Name: maintaining human glioblastoma cellular diversity ex vivo using three-dimensional organoid culture
Uploaded: 2022-08-25T13:10:00
Duration: 7 min 11 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Maintaining Human Glioblastoma Cellular Diversity Ex vivo using Three-Dimensional Organoid Culture at JoVE.com

Vi vil gerne takke Dr. Justin Lathia for hans uvurderlige råd og løbende støtte. Vi takker også Katrina Fife, Lisa Wallace og Maya Camhi for deres fremragende tekniske support.

<ol>
	<li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiotherapy+plus+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+for+glioblastoma.">Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma.</a> New England Journal of Medicine. 352 (10), 987-996 (2005).</li><li>Heffernan, J. M., Sirianni, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+microenvironmental+regulation+of+glioblastoma+stem+cells:+a+biomaterials+perspective.">Modeling microenvironmental regulation of glioblastoma stem cells: a biomaterials perspective.</a> Frontiers in Materials. 5, 7 (2018).</li><li>Zanders, E. D., Svensson, F., Bailey, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapy+for+glioblastoma:+is+it+working.">Therapy for glioblastoma: is it working.</a> Drug Discovery Today. 24 (5), 1193-1201 (2019).</li><li>Hubert, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Three-dimensional+organoid+culture+system+derived+from+human+glioblastomas+recapitulates+the+hypoxic+gradients+and+cancer+stem+cell+heterogeneity+of+tumors+found+in+vivo.">A Three-dimensional organoid culture system derived from human glioblastomas recapitulates the hypoxic gradients and cancer stem cell heterogeneity of tumors found in vivo.</a> Cancer Research. 76 (8), 2465-2477 (2016).</li><li>Lathia, J. D., Heddleston, J. M., Venere, M., Rich, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deadly+teamwork:+neural+cancer+stem+cells+and+the+tumor+microenvironment.">Deadly teamwork: neural cancer stem cells and the tumor microenvironment.</a> Cell Stem Cell. 8 (5), 482-485 (2011).</li><li>Meyer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cell-derived+clonal+analysis+of+human+glioblastoma+links+functional+and+genomic+heterogeneity.">Single cell-derived clonal analysis of human glioblastoma links functional and genomic heterogeneity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (3), 851-856 (2015).</li><li>Bao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell-like+glioma+cells+promote+tumor+angiogenesis+through+vascular+endothelial+growth+factor.">Stem cell-like glioma cells promote tumor angiogenesis through vascular endothelial growth factor.</a> Cancer Research. 66 (16), 7843-7848 (2006).</li><li>Yu, S. C., Bian, X. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enrichment+of+cancer+stem+cells+based+on+heterogeneity+of+invasiveness.">Enrichment of cancer stem cells based on heterogeneity of invasiveness.</a> Stem Cell Reviews and Reports. 5 (1), 66-71 (2009).</li><li>Bao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glioma+stem+cells+promote+radioresistance+by+preferential+activation+of+the+DNA+damage+response.">Glioma stem cells promote radioresistance by preferential activation of the DNA damage response.</a> Nature. 444 (7120), 756-760 (2006).</li><li>Vescovi, A. L., Galli, R., Reynolds, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+tumour+stem+cells.">Brain tumour stem cells.</a> Nature Reviews. Cancer. 6 (6), 425-436 (2006).</li><li>Zhu, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cells+create+a+stem+cell+niche+in+glioblastoma+by+providing+NOTCH+ligands+that+nurture+self-renewal+of+cancer+stem-like+cells.">Endothelial cells create a stem cell niche in glioblastoma by providing NOTCH ligands that nurture self-renewal of cancer stem-like cells.</a> Cancer Research. 71 (18), 6061-6072 (2011).</li><li>Calabrese, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+perivascular+niche+for+brain+tumor+stem+cells.">A perivascular niche for brain tumor stem cells.</a> Cancer Cell. 11 (1), 69-82 (2007).</li><li>Charles, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+nitric+oxide+activates+notch+signaling+and+promotes+stem-like+character+in+PDGF-induced+glioma+cells.">Perivascular nitric oxide activates notch signaling and promotes stem-like character in PDGF-induced glioma cells.</a> Cell Stem Cell. 6 (2), 141-152 (2010).</li><li>Seidel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+hypoxic+niche+regulates+glioblastoma+stem+cells+through+hypoxia+inducible+factor+2+alpha.">A hypoxic niche regulates glioblastoma stem cells through hypoxia inducible factor 2 alpha.</a> Brain. 133, 983-995 (2010).</li><li>Yan, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glioma+cancer+stem+cells+secrete+Gremlin1+to+promote+their+maintenance+within+the+tumor+hierarchy.">Glioma cancer stem cells secrete Gremlin1 to promote their maintenance within the tumor hierarchy.</a> Genes &amp; Development. 28 (10), 1085-1100 (2014).</li><li>Cheng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glioblastoma+stem+cells+generate+vascular+pericytes+to+support+vessel+function+and+tumor+growth.">Glioblastoma stem cells generate vascular pericytes to support vessel function and tumor growth.</a> Cell. 153 (1), 139-152 (2013).</li><li>Flavahan, W. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+tumor+initiating+cells+adapt+to+restricted+nutrition+through+preferential+glucose+uptake.">Brain tumor initiating cells adapt to restricted nutrition through preferential glucose uptake.</a> Nature Neuroscience. 