Society of Hypertension. 11 (5), 314-320 (2017).</li><li>Han, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+safety+of+renal+denervation+as+assessed+by+optical+coherence+tomography:+pre-+and+post-procedure+comparison+with+multi-electrode+ablation+catheter+in+animal+experiment.">The safety of renal denervation as assessed by optical coherence tomography: pre- and post-procedure comparison with multi-electrode ablation catheter in animal experiment.</a> Hellenic Journal of Cardiology. 61 (3), 190-196 (2020).</li><li>Cai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+stereotactic+radiotherapy+for+renal+denervation+in+a+swine+model.">Noninvasive stereotactic radiotherapy for renal denervation in a swine model.</a> Journal of the American College of Cardiology. 74 (13), 1697-1709 (2019).</li></ol>

Se a RDN poderia reduzir a pressão arterial tornou-se controversa desde a publicação do resultado negativo do estudo de simplicidade HTN-3 7,25. No entanto, os diversos ensaios clínicos e experimentos com animais têm demonstrado resultados positivos e efetivos da RDN em humanos e animais hipertensos 9,10,11,12,13,14,15,16,17.<...

A hipertensão é uma importante doença cardiovascular crônica em todo o mundo. A hipertensão não controlada pode danificar órgãos-alvo e contribuir para insuficiência cardíaca, acidente vascular cerebral e doenças renais crônicas 1,2,3. A prevalência de hipertensão aumentou de 20% para 31% entre 1991 e 2007 na China. O número de adultos com hipertensão na China pode dobrar após uma recente revisão dos critérios diagnósticos para hipertensão (130/80 mmHg)4. A hipertensão pode ser controlada por medicamentos, no entanto, aproximadamente 20% dos pacientes são incapazes de controlar sua hipertensão, mesmo quando recebem pelo menos três medicamentos anti-hipertensivos (incluindo um diurético) na dose máxima tolerada, o que pode levar ao desenvolvimento de hipertensão resistente a medicamentos5.
A denervação simpática renal (RDN) provou ser um tratamento potencial para a hipertensão. Em 2009, Krum e seus colegas relataram tratamento de hipertensão resistente usando RDN pela primeira vez. Verificou-se que a ablação percutânea da artéria renal pode efetivamente causar redução persistente da pressão arterial em pacientes6. No entanto, o fracasso do estudo Symplicity Hypertension 3 (HTN-3) impediu a aplicação do RDN7, transformando o RDN em uma terapia controversa. No entanto, a perspectiva de RDN ainda não foi descartada. Ensaios clínicos recentes, incluindo RADIANCE-HTN SOLO, SPYRAL HTN-OFF MED/ON MED e SPYRAL HTN-OFF MED Pivotal confirmaram a eficácia do RDN na hipertensão 8,9,10,11,12. Assim, pesquisas mecanicistas mais detalhadas precisam ser realizadas para explorar os efeitos da RDN.
O objetivo geral deste estudo é demonstrar como a RDN em camundongos pode ser modificada para produzir uma cirurgia mais simples e estável. Um grande número de experimentos tem estudado várias abordagens da RDN, como crioablação intravascular, ultrassonografia extracorpórea e aplicação local de uma substância química ou neurotoxina em diferentes modelos animais 13,14,15,16,17. O modelo RDN gerado por ablação química com fenol é um modelo experimental bem estabelecido para estudar a patogênese da ativação simpática na hipertensão. Este modelo é gerado pela corrosão química dos nervos simpáticos renais com solução de fenol/etanol a 10% utilizando um cotonete18. Por um lado, o RDN convencional potencialmente inibe a atividade simpática renal, o que diminui a secreção de renina e a reabsorção de sódio e aumenta o fluxo sanguíneo renal. Por outro lado, suprime o sistema renina-angiotensina-aldosterona19. Assim, RDN tem um efeito benéfico sobre a hipertensão. No entanto, o modelo RDN gerado pela ablação química carece de critérios de ablação e tempo de ablação e os detalhes do procedimento experimental ainda não estão claros. Além disso, não há relatórios técnicos disponíveis. Neste relato, descrevemos um protocolo cirúrgico para a geração de modelo RDN com fenol utilizando papel de pesagem na hipertensão induzida por Angiotensina II (Ang II) em camundongos C57BL/6. Envolvemos a artéria renal com papel de pesagem contendo fenol e unificamos o tempo de ablação, o que ajuda a estabelecer um modelo RDN mais reprodutível e confiável. Este modelo experimental tem como objetivo avaliar o efeito da RDN sobre a hipertensão.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Angiotensin II</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>CAS:4474-91-3</td>
			<td>To make a hypertensive animol model</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Tyrosine Hydroxylase antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab137869</td>
			<td>To evaluate the expression of TH of renal nerves</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood Pressure Analysis</td>
			<td>Visitech Systems</td>
			<td>BP-2000</td>
			<td>Measure the blood pressure of mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-osmotic pump</td>
			<td>DURECT Corporation</td>
			<td>CA 95014</td>
			<td>To fill with Angiotensin II</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Norepinephrine ELISA Kit</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab287789</td>
			<td>to measure renal norepinephrine levels</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>CAS:108-95-2</td>
			<td>Damage the renal sympathetic nerve</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weighing paper</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>F512112</td>
			<td>To destroy renal nerve with weighing paper immersed with phenol; https://www.sangon.com/productDetail?productInfo.code=F512112.&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

