Name: inner mitochondrial membrane sensitivity to na+ reveals partially segmented functional coq pools
Uploaded: 2022-07-20T13:15:00
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Agradecemos al Dr. R. Martínez-de-Mena, M. M. Muñoz-Hernández, A., al Dr. C. Jiménez y al E. R. Martínez-Jiménez por su asistencia técnica. Este estudio fue apoyado por MICIN: RTI2018-099357-B-I00 y HFSP (RGP0016/2018). El CNIC cuenta con el apoyo del Instituto de Salud Carlos III (ISCIII), el Ministerio de Ciencia, Innovación y Universidades (MCNU) y la Fundación Pro CNIC y es un Centro de Excelencia Severo Ochoa (SEV-2015-0505). Figura 2 creada con BioRender.com.

Todos los experimentos con animales se realizaron siguiendo la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio y fueron aprobados por el comité de ética institucional del Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares Carlos III (CNIC), España, de acuerdo con la Directiva de la Unión Europea de 22 de septiembre de 2010 (2010/63/UE) y con el Real Decreto español de 1 de febrero de 2013 (53/2013). Se hicieron todos los esfuerzos para minimizar el número de animales utilizados y su sufrimiento.
<p clas...

<ol>
	<li>Calvo, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+role+of+respiratory+supercomplexes+in+mice:+SCAF1+relevance+and+segmentation+of+the+Qpool.">Functional role of respiratory supercomplexes in mice: SCAF1 relevance and segmentation of the Qpool.</a> Science Advances. 6 (26), (2020).</li><li>Garcia-Poyatos, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scaf1+promotes+respiratory+supercomplexes+and+metabolic+efficiency+in+zebrafish.">Scaf1 promotes respiratory supercomplexes and metabolic efficiency in zebrafish.</a> EMBO Reports. 21 (7), 50287 (2020).</li><li>Lapuente-Brun, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supercomplex+assembly+determines+electron+flux+in+the+mitochondrial+electron+transport+chain.">Supercomplex assembly determines electron flux in the mitochondrial electron transport chain.</a> Science. 340 (6140), 1567-1570 (2013).</li><li>Cogliati, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+super-assembly+of+respiratory+complexes+III+and+IV.">Mechanism of super-assembly of respiratory complexes III and IV.</a> Nature. 539 (7630), 579-582 (2016).</li><li>Letts, J. 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J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dynamic+substrate+pool+revealed+by+cryo-EM+of+a+lipid-preserved+respiratory+supercomplex.">A dynamic substrate pool revealed by cryo-EM of a lipid-preserved respiratory supercomplex.</a> Antioxidants and Redox Signaling. , (2021).</li><li>Gu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+architecture+of+the+mammalian+respirasome.">The architecture of the mammalian respirasome.</a> Nature. 537 (7622), 639-643 (2016).</li><li>Letts, J. A., Fiedorczuk, K., Sazanov, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+architecture+of+respiratory+supercomplexes.">The architecture of respiratory supercomplexes.</a> Nature. 537 (7622), 644-648 (2016).</li><li>Sousa, J. S., Mills, D. 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L., Parenti Castelli, G., Lenaz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mitochondrial+respiratory+chain+is+partially+organized+in+a+supercomplex+assembly:+kinetic+evidence+using+flux+control+analysis.">The mitochondrial respiratory chain is partially organized in a supercomplex assembly: kinetic evidence using flux control analysis.</a> Journal of Biological Chemistry. 279 (35), 36562-36569 (2004).</li><li>Enriquez, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supramolecular+organization+of+respiratory+complexes.">Supramolecular organization of respiratory complexes.</a> Annual Review of Physiology. 78, 533-561 (2016).</li><li>Genova, M. L., Lenaz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+appraisal+of+the+role+of+respiratory+supercomplexes+in+mitochondria.">A critical appraisal of the role of respiratory supercomplexes in mitochondria.</a> Biological Chemistry. 394 (5), 631-639 (2013).</li><li>Letts, J. A., Sazanov, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clarifying+the+supercomplex:+the+higher-order+organization+of+the+mitochondrial+electron+transport+chain.">Clarifying the supercomplex: the higher-order organization of the mitochondrial electron transport chain.</a> Nature Structural and Molecular Biology. 24 (10), 800-808 (2017).</li><li>Milenkovic, D., Blaza, J. N., Larsson, N. 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A., Lenaz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coenzyme+q+and+the+respiratory+chain:+coenzyme+q+pool+and+mitochondrial+supercomplexes.">Coenzyme q and the respiratory chain: coenzyme q pool and mitochondrial supercomplexes.</a> Molecular Syndromology. 5 (3-4), 119-140 (2014).</li><li>Hernansanz-Agustin, P., Enriquez, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+segmentation+of+CoQ+and+cyt+c+pools+by+respiratory+complex+superassembly.">Functional segmentation of CoQ and cyt c pools by respiratory complex superassembly.</a> Free Radical Biology and Medicine. 167, 232-242 (2021).</li><li>Fernandez-Vizarra, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+mitochondria+for+biogenetical+studies:+An+update.">Isolation of mitochondria for biogenetical studies: An update.</a> Mitochondrion. 10 (3), 253-262 (2010).</li><li>Cogliati, S., Cabrera-Alarcon, J. L., Enriquez, J. 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A., Hac, A., Heimburg, T., Grubm&#252;ller, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+sodium+chloride+on+a+lipid+bilayer.">Effect of sodium chloride on a lipid bilayer.</a> Biophysical Journal. 85 (3), 1647-1655 (2003).</li><li>Cordom&#237;, A., Edholm, O., Perez, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+ions+on+a+dipalmitoyl+phosphatidylcholine+bilayer.+a+molecular+dynamics+simulation+study.">Effect of ions on a dipalmitoyl phosphatidylcholine bilayer. a molecular dynamics simulation study.</a> The Journal of Physical Chemistry B. 112 (5), 1397-1408 (2008).</li></ol>