16 (10), 1373-1382 (2013).</li><li>Hjelmeland, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acidic+stress+promotes+a+glioma+stem+cell+phenotype.">Acidic stress promotes a glioma stem cell phenotype.</a> Cell Death and Differentiation. 18 (5), 829-840 (2011).</li><li>Bar, E. E., Lin, A., Mahairaki, V., Matsui, W., Eberhart, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+increases+the+expression+of+stem-cell+markers+and+promotes+clonogenicity+in+glioblastoma+neurospheres.">Hypoxia increases the expression of stem-cell markers and promotes clonogenicity in glioblastoma neurospheres.</a> The American Journal of Pathology. 177 (3), 1491-1502 (2010).</li><li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia-inducible+factors+regulate+tumorigenic+capacity+of+glioma+stem+cells.">Hypoxia-inducible factors regulate tumorigenic capacity of glioma stem cells.</a> Cancer Cell. 15 (6), 501-513 (2009).</li><li>Azzarelli, R., Ori, M., Philpott, A., Simons, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+model+of+glioblastoma+by+co-culturing+tumor+stem+cells+with+human+brain+organoids.">Three-dimensional model of glioblastoma by co-culturing tumor stem cells with human brain organoids.</a> Biology Open. 10 (2), 056416 (2021).</li><li>Linkous, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+patient-derived+glioblastoma+with+cerebral+organoids.">Modeling patient-derived glioblastoma with cerebral organoids.</a> Cell Reports. 26 (12), 3203-3211 (2019).</li><li>da Silva, B., Mathew, R. K., Polson, E. S., Williams, J., Wurdak, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+glioblastoma+spheroid+infiltration+of+early-stage+cerebral+organoids+models+brain+tumor+invasion.">Spontaneous glioblastoma spheroid infiltration of early-stage cerebral organoids models brain tumor invasion.</a> SLAS Discovery: Advancing Life Sciences R &amp; D. 23 (8), 862-868 (2018).</li><li>Jacob, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Patient-derived+glioblastoma+organoid+model+and+biobank+recapitulates+inter-+and+intra-tumoral+heterogeneity.">A Patient-derived glioblastoma organoid model and biobank recapitulates inter- and intra-tumoral heterogeneity.</a> Cell. 180 (1), 188-204 (2020).</li><li>Boretto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+organoids+from+endometrial+disease+capture+clinical+heterogeneity+and+are+amenable+to+drug+screening.">Patient-derived organoids from endometrial disease capture clinical heterogeneity and are amenable to drug screening.</a> Nature Cell Biology. 21 (8), 1041-1051 (2019).</li><li>Huang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ductal+pancreatic+cancer+modeling+and+drug+screening+using+human+pluripotent+stem+cell-and+patient-derived+tumor+organoids.">Ductal pancreatic cancer modeling and drug screening using human pluripotent stem cell-and patient-derived tumor organoids.</a> Nature Medicine. 21 (11), 1364-1371 (2015).</li><li>Ledur, P. F., Onzi, G. R., Zong, H., Lenz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+conditions+defining+glioblastoma+cells+behavior:+what+is+the+impact+for+novel+discoveries.">Culture conditions defining glioblastoma cells behavior: what is the impact for novel discoveries.</a> Oncotarget. 8 (40), 69185-69197 (2017).</li><li>Lenin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+drug+screening+pipeline+using+2D+and+3D+patient-derived+in+vitro+models+for+preclinical+analysis+of+therapy+response+in+glioblastoma.">A drug screening pipeline using 2D and 3D patient-derived in vitro models for preclinical analysis of therapy response in glioblastoma.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (9), 4322 (2021).</li><li>Rybin, M. J., Ivan, M. E., Ayad, N. G., Zeier, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+models+of+glioblastoma+and+their+role+in+drug+discovery.">Organoid models of glioblastoma and their role in drug discovery.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 15 (4), 605255 (2021).</li><li>Shakya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+lipid+metabolism+marks+glioblastoma+stem+and+non-stem+cells+in+separate+tumor+niches.">Altered lipid metabolism marks glioblastoma stem and non-stem cells in separate tumor niches.</a> Acta Neuropathologica Communications. 9 (1), 101 (2021).</li><li>Lee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+stem+cells+derived+from+glioblastomas+cultured+in+bFGF+and+EGF+more+closely+mirror+the+phenotype+and+genotype+of+primary+tumors+than+do+serum-cultured+cell+lines.">Tumor stem cells derived from glioblastomas cultured in bFGF and EGF more closely mirror the phenotype and genotype of primary tumors than do serum-cultured cell lines.</a> Cancer Cell. 9 (5), 391-403 (2006).</li><li>Bian, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+cerebral+organoids+model+brain+tumor+formation.">Genetically engineered cerebral organoids model brain tumor formation.</a> Nature Methods. 15 (8), 631-639 (2018).</li><li>Lancaster, M. A., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+cerebral+organoids+from+human+pluripotent+stem+cells.">Generation of cerebral organoids from human pluripotent stem cells.</a> Nature Protocols. 9 (10), 2329-2340 (2014).</li><li>Sundar, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+organoid+culture+unveils+resistance+to+clinical+therapies+in+adult+and+pediatric+glioblastoma.">Three-dimensional organoid culture unveils resistance to clinical therapies in adult and pediatric glioblastoma.</a> Translational Oncology. 15 (1), 101251 (2021).</li></ol>

Forfatterne har ingen konflikter at afsløre.

