Name: ensemble force spectroscopy by shear forces
Uploaded: 2022-07-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ensemble Force Spectroscopy by Shear Forces at JoVE.com

עבודת מחקר זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדע [CBET-1904921] והמכונים הלאומיים לבריאות [NIH R01CA236350] ל- H. M.

הערה: כל המאגרים והריאגנטים הכימיים המשמשים בפרוטוקול זה מפורטים בחומרי הטבלה.
1. הכנת מיקרוסקופ כוח הגזירה
הערה: מיקרוסקופ כוח הגזירה מכיל שני חלקים, יחידת תגובה (הומוגנייזר) ויחידת גילוי (מיקרוסקופ פלואורסצנטי). ההגדלה של העינית היא 10x, וההג...

<ol>
	<li>Neuman, K. C., Nagy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-molecule+force+spectroscopy:+Optical+tweezers,+magnetic+tweezers+and+atomic+force+microscopy.">Single-molecule force spectroscopy: Optical tweezers, magnetic tweezers and atomic force microscopy.</a> Nature Methods. 5 (6), 491-505 (2008).</li><li>Woodside, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomechanical+measurements+of+the+sequence-dependent+folding+landscapes+of+single+nucleic+acid+hairpins.">Nanomechanical measurements of the sequence-dependent folding landscapes of single nucleic acid hairpins.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (16), 6190-6195 (2006).</li><li>Grandbois, M., Beyer, M., Rief, M., Clausen-Schaumann, H., Gaub, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+strong+is+a+covalent+bond.">How strong is a covalent bond.</a> Science. 283 (5408), 1727-1730 (1999).</li><li>Strick, T. R., Allemand, J. F., Bensimon, D., Croquette, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavior+of+supercoiled+DNA.">Behavior of supercoiled DNA.</a> Biophysical Journal. 74 (4), 2016-2028 (1998).</li><li>Yang, D., Ward, A., Halvorsen, K., Wong, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplexed+single-molecule+force+spectroscopy+using+a+centrifuge.">Multiplexed single-molecule force spectroscopy using a centrifuge.</a> Nature Communications. 7, 11026 (2016).</li><li>Su, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-responsive+polymer+particles+as+force+clamps+for+the+mechanical+unfolding+of+target+molecules.">Light-responsive polymer particles as force clamps for the mechanical unfolding of target molecules.</a> Nano Letters. 18 (4), 2630-2636 (2018).</li><li>Kirkness, M. W. H., Forde, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-molecule+assay+for+proteolytic+susceptibility:+Force-induced+collagen+destabilization.">Single-molecule assay for proteolytic susceptibility: Force-induced collagen destabilization.</a> Biophysical Journal. 114 (3), 570-576 (2018).</li><li>Astumian, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermodynamics+and+kinetics+of+molecular+motors.">Thermodynamics and kinetics of molecular motors.</a> Biophysical Journal. 98 (11), 2401-2409 (2010).</li><li>Bekard, I. B., Asimakis, P., Bertolini, J., Dunstan, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+shear+flow+on+protein+structure+and+function.">The effects of shear flow on protein structure and function.</a> Biopolymers. 95 (11), 733-745 (2011).</li><li>Chistiakov, D. A., Orekhov, A. N., Bobryshev, Y. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+shear+stress+on+endothelial+cells:+go+with+the+flow.">Effects of shear stress on endothelial cells: go with the flow.</a> Acta Physiologica. 219 (2), 382-408 (2017).</li><li>Hu, C., Jonchhe, S., Pokhrel, P., Karna, D., Mao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+unfolding+of+ensemble+biomolecular+structures+by+shear+force.">Mechanical unfolding of ensemble biomolecular structures by shear force.</a> Chemical Science. 12 (30), 10159-10164 (2021).</li><li>Sedghi Masoud, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+interactions+between+telomeric+i-motif+DNA+and+a+cyclic+tetraoxazole+compound.">Analysis of interactions between telomeric i-motif DNA and a cyclic tetraoxazole compound.</a> ChemBioChem. 19 (21), 2268-2272 (2018).</li><li>Abraham Punnoose, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptive+and+specific+recognition+of+telomeric+G-quadruplexes+via+polyvalency+induced+unstacking+of+binding+units.">Adaptive and specific recognition of telomeric G-quadruplexes via polyvalency induced unstacking of binding units.</a> Journal of the American Chemical Society. 139 (22), 7476-7484 (2017).</li><li>Dhakal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coexistence+of+an+ILPR+i-motif+and+a+partially+folded+structure+with+comparable+mechanical+stability+revealed+at+the+single-molecule+level.">Coexistence of an ILPR i-motif and a partially folded structure with comparable mechanical stability revealed at the single-molecule level.</a> Journal of the American Chemical Society. 132 (26), 8991-8997 (2010).</li><li>Hu, C., Tahir, R., Mao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-molecule+mechanochemical+sensing.">Single-molecule mechanochemical sensing.</a> Accounts of Chemical Research. 55 (9), 1214-1225 (2022).</li></ol>

