Name: maintaining human glioblastoma cellular diversity ex vivo using three-dimensional organoid culture
Uploaded: 2022-08-25T13:10:00
Duration: 7 min 11 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Maintaining Human Glioblastoma Cellular Diversity Ex vivo using Three-Dimensional Organoid Culture at JoVE.com

Мы хотели бы поблагодарить д-ра Джастина Латию за его бесценные советы и постоянную поддержку. Мы также благодарим Катрину Файф, Лизу Уоллес и Майю Камхи за отличную техническую поддержку.

<ol>
	<li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiotherapy+plus+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+for+glioblastoma.">Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma.</a> New England Journal of Medicine. 352 (10), 987-996 (2005).</li><li>Heffernan, J. M., Sirianni, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+microenvironmental+regulation+of+glioblastoma+stem+cells:+a+biomaterials+perspective.">Modeling microenvironmental regulation of glioblastoma stem cells: a biomaterials perspective.</a> Frontiers in Materials. 5, 7 (2018).</li><li>Zanders, E. D., Svensson, F., Bailey, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapy+for+glioblastoma:+is+it+working.">Therapy for glioblastoma: is it working.</a> Drug Discovery Today. 24 (5), 1193-1201 (2019).</li><li>Hubert, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Three-dimensional+organoid+culture+system+derived+from+human+glioblastomas+recapitulates+the+hypoxic+gradients+and+cancer+stem+cell+heterogeneity+of+tumors+found+in+vivo.">A Three-dimensional organoid culture system derived from human glioblastomas recapitulates the hypoxic gradients and cancer stem cell heterogeneity of tumors found in vivo.</a> Cancer Research. 76 (8), 2465-2477 (2016).</li><li>Lathia, J. D., Heddleston, J. M., Venere, M., Rich, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deadly+teamwork:+neural+cancer+stem+cells+and+the+tumor+microenvironment.">Deadly teamwork: neural cancer stem cells and the tumor microenvironment.</a> Cell Stem Cell. 8 (5), 482-485 (2011).</li><li>Meyer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cell-derived+clonal+analysis+of+human+glioblastoma+links+functional+and+genomic+heterogeneity.">Single cell-derived clonal analysis of human glioblastoma links functional and genomic heterogeneity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (3), 851-856 (2015).</li><li>Bao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell-like+glioma+cells+promote+tumor+angiogenesis+through+vascular+endothelial+growth+factor.">Stem cell-like glioma cells promote tumor angiogenesis through vascular endothelial growth factor.</a> Cancer Research. 66 (16), 7843-7848 (2006).</li><li>Yu, S. C., Bian, X. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enrichment+of+cancer+stem+cells+based+on+heterogeneity+of+invasiveness.">Enrichment of cancer stem cells based on heterogeneity of invasiveness.</a> Stem Cell Reviews and Reports. 5 (1), 66-71 (2009).</li><li>Bao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glioma+stem+cells+promote+radioresistance+by+preferential+activation+of+the+DNA+damage+response.">Glioma stem cells promote radioresistance by preferential activation of the DNA damage response.</a> Nature. 444 (7120), 756-760 (2006).</li><li>Vescovi, A. L., Galli, R., Reynolds, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+tumour+stem+cells.">Brain tumour stem cells.</a> Nature Reviews. Cancer. 6 (6), 425-436 (2006).</li><li>Zhu, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cells+create+a+stem+cell+niche+in+glioblastoma+by+providing+NOTCH+ligands+that+nurture+self-renewal+of+cancer+stem-like+cells.">Endothelial cells create a stem cell niche in glioblastoma by providing NOTCH ligands that nurture self-renewal of cancer stem-like cells.</a> Cancer Research. 71 (18), 6061-6072 (2011).</li><li>Calabrese, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+perivascular+niche+for+brain+tumor+stem+cells.">A perivascular niche for brain tumor stem cells.</a> Cancer Cell. 11 (1), 69-82 (2007).</li><li>Charles, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+nitric+oxide+activates+notch+signaling+and+promotes+stem-like+character+in+PDGF-induced+glioma+cells.">Perivascular nitric oxide activates notch signaling and promotes stem-like character in PDGF-induced glioma cells.</a> Cell Stem Cell. 6 (2), 141-152 (2010).</li><li>Seidel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+hypoxic+niche+regulates+glioblastoma+stem+cells+through+hypoxia+inducible+factor+2+alpha.">A hypoxic niche regulates glioblastoma stem cells through hypoxia inducible factor 2 alpha.</a> Brain. 133, 983-995 (2010).</li><li>Yan, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glioma+cancer+stem+cells+secrete+Gremlin1+to+promote+their+maintenance+within+the+tumor+hierarchy.">Glioma cancer stem cells secrete Gremlin1 to promote their maintenance within the tumor hierarchy.</a> Genes &amp; Development. 28 (10), 1085-1100 (2014).</li><li>Cheng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glioblastoma+stem+cells+generate+vascular+pericytes+to+support+vessel+function+and+tumor+growth.">Glioblastoma stem cells generate vascular pericytes to support vessel function and tumor growth.</a> Cell. 153 (1), 139-152 (2013).</li><li>Flavahan, W. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+tumor+initiating+cells+adapt+to+restricted+nutrition+through+preferential+glucose+uptake.">Brain tumor initiating cells adapt to restricted nutrition through preferential glucose uptake.</a> Nature Neuroscience. 