Name: maintaining human glioblastoma cellular diversity ex vivo using three-dimensional organoid culture
Uploaded: 2022-08-25T13:10:00
Duration: 7 min 11 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Maintaining Human Glioblastoma Cellular Diversity Ex vivo using Three-Dimensional Organoid Culture at JoVE.com

Vi vil gjerne takke Dr. Justin Lathia for hans uvurderlige råd og løpende støtte. Vi takker også Katrina Fife, Lisa Wallace og Maya Camhi for deres utmerkede tekniske støtte.

<ol>
	<li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiotherapy+plus+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+for+glioblastoma.">Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma.</a> New England Journal of Medicine. 352 (10), 987-996 (2005).</li><li>Heffernan, J. M., Sirianni, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+microenvironmental+regulation+of+glioblastoma+stem+cells:+a+biomaterials+perspective.">Modeling microenvironmental regulation of glioblastoma stem cells: a biomaterials perspective.</a> Frontiers in Materials. 5, 7 (2018).</li><li>Zanders, E. D., Svensson, F., Bailey, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapy+for+glioblastoma:+is+it+working.">Therapy for glioblastoma: is it working.</a> Drug Discovery Today. 24 (5), 1193-1201 (2019).</li><li>Hubert, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Three-dimensional+organoid+culture+system+derived+from+human+glioblastomas+recapitulates+the+hypoxic+gradients+and+cancer+stem+cell+heterogeneity+of+tumors+found+in+vivo.">A Three-dimensional organoid culture system derived from human glioblastomas recapitulates the hypoxic gradients and cancer stem cell heterogeneity of tumors found in vivo.</a> Cancer Research. 76 (8), 2465-2477 (2016).</li><li>Lathia, J. D., Heddleston, J. M., Venere, M., Rich, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deadly+teamwork:+neural+cancer+stem+cells+and+the+tumor+microenvironment.">Deadly teamwork: neural cancer stem cells and the tumor microenvironment.</a> Cell Stem Cell. 8 (5), 482-485 (2011).</li><li>Meyer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cell-derived+clonal+analysis+of+human+glioblastoma+links+functional+and+genomic+heterogeneity.">Single cell-derived clonal analysis of human glioblastoma links functional and genomic heterogeneity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (3), 851-856 (2015).</li><li>Bao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell-like+glioma+cells+promote+tumor+angiogenesis+through+vascular+endothelial+growth+factor.">Stem cell-like glioma cells promote tumor angiogenesis through vascular endothelial growth factor.</a> Cancer Research. 66 (16), 7843-7848 (2006).</li><li>Yu, S. C., Bian, X. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enrichment+of+cancer+stem+cells+based+on+heterogeneity+of+invasiveness.">Enrichment of cancer stem cells based on heterogeneity of invasiveness.</a> Stem Cell Reviews and Reports. 5 (1), 66-71 (2009).</li><li>Bao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glioma+stem+cells+promote+radioresistance+by+preferential+activation+of+the+DNA+damage+response.">Glioma stem cells promote radioresistance by preferential activation of the DNA damage response.</a> Nature. 444 (7120), 756-760 (2006).</li><li>Vescovi, A. L., Galli, R., Reynolds, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+tumour+stem+cells.">Brain tumour stem cells.</a> Nature Reviews. Cancer. 6 (6), 425-436 (2006).</li><li>Zhu, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cells+create+a+stem+cell+niche+in+glioblastoma+by+providing+NOTCH+ligands+that+nurture+self-renewal+of+cancer+stem-like+cells.">Endothelial cells create a stem cell niche in glioblastoma by providing NOTCH ligands that nurture self-renewal of cancer stem-like cells.</a> Cancer Research. 71 (18), 6061-6072 (2011).</li><li>Calabrese, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+perivascular+niche+for+brain+tumor+stem+cells.">A perivascular niche for brain tumor stem cells.</a> Cancer Cell. 11 (1), 69-82 (2007).</li><li>Charles, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+nitric+oxide+activates+notch+signaling+and+promotes+stem-like+character+in+PDGF-induced+glioma+cells.">Perivascular nitric oxide activates notch signaling and promotes stem-like character in PDGF-induced glioma cells.</a> Cell Stem Cell. 6 (2), 141-152 (2010).</li><li>Seidel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+hypoxic+niche+regulates+glioblastoma+stem+cells+through+hypoxia+inducible+factor+2+alpha.">A hypoxic niche regulates glioblastoma stem cells through hypoxia inducible factor 2 alpha.</a> Brain. 133, 983-995 (2010).</li><li>Yan, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glioma+cancer+stem+cells+secrete+Gremlin1+to+promote+their+maintenance+within+the+tumor+hierarchy.">Glioma cancer stem cells secrete Gremlin1 to promote their maintenance within the tumor hierarchy.</a> Genes &amp; Development. 28 (10), 1085-1100 (2014).</li><li>Cheng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glioblastoma+stem+cells+generate+vascular+pericytes+to+support+vessel+function+and+tumor+growth.">Glioblastoma stem cells generate vascular pericytes to support vessel function and tumor growth.</a> Cell. 153 (1), 139-152 (2013).</li><li>Flavahan, W. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+tumor+initiating+cells+adapt+to+restricted+nutrition+through+preferential+glucose+uptake.">Brain tumor initiating cells adapt to restricted nutrition through preferential glucose uptake.</a> Nature Neuroscience. 