GBM-organoider er en komplementær kulturmetode til traditionelle sfærer, der inkluderer større cellulær og mikromiljømæssig heterogenitet 4,22,30. Selvom det er mere tids- og ressourcekrævende, kan organoidkultur give værdifuld indsigt i intratumoral adfærd og mekanismer for lægemiddelresistens.
GBM er drevet af en population på CSC'er 5,31, og disse metoder blev udviklet for at muliggøre fortsat vækst og selvfornyelse af denne CSC-population. Epidermal vækstfaktor (EGF) og fibroblastvækstfaktor (FGF) er kendt for at forbedre stamcellevedligeholdelse og vækst og give aktiv receptortyrosinkinase (RTK) signalering. Dannelsen af heterogene cellulære populationer og forskellige tumormikromiljøer inden for GBM-tumorer er afhængig af at understøtte CSC-adfærd. Udvælgelsen af en lrECM efterligner det lamininrige hjernemiljø og understøtter cellerne i organoidkulturen til selvorganisering og migration ved invasion. Selvom nogle grupper har etableret organoidkultur uden brug af et lrECM- eller EGF / FGF-beriget medie24,28, som kan tilbyde en mere tidseffektiv måde at bruge denne dyrkningsmetode på og stærkere udvælgelse af onkogen signalering for at drive vækst, blev disse metoder valgt for at optimere pro-stamcellemiljøet for bedst at etablere organoidernes cellulære heterogenitet. Både cerebrale organoider og GBM-organoider er blevet fremstillet med lrECM i litteraturen tidligere 21,32,33. Selvom vi har etableret data vedrørende tumorpopulationer, der findes inden for organoider og den rumlige variation, er der mindre kendt om ikke-tumorpopulationer inden for organoiderne, og hvor længe de overlever fra de oprindelige patientprøver. Visse IHC-pletter (såsom CD45) kan give disse data og kunne være et interessant forskningspunkt i fremtiden med organoider.
At kende den tilsigtede anvendelse til organoid kultur er vigtig for at vælge passende metoder. Etablering af organoider fra primære prøver versus dyrkning af ensartede organoider til specifikke eksperimenter har lidt forskellige procedurer. At have en forståelse for, hvordan organoider modnes og visuelt udfylder lrECM-stilladset, er vigtigt for at kunne allokere ordentlig tid og ressourcer til organoidkultur. Sparsomme områder af celler i organoider vil langsomt udvide sig og vokse for at fylde lrECM, hvilket kan tage alt fra 2-8 uger afhængigt af prøvens adfærd. Denne vækstrate er noget iboende for hver prøve; det bevares på tværs af forskellige partier af organoider og er ret i overensstemmelse med den relative hastighed af kuglevækst. Organoider kan opretholdes i over 1 år og bevare tumordannelsesevner på xenograft i mus; Det anbefales dog at dyrke dem med et særskilt formål for ikke at spilde laboratorieressourcer (både materialer og tid)4. Organoidvækst er blevet testet i flere brøndstørrelser og formater og viser, at en 10 cm plade er den ideelle indstilling til opretholdelse af optimal cellelevedygtighed efterfulgt af en 6-brøndsplade med tre organoider pr. Brønd34. Organoider bruger flere medier sammenlignet med deres todimensionelle kulturmodstykker, og brug af et mindre brøndformat fører ikke til korrekt vedligeholdelse. For eksempel har en brønd i en plade med 96-brøndformat ikke nok plads eller medievolumen i forhold til størrelsen på en organoid til at opretholde organoidvækst.
Som organoider etablerer, er det vigtigt at være opmærksom for at øge succesen. I første omgang vil organoider forbruge medier langsomt, men efterhånden som de bliver tættere og mere modne, vil de forbruge medier hurtigere. Tilføjelse af phenolrød til medierne kan hjælpe med at tjene som indikator for medieforbrug. Når mediet er mere gult, kan det få os til at justere fodringsmønsteret, hvad enten det er at udveksle et større volumen medier, øge den samlede mediemængde i pladen, opdele organoider mellem flere cellekulturplader for at holde trit med deres vækst eller endda justere tidslinjen for eksperimenter. 
På mange måder er organoider en ineffektiv måde at udføre kræftforskning på. De involverer lange tidsskalaer og er dyre og ressourcetunge sammenlignet med GBM-sfærekulturen. Sammenlignet med patientafledte xenotransplantater, en alternativ metode til genskabelse af cellulær og mikromiljømæssig mangfoldighed, er de imidlertid mere ligetil, billigere og kontrollerbare. Udvælgelse af, hvornår man bedst kan bruge organoider, er vigtigt for kræftforskere. De er ikke beregnet til at erstatte traditionel sfære eller tilhængerkultur og ikke til at erstatte xenograftmodeller. Organoider kan, når de anvendes på det rigtige videnskabelige spørgsmål, kombinere fordelene ved begge disse systemer og kan give os mulighed for at observere tumorcellebiologi, der ellers ville forblive skjult. Det videnskabelige samfund er kun begyndt at forstå, hvilke læringsmuligheder organoider tilbyder, men det er klart, at de vil være et uvurderligt værktøj i fremtiden til at forstå GBM's komplekse biologi.

