Name: maintaining human glioblastoma cellular diversity ex vivo using three-dimensional organoid culture
Uploaded: 2022-08-25T13:10:00
Duration: 7 min 11 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Maintaining Human Glioblastoma Cellular Diversity Ex vivo using Three-Dimensional Organoid Culture at JoVE.com

Vi vill tacka Dr. Justin Lathia för hans ovärderliga råd och pågående stöd. Vi tackar också Katrina Fife, Lisa Wallace och Maya Camhi för deras utmärkta tekniska support.

<ol>
	<li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiotherapy+plus+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+for+glioblastoma.">Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma.</a> New England Journal of Medicine. 352 (10), 987-996 (2005).</li><li>Heffernan, J. M., Sirianni, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+microenvironmental+regulation+of+glioblastoma+stem+cells:+a+biomaterials+perspective.">Modeling microenvironmental regulation of glioblastoma stem cells: a biomaterials perspective.</a> Frontiers in Materials. 5, 7 (2018).</li><li>Zanders, E. D., Svensson, F., Bailey, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapy+for+glioblastoma:+is+it+working.">Therapy for glioblastoma: is it working.</a> Drug Discovery Today. 24 (5), 1193-1201 (2019).</li><li>Hubert, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Three-dimensional+organoid+culture+system+derived+from+human+glioblastomas+recapitulates+the+hypoxic+gradients+and+cancer+stem+cell+heterogeneity+of+tumors+found+in+vivo.">A Three-dimensional organoid culture system derived from human glioblastomas recapitulates the hypoxic gradients and cancer stem cell heterogeneity of tumors found in vivo.</a> Cancer Research. 76 (8), 2465-2477 (2016).</li><li>Lathia, J. D., Heddleston, J. M., Venere, M., Rich, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deadly+teamwork:+neural+cancer+stem+cells+and+the+tumor+microenvironment.">Deadly teamwork: neural cancer stem cells and the tumor microenvironment.</a> Cell Stem Cell. 8 (5), 482-485 (2011).</li><li>Meyer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cell-derived+clonal+analysis+of+human+glioblastoma+links+functional+and+genomic+heterogeneity.">Single cell-derived clonal analysis of human glioblastoma links functional and genomic heterogeneity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (3), 851-856 (2015).</li><li>Bao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell-like+glioma+cells+promote+tumor+angiogenesis+through+vascular+endothelial+growth+factor.">Stem cell-like glioma cells promote tumor angiogenesis through vascular endothelial growth factor.</a> Cancer Research. 66 (16), 7843-7848 (2006).</li><li>Yu, S. C., Bian, X. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enrichment+of+cancer+stem+cells+based+on+heterogeneity+of+invasiveness.">Enrichment of cancer stem cells based on heterogeneity of invasiveness.</a> Stem Cell Reviews and Reports. 5 (1), 66-71 (2009).</li><li>Bao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glioma+stem+cells+promote+radioresistance+by+preferential+activation+of+the+DNA+damage+response.">Glioma stem cells promote radioresistance by preferential activation of the DNA damage response.</a> Nature. 444 (7120), 756-760 (2006).</li><li>Vescovi, A. L., Galli, R., Reynolds, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+tumour+stem+cells.">Brain tumour stem cells.</a> Nature Reviews. Cancer. 6 (6), 425-436 (2006).</li><li>Zhu, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cells+create+a+stem+cell+niche+in+glioblastoma+by+providing+NOTCH+ligands+that+nurture+self-renewal+of+cancer+stem-like+cells.">Endothelial cells create a stem cell niche in glioblastoma by providing NOTCH ligands that nurture self-renewal of cancer stem-like cells.</a> Cancer Research. 71 (18), 6061-6072 (2011).</li><li>Calabrese, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+perivascular+niche+for+brain+tumor+stem+cells.">A perivascular niche for brain tumor stem cells.</a> Cancer Cell. 11 (1), 69-82 (2007).</li><li>Charles, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+nitric+oxide+activates+notch+signaling+and+promotes+stem-like+character+in+PDGF-induced+glioma+cells.">Perivascular nitric oxide activates notch signaling and promotes stem-like character in PDGF-induced glioma cells.