16 (10), 1373-1382 (2013).</li><li>Hjelmeland, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acidic+stress+promotes+a+glioma+stem+cell+phenotype.">Acidic stress promotes a glioma stem cell phenotype.</a> Cell Death and Differentiation. 18 (5), 829-840 (2011).</li><li>Bar, E. E., Lin, A., Mahairaki, V., Matsui, W., Eberhart, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+increases+the+expression+of+stem-cell+markers+and+promotes+clonogenicity+in+glioblastoma+neurospheres.">Hypoxia increases the expression of stem-cell markers and promotes clonogenicity in glioblastoma neurospheres.</a> The American Journal of Pathology. 177 (3), 1491-1502 (2010).</li><li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia-inducible+factors+regulate+tumorigenic+capacity+of+glioma+stem+cells.">Hypoxia-inducible factors regulate tumorigenic capacity of glioma stem cells.</a> Cancer Cell. 15 (6), 501-513 (2009).</li><li>Azzarelli, R., Ori, M., Philpott, A., Simons, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+model+of+glioblastoma+by+co-culturing+tumor+stem+cells+with+human+brain+organoids.">Three-dimensional model of glioblastoma by co-culturing tumor stem cells with human brain organoids.</a> Biology Open. 10 (2), 056416 (2021).</li><li>Linkous, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+patient-derived+glioblastoma+with+cerebral+organoids.">Modeling patient-derived glioblastoma with cerebral organoids.</a> Cell Reports. 26 (12), 3203-3211 (2019).</li><li>da Silva, B., Mathew, R. K., Polson, E. S., Williams, J., Wurdak, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+glioblastoma+spheroid+infiltration+of+early-stage+cerebral+organoids+models+brain+tumor+invasion.">Spontaneous glioblastoma spheroid infiltration of early-stage cerebral organoids models brain tumor invasion.</a> SLAS Discovery: Advancing Life Sciences R &amp; D. 23 (8), 862-868 (2018).</li><li>Jacob, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Patient-derived+glioblastoma+organoid+model+and+biobank+recapitulates+inter-+and+intra-tumoral+heterogeneity.">A Patient-derived glioblastoma organoid model and biobank recapitulates inter- and intra-tumoral heterogeneity.</a> Cell. 180 (1), 188-204 (2020).</li><li>Boretto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+organoids+from+endometrial+disease+capture+clinical+heterogeneity+and+are+amenable+to+drug+screening.">Patient-derived organoids from endometrial disease capture clinical heterogeneity and are amenable to drug screening.</a> Nature Cell Biology. 21 (8), 1041-1051 (2019).</li><li>Huang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ductal+pancreatic+cancer+modeling+and+drug+screening+using+human+pluripotent+stem+cell-and+patient-derived+tumor+organoids.">Ductal pancreatic cancer modeling and drug screening using human pluripotent stem cell-and patient-derived tumor organoids.</a> Nature Medicine. 21 (11), 1364-1371 (2015).</li><li>Ledur, P. F., Onzi, G. R., Zong, H., Lenz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+conditions+defining+glioblastoma+cells+behavior:+what+is+the+impact+for+novel+discoveries.">Culture conditions defining glioblastoma cells behavior: what is the impact for novel discoveries.</a> Oncotarget. 8 (40), 69185-69197 (2017).</li><li>Lenin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+drug+screening+pipeline+using+2D+and+3D+patient-derived+in+vitro+models+for+preclinical+analysis+of+therapy+response+in+glioblastoma.">A drug screening pipeline using 2D and 3D patient-derived in vitro models for preclinical analysis of therapy response in glioblastoma.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (9), 4322 (2021).</li><li>Rybin, M. J., Ivan, M. E., Ayad, N. G., Zeier, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+models+of+glioblastoma+and+their+role+in+drug+discovery.">Organoid models of glioblastoma and their role in drug discovery.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 15 (4), 605255 (2021).</li><li>Shakya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+lipid+metabolism+marks+glioblastoma+stem+and+non-stem+cells+in+separate+tumor+niches.">Altered lipid metabolism marks glioblastoma stem and non-stem cells in separate tumor niches.</a> Acta Neuropathologica Communications. 9 (1), 101 (2021).</li><li>Lee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+stem+cells+derived+from+glioblastomas+cultured+in+bFGF+and+EGF+more+closely+mirror+the+phenotype+and+genotype+of+primary+tumors+than+do+serum-cultured+cell+lines.">Tumor stem cells derived from glioblastomas cultured in bFGF and EGF more closely mirror the phenotype and genotype of primary tumors than do serum-cultured cell lines.</a> Cancer Cell. 9 (5), 391-403 (2006).</li><li>Bian, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+cerebral+organoids+model+brain+tumor+formation.">Genetically engineered cerebral organoids model brain tumor formation.</a> Nature Methods. 15 (8), 631-639 (2018).</li><li>Lancaster, M. A., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+cerebral+organoids+from+human+pluripotent+stem+cells.">Generation of cerebral organoids from human pluripotent stem cells.</a> Nature Protocols. 9 (10), 2329-2340 (2014).</li><li>Sundar, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+organoid+culture+unveils+resistance+to+clinical+therapies+in+adult+and+pediatric+glioblastoma.">Three-dimensional organoid culture unveils resistance to clinical therapies in adult and pediatric glioblastoma.</a> Translational Oncology. 15 (1), 101251 (2021).</li></ol>

У авторов нет конфликтов для раскрытия.