Glioblastom (GBM) er den mest almindeligt forekommende primære hjernetumor med en dyster prognose på ca. 15 måneder fra diagnose1. Behandlinger, der er effektive i prækliniske undersøgelser, kan ofte være dårligt effektive hos patienter 2,3. Dårlig klinisk respons tilskrives mange faktorer, herunder den mikromiljømæssige heterogenitet af GBM og komplekse intratumorale interaktioner. Disse kan være vanskelige at genskabe i laboratoriemiljøet med traditionelle klæbe- eller kuglekulturmetoder4. Tilstedeværelsen af en delmængde af selvfornyende kræftstamceller (CSC'er) inden for GBM kan også bidrage til denne kompleksitet 5,6. CSC'er er afgørende for tumorudbredelse og opretholder tumorvækst ved at fremme aktiv angiogenese, kræftinvasion og resistens over for terapier, herunder stråling 7,8,9. CSC'er er ikke ensartet fordelt gennem tumorer, men er snarere beriget inden for specifikke mikromiljøer, herunder den perivaskulære niche og perinekrotiske regioner, som hver især giver særskilt molekylær regulering af deres cellulære tilstande 10,11,12,13,14. CSC'er er ikke passive modtagere af mikromiljømæssige signaler, men har i stedet evnen til at ombygge deres egne mikromiljøer 7,15,16. Mikromiljøet i en CSC kan fremme vedligeholdelse af stamcelletilstand som reaktion på tryk som næringsstofknaphed, pH og hypoxi17,18,19,20, hvilket tyder på vigtigheden af disse forhold i et modelsystem. Rekapitulation af det forskellige cellulære mikromiljø inden for tumorer er derfor afgørende for at forstå terapeutisk resistens og identificere nye terapier.
Tredimensionel kultur er steget i popularitet i de senere år21,22. Organoider er blevet brugt i andre former for kræft, og det primære mål med at opretholde celler som organoider er at muliggøre vækst af heterogene cellepopulationer (hvoraf mange normalt kan udkonkurreres i mere homogen kuglekultur) og rumlig mangfoldighed, set som regionale tumormikromiljøer med genetisk specificitet 4,23,24,25,26 . Der er mange metoder til tredimensionel kultur af kræftceller, som hver har fordele og ulemper27,28,29. Organoidkultur er ikke beregnet til at være en erstatning for traditionel tilhænger- eller kuglekultur. Det bruges bedst som en komplementær teknik til todimensionelle metoder, når der er specifikke spørgsmål, hvor interaktionen mellem cellemikromiljø og tumorcelleresponser er kritisk.
Denne artikel beskriver pålidelige og gentagelige metoder til at generere GBM-organoider fra enten primære patientprøver eller patientafledte kulturer. Vi adresserer to forskellige mål for tredimensionel organoidkultur: (1) etablering af organoider fra primært patientvæv med maksimalt engraftmentpotentiale uanset ensartethed eller (2) dyrkning af ensartede organoider til mere kvantitativ eksperimentel brug. Ved etablering af en primærprøve som organoider er det ikke nødvendigt at filtrere efter enkeltceller eller tælle celler, fordi det er en prioritet at holde maksimale cellenumre og typer for at etablere den oprindelige kultur. Ved dyrkning af organoider til sammenlignende eksperimenter er der imidlertid behov for enkeltcellefiltrering og celletælling for at sikre, at replikatorganoider er sammenlignelige for eksperimentel konsistens. Denne protokol beskriver, hvordan man etablerer organoidkulturer og skaber ensartede organoider samt raffinerede metoder til indlejring og konservering af organoider og standardcellekultureksperimenter, herunder immunohistokemi, immunfluorescens og vurdering af total cellelevedygtighed i GBM-organoider.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3,3-Diaminobenzidine (DAB) tablets</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>08980681</td>
			<td>3,3-Diaminobenzidine (DAB) tablets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well PCR plates</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td>96-well PCR plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>SCR005</td>
			<td>Cell detachment solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-antimycotic</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15240062</td>
			<td>Antibiotic-antimycotic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 supplement minus vitamin A</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>12587001</td>
			<td>B-27 supplement minus vitamin A (50x)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GelCode Blue Stain Reagent</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>24590</td>
			<td>Bluing reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer (70 &#181;m)</td>
			<td>CellTreat Scientific</td>
			<td>229483</td>
			<td>Cell strainer (70 &#181;m)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTiter-Glo 3D</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G9681</td>
			<td>Luminescent cell viability assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clarifier 2</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>7301</td>
			<td>Nuclear hematoxylin clarifying reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear-Rite 3</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>6901</td>
			<td>xylene substitute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia Gill 2 Hematoxylin</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>72504</td>
			<td>Hematoxylin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamine in 0.85% NaCl</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>35050061</td>
			<td>Glutamine in 0.85% NaCl (200 mM)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>354234</td>
			<td>Laminin-enriched extracellular matrix</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini PAP pen</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>008877</td>
			<td>Hydrophobic barrier pen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>22-050-102</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal media minus phenol red</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>12349015</td>
			<td>Neurobasal media minus phenol red (500 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal donkey serum (NDS)</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>017-000-121</td>
			<td>Normal donkey serum (NDS)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde 4% in PBS</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>AAJ19943K2</td>
			<td>Paraformaldehyde 4% in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol red</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P0290</td>
			<td>Phenol red (0.5%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Gold Antifade Mountant with DAPI</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>P10144</td>
			<td>Liquid curing mountant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human EGF protein</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>236-EG-01M</td>
			<td>Recombinant human EGF protein (250 &#181;g/mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human FGF basic</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>4144-TC-01</td>
			<td>Recombinant human FGF basic (250 &#181;g/mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SignalStain Antibody Diluent</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>8112</td>
			<td>Antibody diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SignalStain Boost IHC Detection Reagent</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>8114</td>
			<td>Immunohistochemistry detection reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SignalStain Citrate Unmasking Solution</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>14746</td>
			<td>Citrate unmasking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single edge razor blade</td>
			<td>Uline</td>
			<td>H-595B</td>
			<td>Single edge razor blade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11360070</td>
			<td>Sodium pyruvate (100 mM)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Cryomolds</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25608-916</td>
			<td>Disposable cryomolds</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek O.C.T. Compound</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25608-930</td>
			<td>Optimal cutting temperature compound</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Stain</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>T10282</td>
			<td>Cell impermeant stain (0.4%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>X3P-1GAL</td>
			<td>Xylene</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

