Name: ensemble force spectroscopy by shear forces
Uploaded: 2022-07-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ensemble Force Spectroscopy by Shear Forces at JoVE.com

Detta forskningsarbete stöddes av National Science Foundation [CBET-1904921] och National Institutes of Health [NIH R01CA236350] till H. M.

OBS: Alla buffertar och kemiska reagenser som används i detta protokoll är listade i tabellen Material.
1. Beredning av skjuvkraftmikroskopet
OBS: Skjuvkraftmikroskopet innehåller två delar, en reaktionsenhet (homogenisator) och en detektionsenhet (fluorescensmikroskop). Okularets förstoring är 10x och förstoringen av objektivlinsen (luft) är 4x.
<ol><li>Montera homogenisatorn och mikroskopet på ett monteringsbord. Använ...

<ol>
	<li>Neuman, K. C., Nagy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-molecule+force+spectroscopy:+Optical+tweezers,+magnetic+tweezers+and+atomic+force+microscopy.">Single-molecule force spectroscopy: Optical tweezers, magnetic tweezers and atomic force microscopy.</a> Nature Methods. 5 (6), 491-505 (2008).</li><li>Woodside, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomechanical+measurements+of+the+sequence-dependent+folding+landscapes+of+single+nucleic+acid+hairpins.">Nanomechanical measurements of the sequence-dependent folding landscapes of single nucleic acid hairpins.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (16), 6190-6195 (2006).</li><li>Grandbois, M., Beyer, M., Rief, M., Clausen-Schaumann, H., Gaub, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+strong+is+a+covalent+bond.">How strong is a covalent bond.</a> Science. 283 (5408), 1727-1730 (1999).</li><li>Strick, T. R., Allemand, J. F., Bensimon, D., Croquette, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavior+of+supercoiled+DNA.">Behavior of supercoiled DNA.</a> Biophysical Journal. 74 (4), 2016-2028 (1998).</li><li>Yang, D., Ward, A., Halvorsen, K., Wong, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplexed+single-molecule+force+spectroscopy+using+a+centrifuge.">Multiplexed single-molecule force spectroscopy using a centrifuge.</a> Nature Communications. 7, 11026 (2016).</li><li>Su, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-responsive+polymer+particles+as+force+clamps+for+the+mechanical+unfolding+of+target+molecules.">Light-responsive polymer particles as force clamps for the mechanical unfolding of target molecules.</a> Nano Letters. 18 (4), 2630-2636 (2018).</li><li>Kirkness, M. W. H., Forde, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-molecule+assay+for+proteolytic+susceptibility:+Force-induced+collagen+destabilization.">Single-molecule assay for proteolytic susceptibility: Force-induced collagen destabilization.</a> Biophysical Journal. 114 (3), 570-576 (2018).</li><li>Astumian, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermodynamics+and+kinetics+of+molecular+motors.">Thermodynamics and kinetics of molecular motors.</a> Biophysical Journal. 98 (11), 2401-2409 (2010).</li><li>Bekard, I. B., Asimakis, P., Bertolini, J., Dunstan, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+shear+flow+on+protein+structure+and+function.">The effects of shear flow on protein structure and function.</a> Biopolymers. 95 (11), 733-745 (2011).</li><li>Chistiakov, D. A., Orekhov, A. N., Bobryshev, Y. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+shear+stress+on+endothelial+cells:+go+with+the+flow.">Effects of shear stress on endothelial cells: go with the flow.</a> Acta Physiologica. 219 (2), 382-408 (2017).</li><li>Hu, C., Jonchhe, S., Pokhrel, P., Karna, D., Mao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+unfolding+of+ensemble+biomolecular+structures+by+shear+force.">Mechanical unfolding of ensemble biomolecular structures by shear force.</a> Chemical Science. 12 (30), 10159-10164 (2021).</li><li>Sedghi Masoud, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+interactions+between+telomeric+i-motif+DNA+and+a+cyclic+tetraoxazole+compound.">Analysis of interactions between telomeric i-motif DNA and a cyclic tetraoxazole compound.</a> ChemBioChem. 19 (21), 2268-2272 (2018).</li><li>Abraham Punnoose, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptive+and+specific+recognition+of+telomeric+G-quadruplexes+via+polyvalency+induced+unstacking+of+binding+units.">Adaptive and specific recognition of telomeric G-quadruplexes via polyvalency induced unstacking of binding units.</a> Journal of the American Chemical Society. 139 (22), 7476-7484 (2017).</li><li>Dhakal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coexistence+of+an+ILPR+i-motif+and+a+partially+folded+structure+with+comparable+mechanical+stability+revealed+at+the+single-molecule+level.">Coexistence of an ILPR i-motif and a partially folded structure with comparable mechanical stability revealed at the single-molecule level.</a> Journal of the American Chemical Society. 132 (26), 8991-8997 (2010).</li><li>Hu, C., Tahir, R., Mao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-molecule+mechanochemical+sensing.">Single-molecule mechanochemical sensing.</a> Accounts of Chemical Research. 55 (9), 1214-1225 (2022).</li></ol>