improved renal denervation mitigated hypertension induced by angiotensin ii infusion

Os benefícios da denervação simpática renal (RDN) sobre a pressão arterial foram comprovados em um grande número de ensaios clínicos nos últimos anos. No entanto, o mecanismo regulador da RDN na hipertensão permanece indefinido. Assim, é essencial estabelecer um modelo RDN mais simples em camundongos. Neste estudo, minibombas osmóticas cheias de angiotensina II foram implantadas em camundongos C57BL/6 de 14 semanas de idade. Uma semana após o implante da bomba mini-osmótica, um procedimento RDN modificado foi realizado nas artérias renais bilaterais dos camundongos usando fenol. Camundongos pareados por idade-sexo receberam soro fisiológico e serviram como grupo simulado. A pressão arterial foi medida no início do estudo e a cada semana subsequentemente durante 21 dias. Em seguida, artéria renal, aorta abdominal e coração foram coletados para exame histológico com coloração H&E e Masson. Neste estudo, apresentamos um modelo de RDN simples, prático, repetível e padronizado, que pode controlar a hipertensão e aliviar a hipertrofia cardíaca. A técnica pode desnervar os nervos simpáticos renais periféricos sem danos na artéria renal. Em comparação com os modelos anteriores, o RDN modificado facilita o estudo da patobiologia e fisiopatologia da hipertensão.

Estatística Todos os dados são expressos como média ± desvio padrão. A ANOVA one-way foi utilizada para experimentos com três ou mais condições, seguida de testes post-hoc de Bonferroni para comparações entre grupos individuais. Considere um valor de p igual ou menor que 0,05 como significativo. Um software comercial foi utilizado para realizar todas as análises estatísticas.
O aumento da pressão arterial induzido por Ang II foi atenuado após a RDN</st...

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Improved Renal Denervation Mitigated Hypertension Induced by Angiotensin II Infusion

Aqui, apresentamos um protocolo para denervação simpática renal (RDN) em camundongos com hipertensão induzida por infusão de Angiotensina II. O procedimento é repetível, conveniente e permite estudar os mecanismos regulatórios da RDN na hipertensão e hipertrofia cardíaca.

Denervação renal melhorada Hipertensão Mitigada Induzida por Infusão de Angiotensina II

The benefits of renal sympathetic denervation (RDN) on blood pressure have been proved in a large number of clinical trials in recent years. However, the ...