maintaining human glioblastoma cellular diversity ex vivo using three-dimensional organoid culture

Glioblastom (GBM) er den mest almindeligt forekommende primære maligne hjernekræft med en ekstremt dårlig prognose. Intratumoral cellulær og molekylær mangfoldighed samt komplekse interaktioner mellem tumormikromiljøer kan gøre det til en udfordring at finde effektive behandlinger. Traditionelle klæbende eller kuglekulturmetoder kan maskere sådanne kompleksiteter, mens tredimensionel organoidkultur kan rekapitulere regionale mikromiljøgradienter. Organoider er en metode til tredimensionel GBM-kultur, der bedre efterligner patienttumorarkitektur, indeholder fænotypisk forskellige cellepopulationer og kan bruges til eksperimenter med medium gennemstrømning. Selvom tredimensionel organoidkultur er mere besværlig og tidskrævende sammenlignet med traditionel kultur, giver den unikke fordele og kan tjene til at bygge bro over kløften mellem nuværende in vitro- og in vivo-systemer . Organoider har etableret sig som uvurderlige værktøjer i arsenalet af kræftbiologer for bedre at forstå tumoradfærd og resistensmekanismer, og deres applikationer fortsætter kun med at vokse. Her gives detaljer om metoder til generering og vedligeholdelse af GBM-organoider. Instruktioner om, hvordan man udfører organoid prøveindlejring og sektionering ved hjælp af både frosne og paraffinindlejringsteknikker samt anbefalinger til immunohistokemi og immunfluorescensprotokoller på organoidsektioner og måling af total organoidcellelevedygtighed er alle også beskrevet.

