Name: ensemble force spectroscopy by shear forces
Uploaded: 2022-07-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ensemble Force Spectroscopy by Shear Forces at JoVE.com

Dette forskningsarbeidet ble støttet av National Science Foundation [CBET-1904921] og National Institutes of Health [NIH R01CA236350] til HM.

MERK: Alle buffere og kjemiske reagenser som brukes i denne protokollen er oppført i tabellen Materialer.
1. Forberedelse av skjærkraftmikroskopet
MERK: Skjærkraftmikroskopet inneholder to deler, en reaksjonsenhet (homogenisator) og en deteksjonsenhet (fluorescensmikroskop). Forstørrelsen av okularet er 10x, og forstørrelsen av objektivlinsen (luft) er 4x.
<ol><li>Monter homogenisatoren og mikroskopet på et monteringsbord. B...

<ol>
	<li>Neuman, K. C., Nagy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-molecule+force+spectroscopy:+Optical+tweezers,+magnetic+tweezers+and+atomic+force+microscopy.">Single-molecule force spectroscopy: Optical tweezers, magnetic tweezers and atomic force microscopy.</a> Nature Methods. 5 (6), 491-505 (2008).</li><li>Woodside, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomechanical+measurements+of+the+sequence-dependent+folding+landscapes+of+single+nucleic+acid+hairpins.">Nanomechanical measurements of the sequence-dependent folding landscapes of single nucleic acid hairpins.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (16), 6190-6195 (2006).</li><li>Grandbois, M., Beyer, M., Rief, M., Clausen-Schaumann, H., Gaub, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+strong+is+a+covalent+bond.">How strong is a covalent bond.</a> Science. 283 (5408), 1727-1730 (1999).</li><li>Strick, T. R., Allemand, J. F., Bensimon, D., Croquette, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavior+of+supercoiled+DNA.">Behavior of supercoiled DNA.</a> Biophysical Journal. 74 (4), 2016-2028 (1998).</li><li>Yang, D., Ward, A., Halvorsen, K., Wong, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplexed+single-molecule+force+spectroscopy+using+a+centrifuge.">Multiplexed single-molecule force spectroscopy using a centrifuge.</a> Nature Communications. 7, 11026 (2016).</li><li>Su, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-responsive+polymer+particles+as+force+clamps+for+the+mechanical+unfolding+of+target+molecules.">Light-responsive polymer particles as force clamps for the mechanical unfolding of target molecules.</a> Nano Letters. 18 (4), 2630-2636 (2018).</li><li>Kirkness, M. W. H., Forde, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-molecule+assay+for+proteolytic+susceptibility:+Force-induced+collagen+destabilization.">Single-molecule assay for proteolytic susceptibility: Force-induced collagen destabilization.</a> Biophysical Journal. 114 (3), 570-576 (2018).</li><li>Astumian, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermodynamics+and+kinetics+of+molecular+motors.">Thermodynamics and kinetics of molecular motors.</a> Biophysical Journal. 98 (11), 2401-2409 (2010).</li><li>Bekard, I. B., Asimakis, P., Bertolini, J., Dunstan, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+shear+flow+on+protein+structure+and+function.">The effects of shear flow on protein structure and function.</a> Biopolymers. 95 (11), 733-745 (2011).</li><li>Chistiakov, D. A., Orekhov, A. N., Bobryshev, Y. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+shear+stress+on+endothelial+cells:+go+with+the+flow.">Effects of shear stress on endothelial cells: go with the flow.</a> Acta Physiologica. 219 (2), 382-408 (2017).</li><li>Hu, C., Jonchhe, S., Pokhrel, P., Karna, D., Mao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+unfolding+of+ensemble+biomolecular+structures+by+shear+force.">Mechanical unfolding of ensemble biomolecular structures by shear force.</a> Chemical Science. 12 (30), 10159-10164 (2021).</li><li>Sedghi Masoud, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+interactions+between+telomeric+i-motif+DNA+and+a+cyclic+tetraoxazole+compound.">Analysis of interactions between telomeric i-motif DNA and a cyclic tetraoxazole compound.</a> ChemBioChem. 19 (21), 2268-2272 (2018).</li><li>Abraham Punnoose, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptive+and+specific+recognition+of+telomeric+G-quadruplexes+via+polyvalency+induced+unstacking+of+binding+units.">Adaptive and specific recognition of telomeric G-quadruplexes via polyvalency induced unstacking of binding units.</a> Journal of the American Chemical Society. 139 (22), 7476-7484 (2017).</li><li>Dhakal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coexistence+of+an+ILPR+i-motif+and+a+partially+folded+structure+with+comparable+mechanical+stability+revealed+at+the+single-molecule+level.">Coexistence of an ILPR i-motif and a partially folded structure with comparable mechanical stability revealed at the single-molecule level.</a> Journal of the American Chemical Society. 132 (26), 8991-8997 (2010).</li><li>Hu, C., Tahir, R., Mao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-molecule+mechanochemical+sensing.">Single-molecule mechanochemical sensing.</a> Accounts of Chemical Research. 55 (9), 1214-1225 (2022).</li></ol>