Protokollet som beskrivs i detta manuskript möjliggör realtidsundersökning av utvecklingen av en ensembleuppsättning biomolekylära strukturer genom skjuvkraft. Resultaten som presenteras här understryker att DNA-i-motivstrukturer kan utvecklas med skjuvkraft. Utvecklingen av det ligandbundna i-motivet och skjuvkraftsaktiverade klickreaktionerna var proof-of-concept-applikationer för denna ensemblekraftspektroskopimetod.
Figur 1 visar instrumentets inställn...

I enmolekylär kraftspektroskopi1 (SMFS) har de mekaniska egenskaperna hos enskilda molekylära strukturer studerats med sofistikerade instrument såsom atomkraftmikroskopet, optisk pincett och magnetisk pincett 2,3,4. Begränsad av samma riktningskrav för molekylerna i de kraftgenererande/detekterande inställningarna eller det lilla synfältet i magnetisk pincett och miniatyrcentrifugkraftmikroskopet (MCF)5,6,7,8, kan endast ett begränsat antal molekyler undersökas samtidigt med hjälp av SMFS. Den låga genomströmningen av SMFS förhindrar dess breda tillämpning inom molekylärigenkänningsfältet, vilket kräver involvering av en stor uppsättning molekyler.
Skjuvflöde ger en potentiell lösning för att applicera krafter på en massiv uppsättning molekyler9. I ett vätskeflöde inuti en kanal, ju närmare kanalytan, desto långsammare är flödeshastigheten10. En sådan flödeshastighetsgradient orsakar skjuvspänning som är parallell med gränsytan. När en molekyl placeras i detta skjuvflöde omorienterar molekylen sig själv så att dess långa axel ligger i linje med flödesriktningen, eftersom skjuvkraften appliceras på den långa axeln11. Som ett resultat av denna omorientering förväntas alla molekyler av samma typ (storlek och längd på handtag) att rikta sig i samma riktning medan de upplever samma skjuvkraft.
Detta arbete beskriver ett protokoll för att använda ett sådant skjuvflöde för att utöva skjuvkraft på en massiv uppsättning molekylära strukturer, vilket exemplifieras av DNA-i-motivet. I detta protokoll genereras ett skjuvflöde mellan rotorn och statorn i en homogenisatorspets. Den aktuella studien fann att den vikta DNA-i-motivstrukturen kunde utvecklas med skjuvhastigheter på 9724-97245 s−1. Dessutom hittades en dissociationskonstant på 36 μM mellan L2H2-4OTD-liganden och i-motivet. Detta värde överensstämmer med värdet på 31 μM mätt med gelskiftanalysen12. Vidare används den nuvarande tekniken för att veckla ut i-motivet, vilket kan exponera den kelaterade kopparen (I) för att katalysera en klickreaktion. Detta protokoll gör det alltså möjligt för en att utveckla en stor uppsättning i-motivstrukturer med billiga instrument på rimlig tid (kortare än 30 min). Med tanke på att skjuvkraftstekniken drastiskt ökar genomströmningen av kraftspektroskopin kallar vi denna teknik ensemblekraftspektroskopi (EFS). Detta protokoll syftar till att tillhandahålla experimentella riktlinjer för att underlätta tillämpningen av denna skjuvkraftbaserade EFS.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3K MWCO Amicon</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>ufc900324</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ascorbic acid</td>
			<td>VWR</td>
			<td>VWRC0143-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calfluor 488 azide</td>
			<td>Click Chemistry Tools</td>
			<td>1369-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CuCl</td>
			<td>Thermo&#160;</td>
			<td>ACRO270525000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispersion tip</td>
			<td>Switzerland</td>
			<td>PT-DA07/2EC-B101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA oligos</td>
			<td>IDT</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dye</td>
			<td>IDT</td>
			<td>/5Cy5/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>Janpan</td>
			<td>Nikon TE2000-U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homogenizer</td>
			<td>Switzerland</td>
			<td>PT 3100D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HPG</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>cs-295271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>VWR</td>
			<td>VWRC26760.295</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MES</td>
			<td>VWR</td>
			<td>VWRCE169-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quencher</td>
			<td>IDT</td>
			<td>/3IAbRQSp/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TBTA</td>
			<td>Tokyo Chemical Industry</td>
			<td>T2993</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris</td>
			<td>VWR</td>
			<td>VWRCE133-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ensemble force spectroscopy by shear forces