Figur 1 viser tidlig organoidvækst set via lysmikroskopi ved 10x forstørrelse. Figur 1A viser migration og invasion af enkeltceller gennem lrECM i midtervisningen. Cellerne vil fortsætte med at udvide og 'kolonisere' lrECM, og de vil fremstå mere tætte og til sidst uigennemsigtige ved visuel inspektion. Figur 1B viser flere modne organoider (efter 7 uger) uden forstørrelse i forhold til størrelsen af en krone.
Figur 2 viser immunohistokemisk farvning af GBM-organoider til phospho-histon H3, en markør for aktiv proliferation. De fleste stærkt proliferative celler ses i organoidomkredsen sammenlignet med organoidkernen. Positiv farvning vil have et brunt / kobber udseende.
Figur 3 beskriver processen til homogenisering og måling af det samlede celleantal i GBM-organoider ved hjælp af et 3D-specifikt selvlysende cellelevedygtighedsassay. På grund af det store antal celler, der er til stede i GBM-organoider, homogeniseres den større organoidstruktur oprindeligt ved triturering i selvlysende assayreagens. Derefter lægges fraktioner af det samlede organoidlysat i individuelle brønde og fortyndes med yderligere selvlysende assayreagens inden inkubation og aflæsning på en passende pladelæser med flere brønde.
Figur 4 viser DMSO-kontroldata (common vehicle) for organoider. Afbildede data viser intraorganoid og interorganoid konsistens. Selvlysende levedygtighedsdata vil typisk blive normaliseret til kontroller for hver prøve, når der genereres eksperimentelle data.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63745/63745fig01.jpg"> Figur 1: Se gennem et lysmikroskop (10x). (A) Tidlig organoidvækst, der viser migration / invasion af GBM-celler i hele den lamininrige ekstracellulære matrix. (B) Modne organoider i forhold til størrelsen af en krone. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63745/63745fig01large.jpg" target="_blank">Klik her for at se en større version af denne figur.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63745/63745fig02.jpg"> Figur 2: Immunohistokemi af GBM-organoider. (A, B) GBM-organoider, der viser phospho-histon H3-farvede celler til aktiv proliferation. Scalebars er 600 μm og 300 μm for henholdsvis A og B. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63745/63745fig02large.jpg" target="_blank">Klik her for at se en større version af denne figur.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63745/63745fig03.jpg"> Figur 3: Selvlysende cellelevedygtighedsprotokol for organoider. (A) Flyt individuelle organoider til små centrifugerør, og fjern overskydende medier. (B) Tilsæt 500 μL 1:1 PBS og selvlysende cellelevedygtighedsassayblanding til hvert rør og pipetter aggressivt for at nedbryde organoiden. (C) Tilsæt 25 μL af denne organoidblanding og 75 μL af den samme 1:1 PBS- og selvlysende cellelevedygtighedsassayblanding til hver brønd i en 96-brøndsplade. (D) Anbring på en ryster i 2 minutter efterfulgt af inkubation i 20 minutter ved RT, og læs derefter luminescens på en pladelæser. Figur lavet ved hjælp af BioRender.com. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63745/63745fig03large.jpg" target="_blank">Klik her for at se en større version af denne figur.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63745/63745fig04.jpg"> Figur 4: Cellens levedygtighed. Cellelevedygtighedsdata for organoider i 0,1% dimethylsulfoxid (DMSO) for seks tekniske replikater af fire organoider til fire patientprøver. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63745/63745fig04large.jpg" target="_blank">Klik her for at se en større version af denne figur.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Komponent</td>
			<td>Kvantitet</td>
		</tr><tr><td>Neurobasalt medium minus phenol rød</td>
			<td>500 ml</td>
		</tr><tr><td>B-27 tilskud minus vitamin A (50x)</td>
			<td>10 ml</td>
		</tr><tr><td>Antibiotika-antimykotisk (100x)</td>
			<td>5 ml</td>
		</tr><tr><td>Natriumpyruvat (100 mM)</td>
			<td>5 ml</td>
		</tr><tr><td>Glutamin i 0,85% NaCl (200 mM)</td>
			<td>5 ml</td>
		</tr><tr><td>Rekombinant human FGF basis (250 μg/ml)</td>
			<td>20 μL</td>
		</tr><tr><td>Rekombinant humant EFG-protein (250 μg/ml)</td>
			<td>20 μL</td>
		</tr><tr><td>Phenol rød</td>
			<td>500 μL</td>
		</tr></tbody></table>Tabel 1: Neurobasal medium komplet (NBMc) formulering
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Reagens</td>
			<td>Tidspunkt</td>
		</tr><tr><td>50% ethanol</td>
			<td>3 minutter</td>
		</tr><tr><td>75% ethanol</td>
			<td>3 minutter</td>
		</tr><tr><td>95% ethanol</td>
			<td>3 minutter</td>
		</tr><tr><td>95% ethanol</td>
			<td>4 minutter</td>
		</tr><tr><td>100% ethanol</td>
			<td>2 minutter</td>
		</tr><tr><td>100% ethanol</td>
			<td>3 minutter</td>
		</tr><tr><td>100% ethanol</td>
			<td>4 minutter</td>
		</tr><tr><td>Xylen erstatning</td>
			<td>2 minutter</td>
		</tr><tr><td>Xylen erstatning</td>
			<td>3 minutter</td>
		</tr><tr><td>Xylen erstatning</td>
			<td>4 minutter</td>
		</tr><tr><td>Paraffinvoks</td>
			<td>15 minutter</td>
		</tr><tr><td>Paraffinvoks</td>
			<td>15 minutter</td>
		</tr></tbody></table>Tabel 2: Behandlingsplan for små organoider (under 3 mm i diameter)
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Reagens</td>
			<td>Tidspunkt</td>
		</tr><tr><td>50% ethanol</td>
			<td>6 minutter</td>
		</tr><tr><td>75% ethanol</td>
			<td>6 minutter</td>
		</tr><tr><td>95% ethanol</td>
			<td>5 minutter</td>
		</tr><tr><td>95% ethanol</td>
			<td>8 minutter</td>
		</tr><tr><td>100% ethanol</td>
			<td>5 minutter</td>
		</tr><tr><td>100% ethanol</td>
			<td>5 minutter</td>
		</tr><tr><td>100% ethanol</td>
			<td>8 minutter</td>
		</tr><tr><td>Xylen erstatning</td>
			<td>5 minutter</td>
		</tr><tr><td>Xylen erstatning</td>
			<td>5 minutter</td>
		</tr><tr><td>Xylen erstatning</td>
			<td>8 minutter</td>
		</tr><tr><td>Paraffinvoks</td>
			<td>30 minutter</td>
		</tr><tr><td>Paraffinvoks</td>
			<td>30 minutter</td>
		</tr></tbody></table>Tabel 3: Behandlingsplan for store organoider (over 3 mm i diameter)
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Reagens</td>
			<td>Tidspunkt</td>
		</tr><tr><td>Hæmatoxylin</td>
			<td>2 minutter</td>
		</tr><tr><td>Løbende diH2O</td>
			<td>2 minutter</td>
		</tr><tr><td>Nuklear hæmatoxylin afklarende reagens</td>
			<td>1 minut</td>
		</tr><tr><td>Løbende diH2O</td>
			<td>1 minut</td>
		</tr><tr><td>Bluing Reagens</td>
			<td>1 minut</td>
		</tr><tr><td>Løbende diH2O</td>
			<td>2 minutter</td>
		</tr><tr><td>70% ethanol</td>
			<td>1 minut</td>
		</tr><tr><td>100% ethanol</td>
			<td>1 minut</td>
		</tr><tr><td>100% ethanol</td>
			<td>1 minut</td>
		</tr><tr><td>Xylen erstatning</td>
			<td>2 minutter</td>
		</tr><tr><td>Xylen erstatning</td>
			<td>2 minutter</td>
		</tr></tbody></table>Tabel 4: Hematoxylin modfarve

Watch this Scientific Journal Video about Maintaining Human Glioblastoma Cellular Diversity Ex vivo using Three-Dimensional Organoid Culture at JoVE.com

Maintaining Human Glioblastoma Cellular Diversity Ex vivo using Three-Dimensional Organoid Culture

Her beskriver vi en metode til at generere glioblastom (GBM) organoider fra primære patientprøver eller patientafledte cellekulturer og opretholde dem til modenhed. Disse GBM-organoider indeholder fænotypisk forskellige cellepopulationer og genskaber tumormikromiljøer ex vivo.