Protokollen beskrevet i dette manuskriptet tillater sanntidsundersøkelse av utfoldelsen av et ensemblesett av biomolekylære strukturer med skjærkraft. Resultatene som presenteres her understreker at DNA-i-motivstrukturer kan utfoldes med skjærkraft. Utfoldelsen av det ligandbundne i-motivet og skjærkraftaktiverte klikkreaksjoner var proof-of-concept-applikasjoner for denne ensemblekraftspektroskopimetoden.
Figur 1 viser instrumentoppsettet. Homogenisatorgener...

I enkeltmolekylkraftspektroskopi 1 (SMFS) har de mekaniske egenskapene til individuelle molekylære strukturer blitt studert av sofistikerte instrumenter som atomkraftmikroskopet, optisk pinsett og magnetisk pinsett 2,3,4. Begrenset av det samme direksjonalitetskravet til molekylene i kraftgenererende / detekterende oppsett eller det lille synsfeltet i magnetisk pinsett og miniatyrsentrifugekraftmikroskopet (MCF) 5,6,7,8, kan bare et begrenset antall molekyler undersøkes samtidig ved hjelp av SMFS. Den lave gjennomstrømningen av SMFS forhindrer dens brede anvendelse i molekylær anerkjennelsesfelt, noe som krever involvering av et stort sett med molekyler.
Skjærstrøm gir en potensiell løsning for å påføre krefter på et massivt sett med molekyler9. I en væskestrøm inne i en kanal, jo nærmere kanaloverflaten, jo langsommere strømningshastigheten10. En slik strømningshastighetsgradient forårsaker skjærspenning som er parallell med grenseflaten. Når et molekyl er plassert i denne skjærstrømmen, reorienterer molekylet seg slik at den lange aksen justerer seg med strømningsretningen, ettersom skjærkraften påføres den lange aksen11. Som et resultat av denne nyorienteringen forventes alle molekylene av samme type (størrelse og lengde på håndtakene) å justere seg i samme retning mens de opplever samme skjærkraft.
Dette arbeidet beskriver en protokoll for å bruke en slik skjærstrøm for å utøve skjærkraft på et massivt sett med molekylære strukturer, som eksemplifisert av DNA i-motivet. I denne protokollen genereres en skjærstrøm mellom rotoren og statoren i en homogenisatorspiss. Den foreliggende studien fant at den brettede DNA i-motivstrukturen kunne utfoldes med skjærhastigheter på 9724-97245 s−1. Dessuten ble det funnet en dissosiasjonskonstant på 36 μM mellom L2H2-4OTD-liganden og i-motivet. Denne verdien er i samsvar med verdien på 31 μM målt ved gelskiftanalysen12. Videre brukes den nåværende teknikken til å utfolde i-motivet, som kan eksponere chelatert kobber (I) for å katalysere en klikkreaksjon. Denne protokollen gjør det dermed mulig å utfolde et stort sett med i-motivstrukturer med rimelige instrumenter innen rimelig tid (kortere enn 30 min). Gitt at skjærkraftteknikken drastisk øker gjennomstrømningen av kraftspektroskopien, kaller vi denne teknikken ensemble force spectroscopy (EFS). Denne protokollen tar sikte på å gi eksperimentelle retningslinjer for å lette anvendelsen av denne skjærkraftbaserte EFS.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3K MWCO Amicon</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>ufc900324</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ascorbic acid</td>
			<td>VWR</td>
			<td>VWRC0143-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calfluor 488 azide</td>
			<td>Click Chemistry Tools</td>
			<td>1369-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CuCl</td>
			<td>Thermo&#160;</td>
			<td>ACRO270525000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispersion tip</td>
			<td>Switzerland</td>
			<td>PT-DA07/2EC-B101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA oligos</td>
			<td>IDT</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dye</td>
			<td>IDT</td>
			<td>/5Cy5/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>Janpan</td>
			<td>Nikon TE2000-U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homogenizer</td>
			<td>Switzerland</td>
			<td>PT 3100D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HPG</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>cs-295271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>VWR</td>
			<td>VWRC26760.295</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MES</td>
			<td>VWR</td>
			<td>VWRCE169-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quencher</td>
			<td>IDT</td>
			<td>/3IAbRQSp/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TBTA</td>
			<td>Tokyo Chemical Industry</td>
			<td>T2993</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris</td>
			<td>VWR</td>
			<td>VWRCE133-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ensemble force spectroscopy by shear forces