Enmolekylära tekniker baserade på fluorescens och mekanokemiska principer ger överlägsen känslighet vid biologisk avkänning. På grund av bristen på hög genomströmningskapacitet är dock tillämpningen av dessa tekniker begränsad inom biofysik. Ensemblekraftspektroskopi (EFS) har visat hög genomströmning i undersökningen av en massiv uppsättning molekylära strukturer genom att omvandla mekanokemiska studier av enskilda molekyler till molekylära ensembler. I detta protokoll utvecklades DNA-sekundära strukturer (i-motiv) i skjuvflödet mellan rotorn och statorn på en homogenisatorspets vid skjuvhastigheter upp till 77796/s. Effekterna av flödeshastigheter och molekylstorlekar på skjuvkrafterna som i-motivet upplevde demonstrerades. EFS-tekniken avslöjade också bindningsaffiniteten mellan DNA-i-motiv och ligander. Dessutom har vi demonstrerat en klickkemisk reaktion som kan aktiveras av skjuvkraft (dvs mekano-klickkemi). Dessa resultat fastställer effektiviteten av att använda skjuvkraft för att kontrollera konformationen av molekylära strukturer.

Figur 1 beskriver den mekaniska utfällningen och realtidsavkänningen av ensemblemolekyler i EFS. I figur 1B observerades fluorescensintensiteten hos i-motiv-DNA öka med skjuvhastigheten från 9 724 s−1 till 97 245 s−1 i en pH 5,5 MES-buffert. Som kontroll ökades inte fluorescensintensiteten när samma i-motiv-DNA skjuvades med en hastighet av 63 209 s−1 i en pH 7,4 MES-buffert. Detta beror på att i-mot...

Watch this Scientific Journal Video about Ensemble Force Spectroscopy by Shear Forces at JoVE.com

Ensemble Force Spectroscopy by Shear Forces

Ensemblekraftspektroskopi (EFS) är en robust teknik för mekanisk utveckling och realtidsavkänning av en ensembleuppsättning biomolekylära strukturer i biofysiska och biosensingfält.

Ensemble Force Spektroskopi av Shear Forces

Single-molecule techniques based on fluorescence and mechanochemical principles provide superior sensitivity in biological sensing. However, due to the ...