</a> Cell Stem Cell. 6 (2), 141-152 (2010).</li><li>Seidel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+hypoxic+niche+regulates+glioblastoma+stem+cells+through+hypoxia+inducible+factor+2+alpha.">A hypoxic niche regulates glioblastoma stem cells through hypoxia inducible factor 2 alpha.</a> Brain. 133, 983-995 (2010).</li><li>Yan, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glioma+cancer+stem+cells+secrete+Gremlin1+to+promote+their+maintenance+within+the+tumor+hierarchy.">Glioma cancer stem cells secrete Gremlin1 to promote their maintenance within the tumor hierarchy.</a> Genes &amp; Development. 28 (10), 1085-1100 (2014).</li><li>Cheng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glioblastoma+stem+cells+generate+vascular+pericytes+to+support+vessel+function+and+tumor+growth.">Glioblastoma stem cells generate vascular pericytes to support vessel function and tumor growth.</a> Cell. 153 (1), 139-152 (2013).</li><li>Flavahan, W. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+tumor+initiating+cells+adapt+to+restricted+nutrition+through+preferential+glucose+uptake.">Brain tumor initiating cells adapt to restricted nutrition through preferential glucose uptake.</a> Nature Neuroscience. 16 (10), 1373-1382 (2013).</li><li>Hjelmeland, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acidic+stress+promotes+a+glioma+stem+cell+phenotype.">Acidic stress promotes a glioma stem cell phenotype.</a> Cell Death and Differentiation. 18 (5), 829-840 (2011).</li><li>Bar, E. E., Lin, A., Mahairaki, V., Matsui, W., Eberhart, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+increases+the+expression+of+stem-cell+markers+and+promotes+clonogenicity+in+glioblastoma+neurospheres.">Hypoxia increases the expression of stem-cell markers and promotes clonogenicity in glioblastoma neurospheres.</a> The American Journal of Pathology. 177 (3), 1491-1502 (2010).</li><li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia-inducible+factors+regulate+tumorigenic+capacity+of+glioma+stem+cells.">Hypoxia-inducible factors regulate tumorigenic capacity of glioma stem cells.</a> Cancer Cell. 15 (6), 501-513 (2009).</li><li>Azzarelli, R., Ori, M., Philpott, A., Simons, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+model+of+glioblastoma+by+co-culturing+tumor+stem+cells+with+human+brain+organoids.">Three-dimensional model of glioblastoma by co-culturing tumor stem cells with human brain organoids.</a> Biology Open. 10 (2), 056416 (2021).</li><li>Linkous, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+patient-derived+glioblastoma+with+cerebral+organoids.">Modeling patient-derived glioblastoma with cerebral organoids.</a> Cell Reports. 26 (12), 3203-3211 (2019).</li><li>da Silva, B., Mathew, R. K., Polson, E. S., Williams, J., Wurdak, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+glioblastoma+spheroid+infiltration+of+early-stage+cerebral+organoids+models+brain+tumor+invasion.">Spontaneous glioblastoma spheroid infiltration of early-stage cerebral organoids models brain tumor invasion.</a> SLAS Discovery: Advancing Life Sciences R &amp; D. 23 (8), 862-868 (2018).</li><li>Jacob, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Patient-derived+glioblastoma+organoid+model+and+biobank+recapitulates+inter-+and+intra-tumoral+heterogeneity.">A Patient-derived glioblastoma organoid model and biobank recapitulates inter- and intra-tumoral heterogeneity.</a> Cell. 180 (1), 188-204 (2020).</li><li>Boretto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+organoids+from+endometrial+disease+capture+clinical+heterogeneity+and+are+amenable+to+drug+screening.">Patient-derived organoids from endometrial disease capture clinical heterogeneity and are amenable to drug screening.</a> Nature Cell Biology. 21 (8), 1041-1051 (2019).</li><li>Huang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ductal+pancreatic+cancer+modeling+and+drug+screening+using+human+pluripotent+stem+cell-and+patient-derived+tumor+organoids.">Ductal pancreatic cancer modeling and drug screening using human pluripotent stem cell-and patient-derived tumor organoids.</a> Nature Medicine. 21 (11), 1364-1371 (2015).