Enkeltmolekylteknikker basert på fluorescens og mekanokjemiske prinsipper gir overlegen følsomhet i biologisk sensing. På grunn av mangelen på høy gjennomstrømningskapasitet er anvendelsen av disse teknikkene imidlertid begrenset i biofysikk. Ensemblekraftspektroskopi (EFS) har vist høy gjennomstrømning i undersøkelsen av et massivt sett med molekylære strukturer ved å konvertere mekanokjemiske studier av individuelle molekyler til molekylære ensembler. I denne protokollen ble DNA-sekundære strukturer (i-motiver) brettet ut i skjærstrømmen mellom rotoren og statoren til en homogenisatorspiss ved skjærhastigheter opp til 77796/s. Effektene av strømningshastigheter og molekylstørrelser på skjærkreftene som oppleves av i-motivet ble demonstrert. EFS-teknikken avslørte også bindingsaffiniteten mellom DNA i-motiver og ligander. Videre har vi demonstrert en klikkkjemireaksjon som kan aktiveres av skjærkraft (dvs. mekano-klikkkjemi). Disse resultatene fastslår effektiviteten av å bruke skjærkraft for å kontrollere konformasjonen av molekylære strukturer.

Figur 1 skisserer den mekaniske utfoldelsen og sanntidsfølingen av ensemblemolekyler i EFS. I figur 1B ble fluorescensintensiteten til i-motiv-DNA observert å øke med skjærhastigheten fra 9,724 s−1 til 97,245 s−1 i en pH 5,5 MES-buffer. Som en kontroll ble fluorescensintensiteten ikke økt når det samme i-motiv-DNA ble skåret med en hastighet på 63 209 s−1 i en pH 7,4 MES-buffer. Dette skyldes at i-m...

Watch this Scientific Journal Video about Ensemble Force Spectroscopy by Shear Forces at JoVE.com

Ensemble Force Spectroscopy by Shear Forces

Ensemble force spectroscopy (EFS) er en robust teknikk for mekanisk utfoldelse og sanntidsregistrering av et ensemblesett av biomolekylære strukturer i biofysiske og biosenserende felt.

Ensemble Force spektroskopi av Shear Forces

Single-molecule techniques based on fluorescence and mechanochemical principles provide superior sensitivity in biological sensing. However, due to the ...