הפרוטוקול המתואר בכתב יד זה מאפשר חקירה בזמן אמת של התגלגלות מערך של מבנים ביומולקולריים על ידי כוח גזירה. התוצאות המוצגות כאן מדגישות כי מבנים של מוטיב דנ"א ניתנים לפתיחה על ידי כוח גזירה. התגלגלותו של מוטיב ה-i הקשור לליגנד ותגובות הקליק המופעלות בכוח הגזירה היו יישומים של הוכחת היתכנות ?...

בספקטרוסקופיית כוח של מולקולה בודדת1 (SMFS), התכונות המכניות של מבנים מולקולריים בודדים נחקרו על ידי מכשירים מתוחכמים כגון מיקרוסקופ הכוח האטומי, פינצטה אופטית ופינצטה מגנטית 2,3,4. מוגבל על ידי אותה דרישת כיווניות של המולקולות במערך יצירת הכוח / גילוי או שדה הראייה הקטן בפינצטה מגנטית ובמיקרוסקופ כוח צנטריפוגה זעיר (MCF)5,6,7,8, רק מספר מוגבל של מולקולות ניתן לחקור בו זמנית באמצעות SMFS. התפוקה הנמוכה של SMFS מונעת את היישום הרחב שלה בתחום הזיהוי המולקולרי, הדורש מעורבות של קבוצה גדולה של מולקולות.
זרימת גזירה מספקת פתרון פוטנציאלי להפעלת כוחות על קבוצה מסיבית של מולקולות9. בזרימה נוזלית בתוך ערוץ, ככל שפני התעלה קרובים יותר לפני הערוץ, כך קצב הזרימהאיטי יותר 10. שיפוע מהירות זרימה כזה גורם ללחץ גזירה המקביל למשטח הגבול. כאשר מולקולה ממוקמת בזרימת גזירה זו, המולקולה מכוונת את עצמה מחדש כך שהציר הארוך שלה מתיישר עם כיוון הזרימה, כאשר כוח הגזירה מופעל על ציר11 הארוך. כתוצאה משינוי כיוון זה, כל המולקולות מאותו סוג (גודל ואורך הידיות) צפויות להתיישר באותו כיוון תוך שהן חוות את אותו כוח גזירה.
עבודה זו מתארת פרוטוקול לשימוש בזרימת גזירה כזו כדי להפעיל כוח גזירה על קבוצה מסיבית של מבנים מולקולריים, כפי שמודגם על ידי מוטיב ה- i של הדנ"א. בפרוטוקול זה נוצרת זרימת גזירה בין הרוטור לסטטור בקצה הומוגנייזר. המחקר הנוכחי מצא כי מבנה הדנ"א המקופל i-motif יכול להיפתח על ידי קצבי גזירה של 9724-97245 s−1. חוץ מזה, נמצא קבוע דיסוציאציה של 36 μM בין ליגנד L2H2-4OTD לבין מוטיב i. ערך זה עולה בקנה אחד עם זה של 31 μM שנמדד על ידי מבחן הסטת הג'ל12. יתר על כן, הטכניקה הנוכחית משמשת כדי לפתוח את מוטיב i, אשר יכול לחשוף את נחושת chelated (I) כדי לזרז תגובת קליק. פרוטוקול זה מאפשר אפוא לפתוח קבוצה גדולה של מבני i-motif עם מכשירים בעלות נמוכה בזמן סביר (קצר מ -30 דקות). בהתחשב בכך שטכניקת כוח הגזירה מגדילה באופן דרסטי את התפוקה של ספקטרוסקופיית הכוח, אנו מכנים טכניקה זו ספקטרוסקופיית כוח אנסמבל (EFS). פרוטוקול זה נועד לספק הנחיות ניסיוניות כדי להקל על היישום של EFS מבוסס כוח גזירה זה.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3K MWCO Amicon</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>ufc900324</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ascorbic acid</td>
			<td>VWR</td>
			<td>VWRC0143-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calfluor 488 azide</td>
			<td>Click Chemistry Tools</td>
			<td>1369-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CuCl</td>
			<td>Thermo&#160;</td>
			<td>ACRO270525000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispersion tip</td>
			<td>Switzerland</td>
			<td>PT-DA07/2EC-B101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA oligos</td>
			<td>IDT</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dye</td>
			<td>IDT</td>
			<td>/5Cy5/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>Janpan</td>
			<td>Nikon TE2000-U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homogenizer</td>
			<td>Switzerland</td>
			<td>PT 3100D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HPG</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>cs-295271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>VWR</td>
			<td>VWRC26760.295</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MES</td>
			<td>VWR</td>
			<td>VWRCE169-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quencher</td>
			<td>IDT</td>
			<td>/3IAbRQSp/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TBTA</td>
			<td>Tokyo Chemical Industry</td>
			<td>T2993</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris</td>
			<td>VWR</td>
			<td>VWRCE133-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ensemble force spectroscopy by shear forces