16 (10), 1373-1382 (2013).</li><li>Hjelmeland, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acidic+stress+promotes+a+glioma+stem+cell+phenotype.">Acidic stress promotes a glioma stem cell phenotype.</a> Cell Death and Differentiation. 18 (5), 829-840 (2011).</li><li>Bar, E. E., Lin, A., Mahairaki, V., Matsui, W., Eberhart, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+increases+the+expression+of+stem-cell+markers+and+promotes+clonogenicity+in+glioblastoma+neurospheres.">Hypoxia increases the expression of stem-cell markers and promotes clonogenicity in glioblastoma neurospheres.</a> The American Journal of Pathology. 177 (3), 1491-1502 (2010).</li><li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia-inducible+factors+regulate+tumorigenic+capacity+of+glioma+stem+cells.">Hypoxia-inducible factors regulate tumorigenic capacity of glioma stem cells.</a> Cancer Cell. 15 (6), 501-513 (2009).</li><li>Azzarelli, R., Ori, M., Philpott, A., Simons, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+model+of+glioblastoma+by+co-culturing+tumor+stem+cells+with+human+brain+organoids.">Three-dimensional model of glioblastoma by co-culturing tumor stem cells with human brain organoids.</a> Biology Open. 10 (2), 056416 (2021).</li><li>Linkous, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+patient-derived+glioblastoma+with+cerebral+organoids.">Modeling patient-derived glioblastoma with cerebral organoids.</a> Cell Reports. 26 (12), 3203-3211 (2019).</li><li>da Silva, B., Mathew, R. K., Polson, E. S., Williams, J., Wurdak, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+glioblastoma+spheroid+infiltration+of+early-stage+cerebral+organoids+models+brain+tumor+invasion.">Spontaneous glioblastoma spheroid infiltration of early-stage cerebral organoids models brain tumor invasion.</a> SLAS Discovery: Advancing Life Sciences R &amp; D. 23 (8), 862-868 (2018).</li><li>Jacob, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Patient-derived+glioblastoma+organoid+model+and+biobank+recapitulates+inter-+and+intra-tumoral+heterogeneity.">A Patient-derived glioblastoma organoid model and biobank recapitulates inter- and intra-tumoral heterogeneity.</a> Cell. 180 (1), 188-204 (2020).</li><li>Boretto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+organoids+from+endometrial+disease+capture+clinical+heterogeneity+and+are+amenable+to+drug+screening.">Patient-derived organoids from endometrial disease capture clinical heterogeneity and are amenable to drug screening.</a> Nature Cell Biology. 21 (8), 1041-1051 (2019).</li><li>Huang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ductal+pancreatic+cancer+modeling+and+drug+screening+using+human+pluripotent+stem+cell-and+patient-derived+tumor+organoids.">Ductal pancreatic cancer modeling and drug screening using human pluripotent stem cell-and patient-derived tumor organoids.</a> Nature Medicine. 21 (11), 1364-1371 (2015).</li><li>Ledur, P. F., Onzi, G. R., Zong, H., Lenz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+conditions+defining+glioblastoma+cells+behavior:+what+is+the+impact+for+novel+discoveries.">Culture conditions defining glioblastoma cells behavior: what is the impact for novel discoveries.</a> Oncotarget. 8 (40), 69185-69197 (2017).</li><li>Lenin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+drug+screening+pipeline+using+2D+and+3D+patient-derived+in+vitro+models+for+preclinical+analysis+of+therapy+response+in+glioblastoma.">A drug screening pipeline using 2D and 3D patient-derived in vitro models for preclinical analysis of therapy response in glioblastoma.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (9), 4322 (2021).</li><li>Rybin, M. J., Ivan, M. E., Ayad, N. G., Zeier, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+models+of+glioblastoma+and+their+role+in+drug+discovery.">Organoid models of glioblastoma and their role in drug discovery.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 15 (4), 605255 (2021).</li><li>Shakya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+lipid+metabolism+marks+glioblastoma+stem+and+non-stem+cells+in+separate+tumor+niches.">Altered lipid metabolism marks glioblastoma stem and non-stem cells in separate tumor niches.</a> Acta Neuropathologica Communications. 9 (1), 101 (2021).</li><li>Lee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+stem+cells+derived+from+glioblastomas+cultured+in+bFGF+and+EGF+more+closely+mirror+the+phenotype+and+genotype+of+primary+tumors+than+do+serum-cultured+cell+lines.">Tumor stem cells derived from glioblastomas cultured in bFGF and EGF more closely mirror the phenotype and genotype of primary tumors than do serum-cultured cell lines.</a> Cancer Cell. 9 (5), 391-403 (2006).</li><li>Bian, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+cerebral+organoids+model+brain+tumor+formation.">Genetically engineered cerebral organoids model brain tumor formation.</a> Nature Methods. 15 (8), 631-639 (2018).</li><li>Lancaster, M. A., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+cerebral+organoids+from+human+pluripotent+stem+cells.">Generation of cerebral organoids from human pluripotent stem cells.</a> Nature Protocols. 9 (10), 2329-2340 (2014).</li><li>Sundar, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+organoid+culture+unveils+resistance+to+clinical+therapies+in+adult+and+pediatric+glioblastoma.">Three-dimensional organoid culture unveils resistance to clinical therapies in adult and pediatric glioblastoma.</a> Translational Oncology. 15 (1), 101251 (2021).</li></ol>

Forfatterne har ingen konflikter å avsløre.