</li><li>Ledur, P. F., Onzi, G. R., Zong, H., Lenz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+conditions+defining+glioblastoma+cells+behavior:+what+is+the+impact+for+novel+discoveries.">Culture conditions defining glioblastoma cells behavior: what is the impact for novel discoveries.</a> Oncotarget. 8 (40), 69185-69197 (2017).</li><li>Lenin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+drug+screening+pipeline+using+2D+and+3D+patient-derived+in+vitro+models+for+preclinical+analysis+of+therapy+response+in+glioblastoma.">A drug screening pipeline using 2D and 3D patient-derived in vitro models for preclinical analysis of therapy response in glioblastoma.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (9), 4322 (2021).</li><li>Rybin, M. J., Ivan, M. E., Ayad, N. G., Zeier, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+models+of+glioblastoma+and+their+role+in+drug+discovery.">Organoid models of glioblastoma and their role in drug discovery.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 15 (4), 605255 (2021).</li><li>Shakya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+lipid+metabolism+marks+glioblastoma+stem+and+non-stem+cells+in+separate+tumor+niches.">Altered lipid metabolism marks glioblastoma stem and non-stem cells in separate tumor niches.</a> Acta Neuropathologica Communications. 9 (1), 101 (2021).</li><li>Lee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+stem+cells+derived+from+glioblastomas+cultured+in+bFGF+and+EGF+more+closely+mirror+the+phenotype+and+genotype+of+primary+tumors+than+do+serum-cultured+cell+lines.">Tumor stem cells derived from glioblastomas cultured in bFGF and EGF more closely mirror the phenotype and genotype of primary tumors than do serum-cultured cell lines.</a> Cancer Cell. 9 (5), 391-403 (2006).</li><li>Bian, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+cerebral+organoids+model+brain+tumor+formation.">Genetically engineered cerebral organoids model brain tumor formation.</a> Nature Methods. 15 (8), 631-639 (2018).</li><li>Lancaster, M. A., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+cerebral+organoids+from+human+pluripotent+stem+cells.">Generation of cerebral organoids from human pluripotent stem cells.</a> Nature Protocols. 9 (10), 2329-2340 (2014).</li><li>Sundar, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+organoid+culture+unveils+resistance+to+clinical+therapies+in+adult+and+pediatric+glioblastoma.">Three-dimensional organoid culture unveils resistance to clinical therapies in adult and pediatric glioblastoma.</a> Translational Oncology. 15 (1), 101251 (2021).</li></ol>

Författarna har inga konflikter att avslöja.

GBM-organoider är en kompletterande odlingsmetod till traditionella sfärer som inkluderar större cellulär och mikromiljö heterogenitet 4,22,30. Även om det är mer tids- och resurskrävande kan organoidkultur erbjuda värdefull insikt i intratumörbeteende och mekanismer för läkemedelsresistens.
GBM drivs av en befolkning av CSC 5,31, och dessa metoder utvecklades för att möjliggöra fortsatt tillväxt och självförnyelse av denna CSC-befolkning. Epidermal tillväxtfaktor (EGF) och fibroblasttillväxtfaktor (FGF) är kända för att förbättra stamcellsunderhåll och tillväxt och ge aktiv receptortyrosinkinas (RTK) signalering. Bildandet av heterogena cellulära populationer och distinkta tumörmikromiljöer inom GBM-tumörer är beroende av att stödja CSC-beteenden. Valet av en lrECM efterliknar den lamininrika hjärnmiljön och stöder cellerna i organoidkulturen att självorganisera och migrera genom invasion. Även om vissa grupper har etablerat organoidkultur utan användning av ett lrECM- eller EGF / FGF-berikat media24,28, vilket kan erbjuda ett mer tidseffektivt sätt för denna odlingsmetod och starkare urval av onkogen signalering för att driva tillväxt, valdes dessa metoder för att optimera pro-stamcellsmiljön för att bäst fastställa organoidernas cellulära heterogenitet. Både cerebrala organoider och GBM-organoider har gjorts med lrECM i litteraturen tidigare 21,32,33. Även om vi har etablerat data om tumörpopulationerna som finns inom organoider och den rumsliga variationen, är mindre känt om icke-tumörpopulationer inom organoiderna och hur länge de överlever från de ursprungliga patientproverna. Vissa IHC-fläckar (som CD45) kan ge dessa data och kan vara en intressant forskningspunkt i framtiden med organoider.