Органоиды GBM являются дополнительным методом культивирования к традиционным сферам, которые включают большую клеточную и микросреду гетерогенность 4,22,30. Несмотря на то, что органоидная культура требует больше времени и ресурсов, она может дать ценную информацию о внутриопухолевом поведении и механизмах лекарственной устойчивости.
GBM управляется населением CSC 5,31, и эти методы были разработаны, чтобы обеспечить дальнейший рост и самообновление этой популяции CSC. Известно, что эпидермальный фактор роста (EGF) и фактор роста фибробластов (FGF) улучшают поддержание и рост стволовых клеток и обеспечивают передачу сигналов активной рецепторной тирозинкиназы (RTK). Формирование гетерогенных клеточных популяций и различных микросред опухоли в опухолях GBM зависит от поддержки поведения CSC. Выбор lrECM имитирует богатую ламининами среду мозга и поддерживает клетки в органоидной культуре для самоорганизации и миграции путем инвазии. Хотя некоторые группы создали органоидную культуру без использования lrECM или EGF/FGF обогащенной среды24,28, которая может предложить более эффективный по времени способ этого метода культивирования и более сильный отбор онкогенной сигнализации для стимулирования роста, эти методы были выбраны для оптимизации среды простековых клеток, чтобы наилучшим образом установить клеточную гетерогенность органоидов. Как церебральные органоиды, так и органоиды GBM были сделаны с lrECM в литературе ранее 21,32,33. Хотя мы установили данные о популяциях опухолей, обнаруженных в органоидах, и пространственных вариациях, меньше известно о неопухолевых популяциях внутри органоидов и о том, как долго они выживают от исходных образцов пациентов. Некоторые пятна IHC (такие как CD45) могут предоставить эти данные и могут быть интересной точкой исследования в будущем с органоидами.
Знание предполагаемого использования органоидной культуры важно для выбора соответствующих методов. Создание органоидов из первичных образцов по сравнению с выращиванием однородных органоидов для конкретных экспериментов имеет несколько разные процедуры. Понимание того, как органоиды созревают и визуально заполняют каркас lrECM, важно для того, чтобы иметь возможность выделять надлежащее время и ресурсы на органоидную культуру. Разреженные области клеток в органоидах будут медленно расширяться и расти, чтобы заполнить lrECM, что может занять от 2 до 8 недель, в зависимости от поведения образца. Эта скорость роста в некоторой степени присуща каждому экземпляру; она сохраняется на разных партиях органоидов и вполне соответствует относительной скорости роста сфер. Органоиды могут сохраняться более 1 года и сохранять способность к образованию опухолей на ксенотрансплантате у мышей; однако рекомендуется выращивать их с определенной целью, чтобы не тратить лабораторные ресурсы (как материалы, так и время)4. Рост органоидов был протестирован в нескольких размерах и форматах скважин и показывает, что пластина размером 10 см является идеальной установкой для поддержания оптимальной жизнеспособности клеток, за которой следует 6-луночная пластина с тремя органоидами наскважину 34. Органоиды потребляют больше среды по сравнению с их двумерными аналогами культуры, и использование меньшего формата скважины не приводит к надлежащему обслуживанию. Например, одна скважина пластины формата 96 лунок не имеет достаточного пространства или объема среды относительно размера органоида для поддержания роста органоида.
Как устанавливают органоиды, наблюдательность важна для увеличения успеха. Первоначально органоиды будут потреблять среду медленно, но по мере того, как они становятся более плотными и зрелыми, они будут потреблять медиа быстрее. Добавление фенольного красного в среду может помочь служить индикатором потребления среды. Когда среда становится более желтой, это может побудить нас скорректировать схему кормления, будь то обмен большим объемом среды, увеличение общего количества среды в пластине, разделение органоидов между пластинами нескольких клеточных культур, чтобы идти в ногу с их ростом, или даже корректировка временной шкалы для экспериментов. 
Во многих отношениях органоиды являются неэффективным способом проведения исследований рака. Они имеют длительные временные масштабы и являются дорогостоящими и ресурсоемкими по сравнению с культурой сферы GBM. Однако, по сравнению с ксенотрансплантатами, полученными от пациентов, альтернативным методом воссоздания клеточного и микроокружного разнообразия, они более просты, менее дороги и контролируемы. Выбор того, когда лучше всего использовать органоиды, важен для исследователей рака. Они не предназначены для замены традиционной сферы или адгезивной культуры и не для замены моделей ксенотрансплантатов. Органоиды могут, при применении к правильному научному вопросу, сочетать преимущества обеих этих систем и могут позволить нам наблюдать биологию опухолевых клеток, которая в противном случае оставалась бы скрытой. Научное сообщество только начинает понимать, какие возможности обучения предлагают органоиды, но ясно, что они станут бесценным инструментом в будущем для понимания сложной биологии GBM.