Denne protokollen gir en høy gjennomstrømningsteknikk for å studere den intermolekylære bindingen mellom DNA og ligander. Denne teknikken har vist høy gjennomstrømning i undersøkelsen av massive sett med biomolekylære strukturer. Det gjør det ved å konvertere de mekaniske kjemiske egenskapene til individuelle molekyler til molekylære ensembler.Jeg tror det er et veldig skritt fremover eksperiment, men det er få kritiske skritt. For eksempel justering av mikroskop, homogenisator og reaksjonsrøret. Disse tre tingene bør være perfekt justert for å nøyaktig spore endringen i fluorescens.Begynn med å montere homogenisatoren og mikroskopet på et monteringsbord. Etter å ha brukt vernebriller, slå på fluorescensmikroskopet og juster deretter homogenisatoren for å sikre at eksitasjonslysstrålen passerer gjennom midten av dispergeringsspissen til homogenisatoren. Lag deretter et flatt bunnet reaksjonskammer som er fem centimeter i høyden og 1,5 x 1,5 kvadratcentimeter i tverrsnitt, slik at det valgte kammermaterialet ikke fluorescerer for å redusere bakgrunnen.Etterpå klemmer du reaksjonskammeret på prøvetrinnet i fluorescensmikroskopet og justerer deretter kammeret for å holde dispergeringsspissen til homogenisatoren, slik at spissen er litt over den nederste overflaten av reaksjonskammeret. Deretter justerer du den vertikale posisjonen til homogenisatoren og kammeret sammen for å sikre at mikroskopets fokus er på overflaten av dispergeringsspissen. Juster deretter den horisontale posisjonen til dispergeringsspissen for å sikre at deteksjonsområdet er satt mellom rotoren og statene.Slå på fluorescerende kanaler, i henhold til fluorescerende fargestoff som ble brukt i forsøket. Før høyhastighetsskjæringseksperimentet brukte avionisert vann for å teste skjæringen med lav skjærehastighet. Først må du forberede et humant telomert i-motiv DNA merket med henholdsvis et fargestoff og en slukker i de to endene i avionisert vann som beskrevet i manuskriptet.Fortynn deretter DNA til fem mikromolar i 30 millimolar MES-buffer ved pH 5,5 eller pH 7,4. Til DNA-løsningen, tilsett ligand L2H24OTD"i et konsentrasjonsområde på null til 60 mikromolar og bland løsningen forsiktig i 10 minutter for å brette i-motivstrukturene uten lys. Kontroller og minimer bakgrunnsfluorescensintensiteten til reaksjonskammeret som er fylt med avionisert vann ved hjelp av fluorescerende mikroskop uten skjæring.Still deretter parametrene til CCD-kameraet ved hjelp av programvaren med eksponeringstid som 0.5 sekunder, CCD-følsomhet på 1.600 og opptakstid lik 20 minutter. Bruk en lang pipette, tilsett DNA-løsningen i det tomme og rene reaksjonskammeret og dekk reaksjonskammeret med en svart boks. Start deretter homogenisatoren for å utføre skjæring med en valgt skjærhastighet fra 9.724 per sekund til 97, 245 per sekund i 20 minutter, med CCD-kameraet slått på for å registrere dataene.Etter forsøket, fjern kammeret og vask det med avionisert vann. Forbered i-motiv DNA og avionisert vann. Deretter inkuberer du 10 mikromolar i-motiv DNA og 300 mikroliter 30 millimolar tris buffer supplert med 150 mikromolar cupric chloride og 300 mikromolar askorbinsyre i 10 minutter for å brette i-motivstrukturene.Deretter ultrafiltrerer løsningen med en ultrafiltreringsanordning ved en sentrifugalkraft på 14, 300 ganger G.Fyll løsningen til ca. 500 mikroliter med 30 millimolar tris buffere supplert med 300 mikromolar askorbinsyre etter hver filtrering. Etter å ha samlet restløsningen, gjør du et endelig volum på 300 mikroliter ved å tilsette 30 millimolar tris supplert med 300 mikromolar askorbinsyre sammen med 20 mikromolar CalFluor 488 Azide, 20 mikromolar HPG og 10 mikromolar TBTA. Når reagensene er tilsatt, flytt løsningen til det mørke rommet.Kontroller deretter og minimer bakgrunnsfluorescensintensiteten til reaksjonskammeret fylt med avionisert vann ved hjelp av mikroskopet før skjæreeksperimentene. Deretter legger du DNA-løsningen i det tomme reaksjonskammeret med en lang pipette, og start deretter homogenisatorskjæringen med en skjærhastighet på 63.209 per sekund i 20 minutter med CCD-kameraet slått på. Etter forsøket, fjern kammeret og vask det med avionisert vann.Fluorescensintensiteten til i-motiv-DNA ble observert å øke med den rene hastigheten fra 9.724 per sekund til 97.245 per sekund i en pH 5.5 MES-buffer. Fluorescensintensiteten ble imidlertid ikke økt når det samme i-motiv-DNA ble kuttet med en hastighet på 63.209 per sekund, da det ikke brettes ved pH 7,4 i MES-buffer. Ligandbindingen til DNA i-motivmolekylene utsatt for ren strømning ble evaluert som viste at økningen av fluorescensintensiteten ble mindre tydelig med økende ligandkonsentrasjon.Dissosiasjonskonstanten ble bestemt for samspillet mellom liganden og i-motivet og ble funnet å være 34 mikromol. Det kobberchelaterte i-motivet ble brettet ut med skjærhastigheten 63.209 per sekund, og det frigjorte kobberet utløste den fluorgene klikkreaksjonen, noe som resulterte i økt fluorescensintensitet over tid. Først må du sørge for at deteksjonsområdet er satt mellom rotoren og statene.For det andre, sjekk og minimer fluorescensbakgrunnen. Og til slutt, sørg for at du filtrerer reaksjonen før du utfører klikkreaksjon. Denne metoden åpner en inngangsport for å utforske mekanisk styrke, folding og utfolding av alle slags polymerer.Det kan være andre DNA-strukturer, proteiner eller andre polymerer, og deres interaksjon med andre typer molekyler. Som sagt kan flere andre makromolekyler studeres ved hjelp av denne tilnærmingen.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Thermodynamics of Membrane Protein Folding Measured by Fluorescence Spectroscopy