GBM-organoider er en komplementær kulturmetode til tradisjonelle sfærer som inkluderer større cellulær og mikromiljømessig heterogenitet 4,22,30. Selv om det er mer tid og ressurskrevende, kan organoidkultur gi verdifull innsikt i intratumoral oppførsel og mekanismer for stoffresistens.
GBM er drevet av en befolkning på CSCs 5,31, og disse metodene ble utviklet for å tillate fortsatt vekst og selvfornyelse av denne CSC-befolkningen. Epidermal vekstfaktor (EGF) og fibroblast vekstfaktor (FGF) er kjent for å forbedre stamcelle vedlikehold og vekst og gi aktiv reseptor tyrosinkinase (RTK) signalering. Dannelsen av heterogene cellulære populasjoner og distinkte tumormikromiljøer i GBM-svulster er avhengig av å støtte CSC-atferd. Valget av en lrECM etterligner det lamininrike hjernemiljøet og støtter cellene i organoidkulturen til selvorganisering og migrering ved invasjon. Selv om noen grupper har etablert organoidkultur uten bruk av en lrECM eller EGF / FGF-beriket media24,28, som kan tilby en mer tidseffektiv måte av denne kulturmetoden og sterkere utvalg av onkogen signalering for å drive vekst, ble disse metodene valgt for å optimalisere pro-stamcellemiljøet for best å etablere den cellulære heterogeniteten til organoider. Både cerebrale organoider og GBM-organoider er laget med lrECM i litteraturen tidligere 21,32,33. Selv om vi har etablert data om tumorpopulasjonene som finnes i organoider og den romlige variasjonen, er mindre kjent om ikke-tumorpopulasjoner i organoider og hvor lenge de overlever fra de opprinnelige pasientprøvene. Visse IHC-flekker (for eksempel CD45) kan gi disse dataene, og kan være et interessant forskningspunkt i fremtiden med organoider.
Å vite den tiltenkte bruken for organoidkultur er viktig for å velge passende metoder. Etablering av organoider fra primære prøver versus voksende ensartede organoider for spesifikke eksperimenter har litt forskjellige prosedyrer. Å ha en forståelse for hvordan organoider modnes og visuelt fyller ut lrECM-stillaset er viktig for å kunne tildele riktig tid og ressurser til organoidkultur. Sparsomme områder av celler i organoider vil sakte utvide og vokse for å fylle lrECM, som kan ta alt fra 2-8 uker, avhengig av prøvens oppførsel. Denne veksthastigheten er noe iboende for hvert eksemplar; Den er bevart på tvers av forskjellige grupper av organoider og ganske konsistent med den relative frekvensen av sfærevekst. Organoider kan opprettholdes i over 1 år og beholde tumordannelsesevner på xenograft til mus; Det anbefales imidlertid å dyrke dem med et tydelig formål for ikke å kaste bort laboratorieressurser (både materialer og tid)4. Organoidvekst er testet i flere brønnstørrelser og formater, og viser at en 10 cm plate er den ideelle innstillingen for å opprettholde optimal celle levedyktighet, etterfulgt av en 6-brønns plate med tre organoider per brønn34. Organoider bruker mer media sammenlignet med sine todimensjonale kulturmodeller, og bruk av et mindre brønnformat fører ikke til riktig vedlikehold. For eksempel har en brønn av en 96-brønns formatplate ikke nok plass eller medievolum i forhold til størrelsen på en organoid for å opprettholde organoidvekst.
Som organoider etablerer, er det viktig å være observant for å øke suksessen. I utgangspunktet vil organoider konsumere media sakte, men etter hvert som de blir tettere og mer modne, vil de konsumere media raskere. Tilsetning av fenolrødt til mediet kan bidra til å tjene som en indikator på medieforbruk. Når mediet er mer gult, kan det be oss om å justere fôringsmønsteret, enten det er å bytte et høyere volum av medier, øke den totale mediemengden i platen, dele organoider blant flere cellekulturplater for å holde tritt med veksten, eller til og med justere tidslinjen for eksperimenter. 
På mange måter er organoider en ineffektiv måte å drive kreftforskning på. De involverer lange tidsskalaer, og er dyre og ressurstunge sammenlignet med GBM-sfærekultur. Men sammenlignet med pasientavledede xenotransplantater, en alternativ metode for å gjenskape cellulært og mikromiljømessig mangfold, er de enklere, billigere og kontrollerbare. Valg av når organoider best skal brukes er viktig for kreftforskere. De er ikke ment å erstatte tradisjonell sfære eller tilhengerkultur og ikke å erstatte xenograftmodeller. Organoider kan, når de brukes på riktig vitenskapelig spørsmål, kombinere fordelene med begge disse systemene og kan tillate oss å observere tumorcellebiologi som ellers ville forbli skjult. Det vitenskapelige samfunnet begynner bare å forstå hvilke læringsmuligheter organoider tilbyr, men det er klart at de vil være et uvurderlig verktøy i fremtiden for å forstå GBMs komplekse biologi.