טכניקות של מולקולה בודדת המבוססות על עקרונות פלואורסצנטיים ומכנוכימיים מספקות רגישות מעולה בחישה ביולוגית. עם זאת, בשל היעדר יכולות תפוקה גבוהות, היישום של טכניקות אלה מוגבל בביופיזיקה. ספקטרוסקופיית כוח אנסמבל (EFS) הדגימה תפוקה גבוהה בחקר קבוצה מסיבית של מבנים מולקולריים על ידי המרת מחקרים מכניכימיים של מולקולות בודדות לאלה של הרכבים מולקולריים. בפרוטוקול זה, המבנים המשניים של הדנ"א (i-motifs) נפרשו בזרימת הגזירה בין הרוטור לסטטור של קצה הומוגנייזר בקצבי גזירה של עד 77796/s. הודגמו ההשפעות של קצבי הזרימה והגדלים המולקולריים על כוחות הגזירה שחווה ה-i-motif. טכניקת EFS חשפה גם את הזיקה המחייבת בין מוטיבים של דנ"א לליגנדים. יתר על כן, הדגמנו תגובת כימיה של קליקים שיכולה להיות מופעלת על ידי כוח גזירה (כלומר, כימיה של מכניקה-קליק). תוצאות אלה מבססות את היעילות של שימוש בכוח גזירה כדי לשלוט על הקונפורמציה של מבנים מולקולריים.

איור 1 מתאר את ההתגלגלות המכנית והחישה בזמן אמת של מולקולות אנסמבל ב-EFS. באיור 1B, עוצמת הפלואורסצנטיות של דנ"א i-motif נצפתה עולה כאשר קצב הגזירה נע בין 9,724 s−1 ל-97,245 s−1 במאגר pH 5.5 MES. כבקרה, עוצמת הפלואורסצנציה לא עלתה כאשר אותו דנ"א של מוטיב i ה...

Watch this Scientific Journal Video about Ensemble Force Spectroscopy by Shear Forces at JoVE.com

Ensemble Force Spectroscopy by Shear Forces

ספקטרוסקופיית כוח אנסמבל (EFS) היא טכניקה חזקה לפתיחה מכנית וחישה בזמן אמת של מערך אנסמבל של מבנים ביומולקולריים בתחומים ביופיזיים וביו-סנסורים.