Att känna till den avsedda användningen för organoidkultur är viktigt för att välja lämpliga metoder. Att etablera organoider från primära prover kontra växande enhetliga organoider för specifika experiment har något olika procedurer. Att ha en uppskattning för hur organoider mognar och visuellt fyller i lrECM-ställningen är viktigt för att kunna avsätta rätt tid och resurser till organoidkultur. Glesa regioner av celler i organoider kommer långsamt att expandera och växa för att fylla lrECM, vilket kan ta allt från 2-8 veckor, beroende på provets beteende. Denna tillväxttakt är något inneboende för varje exemplar; Det bevaras över olika partier av organoider och ganska förenligt med den relativa hastigheten för sfärtillväxt. Organoider kan bibehållas i över 1 år och behålla tumörbildningsförmåga på xenograft till möss; Det rekommenderas dock att odla dem med ett tydligt syfte att inte slösa bort laboratorieresurser (både material och tid)4. Organoidtillväxt har testats i flera brunnsstorlekar och format och visar att en 10 cm platta är den perfekta inställningen för att upprätthålla optimal cellviabilitet, följt av en 6-brunnsplatta med tre organoider per brunn34. Organoider konsumerar mer media jämfört med deras tvådimensionella kulturmotsvarigheter, och att använda ett mindre brunnformat leder inte till korrekt underhåll. Till exempel har en brunn i en 96-brunnsformatplatta inte tillräckligt med utrymme eller medievolym i förhållande till storleken på en organoid för att upprätthålla organoidtillväxt.
Som organoider etablerar är det viktigt att vara observant för att öka framgången. Inledningsvis kommer organoider att konsumera media långsamt, men när de blir tätare och mer mogna kommer de att konsumera media snabbare. Att lägga till fenolrött i media kan hjälpa till att fungera som en indikator på mediekonsumtion. När mediet är mer gult kan det få oss att justera matningsmönstret, oavsett om det är att utbyta en högre volym media, öka den totala mediemängden i plattan, dela organoider mellan flera cellodlingsplattor för att hålla jämna steg med deras tillväxt eller till och med justera tidslinjen för experiment. 
På många sätt är organoider ett ineffektivt sätt att bedriva cancerforskning. De involverar långa tidsskalor och är dyra och resurstunga jämfört med GBM-sfärkulturen. Men jämfört med patient-härledda xenografter, en alternativ metod för att återskapa cellulär och mikromiljömässig mångfald, är de enklare, billigare och kontrollerbara. Val av när organoider ska användas bäst är viktigt för cancerforskare. De är inte avsedda att ersätta traditionell sfär eller vidhäftande kultur och inte att ersätta xenograftmodeller. Organoider kan, när de tillämpas på rätt vetenskaplig fråga, kombinera fördelarna med båda dessa system och kan tillåta oss att observera tumörcellbiologi som annars skulle förbli dold. Det vetenskapliga samfundet börjar bara förstå vilka inlärningsmöjligheter organoider erbjuder, men det är uppenbart att de kommer att vara ett ovärderligt verktyg i framtiden för att förstå GBM: s komplexa biologi.

Glioblastom (GBM) är den vanligaste primära hjärntumören med en dyster prognos på cirka 15 månader från diagnos1. Behandlingar som är effektiva i prekliniska studier kan ofta vara dåligt effektiva hos patienter 2,3. Dåligt kliniskt svar tillskrivs många faktorer, inklusive mikromiljömässig heterogenitet hos GBM och komplexa intratumörala interaktioner. Dessa kan vara svåra att återskapa i laboratoriemiljö med traditionella vidhäftande eller sfärodlingsmetoder4. Förekomsten av en delmängd av självförnyande cancerstamceller (CSC) inom GBM kan också bidra till denna komplexitet 5,6. CSC är avgörande för tumörutbredning och upprätthåller tumörtillväxt genom att främja aktiv angiogenes, cancerinvasion och resistens mot terapier inklusive strålning 7,8,9. CSC är inte jämnt fördelade över tumörer utan berikas snarare inom specifika mikromiljöer, inklusive perivaskulär nisch och perinecrotic regioner, som var och en ger distinkt molekylär reglering av deras cellulära tillstånd 10,11,12,13,14. CSC är inte passiva mottagare av mikromiljösignaler utan har istället förmågan att omforma sina egna mikromiljöer 7,15,16. Mikromiljön i en CSC kan främja upprätthållandet av stamcellstillstånd som svar på tryck som näringsbrist, pH och hypoxi17,18,19,20, vilket tyder på vikten av dessa förhållanden i ett modellsystem. Rekapitulation av den olika cellulära mikromiljön inom tumörer är därför avgörande för att förstå terapeutisk resistens och identifiera nya terapier.