Opretholdelse af menneskelig glioblastom cellulær mangfoldighed Ex vivo ved hjælp af tredimensionel organoidkultur

Glioblastoma (GBM) is the most commonly occurring primary malignant brain cancer with an extremely poor prognosis. Intra-tumoral cellular and molecular ...

At finde behandlinger for glioblastom er udfordrende på grund af den cellulære mangfoldighed, der findes i tumorer og interaktionerne mellem forskellige mikromiljøer. Organoider kan hjælpe med at genskabe noget af den rumlige mangfoldighed, og vi kan bruge dette til bedre at forstå tumorernes biologi. Mens traditionelle cellekulturmetoder har tendens til at producere homogene tumorcellepopulationer, kan organoider bedre efterligne den molekylære og cellulære mangfoldighed af glioblastom og bedre model intratumorale interaktioner.Organoider kan bruges til at undersøge lægemiddeleffektivitet og resistensmekanismer. Modstand mod kliniske terapier kan kun forekomme i organoider og ikke i den traditionelle sfærekultur, hvilket afspejler den kliniske virkelighed af denne sygdom. Organoider kan hjælpe med at demonstrere de regionale virkninger af kemoterapier.De kan bruges til at opdage nye nichespecifikke terapier, og de kan også fungere som et forudsigeligt værktøj til personlig medicin i fremtiden. Nogle materialer, der bruges til at skabe organoider, er temperaturfølsomme, og forsømmelse af at holde disse materialer ved deres rette temperatur kan føre til vanskeligheder med at skabe eller vedligeholde organoider. Begynd at forberede organoidformene under en kulturhætte ved at tage vokspapiret af parafilmarket og placere det mellem to sterile 96-brønds polymerasekædereaktion eller PCR-plader.Sørg for, at indersiden af parafilmen er ren. Påfør jævnt tryk på toppladen for at danne små to millimeter dybe fordybninger i parafilmen uden at skabe huller. Adskil pladerne.Den dimpled parafilm klæber til toppladen. Placer derefter toppladen på tøris i 30 sekunder. Brug steril tang til at trække parafilmen af toppladen i en hurtig bevægelse.Frossen parafilm er lettere at fjerne. Anbring den færdige parafilmform i en dækket, steril 10 centimeter cellekulturskål. For at forberede enkeltcellesuspensionen fra glioblastom eller GBM-klæbende kultur skal du fjerne det brugte medie fra pladen.Tilsæt derefter to milliliter celleløsningsopløsning ved stuetemperatur til pladen, og inkuber pladen ved 37 grader i tre minutter. Efter bekræftelse af celleløsrivelse fra pladen under mikroskopet tilsættes otte milliliter Neurobasal Medium komplet eller NBMc-medium for at neutralisere celleløsningen. Sil suspensionen gennem en enkelt 70 mikron celle sil.Drej cellerne ned ved 120 gange G i fem minutter. Fjern derefter supernatanten og suspender cellerne i en milliliter NBMc. Tæl cellerne fra enkeltcellesuspensionen ved hjælp af en celle impermeant plet.For at fremstille organoider fra en enkeltcellesuspension tilsættes en passende mængde lamininrig ekstracellulær matrix eller lrECM i et lille centrifugerør i en isspand eller koldblok. Forbered en celleblanding indeholdende 20.000 celler pr. Organoid. Bland lrECM-cellesuspensionsblandingen grundigt for at undgå at bundfælde cellerne, hvilket ville resultere i ikke-ensartet organoiddannelse.Derefter pipetteres forsigtigt 20 mikroliter af blandingen på en parafilmform for at danne en perlelignende dråbe. Sørg for at afkøle pipettespidsen hver anden til tre organoider for at forhindre lrECM-polymerisation. Når det ønskede antal organoider er pipetteret på parafilmformen i en 10 centimeter kulturplade, inkuberes organoiderne ved 37 grader Celsius i en til to timer i en cellekulturinkubator.Når organoiderne er størknet, skylles organoiderne forsigtigt af parafilmformen med NBMc-medium ved hjælp af en P1000-spids og samles i en ny 10 centimeter kulturplade indeholdende 20 ml NBMc. Placer kulturpladen i en inkubator uden at ryste i fire dage. Efter fire dage udskiftes mediet i pladen.For at gøre dette skal du placere et stykke mørkt papir under cellekulturpladen. Vip pladen og vent i 20 sekunder. Når organoiderne helt sætter sig i bunden af skålen, skal du langsomt fjerne mediet med en glaspipette med stor åbning.Efter tilføjelse af nye medier skal du placere pladen i inkubatoren på en orbital shaker ved 80 o / min og udveksle medier hver anden til tre dage derefter. Væksten af organoiden blev observeret ved anvendelse af lysmikroskopi. I midtervisningen viste tidlig organoidvækst migration og encellet invasion gennem lrECM.De modne organoider efter syv uger var i forhold til størrelsen af en krone. Den immunohistokemiske farvning af GBM-organoiderne med phospho-histon H3 afslørede stærkt proliferative celler med et brunt eller lilla udseende i organoidomkredsen sammenlignet med kernen. Cellelevedygtighedsdataene for organoider i 0,1% DMSO viste intraorganoid og interorganoid konsistens.Vær opmærksom på organisk biomasse og medieforsuring. Hvis organoiderne går gennem medierne for hurtigt, skal du sørge for at udveksle medierne oftere eller opdele organoiderne mellem yderligere plader. Modne organoider kan bruges til eksperimenter med terapier eller indlejret og sektioneret til brug med immunhistokemi eller immunfluorescens.De dissocierede organoider kan bruges til FACS-analyse. Disse organoider blev for nylig brugt i tredimensionel funktionel screening for at opdage mål, der er afgørende i rumligt forskellige kræftstamcellenicher. Vi bruger også disse modeller til at prioritere forskellige lægemidler og terapier inden in vivo-test.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Maintaining Human Glioblastoma Cellular Diversity Ex vivo using Three-Dimensional Organoid Culture