ספקטרוסקופיית כוח אנסמבל על ידי כוחות גזירה

Single-molecule techniques based on fluorescence and mechanochemical principles provide superior sensitivity in biological sensing. However, due to the ...

פרוטוקול זה מספק טכניקת תפוקה גבוהה לחקר הקשירה הבין-מולקולרית בין דנ"א לליגנדים. טכניקה זו הדגימה תפוקה גבוהה בחקר קבוצה מסיבית של מבנים ביומולקולריים. הוא עושה זאת על ידי המרת התכונות הכימיות המכניות של מולקולות בודדות לאלה של הרכבים מולקולריים.אני חושב שזה ניסוי מאוד צעד קדימה אבל יש כמה צעדים קריטיים. לדוגמה, יישור של מיקרוסקופ, הומוגנייזר, ואת צינור התגובה. שלושת הדברים האלה צריכים להיות מיושרים בצורה מושלמת על מנת לעקוב במדויק אחר השינוי בפלואורסצנציה.מתחילים בהרכבת ההומוגנייזר והמיקרוסקופ על שולחן הרכבה. לאחר הרכבת משקפי מגן, הפעל את המיקרוסקופ הפלואורסצנטי ולאחר מכן כוונן את ההומוגנייזר כדי לוודא שקרן האור העירור עוברת דרך מרכז הקצה המתפזר של ההומוגנייזר. לאחר מכן הכינו תא תגובה בעל תחתית שטוחה שגובהו חמישה סנטימטרים ו-1.5 על 1.5 סנטימטרים רבועים בחתך רוחב, כדי להבטיח שחומר התא שנבחר לא יפחית את הרקע.לאחר מכן, מהדקים את תא התגובה בשלב הדגימה של המיקרוסקופ הפלואורסצנטי ולאחר מכן מתאימים את התא כך שיחזיק את קצה הפיזור של ההומוגנייזר, כדי להבטיח שהקצה יהיה מעט מעל המשטח התחתון של תא התגובה. לאחר מכן, התאם את המיקום האנכי של ההומוגנייזר והתא יחד כדי להבטיח שהמיקוד של המיקרוסקופ יהיה על פני השטח של קצה הפיזור. לאחר מכן התאם את המיקום האופקי של קצה הפיזור כדי לוודא שאזור הזיהוי מוגדר בין הרוטור למצב.הפעל את ערוצי הפלואורסצנט, על פי הצבע הפלואורסצנטי ששימש בניסוי. לפני ניסוי הגזירה במהירות גבוהה, השתמשו במים שעברו דה-יוניזציה כדי לבחון את הגזירה במהירות גזירה נמוכה. ראשית, הכינו דנ"א טלומרי אנושי בעל מוטיב המסומן בצבע ובקוונצ'ר בשני קצותיו בהתאמה במים שעברו דה-יוניזציה כפי שמתואר בכתב היד.לאחר מכן, דללו את הדנ"א לחמישה מיקרומולרים במאגר MES של 30 מילימולאר ב-pH 5.5 או pH 7.4. לתמיסת הדנ"א, הוסיפו ליגנד L2H24OTD"בטווח ריכוזים של אפס עד 60 מיקרומולר וערבבו את התמיסה בעדינות במשך 10 דקות כדי לקפל את מבני ה-i-motif ללא אור. בדוק ומזער את עוצמת הפלואורסצנטיות ברקע של תא התגובה המלא במים שעברו דה-יוניזציה באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי ללא גזירה.לאחר מכן הגדר את הפרמטרים של מצלמת ה- CCD באמצעות התוכנה עם זמן חשיפה של 0.5 שניות, רגישות CCD של 1, 600 וזמן הקלטה השווה ל -20 דקות. באמצעות פיפטה ארוכה, מוסיפים את תמיסת הדנ"א לתא התגובה הריק והנקי ומכסים את תא התגובה בקופסה שחורה. לאחר מכן התחל את ההומוגנייזר לבצע גזירה בקצב גזירה נבחר הנע בין 9, 724 לשנייה ל -97, 245 לשנייה למשך 20 דקות, כאשר מצלמת ה- CCD מופעלת כדי להקליט את הנתונים.