Aunque este protocolo representa un procedimiento muy sencillo para identificar la existencia de los grupos de CoQ parcialmente segmentados, hay algunos pasos críticos a tener en cuenta. Los sustratos (es decir, NADH o succinato) se agregan preferiblemente en último lugar, ya que puede ocurrir la autooxidación de estos compuestos. El volteo de cuvette debe ser cuidadoso para evitar la formación de burbujas que puedan interferir con la lectura.
Además, la presente técnica presenta algunas...

El sistema de fosforilación oxidativa mitocondrial (OXPHOS) es la principal vía que impulsa la síntesis de trifosfato de adenosina (ATP), la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) y el consumo de equivalentes reductores, como nicotinamida adenina dinucleótido (NADH) o succinato, por parte de las mitocondrias. El sistema OXPHOS se compone de cinco complejos de proteínas: el Complejo I (CI) oxida el NADH y reduce la CoQ en ubiquinol (CoQH2). El Complejo II (CII) oxida el succinato en fumarato y reduce la CoQ en CoQH2. El Complejo III (CIII) oxida la CoQH2 de nuevo en CoQ, reduciendo el citocromo c (cyt c). Finalmente, el complejo IV (CIV) oxida el citt c y reduce el oxígeno al agua. Esta cadena de oxidorreducción, la llamada cadena de transporte de electrones (mETC), está acoplada al bombeo de H + a través de la IMM, lo que crea un gradiente electroquímico utilizado por el complejo V (CV) para fosforilar el difosfato de adenosina (ADP) en ATP.
Los complejos mETC pueden estar solos en el IMM o ensamblarse en estructuras cuaternarias llamadas supercomplejos. El CIV puede ensamblarse con CIII, formando el III2+IV o Q-respirasoma (ya que es capaz de respirar en presencia de CoQH2)1,2,3 o formando homodímeros u homooligomeros4. CIII puede interactuar con CI, formando el supercomplejo I+III25. Finalmente, CI también es capaz de interactuar con el Q-respirasoma, construyendo el I+III2+IV o N-respirasoma (ya que puede respirar consumiendo NADH)1,6,7,8,9,10.
CoQ y cyt c son portadores de electrones móviles encargados de transferir electrones de CI/CII a CIII, y de CIII a CIV, respectivamente. Si los supercomplejos imponen o no una restricción local funcional para estos portadores ha sido un tema de intenso debate a lo largo de las últimas dos décadas 2,7,11,12,13,14,15,16,17. Sin embargo, varios grupos independientes han demostrado que coQ y cyt c se pueden segmentar funcionalmente en grupos en el IMM. Con respecto a la CoQ, se puede segmentar funcionalmente en una agrupación específica de CoQ para IC (CoQNAD) y otra agrupación dedicada a enzimas dependientes de FAD (CoQFAD)1,7,12,18,19. Sin embargo, para diferenciar la existencia de grupos funcionales de CoQ parcialmente segmentados, se requirió la sobreexpresión de la oxidasa alternativa (AOX) y la generación de mutantes específicos de ADNmt, que pueden ensamblar IC en ausencia de CIII, 1,19,20.
El mecanismo de producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) durante la hipoxia era desconocido hasta hace poco. Ante la hipoxia aguda, IC sufre la transición activa/deactiva (A/D), que implica la disminución de su actividad de bombeo H+ NADH-CoQ oxidorreductasa. Tal disminución en el bombeo de H + acidifica la matriz mitocondrial y disuelve parcialmente los precipitados de calcio-fosfato en la matriz mitocondrial, liberando Ca2 + soluble. Este aumento de Ca2+ soluble activa el intercambiador Na+/Ca2+ (NCLX), que extruye Ca2+ a cambio de Na+. El aumento de Na+ mitocondrial interactúa con los fosfolípidos en el lado interno de la IMM, disminuyendo su fluidez y transferencia de CoQ entre CII y CIII, produciendo finalmente anión superóxido, una señal redox21. Curiosamente, la transferencia de CoQ solo disminuyó entre CII y CIII, pero no entre IC y CIII, destacando que 1) Na+ fue capaz de modular solo uno de los grupos de CoQ existentes en las mitocondrias; 2) existen grupos de CoQ funcionalmente diferenciados en el IMM. Por lo tanto, se puede utilizar un protocolo ampliamente utilizado para el estudio de las actividades enzimáticas mitocondriales para evaluar la existencia de las piscinas de CoQ mencionadas.