Tredimensionell kultur har ökat i popularitet de senaste åren21,22. Organoider har använts i andra typer av cancer, och det primära målet att upprätthålla celler som organoider är att möjliggöra tillväxt av heterogena cellpopulationer (varav många normalt kan konkurreras ut i mer homogen sfärkultur) och rumslig mångfald, sett som regionala tumörmikromiljöer med genetisk specificitet 4,23,24,25,26 . Det finns många metoder för tredimensionell odling av cancerceller, som var och en har fördelar och nackdelar27,28,29. Organoidkultur är inte avsedd att ersätta traditionell vidhäftande eller sfärkultur. Det används bäst som en kompletterande teknik till tvådimensionella metoder när det finns specifika frågor där interaktionen mellan cellmikromiljö och tumörcellsvar är kritisk.
Den här artikeln beskriver tillförlitliga och repeterbara metoder för att generera GBM-organoider från antingen primära patientprover eller patient-härledda kulturer. Vi adresserar två olika mål för tredimensionell organoidodling: (1) etablering av organoider från primär patientvävnad, med maximal engraftmentpotential oavsett enhetlighet, eller (2) odling av enhetliga organoider för mer kvantitativ experimentell användning. Vid upprättandet av ett primärprov som organoider är det inte nödvändigt att filtrera efter enstaka celler eller räkna celler, eftersom det är en prioritet att hålla maximala cellnummer och typer för att fastställa den ursprungliga kulturen. Vid odling av organoider för jämförande experiment behövs dock encellsfiltrering och cellräkning för att säkerställa att replikatorganoider är jämförbara för experimentell konsistens. Detta protokoll beskriver hur man etablerar organoidkulturer och skapar enhetliga organoider, samt förfinade metoder för inbäddning och bevarande av organoider och standardcellodlingsexperiment, inklusive immunhistokemi, immunofluorescens och bedömning av total cellviabilitet i GBM-organoider.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3,3-Diaminobenzidine (DAB) tablets</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>08980681</td>
			<td>3,3-Diaminobenzidine (DAB) tablets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well PCR plates</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td>96-well PCR plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>SCR005</td>
			<td>Cell detachment solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-antimycotic</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15240062</td>
			<td>Antibiotic-antimycotic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 supplement minus vitamin A</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>12587001</td>
			<td>B-27 supplement minus vitamin A (50x)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GelCode Blue Stain Reagent</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>24590</td>
			<td>Bluing reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer (70 &#181;m)</td>
			<td>CellTreat Scientific</td>
			<td>229483</td>
			<td>Cell strainer (70 &#181;m)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTiter-Glo 3D</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G9681</td>
			<td>Luminescent cell viability assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clarifier 2</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>7301</td>
			<td>Nuclear hematoxylin clarifying reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear-Rite 3</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>6901</td>
			<td>xylene substitute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia Gill 2 Hematoxylin</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>72504</td>
			<td>Hematoxylin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamine in 0.85% NaCl</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>35050061</td>
			<td>Glutamine in 0.85% NaCl (200 mM)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>354234</td>
			<td>Laminin-enriched extracellular matrix</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini PAP pen</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>008877</td>
			<td>Hydrophobic barrier pen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>22-050-102</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal media minus phenol red</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>12349015</td>
			<td>Neurobasal media minus phenol red (500 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal donkey serum (NDS)</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>017-000-121</td>
			<td>Normal donkey serum (NDS)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde 4% in PBS</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>AAJ19943K2</td>
			<td>Paraformaldehyde 4% in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol red</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P0290</td>
			<td>Phenol red (0.5%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Gold Antifade Mountant with DAPI</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>P10144</td>