A denervação simpática renal é um tratamento potencial para a hipertensão, que foi comprovado por muitos ensaios clínicos. Esta técnica desnerva os nervos renais de fluxo livre sem danos na artéria renal. Além disso, é um modelo simples, crítico, repetível e padronizado.Demonstrando o procedimento estará Ming Wang, um assistente de laboratório do meu laboratório. Comece desinfetando a mesa de operação com etanol a 70% e, em seguida, ajuste a temperatura da almofada de aquecimento para 37 graus Celsius. Antes da cirurgia, esterilize todos os instrumentos cirúrgicos, incluindo tesouras microcirúrgicas, pinça reta fina, pinça curva fina, pinça hemostática, gazes estéreis e papel de pesagem a 121 graus Celsius por 30 minutos.Depois de anestesiar um rato C57BKL/6 macho de 14 semanas de idade, remova o cabelo nas costas com um barbeador e, em seguida, aplique pomada veterinária nos olhos para evitar o ressecamento. Coloque o rato sobre uma mesa de operação na posição dorsal. Passe o dedo e limpe a área raspada com iodopovidona, seguido de três toalhetes com etanol a 70%.Usando uma lâmina de bisturi estéril, faça uma incisão de um centímetro perpendicular à cauda atrás da orelha sobre a omoplata da perna da frente. Em seguida, use um hemostato estéril para fazer um túnel subcutâneo sob a pele e criar uma bolsa para a bomba. Insira suavemente uma bomba osmótica cheia de angiotensina II na bolsa, garantindo espaço livre suficiente para suturar a ferida sem esticar a pele.Suture o músculo com suturas de Vicryl 6-0 interrompidas e feche a pele com suturas de nylon 4-0 interrompidas. em seguida, esfregue e limpe o local da ferida com iodopovidona. Coloque todos os instrumentos cirúrgicos em um esterilizador por 10 segundos e substitua as luvas estéreis entre as cirurgias.Monitore o mouse até que ele tenha se recuperado completamente. Monitore de perto e observe a cicatrização de feridas pelo menos duas vezes por dia durante a primeira semana e uma vez por dia posteriormente, incluindo vermelhidão, inchaço e infecção. Realize a dissecção imediatamente se o rato morrer durante a perfusão de angiotensina II.Medir a pressão arterial no início do estudo e todas as semanas após a perfusão de angiotensina II com o método de pletismografia do manguito caudal em ratinhos conscientes. Uma semana após a infusão de angiotensina II, selecione os camundongos com pressão arterial elevada e registre seu peso. Escolha animais com um peso mínimo de 24 gramas para a cirurgia de desnervação renal.Em seguida, remova os pelos no abdômen de um rato anestesiado com um barbeador e, em seguida, coloque o rato na mesa de operação. Mantenha o abdômen para cima e fixe os membros com fita adesiva. Desinfetar a pele abdominal com iodopovidona, seguido de três toalhetes com etanol a 70%.Depois de fazer uma incisão abdominal ventral de dois centímetros na linha média, puxe o intestino para trás com gaze embebida em solução salina de 37 graus Celsius para expor a artéria renal esquerda. Cuidadosamente, mas sem rodeios, disseque a gordura para longe da artéria renal usando pinças curvas. Usando uma tesoura afiada estéril, corte o papel de pesagem em um retângulo do mesmo tamanho que a artéria renal.Corte vários pedaços do papel de pesagem de cada vez para manter a mesma forma. Mergulhe o papel de pesagem em solução de etanol a 10% de fenol durante, pelo menos, 30 segundos. Cubra a superfície da artéria renal esquerda e envolva o vaso com o papel de pesagem por dois minutos.Use gaze para proteger os tecidos circundantes para evitar que o papel de pesagem toque o rim e o intestino. Repita o mesmo procedimento para a artéria renal direita. Após a cirurgia, reposicione os músculos em sua posição inicial e feche o peritônio com suturas de Vicryl 6-0 em um padrão de sutura interrompido, em seguida, feche a pele com suturas de nylon 4-0 interrompidas.Monitore todos os ratos até que estejam totalmente recuperados. Um aumento significativo da pressão arterial sistólica foi observado uma semana após a infusão de angiotensina II. O grupo de angiotensina II de denervação simpática renal, ou RDN, mostrou uma redução significativa na pressão arterial sistólica em comparação com o grupo de angiotensina II simulada aos 21 dias após o procedimento de RDN.Não foi observada diferença significativa entre os grupos sham e RDN em duas semanas após o procedimento RDN. A coloração de hematoxilina e eosina do nervo simpático renal e da artéria renal é mostrada aqui. Não foi observado espessamento da camada íntima da artéria renal nos quatro grupos.Em comparação com o grupo shams, núcleos fragmentados e picnóticos, digestão e inchaço do tecido endoneurial foram observados em ambos os grupos RDN. A imuno-histoquímica dos feixes nervosos revelou que a expressão de tirosina hidroxilase foi significativamente diminuída no grupo RDN e RDN angiotensina II em comparação com ambos os grupos shams. O conteúdo de norepinefrina cortical renal nos rins desnervados tanto no grupo normotenso quanto no hipertenso foi significativamente reduzido em comparação com o rim inervado.A coloração de Masson não mostrou aumento notável da íntima média da aorta abdominal entre os grupos. Imagens representativas do miocárdio em diferentes grupos são mostradas aqui. A hipertrofia cardíaca induzida por infusão de angiotensina II foi melhorada pelo tratamento com RDN pela diminuição da fibrose intersticial e do tamanho dos cardiomiócitos.Durante o procedimento, não toque o fenol no tecido circundante, exceto na artéria renal, pois pode causar obstrução intestinal, infecção abdominal e estenose da artéria renal. Este método pode estabelecer um modelo RDN padronizado para ajudar a estudar os mecanismos que controlam a hipertensão. Futuras aplicações dessa técnica podem contribuir para a ampliação das vias que reforçam o processo de hipertensão e hipertrofia cardíaca.