לאחר הניסוי, הסר את התא ושטוף אותו במים שעברו דה-יוניזציה. הכן דנ"א i-motif ומים שעברו דה-יוניזציה. לאחר מכן, דגרו 10 דנ"א מיקרומולרי i-motif ו-300 מיקרוליטרים של 30 מילימולאר טריס בופר בתוספת 150 מיקרומולאר קופריק כלוריד ו-300 מיקרומולאר חומצה אסקורבית למשך 10 דקות כדי לקפל את מבני ה-i-motif.הבא אולטרה לסנן את התמיסה עם מכשיר סינון אולטרה בכוח צנטריפוגלי של 14, 300 פעמים G.לחדש את התמיסה לכ 500 microliters עם 30 מילימולר tris buffers בתוספת 300 micromolar חומצה אסקורבית לאחר כל סינון. לאחר איסוף התמיסה השיורית, צור נפח סופי של 300 מיקרוליטר על ידי הוספת 30 מיקרומולאר טריס בתוספת 300 מיקרומולר חומצה אסקורבית יחד עם 20 מיקרומולאר CalFluor 488 אזיד, 20 מיקרומולאר HPG ו-10 מיקרומולאר TBTA. לאחר הוספת הריאגנטים, העבירו את הפתרון לחדר החושך.לאחר מכן בדקו ומזערו את עוצמת הפלואורסצנטיות ברקע של תא התגובה המלא במים שעברו דה-יוניזציה באמצעות המיקרוסקופ לפני ניסויי הגזירה. לאחר מכן, הוסף את תמיסת הדנ"א לתא התגובה הריק עם פיפטה ארוכה, ולאחר מכן התחל את הטיית ההומוגנייזר בקצב גזירה של 63, 209 לשנייה למשך 20 דקות כאשר מצלמת ה- CCD מופעלת. לאחר הניסוי, הסר את התא ושטוף אותו במים שעברו דה-יוניזציה.עוצמת הפלואורסצנטיות של דנ"א i-motif נצפתה עולה עם הקצב העצום שנע בין 9, 724 לשנייה ל-97, 245 לשנייה במאגר pH 5.5 MES. עם זאת, עוצמת הפלואורסצנציה לא עלתה כאשר אותו דנ"א של מוטיב i נגזל בקצב של 63, 209 לשנייה, מכיוון שהוא אינו מתקפל ב- pH 7.4 במאגר MES. הליגנד נקשר למולקולות ה-i-motif של הדנ"א הנתון לזרימה העצומה הוערך אשר הראה כי תוספת עוצמת הפלואורסצנטיות נעשתה פחות ברורה עם העלייה בריכוז הליגנד.קבוע הדיסוציאציה נקבע עבור האינטראקציה בין הליגנד לבין מוטיב ה-i ונמצא כ-34 מיקרומולים. מוטיב הנחושת של כלאט אחד נפרש בקצב גזירה של 63, 209 לשנייה, והנחושת ששוחררה עוררה את תגובת הקליק הפלואורגנית, וכתוצאה מכך עוצמת הפלואורסצנטיות גדלה עם הזמן. ראשית, ודא כי אזור הזיהוי מוגדר בין הרוטור לבין stater.שנית, בדקו ומזערו את הרקע הפלואורסצנטי. ולבסוף, הקפד לסנן את התגובה לפני שתבצע תגובת לחיצה. שיטה זו פותחת שער לחקור את החוזק המכני, לקפל ולפתוח את כל סוגי הפולימרים.זה יכול להיות מבנים אחרים של דנ"א, חלבונים או פולימרים אחרים, והאינטראקציה שלהם עם סוגים אחרים של מולקולות. כאמור, ניתן לחקור מספר מקרומולקולות אחרות באמצעות גישה זו.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Thermodynamics of Membrane Protein Folding Measured by Fluorescence Spectroscopy

תרמודינמיקה של קיפול חלבונים ממברנה נמדד על ידי הקרינה ספקטרוסקופיה

Membrane protein folding is an emerging topic with both fundamental and health-related significance.  The abundance of membrane proteins in cells ...