Глиобластома (GBM) является наиболее часто встречающейся первичной опухолью головного мозга с мрачным прогнозом примерно 15 месяцев с момента постановки диагноза1. Методы лечения, которые эффективны в доклинических исследованиях, часто могут быть плохо эффективными у пациентов 2,3. Плохой клинический ответ объясняется многими факторами, включая микроокружательную гетерогенность GBM и сложные внутриопухолевые взаимодействия. Их может быть трудно воссоздать в лабораторных условиях с помощью традиционных методов адгезивной или сферной культуры4. Наличие подмножества самообновляющихся раковых стволовых клеток (CSC) в GBM также может способствовать этой сложности 5,6. CSC имеют решающее значение для распространения опухоли и поддержания роста опухоли, способствуя активному ангиогенезу, инвазии рака и устойчивости к терапии, включая облучение 7,8,9. CSC не равномерно распределены по опухолям, а скорее обогащаются в определенных микросредах, включая периваскулярную нишу и перинекротические области, каждая из которых обеспечивает четкую молекулярную регуляцию своих клеточных состояний 10,11,12,13,14. CSC не являются пассивными получателями сигналов микросреды, а вместо этого обладают способностью реконструировать свои собственные микросреды 7,15,16. Микроокружение CSC может способствовать поддержанию состояния стволовых клеток в ответ на такие давления, как дефицит питательных веществ, рН и гипоксия 17,18,19,20, что свидетельствует о важности этих условий в модельной системе. Поэтому рекапитуляция разнообразной клеточной микросреды в опухолях имеет решающее значение для понимания терапевтической резистентности и выявления новых методов лечения.
Трехмерная культура возросла в популярности в последниегоды на 21,22. Органоиды использовались в других типах рака, и основная цель поддержания клеток в качестве органоидов заключается в том, чтобы обеспечить рост гетерогенных клеточных популяций (многие из которых обычно могут быть вытеснены в более однородной культуре сферы) и пространственного разнообразия, рассматриваемого как региональные микросреды опухолей с генетической специфичностью 4,23,24,25,26 . Существует множество методов трехмерной культивирования раковых клеток, каждый из которых имеет преимущества и недостатки 27,28,29. Органоидная культура не предназначена для замены традиционной адгезивной или сферной культуры. Его лучше всего использовать в качестве дополнительного метода к двумерным методам, когда есть конкретные вопросы, где взаимодействие между микроокружением клеток и реакциями опухолевых клеток имеет решающее значение.
В этой статье описываются надежные и повторяемые методы получения органоидов GBM из первичных образцов пациентов или культур, полученных от пациента. Мы рассматриваем две различные цели для трехмерной органоидной культуры: (1) создание органоидов из первичной ткани пациента с максимальным потенциалом приживления независимо от однородности или (2) выращивание однородных органоидов для более количественного экспериментального использования. При установлении первичного образца в качестве органоидов нет необходимости фильтровать отдельные клетки или подсчитывать клетки, потому что сохранение максимального количества и типов клеток для установления исходной культуры является приоритетом. Однако при выращивании органоидов для сравнительных экспериментов необходима одноклеточная фильтрация и подсчет клеток, чтобы гарантировать, что реплицируемые органоиды сопоставимы по экспериментальной консистенции. В этом протоколе подробно описывается, как создавать органоидные культуры и создавать однородные органоиды, а также усовершенствованные методы встраивания и сохранения органоидов и стандартные эксперименты с клеточными культурами, включая иммуногистохимию, иммунофлуоресценцию и оценку общей жизнеспособности клеток в органоидах GBM.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3,3-Diaminobenzidine (DAB) tablets</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>08980681</td>
			<td>3,3-Diaminobenzidine (DAB) tablets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well PCR plates</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td>96-well PCR plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>SCR005</td>
			<td>Cell detachment solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-antimycotic</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15240062</td>
			<td>Antibiotic-antimycotic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 supplement minus vitamin A</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>12587001</td>
			<td>B-27 supplement minus vitamin A (50x)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GelCode Blue Stain Reagent</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>24590</td>
			<td>Bluing reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer (70 &#181;m)</td>
			<td>CellTreat Scientific</td>
			<td>229483</td>
			<td>Cell strainer (70 &#181;m)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTiter-Glo 3D</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G9681</td>
			<td>Luminescent cell viability assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clarifier 2</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>7301</td>
			<td>Nuclear hematoxylin clarifying reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear-Rite 3</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>6901</td>
			<td>xylene substitute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia Gill 2 Hematoxylin</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>72504</td>
			<td>Hematoxylin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamine in 0.85% NaCl</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>35050061</td>
			<td>Glutamine in 0.85% NaCl (200 mM)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>354234</td>
			<td>Laminin-enriched extracellular matrix</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini PAP pen</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>008877</td>
			<td>Hydrophobic barrier pen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>22-050-102</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal media minus phenol red</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>12349015</td>
			<td>Neurobasal media minus phenol red (500 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal donkey serum (NDS)</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>017-000-121</td>
			<td>Normal donkey serum (NDS)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde 4% in PBS</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>AAJ19943K2</td>
			<td>Paraformaldehyde 4% in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol red</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P0290</td>
			<td>Phenol red (0.5%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Gold Antifade Mountant with DAPI</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>P10144</td>
			<td>Liquid curing mountant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human EGF protein</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>236-EG-01M</td>
			<td>Recombinant human EGF protein (250 &#181;g/mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human FGF basic</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>4144-TC-01</td>
			<td>Recombinant human FGF basic (250 &#181;g/mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SignalStain Antibody Diluent</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>8112</td>
			<td>Antibody diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SignalStain Boost IHC Detection Reagent</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>8114</td>
			<td>Immunohistochemistry detection reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SignalStain Citrate Unmasking Solution</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>14746</td>
			<td>Citrate unmasking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single edge razor blade</td>
			<td>Uline</td>
			<td>H-595B</td>
			<td>Single edge razor blade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11360070</td>
			<td>Sodium pyruvate (100 mM)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Cryomolds</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25608-916</td>
			<td>Disposable cryomolds</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek O.C.T. Compound</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25608-930</td>
			<td>Optimal cutting temperature compound</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Stain</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>T10282</td>
			<td>Cell impermeant stain (0.4%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>X3P-1GAL</td>
			<td>Xylene</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