Ex Vivo Imaging of Resident CD8 T Lymphocytes in Human Lung Tumor Slices Using Confocal Microscopy

Ex Vivo Imaging of Resident CD8 T Lymphocytes in Human Lung Tumor Slices Using Confocal Microscopy

Ex Vivo Billeddannelse af hjemmehørende CD8 T-lymfocytter i menneskelige lunge Tumor skiver bruger konfokalmikroskopi

CD8 T cell are key players in the fight against cancer. In order for CD8 T cells to kill tumor cells they need to enter into the tumor, migrate within the ...

Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

Fluorescens molekylære tomografi for In Vivo billeddannelse af glioblastom Xenografts

Tumorigenicity is the capability of cancer cells to form a tumor mass. A widely used approach to determine if the cells are tumorigenic is by injecting ...

Longitudinal Morphological and Physiological Monitoring of Three-dimensional Tumor Spheroids Using Optical Coherence Tomography

Langsgående morfologiske og fysiologiske overvågning af tre-dimensionelle Tumor Spheroids bruge optisk kohærens tomografi

Tumor spheroids have been developed as a three-dimensional (3D) cell culture model in cancer research and anti-cancer drug discovery. However, currently, ...

Fully Human Tumor-based Matrix in Three-dimensional Spheroid Invasion Assay

Fuldt humant tumor-baserede matrix i tredimensionale Spheroid invasion assay

Two-dimensional cell culture-based assays are commonly used in in vitro cancer research. However, they lack several basic elements that form the tumor ...

Evaluating the Differentiation Capacity of Mouse Prostate Epithelial Cells Using Organoid Culture

Evaluering af differentierings kapaciteten af mus prostata Epiteliale celler ved hjælp af Organoid kultur

The prostate epithelium is comprised predominantly of basal and luminal cells. In vivo lineage tracing has been utilized to define the differentiation ...

Co-culture of Glioblastoma Stem-like Cells on Patterned Neurons to Study Migration and Cellular Interactions

Co-kultur af Glioblastoma Stamceller på mønstrede neuroner til at studere migration og cellulære interaktioner

Glioblastomas (GBMs), grade IV malignant gliomas, are one of the deadliest types of human cancer because of their aggressive characteristics. Despite ...

Three-Dimensional In Vitro Biomimetic Model of Neuroblastoma Using Collagen-Based Scaffolds

Three-Dimensional In Vitro Biomimetic Model of Neuroblastoma Using Collagen-Based Scaffolds

Tredimensionel in vitro biomimetisk model af neuroblastom ved hjælp af kollagenbaserede stilladser

Neuroblastoma is the most common extracranial solid tumor in children, accounting for 15% of overall pediatric cancer deaths. The native tumor tissue is a ...

Ex Vivo Organoid Model of Adenovirus-Cre Mediated Gene Deletions in Mouse Urothelial Cells

Ex Vivo Organoid Model of Adenovirus-Cre Mediated Gene Deletions in Mouse Urothelial Cells

Ex Vivo Organoidmodel af adenovirus-cre-medierede gendeletninger i museurtelceller

Bladder cancer is an understudied area, particularly in genetically engineered mouse models (GEMMs). Inbred GEMMs with tissue-specific Cre and loxP sites ...

Phospholipid Mediator Induced Transformation in Three-Dimensional Cultures

Fosfolipidmediator induceret transformation i tredimensionelle kulturer

Several models have been developed to study cancer, such as rodent models and established cell lines. Valuable insights into carcinogenesis have been ...

Three-Dimensional Culture of Murine Colonic Crypts to Study Intestinal Stem Cell Function Ex Vivo

Three-Dimensional Culture of Murine Colonic Crypts to Study Intestinal Stem Cell Function Ex Vivo

Tredimensionel kultur af Murine Colonic Crypts til undersøgelse af tarmstamcellefunktion Ex vivo

The intestinal epithelium regenerates every 5-7 days, and is controlled by the intestinal epithelial stem cell (IESC) population located at the bottom of ...