El protocolo actual se basa en la medición de la reducción de la cit c oxidada, el sustrato de CIII, por absorbancia en presencia de succinato (es decir, sustrato CII) o NADH (es decir, sustrato CI). La misma muestra se divide en dos, una de las cuales será tratada con KCl, y la otra con la misma concentración de NaCl. De esta manera, dado que el Na+ disminuye la fluidez de la IMM, si la CoQ existiera en un pool único en la IMM, tanto la CI+CIII como la CII+CIII disminuirían en presencia de Na+. Sin embargo, si la CoQ existiera en grupos de CoQ funcionales parcialmente segmentados, el efecto de Na+ sería mayormente (o sólo) evidente en la actividad de CII+CIII, pero no en la CI+CIII. Como se publicó recientemente21, na+ solo afecta la transferencia de CoQ entre CII y CIII (Figura 1C,D), pero no entre IC y CIII (Figura 1A,B).
Este protocolo, junto con una panoplia de técnicas, se ha utilizado para confirmar la existencia de grupos funcionales de CoQ parcialmente segmentados en el IMM, uno dedicado a CI (es decir, CoQNAD) y otro dedicado a enzimas ligadas a FAD (es decir, CoQFAD)1,3,7; una observación que, aunque se sigue debatiendo22, ha sido corroborada de forma independiente por varios grupos 7,19. Así, el superasamblaje de IC en supercomplejos impacta en la movilidad local de CoQ, facilitando su uso por el CIII dentro del supercomplejo 1,7,13,14,23,24,25.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Antimycin A</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A8674</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>10775835001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bradford protein assay</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>5000001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytochrome c from equine heart</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C7752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2HPO4</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3786</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3911</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malonic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M1296</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NADH</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10107735001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium cyanide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>207810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotenone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R8875</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectra Manager software</td>
			<td>JASCO</td>
			<td>version 2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrophotometer</td>
			<td>UV/VISJASCO</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Succinate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>398055</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

inner mitochondrial membrane sensitivity to na+ reveals partially segmented functional coq pools

Las piscinas de ubiquinona (CoQ) en la membrana mitocondrial interna (IMM) están parcialmente segmentadas en enzimas complejas I o dependientes de FAD. Dicha subdivisión puede evaluarse fácilmente mediante un ensayo comparativo utilizando NADH o succinato como donantes de electrones en mitocondrias congeladas-descongeladas, en las que se mide la reducción del citocromo c (cyt c). El ensayo se basa en el efecto de Na+ sobre el IMM, disminuyendo su fluidez. Aquí, presentamos un protocolo para medir la actividad de la NADH-cyt c oxidorreductasa y las actividades de la succinato-cyt c oxidorreductasa en presencia de NaCl o KCl. Las reacciones, que se basan en la mezcla de reactivos en una cubeta de manera escalonada, se miden espectrofotométricamente durante 4 min en presencia de Na+ o K+. La misma mezcla se realiza en paralelo en presencia de inhibidores enzimáticos específicos para restar el cambio inespecífico en la absorbancia. La actividad de la NADH-cyt c oxidorreductasa no disminuye en presencia de ninguno de estos cationes. Sin embargo, la actividad de la oxidorreductasa de succinato-cyt c disminuye en presencia de NaCl. Este sencillo experimento destaca: 1) el efecto del Na+ en la disminución de la fluidez de la IMM y la transferencia de CoQ; 2) que el supercomplejo I + III2 protege la transferencia de ubiquinona (CoQ) de verse afectada por la disminución de la fluidez de IMM; 3) que la transferencia de CoQ entre IC y CIII es funcionalmente diferente de la transferencia de CoQ entre CII y CIII. Estos hechos apoyan la existencia de grupos de CoQ funcionalmente diferenciados en el IMM y muestran que pueden ser regulados por el entorno cambiante de Na + de las mitocondrias.