maintaining human glioblastoma cellular diversity ex vivo using three-dimensional organoid culture

Глиобластома (ГБМ) является наиболее часто встречающимся первичным злокачественным раком головного мозга с крайне плохим прогнозом. Внутриопухолевые клеточные и молекулярные различия, а также сложные взаимодействия между микроокружениями опухоли могут сделать поиск эффективных методов лечения проблемой. Традиционные методы адгезивного или сферного культивирования могут маскировать такие сложности, тогда как трехмерная органоидная культура может повторять региональные микроокружательные градиенты. Органоиды представляют собой метод трехмерной культуры GBM, который лучше имитирует архитектуру опухоли пациента, содержит фенотипически разнообразные клеточные популяции и может быть использован для экспериментов со средней пропускной способностью. Хотя трехмерная органоидная культура более трудоемка и трудоемка по сравнению с традиционной культурой, она предлагает уникальные преимущества и может служить для преодоления разрыва между существующими системами in vitro и in vivo . Органоиды зарекомендовали себя как бесценные инструменты в арсенале биологов рака, чтобы лучше понять поведение опухоли и механизмы резистентности, и их применение только продолжает расти. Здесь приведены подробные сведения о методах генерации и поддержания органоидов GBM. Также описаны инструкции о том, как выполнять встраивание и секционирование образца органоида с использованием как замороженных, так и парафиновых методов встраивания, а также рекомендации по протоколам иммуногистохимии и иммунофлуоресценции на органоидных участках и измерению общей жизнеспособности органоидных клеток.