Detta protokoll ger en hög genomströmningsteknik för att studera den intermolekylära bindningen mellan DNA och ligander. Denna teknik har visat hög genomströmning i undersökningen av massiva uppsättningar biomolekylära strukturer. Det gör det genom att omvandla de mekaniska kemiska egenskaperna hos enskilda molekyler till molekylära ensembler.Jag tycker att det är ett väldigt steg framåt experiment men det finns få kritiska steg. Till exempel inriktningen av mikroskop, homogenisator och reaktionsröret. Dessa tre saker bör vara perfekt anpassade för att exakt spåra förändringen i fluorescens.Börja med att montera homogenisatorn och mikroskopet på ett monteringsbord. Efter att ha använt skyddsglasögon, slå på fluorescensmikroskopet och justera sedan homogenisatorn för att se till att excitationsljusstrålen passerar genom mitten av homogenisatorns dispergeringsspets. Förbered sedan en plattbottnad reaktionskammare som är fem centimeter hög och 1,5 x 1,5 kvadratcentimeter i tvärsnitt, så att det valda kammarmaterialet inte fluorescerar för att minska bakgrunden.Kläm sedan fast reaktionskammaren på provsteget i fluorescensmikroskopet och justera sedan kammaren så att den håller homogenisatorns dispergeringsspets, så att spetsen ligger något ovanför reaktionskammarens bottenyta. Justera sedan homogenisatorns och kammarens vertikala läge tillsammans för att säkerställa att mikroskopets fokus ligger på ytan av dispersionsspetsen. Justera sedan spridningsspetsens horisontella läge för att säkerställa att detekteringsområdet är inställt mellan rotorn och delstaten.Slå på de fluorescerande kanalerna, enligt det fluorescerande färgämnet som används i experimentet. Före höghastighetsskjuvningsexperimentet användes avjoniserat vatten för att testa skjuvningen med låg skjuvningshastighet. Förbered först ett humant telomeriskt i-motiv-DNA märkt med ett färgämne och en släckare i dess två ändar i avjoniserat vatten som beskrivs i manuskriptet.Späd sedan DNA till fem mikromolar i 30 millimolar MES-buffert vid pH 5,5 eller pH 7,4. Till DNA-lösningen, tillsätt ligand L2H24OTD"i ett koncentrationsområde från noll till 60 mikromolar och blanda lösningen försiktigt i 10 minuter för att vika i-motivstrukturerna utan ljus. Kontrollera och minimera bakgrundsfluorescensintensiteten hos reaktionskammaren som är fylld med avjoniserat vatten med hjälp av det fluorescerande mikroskopet utan skjuvning.Ställ sedan in parametrarna för CCD-kameran med hjälp av programvaran med exponeringstid som 0,5 sekunder, CCD-känslighet på 1 600 och inspelningstid lika med 20 minuter. Använd en lång pipett, tillsätt DNA-lösningen i den tomma och rena reaktionskammaren och täck reaktionskammaren med en svart låda. Starta sedan homogenisatorn för att utföra skjuvning med en vald skjuvningshastighet som sträcker sig från 9 724 per sekund till 97 245 per sekund i 20 minuter, med CCD-kameran påslagen för att spela in data.Efter experimentet, ta bort kammaren och tvätta den med avjoniserat vatten. Förbered i-motiv-DNA och avjoniserat vatten. Inkubera sedan 10 mikromolärt i-motiv-DNA och 300 mikroliter 30 millimolar tris-buffert kompletterat med 150 mikromolar kopparklorid och 300 mikromolar askorbinsyra i 10 minuter för att vika i-motivstrukturerna.Därefter ultrafiltrerar lösningen med en ultrafiltreringsanordning vid en centrifugalkraft på 14 300 gånger G.Fyll på lösningen till cirka 500 mikroliter med 30 millimolära trisbuffertar kompletterade med 300 mikromolar askorbinsyra efter varje filtrering. Efter uppsamling av restlösningen, gör en slutlig volym på 300 mikroliter genom att tillsätta 30 millimolar tris kompletterad med 300 mikromolar askorbinsyra tillsammans med 20 mikromolar CalFluor 488 azid, 20 mikromolar HPG och 10 mikromolar TBTA. När reagenserna har tillsatts, flytta lösningen till det mörka rummet.Kontrollera och minimera sedan bakgrundsfluorescensintensiteten hos reaktionskammaren fylld med avjoniserat vatten med hjälp av mikroskopet före skjuvningsexperimenten. Tillsätt sedan DNA-lösningen i den tomma reaktionskammaren med en lång pipett och starta sedan homogenisatorns skjuvning med en skjuvhastighet på 63 209 per sekund i 20 minuter med CCD-kameran påslagen. Efter experimentet, ta bort kammaren och tvätta den med avjoniserat vatten.Fluorescensintensiteten hos i-motiv-DNA observerades öka med den rena hastigheten från 9 724 per sekund till 97 245 per sekund i en pH 5,5 MES-buffert. Fluorescensintensiteten ökade emellertid inte när samma i-motiv-DNA skjuvades med en hastighet av 63 209 per sekund, eftersom det inte viks vid pH 7,4 i MES-buffert. Ligandbindningen till DNA-i-motivmolekylerna som utsattes för det rena flödet utvärderades vilket visade att ökningen av fluorescensintensiteten blev mindre uppenbar med ökande ligandkoncentration.Dissociationskonstanten bestämdes för interaktionen mellan liganden och i-motivet och befanns vara 34 mikromol. Det kopparkelaterade i-motivet vecklades ut med skjuvhastigheten 63, 209 per sekund, och den frigjorda kopparn utlöste den fluorgena klickreaktionen, vilket resulterade i ökad fluorescensintensitet över tiden. För det första, se till att detekteringsområdet är inställt mellan rotorn och staten.För det andra, kontrollera och minimera fluorescensbakgrunden. Och slutligen, se till att du filtrerar reaktionen innan du utför klickreaktion. Denna metod öppnar en port för att utforska mekanisk hållfasthet, vikning och utfällning av alla typer av polymerer.Det kan vara andra DNA-strukturer, proteiner eller andra polymerer och deras interaktion med andra typer av molekyler. Som sagt kan flera andra makromolekyler studeras med hjälp av detta tillvägagångssätt.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Thermodynamics of Membrane Protein Folding Measured by Fluorescence Spectroscopy