Glioblastom (GBM) er den hyppigst forekommende primære hjernesvulsten med en dyster prognose på ca. 15 måneder fra diagnose1. Behandlinger som er effektive i prekliniske studier kan ofte være dårlig effektive hos pasienter 2,3. Dårlig klinisk respons tilskrives mange faktorer, inkludert mikromiljømessig heterogenitet av GBM og komplekse intratumorale interaksjoner. Disse kan være vanskelige å gjenskape i laboratoriemiljøet med tradisjonelle tilhenger- eller kulekulturmetoder4. Tilstedeværelsen av en undergruppe av selvfornyende kreftstamceller (CSC) innenfor GBM kan også bidra til denne kompleksiteten 5,6. CSC er avgjørende for tumorutbredelse og opprettholder tumorvekst ved å fremme aktiv angiogenese, kreftinvasjon og motstand mot terapier, inkludert stråling 7,8,9. CSC er ikke jevnt fordelt gjennom svulster, men er beriket innenfor spesifikke mikromiljøer, inkludert perivaskulær nisje og perinekrotiske regioner, som hver gir distinkt molekylær regulering av deres cellulære tilstander 10,11,12,13,14. CSC-er er ikke passive mottakere av mikromiljøsignaler, men har i stedet muligheten til å ombygge sine egne mikromiljøer 7,15,16. Mikromiljøet til en CSC kan fremme vedlikehold av stamcelletilstand som svar på press som næringsmangel, pH og hypoksi17,18,19,20, noe som tyder på viktigheten av disse forholdene i et modellsystem. Rekapitulering av det mangfoldige cellulære mikromiljøet i svulster er derfor avgjørende for å forstå terapeutisk motstand og identifisere nye terapier.
Tredimensjonal kultur har økt i popularitet de siste årene21,22. Organoider har blitt brukt i andre typer kreft, og det primære målet med å opprettholde celler som organoider er å tillate vekst av heterogene cellepopulasjoner (hvorav mange normalt kan utkonkurreres i mer homogen sfærekultur) og romlig mangfold, sett på som regionale tumormikromiljøer med genetisk spesifisitet 4,23,24,25,26 . Det finnes mange metoder for tredimensjonal kultur av kreftceller, som hver har fordeler og ulemper27,28,29. Organoidkultur er ikke ment å være en erstatning for tradisjonell tilhenger- eller sfærekultur. Det brukes best som en komplementær teknikk til todimensjonale metoder når det er spesifikke spørsmål der samspillet mellom cellemikromiljø og tumorcelleresponser er kritisk.
Denne artikkelen beskriver pålitelige og repeterbare metoder for å generere GBM-organoider fra enten primære pasientprøver eller pasientavledede kulturer. Vi tar for oss to ulike mål for tredimensjonal organoidkultur: (1) etablering av organoider fra primærpasientvev, med maksimalt transplanteringspotensial uavhengig av ensartethet, eller (2) dyrking av ensartede organoider for mer kvantitativ eksperimentell bruk. Når du etablerer en primærprøve som organoider, er det ikke nødvendig å filtrere for enkeltceller eller telle celler, fordi det er en prioritet å holde maksimale celletall og typer for å etablere den opprinnelige kulturen. Ved dyrking av organoider for komparative eksperimenter er det imidlertid nødvendig med enkeltcellefiltrering og celletelling for å sikre at replikasjonsorganoider er sammenlignbare for eksperimentell konsistens. Denne protokollen beskriver hvordan man etablerer organoidkulturer og skaper ensartede organoider, samt raffinerte metoder for innebygging og bevaring av organoider og standard cellekultureksperimenter, inkludert immunhistokjemi, immunfluorescens og vurdering av total celle levedyktighet i GBM-organoider.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3,3-Diaminobenzidine (DAB) tablets</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>08980681</td>
			<td>3,3-Diaminobenzidine (DAB) tablets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well PCR plates</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td>96-well PCR plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>SCR005</td>
			<td>Cell detachment solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-antimycotic</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15240062</td>
			<td>Antibiotic-antimycotic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 supplement minus vitamin A</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>12587001</td>
			<td>B-27 supplement minus vitamin A (50x)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GelCode Blue Stain Reagent</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>24590</td>
			<td>Bluing reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer (70 &#181;m)</td>
			<td>CellTreat Scientific</td>
			<td>229483</td>
			<td>Cell strainer (70 &#181;m)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTiter-Glo 3D</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G9681</td>
			<td>Luminescent cell viability assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clarifier 2</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>7301</td>
			<td>Nuclear hematoxylin clarifying reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear-Rite 3</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>6901</td>
			<td>xylene substitute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia Gill 2 Hematoxylin</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>72504</td>
			<td>Hematoxylin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamine in 0.85% NaCl</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>35050061</td>
			<td>Glutamine in 0.85% NaCl (200 mM)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>354234</td>
			<td>Laminin-enriched extracellular matrix</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini PAP pen</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>008877</td>
			<td>Hydrophobic barrier pen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>22-050-102</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal media minus phenol red</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>12349015</td>
			<td>Neurobasal media minus phenol red (500 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal donkey serum (NDS)</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>017-000-121</td>
			<td>Normal donkey serum (NDS)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde 4% in PBS</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>AAJ19943K2</td>
			<td>Paraformaldehyde 4% in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol red</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P0290</td>
			<td>Phenol red (0.5%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Gold Antifade Mountant with DAPI</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>P10144</td>
			<td>Liquid curing mountant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human EGF protein</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>236-EG-01M</td>
			<td>Recombinant human EGF protein (250 &#181;g/mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human FGF basic</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>4144-TC-01</td>
			<td>Recombinant human FGF basic (250 &#181;g/mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SignalStain Antibody Diluent</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>8112</td>
			<td>Antibody diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SignalStain Boost IHC Detection Reagent</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>8114</td>
			<td>Immunohistochemistry detection reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SignalStain Citrate Unmasking Solution</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>14746</td>
			<td>Citrate unmasking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single edge razor blade</td>
			<td>Uline</td>
			<td>H-595B</td>
			<td>Single edge razor blade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11360070</td>
			<td>Sodium pyruvate (100 mM)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Cryomolds</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25608-916</td>
			<td>Disposable cryomolds</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek O.C.T. Compound</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25608-930</td>
			<td>Optimal cutting temperature compound</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Stain</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>T10282</td>
			<td>Cell impermeant stain (0.4%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>X3P-1GAL</td>
			<td>Xylene</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