Membrane protein folding is an emerging topic with both fundamental and health-related significance.  The abundance of membrane proteins in cells ...

Bacterial Immobilization for Imaging by Atomic Force Microscopy

AFM is a high-resolution (nm scale) imaging tool that mechanically probes a surface.  It has the ability to image cells and biomolecules, in a liquid ...

Biosensor for Detection of Antibiotic Resistant Staphylococcus Bacteria

Biosensor for påvisning av antibiotikaresistens resistente Staphylococcus bakterier

A structurally transformed lytic bacteriophage having a broad host range of Staphylococcus aureus strains and a penicillin-binding protein (PBP 2a) ...

Investigating Receptor-ligand Systems of the Cellulosome with AFM-based Single-molecule Force Spectroscopy

Gransker Receptor-ligandsysternene med Cellulosome med AFM-baserte Single-molekyl kraft spektroskopi

Cellulosomes are discrete multienzyme complexes used by a subset of anaerobic bacteria and fungi to digest lignocellulosic substrates. Assembly of the ...

Manufacture of Concentrated, Lipid-based Oxygen Microbubble Emulsions by High Shear Homogenization and Serial Concentration

Produksjon av Konsentrert, Lipid-baserte Oxygen mikrobobleutskillere Emulsjoner av High Shear Homogenisering og Serial Konsentrasjon

Gas-filled microbubbles have been developed as ultrasound contrast and drug delivery agents. Microbubbles can be produced by processing surfactants using ...

Measurement of Maximum Isometric Force Generated by Permeabilized Skeletal Muscle Fibers

Måling av maksimal isometrisk Force generert av permeabilized skjelettmuskulatur Fibers

Analysis of the contractile properties of chemically skinned, or permeabilized, skeletal muscle fibers offers a powerful means by which to assess muscle ...

Atomic Force Microscopy Imaging and Force Spectroscopy of Supported Lipid Bilayers

Atomic Force Microscopy Imaging and Force spektroskopi av Supported lipidbilag

Atomic force microscopy (AFM) is a versatile, high-resolution imaging technique that allows visualization of biological membranes. It has sufficient ...

A Protocol for Using F&#246;rster Resonance Energy Transfer (FRET)-force Biosensors to Measure Mechanical Forces across the Nuclear LINC Complex

A Protocol for Using FÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¶rster Resonance Energy Transfer FRET-force Biosensors to Measure Mechanical Forces across the Nuclear LINC Complex

En protokoll for å bruke Förster Resonance Energy Transfer (FRET) -force Biosensorer måle mekaniske krefter over hele Nuclear LINC Complex

The LINC complex has been hypothesized to be the critical structure that mediates the transfer of mechanical forces from the cytoskeleton to the nucleus. ...

Detection of Endotoxin in Nano-formulations Using Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) Assays

Detection of Endotoxin in Nano-formulations Using Limulus Amoebocyte Lysate LAL Assays

Deteksjon av Endotoxin i Nano-formuleringer bruker Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) analyser

When present in pharmaceutical products, a Gram-negative bacterial cell wall component endotoxin (often also called lipopolysaccharide) can cause ...

3D Printing of In Vitro Hydrogel Microcarriers by Alternating Viscous-Inertial Force Jetting

3D Printing of In Vitro Hydrogel Microcarriers by Alternating Viscous-Inertial Force Jetting

3D-utskrift av In Vitro Hydrogel Microcarriers ved vekslende Viscous-Inertial Force Jetting

Microcarriers are beads with a diameter of 60-250 &#181;m and a large specific surface area, which are commonly used as carriers for large-scale cell ...