На рисунке 1 показан ранний рост органоидов, наблюдаемый с помощью световой микроскопии при 10-кратном увеличении. На рисунке 1A показана миграция и инвазия одиночных ячеек через lrECM в центральном представлении. Клетки будут продолжать расширяться и «колонизировать» lrECM, и они будут казаться более плотными и в конечном итоге непрозрачными при визуальном осмотре. На рисунке 1B показано несколько зрелых органоидов (через 7 недель) без увеличения, относительно размера копейки.
На рисунке 2 показано иммуногистохимическое окрашивание органоидов GBM для фосфогистона H3, маркера активной пролиферации. Большинство высокопролиферативных клеток наблюдаются в органоидном периметре по сравнению с органоидным ядром. Положительное окрашивание будет иметь коричневый / медный вид.
На рисунке 3 описан процесс гомогенизации и измерения общего количества клеток в органоидах GBM с использованием 3D-специфического анализа жизнеспособности люминесцентных клеток. Из-за большого количества клеток, присутствующих в органоидах GBM, более крупная органоидная структура первоначально гомогенизируется путем тритурации в люминесцентном реагенте. Затем фракции общего органоидного лизата загружают в отдельные скважины и разбавляют дополнительным люминесцентным пробирным реагентом перед инкубацией и считыванием на соответствующем многолуночном пластинчатом считывателе.
На рисунке 4 представлены данные управления DMSO (common vehicle) для органоидов. Построенные данные демонстрируют внутриорганоидную и межорганоидную консистенцию. Данные о люминесцентной жизнеспособности обычно нормализуются для элементов управления для каждого образца при генерации экспериментальных данных.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63745/63745fig01.jpg"> Рисунок 1: Просмотр через световой микроскоп (10x). (A) Ранний рост органоидов, демонстрирующий миграцию/инвазию клеток GBM по всему богатому ламинином внеклеточному матриксу. (B) Зрелые органоиды относительно размера копейки. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63745/63745fig01large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63745/63745fig02.jpg"> Рисунок 2: Иммуногистохимия органоидов GBM. (A, B) органоиды GBM, показывающие фосфо-гистоновые H3 окрашенные клетки для активной пролиферации. Масштаббары составляют 600 мкм и 300 мкм для А и В соответственно. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63745/63745fig02large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63745/63745fig03.jpg"> Рисунок 3: Протокол жизнеспособности люминесцентных клеток для органоидов. (А) Переместите отдельные органоиды в небольшие центрифужные трубки и удалите лишние среды. (B) Добавьте 500 мкл 1:1 PBS и смесь для анализа жизнеспособности люминесцентных клеток в каждую трубку и пипетку агрессивно, чтобы разрушить органоид. (C) Добавить 25 мкл этой органоидной смеси и 75 мкл той же смеси для анализа жизнеспособности 1:1 PBS и люминесцентных клеток в каждую лунку пластины из 96 лунок. (D) Поместите на шейкер на 2 мин, затем инкубируйте в течение 20 мин на RT, а затем считывайте люминесценцию на пластинчатом считывателе. Рисунок выполнен с использованием BioRender.com. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63745/63745fig03large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63745/63745fig04.jpg"> Рисунок 4: Жизнеспособность клеток. Данные о жизнеспособности клеток для органоидов в 0,1% диметилсульфоксиде (ДМСО) для шести технических реплик четырех органоидов для четырех образцов пациентов. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63745/63745fig04large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Компонент</td>
			<td>Количество</td>
		</tr><tr><td>Нейробазальная среда минус фенол красный</td>
			<td>500 мл</td>
		</tr><tr><td>Добавка B-27 минус витамин А (50x)</td>
			<td>10 мл</td>
		</tr><tr><td>Антибиотик-антимикотик (100x)</td>
			<td>5 мл</td>
		</tr><tr><td>Пируват натрия (100 мМ)</td>
			<td>5 мл</td>
		</tr><tr><td>Глютамин в 0,85% NaCl (200 мМ)</td>
			<td>5 мл</td>
		</tr><tr><td>Рекомбинантный человеческий FGF основной (250 мкг/мл)</td>
			<td>20 мкл</td>
		</tr><tr><td>Рекомбинантный человеческий белок EFG (250 мкг/мл)</td>
			<td>20 мкл</td>
		</tr><tr><td>Фенол красный</td>
			<td>500 мкл</td>
		</tr></tbody></table>Таблица 1: Состав нейробазальной среды полной (NBMc)
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Реагент</td>
			<td>Время</td>
		</tr><tr><td>50% этанол</td>
			<td>3 мин</td>
		</tr><tr><td>75% этанол</td>
			<td>3 мин</td>
		</tr><tr><td>95% этанол</td>
			<td>3 мин</td>
		</tr><tr><td>95% этанол</td>
			<td>4 мин</td>
		</tr><tr><td>100% этанол</td>
			<td>2 мин</td>
		</tr><tr><td>100% этанол</td>
			<td>3 мин</td>
		</tr><tr><td>100% этанол</td>
			<td>4 мин</td>
		</tr><tr><td>Заменитель ксилола</td>
			<td>2 мин</td>
		</tr><tr><td>Заменитель ксилола</td>
			<td>3 мин</td>
		</tr><tr><td>Заменитель ксилола</td>
			<td>4 мин</td>
		</tr><tr><td>Парафин</td>
			<td>15 мин</td>
		</tr><tr><td>Парафин</td>
			<td>15 мин</td>
		</tr></tbody></table>Таблица 2: График обработки малых органоидов (диаметром менее 3 мм)
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Реагент</td>
			<td>Время</td>
		</tr><tr><td>50% этанол</td>
			<td>6 мин</td>
		</tr><tr><td>75% этанол</td>
			<td>6 мин</td>
		</tr><tr><td>95% этанол</td>
			<td>5 мин</td>
		</tr><tr><td>95% этанол</td>
			<td>8 мин</td>
		</tr><tr><td>100% этанол</td>
			<td>5 мин</td>
		</tr><tr><td>100% этанол</td>
			<td>5 мин</td>
		</tr><tr><td>100% этанол</td>
			<td>8 мин</td>
		</tr><tr><td>Заменитель ксилола</td>
			<td>5 мин</td>
		</tr><tr><td>Заменитель ксилола</td>
			<td>5 мин</td>
		</tr><tr><td>Заменитель ксилола</td>
			<td>8 мин</td>
		</tr><tr><td>Парафин</td>
			<td>30 мин</td>
		</tr><tr><td>Парафин</td>
			<td>30 мин</td>
		</tr></tbody></table>Таблица 3: График обработки крупных органоидов (диаметром более 3 мм)
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Реагент</td>
			<td>Время</td>
		</tr><tr><td>Гематоксилин</td>
			<td>2 мин</td>
		</tr><tr><td>Запуск diH2O</td>
			<td>2 мин</td>
		</tr><tr><td>Ядерный гематоксилин осветляющий реагент</td>
			<td>1 мин</td>
		</tr><tr><td>Запуск diH2O</td>
			<td>1 мин</td>
		</tr><tr><td>Реагент Bluing</td>
			<td>1 мин</td>
		</tr><tr><td>Запуск diH2O</td>
			<td>2 мин</td>
		</tr><tr><td>70% этанол</td>
			<td>1 мин</td>
		</tr><tr><td>100% этанол</td>
			<td>1 мин</td>
		</tr><tr><td>100% этанол</td>
			<td>1 мин</td>
		</tr><tr><td>Заменитель ксилола</td>
			<td>2 мин</td>
		</tr><tr><td>Заменитель ксилола</td>
			<td>2 мин</td>
		</tr></tbody></table>Таблица 4: Гематоксилин контрокрашен

Watch this Scientific Journal Video about Maintaining Human Glioblastoma Cellular Diversity Ex vivo using Three-Dimensional Organoid Culture at JoVE.com

Maintaining Human Glioblastoma Cellular Diversity Ex vivo using Three-Dimensional Organoid Culture

Здесь мы описываем метод генерации органоидов глиобластомы (GBM) из первичных образцов пациента или клеточных культур пациента и поддержания их до зрелости. Эти органоиды GBM содержат фенотипически разнообразные клеточные популяции и воссоздают микроокружение опухоли ex vivo.