maintaining human glioblastoma cellular diversity ex vivo using three-dimensional organoid culture

Glioblastom (GBM) er den hyppigst forekommende primære maligne hjernekreftformen med ekstremt dårlig prognose. Intratumoralt cellulært og molekylært mangfold, samt komplekse interaksjoner mellom tumormikromiljøer, kan gjøre det vanskelig å finne effektive behandlinger. Tradisjonelle tilhenger- eller sfærekulturmetoder kan maskere slike kompleksiteter, mens tredimensjonal organoidkultur kan rekapitulere regionale mikromiljøgradienter. Organoider er en metode for tredimensjonal GBM-kultur som bedre etterligner pasienttumorarkitektur, inneholder fenotypisk forskjellige cellepopulasjoner, og kan brukes til eksperimenter med middels gjennomstrømning. Selv om tredimensjonal organoidkultur er mer arbeidskrevende og tidkrevende sammenlignet med tradisjonell kultur, gir den unike fordeler og kan tjene til å bygge bro over gapet mellom nåværende in vitro og in vivo systemer. Organoider har etablert seg som uvurderlige verktøy i arsenalet til kreftbiologer for bedre å forstå tumoradferd og resistensmekanismer, og deres applikasjoner fortsetter bare å vokse. Her er det gitt detaljer om metoder for generering og vedlikehold av GBM-organoider. Instruksjoner om hvordan man utfører organoidprøveinnbygging og seksjonering ved hjelp av både frosne og parafininnbyggingsteknikker, samt anbefalinger for immunhistokjemi og immunfluorescensprotokoller på organoidseksjoner, og måling av total organoid celle levedyktighet, er også beskrevet.