Los resultados típicos de este protocolo se representan a continuación (Figura 3). Como la absorbancia reducida de cyt c se localiza en 550 nm, todas las submuestras desinhibidas deben mostrar un aumento en la absorbancia a 550 nm. Las submuestras inhibidas muestran idealmente una pendiente de línea plana o ligeramente creciente (Figura 3). Las pendientes de las submuestras inhibidas deben restarse de las submuestras desinhibidas.
...

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Inner Mitochondrial Membrane Sensitivity to Na+ Reveals Partially Segmented Functional CoQ Pools

Este protocolo describe un ensayo comparativo, utilizando actividades complejas mitocondriales CI+CIII y CII+CIII en presencia o ausencia de Na+, para estudiar la existencia de grupos funcionales de CoQ parcialmente segmentados.

La sensibilidad de la membrana mitocondrial interna al Na+ revela grupos de CoQ funcionales parcialmente segmentados

Ubiquinone (CoQ) pools in the inner mitochondrial membrane (IMM) are partially segmented to either complex I or FAD-dependent enzymes. Such subdivision ...

Este protocolo destaca el papel del sodio como segundo mensajero y también muestra la existencia de piscinas de ubiquinol parcialmente diferenciadas. Esta técnica demuestra un enfoque extremadamente simple para el estudio de piscinas de ubiquinol que, de lo contrario, requiere modelos celulares muy específicos. Este enfoque se puede utilizar para el estudio de la transferencia de electrones en otras membranas, particularmente de enzimas dentro de las gotas de lípidos.Divida las muestras en cuatro submuestras de 20 microgramos cada una y etiquételas de A a D.Divida las muestras A y B en dos submuestras de 10 microgramos cada una y etiquételas como A1, A2, B1 y B2. Prepare el búfer C1/C2 como se describe en el protocolo de texto y precaliente a 37 grados centígrados. En una cubeta de un mililitro, agregue cada una de las submuestras a 30 microlitros de citocromo c y 10 microlitros de malonato. Agregue un búfer C1 / C2 para aumentar el volumen a 980 microlitros en cubetas A1 y B1 y 979 microlitros en A2 y B2. Añadir 10 microlitros de cloruro de potasio un molar en las cubetas A1 y A2 y 10 microlitros de cloruro de sodio un molar en B1 y B2. Agregue un microlitro de rotenona de un milimolar en las cubetas A2 y B2. Justo antes de la medición, agregue 10 microlitros de NADH de 10 milimolares en todas las cubetas.Voltee la cubeta tres veces y colóquela en el espectrofotómetro. En el software adjunto, haga clic en Medir y luego en Parámetros, luego vaya a General y establezca los parámetros de medición en longitud de onda de 550 nanómetros y tiempo en cuatro minutos de lectura. Haga clic en Aceptar y Comience para comenzar el experimento.Al final de la medición, guarde la pendiente que comprende el aumento lineal de la absorbancia haciendo clic en Archivo y Guardar como.Divida las muestras C y D en dos submuestras de 10 microgramos cada una y etiquételas como C1, C2, D1 y D2. Mezcle cada una de las submuestras en una cubeta de un mililitro con 30 microlitros de citocromo c y un microlitro de rotenona. Agregue un tampón C1 / C2 precalentado a 37 grados Celsius para elevar el volumen a 980 microlitros en las cubetas C1 y D1 y 970 microlitros en C2 y D2. Añadir 10 microlitros de cloruro de potasio monolar en cubetas C1 y C2 y 10 microlitros de cloruro de sodio monolar en D1 y D2. Agregue un microlitro de antimicina A de un milimolar en las cubetas C2 y D2 justo antes de la medición y 10 microlitros de succinato de un molar en todas las cubetas. Voltee la cubeta tres veces y colóquela en el espectrofotómetro.Realizar la medición y guardar la pendiente que comprende el aumento lineal de la absorbancia al final de la medición. Este protocolo se utilizó para estudiar el efecto de los iones de sodio en la reducción del citocromo c por las membranas mitocondriales sobre la adición de NADH o succinato. Las trazas de absorbancia generadas a 550 nanómetros para las muestras A y B se corrigieron para su correspondiente inhibición.Estos rastros mostraron una pendiente similar, lo que indica una actividad similar de nadH-citocromo c oxidorreductasa. Sin embargo, los rastros para las muestras C y D fueron diferentes, mostrando que la actividad de la succinato-citocromo c oxidorreductasa de la muestra C es mayor que la de la muestra D.In fin de normalizar la cantidad de cambio medido con esta técnica, se pueden realizar otros métodos, como la actividad aislada del complejo I, el complejo II o el complejo III. Usando esta técnica, estamos explorando los entornos fisiológicos en los que el sodio puede estar involucrado como un segundo mensajero.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Inner Mitochondrial Membrane Sensitivity to Na+ Reveals Partially Segmented Functional CoQ Pools