Поддержание клеточного разнообразия глиобластомы человека Ex vivo с использованием трехмерной органоидной культуры

Glioblastoma (GBM) is the most commonly occurring primary malignant brain cancer with an extremely poor prognosis. Intra-tumoral cellular and molecular ...

Поиск методов лечения глиобластомы является сложной задачей из-за клеточного разнообразия, которое существует в опухолях, и взаимодействий между различными микросредами. Органоиды могут помочь воссоздать часть этого пространственного разнообразия, и мы можем использовать это, чтобы лучше понять биологию опухолей. В то время как традиционные методы культивирования клеток, как правило, производят однородные популяции опухолевых клеток, органоиды могут лучше имитировать молекулярное и клеточное разнообразие глиобластомы и лучше моделировать внутриопухолевые взаимодействия.Органоиды могут быть использованы для исследования эффективности препарата и механизмов резистентности. Устойчивость к клинической терапии может проявляться только у органоидов, а не в традиционной отраслевой культуре, отражающей клиническую реальность этого заболевания. Органоиды могут помочь продемонстрировать региональные эффекты химиотерапии.Они могут быть использованы для открытия новых нишевых специфических методов лечения, а также могут выступать в качестве прогностического инструмента для персонализированной медицины в будущем. Некоторые материалы, используемые для создания органоидов, чувствительны к температуре, и пренебрежение поддержанием этих материалов при их надлежащей температуре может привести к трудностям в создании или поддержании органоидов. Начните подготовку органоидных форм под культуральным капюшоном, сняв восковую бумагу с листа парапленки и поместив ее между двумя стерильными 96-луночными полимеразными цепными реакциями или пластинами ПЦР.Убедитесь, что внутренняя часть парапленки чистая. Приложите равномерное давление к верхней пластине, чтобы сформировать небольшие ямочки глубиной два миллиметра в парапленке, не создавая отверстий. Отделите пластины.Парапленка с ямочками будет прилипать к верхней пластине. Затем поместите верхнюю пластину на сухой лед на 30 секунд. Используйте стерильные щипцы, чтобы быстро вытащить парапленку с верхней пластины.Замороженную парапленку легче удалить. Поместите готовую форму парапленки в закрытую стерильную 10-сантиметровую чашку для культивирования клеток. Чтобы приготовить одноклеточную суспензию из глиобластомы или адгезивной культуры GBM, удалите использованную среду с пластины.Затем добавляют два миллилитра раствора для отсоединения клеток при комнатной температуре в пластину и инкубируют пластину при 37 градусах в течение трех минут. После подтверждения отслоения клеток от пластины под микроскопом добавьте восемь миллилитров полной нейробазальной среды, или среды NBMc, чтобы нейтрализовать раствор отслоения клеток. Процедите суспензию через один 70-микронный клеточный сетчатый фильтр.Раскрутите клетки в 120 раз G в течение пяти минут. Затем удалите супернатант и повторно суспендируйте клетки в одном миллилитре NBMc. Подсчитайте клетки из одноклеточной суспензии с помощью клеточного непроницаемого пятна.Чтобы сделать органоиды из одноклеточной суспензии, добавьте соответствующее количество богатого ламинином внеклеточного матрикса, или lrECM, в небольшую центрифужную трубку в ведре со льдом или холодном блоке. Приготовьте клеточную смесь, содержащую 20 000 клеток на органоид. Тщательно перемешайте смесь клеточной суспензии lrECM, чтобы избежать оседания клеток, что приведет к образованию неоднородных органоидов.Затем аккуратно выложите 20 микролитров смеси на форму парапленки, чтобы сформировать жемчужную каплю. Убедитесь, что наконечник пипетки охлаждается каждые два-три органоида, чтобы предотвратить полимеризацию lrECM. После того, как желаемое количество органоидов будет пипетировано на парапленочную форму в 10-сантиметровой культуральной пластине, инкубируйте органоиды при 37 градусах Цельсия в течение одного-двух часов в инкубаторе клеточной культуры.После того, как органоиды затвердеют, аккуратно смойте органоиды с парапленочной формы средой NBMc с помощью наконечника P1000 и соберите их в новую 10-сантиметровую культуральную пластину, содержащую 20 миллилитров NBMc. Поместите культуральную пластину в инкубатор без встряхивания в течение четырех дней. Через четыре дня замените носитель в пластине.Для этого поместите лист темной бумаги под тарелку для культивирования клеток. Наклоните тарелку и подождите 20 секунд. Когда органоиды полностью осядут на дне тарелки, медленно удалите среду с помощью широко открывающейся стеклянной пипетки.После добавления новых носителей поместите пластину в инкубатор на орбитальный шейкер со скоростью 80 оборотов в минуту и обменивайтесь средой каждые два-три дня после этого. Рост органоида наблюдали с помощью световой микроскопии. На центральном снимке ранний рост органоидов показал миграцию и одноклеточную инвазию через lrECM.Зрелые органоиды через семь недель были относительно размера копейки. Иммуногистохимическое окрашивание органоидов GBM фосфогистоном H3 выявило высокопролиферативные клетки с коричневым или фиолетовым видом в органоидном периметре по сравнению с ядром. Данные о жизнеспособности клеток для органоидов в 0,1% DMSO продемонстрировали интраорганоидную и межорганоидную консистенцию.Обратите внимание на органоидную биомассу и подкисление сред. Если органоиды проходят через среды слишком быстро, обязательно чаще обменивайтесь средами или расщепляйте органоиды между дополнительными пластинами. Зрелые органоиды могут быть использованы для экспериментов с терапией или встроены и разделены для использования с иммуногистохимией или иммунофлуоресценцией.Диссоциированные органоиды могут быть использованы для анализа FACS. Эти органоиды были недавно использованы в трехмерном функциональном скрининге для обнаружения мишеней, необходимых в пространственно различных нишах раковых стволовых клеток. Мы также используем эти модели для определения приоритетов различных лекарств и методов лечения до тестирования in vivo.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Maintaining Human Glioblastoma Cellular Diversity Ex vivo using Three-Dimensional Organoid Culture