Figur 1 viser tidlig organoidvekst sett via lysmikroskopi ved 10x forstørrelse. Figur 1A viser migrasjon og invasjon av enkeltceller gjennom lrECM i midtvisningen. Cellene vil fortsette å ekspandere og "kolonisere" lrECM, og de vil virke tettere og til slutt ugjennomsiktige ved visuell inspeksjon. Figur 1B viser flere modne organoider (ved 7 uker) uten forstørrelse, i forhold til størrelsen på en krone.
Figur 2 viser immunhistokjemisk farging av GBM-organoider for fosfohiston H3, en markør for aktiv proliferasjon. De fleste svært proliferative celler ses i organoidperimeteren sammenlignet med organoidkjernen. Positiv farging vil ha et brunt / kobberutseende.
Figur 3 beskriver prosessen for å homogenisere og måle totalt celletall i GBM-organoider ved hjelp av en 3D-spesifikk luminescerende celle levedyktighetsanalyse. På grunn av det høye antallet celler som er tilstede i GBM-organoider, blir den større organoidstrukturen opprinnelig homogenisert ved triturering i luminescerende analysereagens. Deretter lastes fraksjoner av det totale organoidlysatet i individuelle brønner og fortynnes med ytterligere luminescerende analysereagens før inkubering og lesing på en passende flerbrønnsplateleser.
Figur 4 representerer DMSO (common vehicle) kontrolldata for organoider. Plottede data viser intraorganoid og interorganoid konsistens. Selvlysende levedyktighetsdata vil vanligvis bli normalisert til kontroller for hvert eksemplar når eksperimentelle data genereres.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63745/63745fig01.jpg"> Figur 1: Utsikt gjennom et lysmikroskop (10x). (A) Tidlig organoidvekst som demonstrerer migrasjon / invasjon av GBM-celler gjennom den lamininrike ekstracellulære matrisen. (B) Modne organoider i forhold til størrelsen på en krone. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63745/63745fig01large.jpg" target="_blank">Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63745/63745fig02.jpg"> Figur 2: Immunhistokjemi av GBM-organoider. (A, B) GBM-organoider som viser fosfohiston H3-fargede celler for aktiv proliferasjon. Scalebars er 600 μm og 300 μm for henholdsvis A og B. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63745/63745fig02large.jpg" target="_blank">Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63745/63745fig03.jpg"> Figur 3: Selvlysende celle levedyktighetsprotokoll for organoider. (A) Flytt individuelle organoider til små sentrifugerør og fjern overflødig media. (B) Tilsett 500 μL av 1: 1 PBS og selvlysende celle levedyktighetsanalyseblanding til hvert rør og pipette aggressivt for å bryte ned organoiden. (C) Tilsett 25 μL av denne organoidblandingen og 75 μL av samme 1: 1 PBS og luminescerende celle levedyktighetsanalyseblanding til hver brønn av en 96-brønnplate. (D) Plasser på en shaker i 2 min, etterfulgt av inkubasjon i 20 minutter ved RT, og les deretter luminescens på en plateleser. Figur laget med BioRender.com. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63745/63745fig03large.jpg" target="_blank">Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63745/63745fig04.jpg"> Figur 4: Cellens levedyktighet. Cellens levedyktighetsdata for organoider i 0,1% dimetylsulfoksid (DMSO) for seks tekniske replikasjoner av fire organoider for fire pasientprøver. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63745/63745fig04large.jpg" target="_blank">Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Komponent</td>
			<td>Kvantitet</td>
		</tr><tr><td>Nevrobasalt medium minus fenolrødt</td>
			<td>500 ml</td>
		</tr><tr><td>B-27 tilskudd minus vitamin A (50x)</td>
			<td>10 ml</td>
		</tr><tr><td>Antibiotisk-antimykotisk (100x)</td>
			<td>5 ml</td>
		</tr><tr><td>Natriumpyruvat (100 mM)</td>
			<td>5 ml</td>
		</tr><tr><td>Glutamin i 0,85% NaCl (200 mM)</td>
			<td>5 ml</td>
		</tr><tr><td>Rekombinant human FGF basisk (250 μg/ml)</td>
			<td>20 μL</td>
		</tr><tr><td>Rekombinant humant EFG-protein (250 μg/ml)</td>
			<td>20 μL</td>
		</tr><tr><td>Fenol rød</td>
			<td>500 μL</td>
		</tr></tbody></table>Tabell 1: Neurobasal medium komplett (NBMc) formulering
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Reagent</td>
			<td>Tid</td>
		</tr><tr><td>50% etanol</td>
			<td>3 minutter</td>
		</tr><tr><td>75% etanol</td>
			<td>3 minutter</td>
		</tr><tr><td>95% etanol</td>
			<td>3 minutter</td>
		</tr><tr><td>95% etanol</td>
			<td>4 minutter</td>
		</tr><tr><td>100% etanol</td>
			<td>2 minutter</td>
		</tr><tr><td>100% etanol</td>
			<td>3 minutter</td>
		</tr><tr><td>100% etanol</td>
			<td>4 minutter</td>
		</tr><tr><td>Xylen erstatning</td>
			<td>2 minutter</td>
		</tr><tr><td>Xylen erstatning</td>
			<td>3 minutter</td>
		</tr><tr><td>Xylen erstatning</td>
			<td>4 minutter</td>
		</tr><tr><td>Parafinvoks</td>
			<td>15 minutter</td>
		</tr><tr><td>Parafinvoks</td>
			<td>15 minutter</td>
		</tr></tbody></table>Tabell 2: Behandlingsplan for små organoider (under 3 mm i diameter)
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Reagent</td>
			<td>Tid</td>
		</tr><tr><td>50% etanol</td>
			<td>6 minutter</td>
		</tr><tr><td>75% etanol</td>
			<td>6 minutter</td>
		</tr><tr><td>95% etanol</td>
			<td>5 minutter</td>
		</tr><tr><td>95% etanol</td>
			<td>8 minutter</td>
		</tr><tr><td>100% etanol</td>
			<td>5 minutter</td>
		</tr><tr><td>100% etanol</td>
			<td>5 minutter</td>
		</tr><tr><td>100% etanol</td>
			<td>8 minutter</td>
		</tr><tr><td>Xylen erstatning</td>
			<td>5 minutter</td>
		</tr><tr><td>Xylen erstatning</td>
			<td>5 minutter</td>
		</tr><tr><td>Xylen erstatning</td>
			<td>8 minutter</td>
		</tr><tr><td>Parafinvoks</td>
			<td>30 minutter</td>
		</tr><tr><td>Parafinvoks</td>
			<td>30 minutter</td>
		</tr></tbody></table>Tabell 3: Behandlingsplan for store organoider (over 3 mm i diameter)
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Reagent</td>
			<td>Tid</td>
		</tr><tr><td>Hematoksylin</td>
			<td>2 minutter</td>
		</tr><tr><td>Kjører diH2O</td>
			<td>2 minutter</td>
		</tr><tr><td>Nukleær hematoksylinklarerende reagens</td>
			<td>1 min</td>
		</tr><tr><td>Kjører diH2O</td>
			<td>1 min</td>
		</tr><tr><td>Bluing Reagens</td>
			<td>1 min</td>
		</tr><tr><td>Kjører diH2O</td>
			<td>2 minutter</td>
		</tr><tr><td>70% etanol</td>
			<td>1 min</td>
		</tr><tr><td>100% etanol</td>
			<td>1 min</td>
		</tr><tr><td>100% etanol</td>
			<td>1 min</td>
		</tr><tr><td>Xylen erstatning</td>
			<td>2 minutter</td>
		</tr><tr><td>Xylen erstatning</td>
			<td>2 minutter</td>
		</tr></tbody></table>Tabell 4: Hematoksylin counterstain

Watch this Scientific Journal Video about Maintaining Human Glioblastoma Cellular Diversity Ex vivo using Three-Dimensional Organoid Culture at JoVE.com

Maintaining Human Glioblastoma Cellular Diversity Ex vivo using Three-Dimensional Organoid Culture

Her beskriver vi en metode for å generere glioblastom (GBM) organoider fra primære pasientprøver eller pasientavledede cellekulturer og opprettholde dem til modenhet. Disse GBM-organoidene inneholder fenotypisk forskjellige cellepopulasjoner og gjenskaper tumormikromiljøer ex vivo.