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Glaucoma, frequently associated with elevated intraocular pressure (IOP), is one of the leading causes of blindness. We sought to establish a mouse model ...

Medicina

Tibial Nerve Transection - A Standardized Model for Denervation-induced Skeletal Muscle Atrophy in Mice

Secção do nervo tibial - um modelo padronizado para denervação induzida por atrofia muscular em ratos

The tibial nerve transection model is a well-tolerated, validated, and reproducible model of denervation-induced skeletal muscle atrophy in rodents. ...

Assessment of Vascular Function in Patients With Chronic Kidney Disease

Avaliação da função vascular em pacientes com doença renal crônica

Patients with chronic kidney disease (CKD) have significantly increased risk of cardiovascular disease (CVD) compared to the general population, and this ...

Early Detection of Drug-Induced Renal Hemodynamic Dysfunction Using Sonographic Technology in Rats

Detecção precoce de Induzida por Medicamentos Renal hemodinâmica Disfunção Usando ultrassonografia Tecnologia em Ratos

The kidney normally functions to maintain hemodynamic homeostasis and is a major site of damage caused by drug toxicity. Drug-induced nephrotoxicity is ...

Murine Kidney Transplant Technique

Rim murino técnica de transplante

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become ...

Subcutaneous Angiotensin II Infusion using Osmotic Pumps Induces Aortic Aneurysms in Mice

Subcutânea perfusão de angiotensina II usando osmótica Bombas Induz aneurismas da aorta em ratos

Osmotic pumps continuously deliver compounds at a constant rate into small animals.  This article introduces a standard protocol used to induce aortic ...

Novel Approach for Simultaneous Recording of Renal Sympathetic Nerve Activity and Blood Pressure with Intravenous Infusion in Conscious, Unrestrained Mice.

Nova abordagem para gravação simultânea da atividade do nervo simpático Renal e pressão arterial com infusão intravenosa em consciente, ratos desenfreados.

Renal sympathetic nerves contribute significantly to both physiological and pathophysiological phenomena. Evaluating renal sympathetic nerve activity ...

Shunt Surgery, Right Heart Catheterization, and Vascular Morphometry in a Rat Model for Flow-induced Pulmonary Arterial Hypertension

A cirurgia de derivação, coração direito Cateterismo e Vascular morfometria em um modelo de rato para induzida Fluxo de Hipertensão Arterial Pulmonar

In this protocol, PAH is induced by combining a 60 mg/kg monocrotalin (MCT) injection with increased pulmonary blood flow through an aorto-caval shunt ...

Improved Registration of 3D CT Angiography with X-ray Fluoroscopy for Image Fusion During Transcatheter Aortic Valve Implantation

Melhorou o registo de 3D CT angiografia com fluoroscopia de raio-x para fusão de imagem durante a implantação de válvula aórtica percutânea

The fusion of 3D anatomical models derived from high-fidelity pre-interventional computed tomography angiography (CTA), and x-ray (XR) fluoroscopy to ...

Left Atrial Stenosis Induced Pulmonary Venous Arterialization and Group 2 Pulmonary Hypertension in Rat

Estenose Atrial Esquerdo induzida Arterialization venoso pulmonar e hipertensão pulmonar do grupo 2 no rato

The mechanism of mitral stenosis-induced pulmonary venous arterialization and group 2 pulmonary hypertension (PH) is unclear. There is no rodent model of ...