Termodynamik för membranprotein Folding Mätt fluorescensspektroskopi

Membrane protein folding is an emerging topic with both fundamental and health-related significance.  The abundance of membrane proteins in cells ...

Bacterial Immobilization for Imaging by Atomic Force Microscopy

Bakteriell Immobilisering for Imaging genom atomkraftsmikroskopi

AFM is a high-resolution (nm scale) imaging tool that mechanically probes a surface.  It has the ability to image cells and biomolecules, in a liquid ...

Biosensor for Detection of Antibiotic Resistant Staphylococcus Bacteria

Biosensor för detektion av antibiotikaresistenta stafylokocker

A structurally transformed lytic bacteriophage having a broad host range of Staphylococcus aureus strains and a penicillin-binding protein (PBP 2a) ...

Investigating Receptor-ligand Systems of the Cellulosome with AFM-based Single-molecule Force Spectroscopy

Undersöka Receptor-ligand System av Cellulosome med AFM-baserad Single-molekyl Force spektroskopi

Cellulosomes are discrete multienzyme complexes used by a subset of anaerobic bacteria and fungi to digest lignocellulosic substrates. Assembly of the ...

Manufacture of Concentrated, Lipid-based Oxygen Microbubble Emulsions by High Shear Homogenization and Serial Concentration

Tillverkning av Koncentrerad, Lipid-baserade Oxygen mikrobubblor Emulsioner av hög Shear Homogenisering och Serial Koncentration

Gas-filled microbubbles have been developed as ultrasound contrast and drug delivery agents. Microbubbles can be produced by processing surfactants using ...

Measurement of Maximum Isometric Force Generated by Permeabilized Skeletal Muscle Fibers

Mätning av Högsta Isometrisk kraft som genereras av permeabiliserade Skelett muskelfibrer

Analysis of the contractile properties of chemically skinned, or permeabilized, skeletal muscle fibers offers a powerful means by which to assess muscle ...

Atomic Force Microscopy Imaging and Force Spectroscopy of Supported Lipid Bilayers

Atomic Force Microscopy Imaging och Force-spektra enligt stöds lipiddubbelskikt

Atomic force microscopy (AFM) is a versatile, high-resolution imaging technique that allows visualization of biological membranes. It has sufficient ...

A Protocol for Using F&#246;rster Resonance Energy Transfer (FRET)-force Biosensors to Measure Mechanical Forces across the Nuclear LINC Complex

A Protocol for Using FÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¶rster Resonance Energy Transfer FRET-force Biosensors to Measure Mechanical Forces across the Nuclear LINC Complex

Ett protokoll för användning av Förster resonansenergiöverföring (FRET) -force Biosensorer för att mäta mekaniska krafter över Nuclear LINC Complex

The LINC complex has been hypothesized to be the critical structure that mediates the transfer of mechanical forces from the cytoskeleton to the nucleus. ...

Detection of Endotoxin in Nano-formulations Using Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) Assays

Detection of Endotoxin in Nano-formulations Using Limulus Amoebocyte Lysate LAL Assays

Påvisande av Endotoxin i Nano-formuleringar använder Limulus immobiliserat Lysate (LAL) analyser

When present in pharmaceutical products, a Gram-negative bacterial cell wall component endotoxin (often also called lipopolysaccharide) can cause ...

3D Printing of In Vitro Hydrogel Microcarriers by Alternating Viscous-Inertial Force Jetting

3D Printing of In Vitro Hydrogel Microcarriers by Alternating Viscous-Inertial Force Jetting

3D-utskrift av In Vitro Hydrogel Microcarriers genom alternerande viskös-tröghetskraft jetting

Microcarriers are beads with a diameter of 60-250 &#181;m and a large specific surface area, which are commonly used as carriers for large-scale cell ...