Bacterial Immobilization for Imaging by Atomic Force Microscopy

Immobilization חיידקית עבור הדמיה על ידי מיקרוסקופית כוח אטומי

AFM is a high-resolution (nm scale) imaging tool that mechanically probes a surface.  It has the ability to image cells and biomolecules, in a liquid ...

Biosensor for Detection of Antibiotic Resistant Staphylococcus Bacteria

Biosensor לאיתור של חיידקי סטפילוקוקוס עמידים לאנטיביוטיקה

A structurally transformed lytic bacteriophage having a broad host range of Staphylococcus aureus strains and a penicillin-binding protein (PBP 2a) ...

Investigating Receptor-ligand Systems of the Cellulosome with AFM-based Single-molecule Force Spectroscopy

חוקר מערכות קולטן ליגנד של Cellulosome עם המולקולה בודדת מבוססת AFM חיל ספקטרוסקופיה

Cellulosomes are discrete multienzyme complexes used by a subset of anaerobic bacteria and fungi to digest lignocellulosic substrates. Assembly of the ...

Manufacture of Concentrated, Lipid-based Oxygen Microbubble Emulsions by High Shear Homogenization and Serial Concentration

ייצור מרוכז, חמצן שומנים מבוסס microbubble אמולסיות ידי הגזירה גבוהה Homogenization וריכוז סידורי

Gas-filled microbubbles have been developed as ultrasound contrast and drug delivery agents. Microbubbles can be produced by processing surfactants using ...

Measurement of Maximum Isometric Force Generated by Permeabilized Skeletal Muscle Fibers

מדידה המרבית איזומטרי הכוח שנוצרה על ידי סיבי שריר שלד permeabilized

Analysis of the contractile properties of chemically skinned, or permeabilized, skeletal muscle fibers offers a powerful means by which to assess muscle ...

Atomic Force Microscopy Imaging and Force Spectroscopy of Supported Lipid Bilayers

כוח האטומי מיקרוסקופית הדמיה וחיל ספקטרוסקופיה של bilayers שומנים הנתמכים

Atomic force microscopy (AFM) is a versatile, high-resolution imaging technique that allows visualization of biological membranes. It has sufficient ...

A Protocol for Using F&#246;rster Resonance Energy Transfer (FRET)-force Biosensors to Measure Mechanical Forces across the Nuclear LINC Complex

A Protocol for Using FÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¶rster Resonance Energy Transfer FRET-force Biosensors to Measure Mechanical Forces across the Nuclear LINC Complex

פרוטוקול באמצעות העברת אנרגיה פורסטר תהודה (סריג) חיישנים ביולוגיים -force למדוד כוחות מכניים ברחבי המכלול הגרעיני LINC

The LINC complex has been hypothesized to be the critical structure that mediates the transfer of mechanical forces from the cytoskeleton to the nucleus. ...

Detection of Endotoxin in Nano-formulations Using Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) Assays

Detection of Endotoxin in Nano-formulations Using Limulus Amoebocyte Lysate LAL Assays

זיהוי של אנדוטוקסין ניסוחים-Nano באמצעות מבחני Lysate (LAL) Amoebocyte Limulus

When present in pharmaceutical products, a Gram-negative bacterial cell wall component endotoxin (often also called lipopolysaccharide) can cause ...

3D Printing of In Vitro Hydrogel Microcarriers by Alternating Viscous-Inertial Force Jetting

3D Printing of In Vitro Hydrogel Microcarriers by Alternating Viscous-Inertial Force Jetting

הדפסה תלת-ממדית של מיקרוקארים הידרוג'ל במבחנה על ידי סילון כוח צמיג-אינרציאלי לסירוגין

Microcarriers are beads with a diameter of 60-250 &#181;m and a large specific surface area, which are commonly used as carriers for large-scale cell ...