Opprettholde humant glioblastom cellulært mangfold ex vivo ved bruk av tredimensjonal organoidkultur

Glioblastoma (GBM) is the most commonly occurring primary malignant brain cancer with an extremely poor prognosis. Intra-tumoral cellular and molecular ...

Å finne behandlinger for glioblastom er utfordrende på grunn av det cellulære mangfoldet som eksisterer i svulster og samspillet mellom ulike mikromiljøer. Organoider kan bidra til å gjenskape noe av det romlige mangfoldet, og vi kan bruke dette til å bedre forstå biologien til svulstene. Mens tradisjonelle cellekulturmetoder har en tendens til å produsere homogene tumorcellepopulasjoner, kan organoider bedre etterligne det molekylære og cellulære mangfoldet av glioblastom og bedre modellere intratumorale interaksjoner.Organoider kan brukes til å undersøke legemiddeleffekt og resistensmekanismer. Motstand mot kliniske terapier kan bare forekomme i organoider og ikke i den tradisjonelle sfærekulturen, noe som gjenspeiler den kliniske virkeligheten av denne sykdommen. Organoider kan bidra til å demonstrere de regionale effektene av kjemoterapier.De kan brukes til å oppdage nye nisjespesifikke terapier, og de kan også fungere som et prediktivt verktøy for personlig medisin i fremtiden. Noen materialer som brukes til å lage organoider er temperaturfølsomme, og forsømmelse av å holde disse materialene ved riktig temperatur kan føre til vanskeligheter med å skape eller opprettholde organoider. Begynn å forberede organoidformene under en kulturhette ved å ta vokspapiret av parafilmarket og plassere det mellom to sterile 96-brønns polymerasekjedereaksjon eller PCR-plater.Sørg for at innsiden av parafilmen er ren. Påfør jevnt trykk på topplaten for å danne små to millimeter dype dimples i parafilmen uten å skape hull. Skill platene.Den dimpled parafilmen vil holde seg til topplaten. Legg deretter topplaten på tørris i 30 sekunder. Bruk sterile tang til å trekke parafilmen av topplaten i en rask bevegelse.Frossen parafilm er lettere å fjerne. Plasser den ferdige parafilmformen i en dekket, steril 10-centimeter cellekulturskål. For å forberede enkeltcellesuspensjonen fra glioblastom eller GBM-adherentekultur, fjern det brukte mediet fra platen.Tilsett deretter to milliliter celleoppløsningsløsning ved romtemperatur til platen, og inkuber platen ved 37 grader i tre minutter. Etter å ha bekreftet celleoppløsning fra platen under mikroskopet, tilsett åtte milliliter Neurobasal Medium complete, eller NBMc-medium, for å nøytralisere celleoppløsningsløsningen. Sil suspensjonen gjennom en enkelt 70-mikron cellesil.Spinn ned cellene ved 120 ganger G i fem minutter. Fjern deretter supernatanten og resuspender cellene i en milliliter NBMc. Tell cellene fra enkeltcellesuspensjonen ved hjelp av en celle impermeant flekk.For å lage organoider fra en enkeltcellet suspensjon, tilsett en passende mengde lamininrik ekstracellulær matriks, eller lrECM, i et lite sentrifugerør i en isbøtte eller kuldeblokk. Forbered en celleblanding som inneholder 20.000 celler per organoid. Bland lrECM-cellesuspensjonsblandingen grundig for å unngå å sedimentere cellene, noe som vil resultere i ujevn organoiddannelse.Deretter pipetter du forsiktig 20 mikroliter av blandingen på en parafilmform for å danne en perlelignende dråpe. Sørg for å avkjøle pipettespissen annenhver til tredje organoider for å forhindre lrECM-polymerisering. Når ønsket antall organoider er pipettert på parafilmformen i en 10-centimeter kulturplate, inkuberer organoider ved 37 grader Celsius i en til to timer i en cellekulturinkubator.Etter at organoidene er størknet, skyll organoidene forsiktig av parafilmformen med NBMc-medium ved hjelp av en P1000-spiss og samle dem inn i en ny 10-centimeter kulturplate som inneholder 20 milliliter NBMc. Plasser kulturplaten i en inkubator uten å riste i fire dager. Etter fire dager, bytt ut media i platen.For å gjøre dette, legg et stykke mørkt papir under cellekulturplaten. Vipp platen og vent i 20 sekunder. Når organoidene legger seg helt i bunnen av fatet, fjerner du sakte mediet med en glasspipette med stor åpning.Etter å ha lagt til nye medier, plasser platen i inkubatoren på en orbital shaker ved 80 RPM, og utveksle medier hver to til tre dager etterpå. Veksten av organoid ble observert ved bruk av lysmikroskopi. I sentrumssynet viste tidlig organoidvekst migrasjon og encellet invasjon gjennom lrECM.De modne organoider på syv uker var i forhold til størrelsen på en krone. Den immunhistokjemiske fargingen av GBM-organoidene med fosfohiston H3 viste svært proliferative celler med brunt eller lilla utseende i organoidperimeteren sammenlignet med kjernen. Cellens levedyktighetsdata for organoider i 0,1% DMSO viste intraorganoid og interorganoid konsistens.Vær oppmerksom på organoid biomasse og media forsuring. Hvis organoider går gjennom media for fort, sørg for å bytte media oftere eller dele organoider mellom flere plater. Modne organoider kan brukes til eksperimenter med terapier eller innebygd og seksjonert for bruk med immunhistokjemi eller immunfluorescens.De dissosierte organoider kan brukes til FACS-analyse. Disse organoider ble nylig brukt i tredimensjonal funksjonell screening for å oppdage mål avgjørende i romlig distinkte kreft stamcelle nisjer. Vi bruker også disse modellene til å prioritere ulike medisiner og terapier før in vivo testing.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Maintaining Human Glioblastoma Cellular Diversity Ex vivo using Three-Dimensional Organoid Culture