Bacterial Inner-membrane Display for Screening a Library of Antibody Fragments

Visualización interior de la membrana bacteriana para la selección de una biblioteca de fragmentos de anticuerpos

Antibodies engineered for intracellular function must not only have affinity for their target antigen, but must also be soluble and correctly folded in ...

Investigación

Bioquímica

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

El uso de andamios liposomas para reconstituir las interacciones proteína-proteína-lípidos proximal<em&gt; In Vitro</em

Studies of integral membrane proteins in vitro are frequently complicated by the presence of a hydrophobic transmembrane domain. Further complicating ...

Measuring Liver Mitochondrial Oxygen Consumption and Proton Leak Kinetics to Estimate Mitochondrial Respiration in Holstein Dairy Cattle

Medir consumo de oxígeno mitocondrial hepática y la cinética de pérdida de protón para estimar la respiración mitocondrial en el ganado de lechero Holstein

Oxygen consumption, proton motive force (PMF) and proton leak are measurements of mitochondrial respiration, or how well mitochondria are able to convert ...

A Fluorescence Fluctuation Spectroscopy Assay of Protein-Protein Interactions at Cell-Cell Contacts

Un análisis de espectroscopia de fluorescencia fluctuación de interacciones de proteínas en los contactos célula-célula

A variety of biological processes involves cell-cell interactions, typically mediated by proteins that interact at the interface between neighboring ...

Atomic Absorbance Spectroscopy to Measure Intracellular Zinc Pools in Mammalian Cells

Espectroscopía de absorbancia atómica para medir las agrupaciones intracelulares de zinc en células de mamífero

Transition metals are essential micronutrients for organisms but can be toxic to cells at high concentrations by competing with physiological metals in ...

Monitoring GPCR-&#946;-arrestin1/2 Interactions in Real Time Living Systems to Accelerate Drug Discovery

Monitoring GPCR-ÃƒÅ½Ã‚Â²-arrestin1/2 Interactions in Real Time Living Systems to Accelerate Drug Discovery

Monitoreo de las interacciones de GPCR--arrestin1/2 en sistemas de vida en tiempo real para acelerar el descubrimiento de fármacos

Interactions between G-protein coupled receptors (GPCRs) and &#946;-arrestins are vital processes with physiological implications of great importance. ...

Measuring Nucleotide Binding to Intact, Functional Membrane Proteins in Real Time

Medición de la unión de nucleótidos a proteínas de membrana intactas y funcionales en tiempo real

We have developed a method to measure binding of adenine nucleotides to intact, functional transmembrane receptors in a cellular or membrane environment. ...

A Model Membrane Platform for Reconstituting Mitochondrial Membrane Dynamics

Una plataforma de membrana modelo para la reconstitución de la dinámica de membrana mitocondrial

Mitochondrial dynamics is essential for the organelle&#8217;s diverse functions and cellular responses. The crowded, spatially complex, mitochondrial ...

Cell-Free Production of Proteoliposomes for Functional Analysis and Antibody Development Targeting Membrane Proteins

Producción libre de células de proteoliposomas para análisis funcional y desarrollo de anticuerpos dirigidos a proteínas de membrana

Membrane proteins play essential roles in a variety of cellular processes and perform vital functions. Membrane proteins are medically important in drug ...

Labelling and Visualization of Mitochondrial Genome Expression Products in Baker's Yeast Saccharomyces cerevisiae

Labelling and Visualization of Mitochondrial Genome Expression Products in Baker's Yeast Saccharomyces cerevisiae

Etiquetado y visualización de productos de expresión del genoma mitocondrial en la levadura de Panadero Saccharomyces cerevisiae

Mitochondria are essential organelles of eukaryotic cells capable of aerobic respiration. They contain circular genome and gene expression apparatus. A ...