Ex Vivo Imaging of Resident CD8 T Lymphocytes in Human Lung Tumor Slices Using Confocal Microscopy

Ex Vivo Imaging of Resident CD8 T Lymphocytes in Human Lung Tumor Slices Using Confocal Microscopy

Ex Vivo Визуализация-резидентов CD8 Т-лимфоцитов в опухоли легких человека кусочки с помощью конфокальной микроскопии

CD8 T cell are key players in the fight against cancer. In order for CD8 T cells to kill tumor cells they need to enter into the tumor, migrate within the ...

Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

Молекулярные томография флуоресценции для изображений в Vivo ксенотрасплантатов глиобластомы

Tumorigenicity is the capability of cancer cells to form a tumor mass. A widely used approach to determine if the cells are tumorigenic is by injecting ...

Longitudinal Morphological and Physiological Monitoring of Three-dimensional Tumor Spheroids Using Optical Coherence Tomography

Продольные морфологических и физиологических мониторинг сфероидов трехмерной опухоли с помощью оптическая когерентная томография

Tumor spheroids have been developed as a three-dimensional (3D) cell culture model in cancer research and anti-cancer drug discovery. However, currently, ...

Fully Human Tumor-based Matrix in Three-dimensional Spheroid Invasion Assay

Полностью человека опухоли на основе матрицы в трехмерном Сфероидных вторжения анализ

Two-dimensional cell culture-based assays are commonly used in in vitro cancer research. However, they lack several basic elements that form the tumor ...

Evaluating the Differentiation Capacity of Mouse Prostate Epithelial Cells Using Organoid Culture

Оценка дифференциации потенциала мыши простаты эпителиальных клеток с использованием органоидной культуры

The prostate epithelium is comprised predominantly of basal and luminal cells. In vivo lineage tracing has been utilized to define the differentiation ...

Co-culture of Glioblastoma Stem-like Cells on Patterned Neurons to Study Migration and Cellular Interactions

Кокультура стволовых клеток глиобластомы на узорчатых нейронах для изучения миграции и клеточных взаимодействий

Glioblastomas (GBMs), grade IV malignant gliomas, are one of the deadliest types of human cancer because of their aggressive characteristics. Despite ...

Three-Dimensional In Vitro Biomimetic Model of Neuroblastoma Using Collagen-Based Scaffolds

Three-Dimensional In Vitro Biomimetic Model of Neuroblastoma Using Collagen-Based Scaffolds

Трехмерная биомиметическая модель нейробластомы in vitro с использованием скаффолдов на основе коллагена

Neuroblastoma is the most common extracranial solid tumor in children, accounting for 15% of overall pediatric cancer deaths. The native tumor tissue is a ...

Ex Vivo Organoid Model of Adenovirus-Cre Mediated Gene Deletions in Mouse Urothelial Cells

Ex Vivo Organoid Model of Adenovirus-Cre Mediated Gene Deletions in Mouse Urothelial Cells

Ex Vivo Органоидная модель аденовирусно-cre опосредованных делеций генов в уротелиальных клетках мышей

Bladder cancer is an understudied area, particularly in genetically engineered mouse models (GEMMs). Inbred GEMMs with tissue-specific Cre and loxP sites ...

Phospholipid Mediator Induced Transformation in Three-Dimensional Cultures

Фосфолипидный медиатор индуцированная трансформация в трехмерных культурах

Several models have been developed to study cancer, such as rodent models and established cell lines. Valuable insights into carcinogenesis have been ...

Three-Dimensional Culture of Murine Colonic Crypts to Study Intestinal Stem Cell Function Ex Vivo

Three-Dimensional Culture of Murine Colonic Crypts to Study Intestinal Stem Cell Function Ex Vivo

Трехмерная культура склепков толстой кишки мышей для изучения функции стволовых клеток кишечника Ex vivo

The intestinal epithelium regenerates every 5-7 days, and is controlled by the intestinal epithelial stem cell (IESC) population located at the bottom of ...