Ex Vivo Imaging of Resident CD8 T Lymphocytes in Human Lung Tumor Slices Using Confocal Microscopy

Ex Vivo Imaging of Resident CD8 T Lymphocytes in Human Lung Tumor Slices Using Confocal Microscopy

Ex Vivo Avbildning av bosatt CD8 T-lymfocytter i menneskelig lunge svulst skiver bruker AC Confocal mikroskopi

CD8 T cell are key players in the fight against cancer. In order for CD8 T cells to kill tumor cells they need to enter into the tumor, migrate within the ...

Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

Fluorescens molekylær tomografi ved i Vivo avbildning av glioblastom Xenografts

Tumorigenicity is the capability of cancer cells to form a tumor mass. A widely used approach to determine if the cells are tumorigenic is by injecting ...

Longitudinal Morphological and Physiological Monitoring of Three-dimensional Tumor Spheroids Using Optical Coherence Tomography

Langsgående morfologiske og fysiologiske overvåking av tredimensjonale svulst Spheroids bruker Optical Coherence tomografi

Tumor spheroids have been developed as a three-dimensional (3D) cell culture model in cancer research and anti-cancer drug discovery. However, currently, ...

Fully Human Tumor-based Matrix in Three-dimensional Spheroid Invasion Assay

Fullt Human tumor-baserte Matrix i tredimensjonale spheroid Invasion analysen

Two-dimensional cell culture-based assays are commonly used in in vitro cancer research. However, they lack several basic elements that form the tumor ...

Evaluating the Differentiation Capacity of Mouse Prostate Epithelial Cells Using Organoid Culture

Vurderer differensiering kapasitet på Mouse prostata epitelceller bruke Organoid kultur

The prostate epithelium is comprised predominantly of basal and luminal cells. In vivo lineage tracing has been utilized to define the differentiation ...

Co-culture of Glioblastoma Stem-like Cells on Patterned Neurons to Study Migration and Cellular Interactions

Samkultur av Glioblastoma stamceller på mønstrede nevroner for å studere migrasjon og cellulære interaksjoner

Glioblastomas (GBMs), grade IV malignant gliomas, are one of the deadliest types of human cancer because of their aggressive characteristics. Despite ...

Three-Dimensional In Vitro Biomimetic Model of Neuroblastoma Using Collagen-Based Scaffolds

Three-Dimensional In Vitro Biomimetic Model of Neuroblastoma Using Collagen-Based Scaffolds

Tredimensjonal in vitro biomimetisk modell av neuroblastom ved bruk av kollagenbaserte stillas

Neuroblastoma is the most common extracranial solid tumor in children, accounting for 15% of overall pediatric cancer deaths. The native tumor tissue is a ...

Ex Vivo Organoid Model of Adenovirus-Cre Mediated Gene Deletions in Mouse Urothelial Cells

Ex Vivo Organoid Model of Adenovirus-Cre Mediated Gene Deletions in Mouse Urothelial Cells

Eks Vivo Organoid modell av Adenovirus-Cre medierte genslettinger i mus urotelceller

Bladder cancer is an understudied area, particularly in genetically engineered mouse models (GEMMs). Inbred GEMMs with tissue-specific Cre and loxP sites ...

Phospholipid Mediator Induced Transformation in Three-Dimensional Cultures

Fosfolipid mediator indusert transformasjon i tredimensjonale kulturer

Several models have been developed to study cancer, such as rodent models and established cell lines. Valuable insights into carcinogenesis have been ...

Three-Dimensional Culture of Murine Colonic Crypts to Study Intestinal Stem Cell Function Ex Vivo

Three-Dimensional Culture of Murine Colonic Crypts to Study Intestinal Stem Cell Function Ex Vivo

Tredimensjonal kultur av Murine Colonic krypter for å studere intestinal stamcellefunksjon ex vivo

The intestinal epithelium regenerates every 5-7 days, and is controlled by the intestinal epithelial stem cell (IESC) population located at the bottom of ...