			<td>Liquid curing mountant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human EGF protein</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>236-EG-01M</td>
			<td>Recombinant human EGF protein (250 &#181;g/mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human FGF basic</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>4144-TC-01</td>
			<td>Recombinant human FGF basic (250 &#181;g/mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SignalStain Antibody Diluent</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>8112</td>
			<td>Antibody diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SignalStain Boost IHC Detection Reagent</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>8114</td>
			<td>Immunohistochemistry detection reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SignalStain Citrate Unmasking Solution</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>14746</td>
			<td>Citrate unmasking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single edge razor blade</td>
			<td>Uline</td>
			<td>H-595B</td>
			<td>Single edge razor blade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11360070</td>
			<td>Sodium pyruvate (100 mM)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Cryomolds</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25608-916</td>
			<td>Disposable cryomolds</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek O.C.T. Compound</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25608-930</td>
			<td>Optimal cutting temperature compound</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Stain</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>T10282</td>
			<td>Cell impermeant stain (0.4%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>X3P-1GAL</td>
			<td>Xylene</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

maintaining human glioblastoma cellular diversity ex vivo using three-dimensional organoid culture

Glioblastom (GBM) är den vanligaste primära maligna hjärncancern med en extremt dålig prognos. Intratumöral cellulär och molekylär mångfald, liksom komplexa interaktioner mellan tumörmikromiljöer, kan göra det svårt att hitta effektiva behandlingar. Traditionella vidhäftande eller sfärodlingsmetoder kan maskera sådana komplexiteter, medan tredimensionell organoidkultur kan rekapitulera regionala mikromiljögradienter. Organoider är en metod för tredimensionell GBM-odling som bättre efterliknar patientens tumörarkitektur, innehåller fenotypiskt olika cellpopulationer och kan användas för experiment med medelhög genomströmning. Även om tredimensionell organoidkultur är mer mödosam och tidskrävande jämfört med traditionell kultur, erbjuder den unika fördelar och kan tjäna till att överbrygga klyftan mellan nuvarande in vitro - och in vivo-system . Organoider har etablerat sig som ovärderliga verktyg i arsenalen av cancerbiologer för att bättre förstå tumörbeteende och resistensmekanismer, och deras tillämpningar fortsätter bara att växa. Här finns detaljer om metoder för att generera och underhålla GBM-organoider. Instruktioner för hur man utför organoidprovtagningsinbäddning och sektionering med både frysta och paraffininbäddningstekniker, samt rekommendationer för immunhistokemi och immunofluorescensprotokoll på organoidsektioner och mätning av total organoidcellviabilitet, beskrivs också alla.

Figur 1 visar tidig organoidtillväxt sett via ljusmikroskopi vid 10x förstoring. Figur 1A visar migrering och invasion av enskilda celler genom lrECM i mittvyn. Cellerna kommer att fortsätta att expandera och "kolonisera" lrECM, och de kommer att se mer täta och så småningom ogenomskinliga ut genom visuell inspektion. Figur 1B visar flera mogna organoider (vid 7 veckor) utan förstoring, i förhållande till storleken på en krona.
Figur 2 visar immunohistokemisk färgning av GBM-organoider för fosfo-histon H3, en markör för aktiv spridning. De flesta starkt proliferativa celler ses i organoidomkretsen jämfört med organoidkärnan. Positiv färgning kommer att ha ett brunt / kopparutseende.
Figur 3 beskriver processen för att homogenisera och mäta det totala cellantalet i GBM-organoider med hjälp av en 3D-specifik luminescerande cellviabilitetsanalys. På grund av det stora antalet celler som finns i GBM-organoider homogeniseras den större organoidstrukturen initialt genom triturering i självlysande analysreagens. Därefter laddas fraktioner av det totala organoidlysatet i enskilda brunnar och späds ut med ytterligare självlysande analysreagens före inkubation och avläsning på en lämplig flerbrunnsplattläsare.
Figur 4 representerar DMSO-kontrolldata (common vehicle) för organoider. Plottade data visar intraorganoid och interorganoid konsistens. Luminescerande viabilitetsdata normaliseras vanligtvis till kontroller för varje prov när experimentella data genereras.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63745/63745fig01.jpg"> Figur 1: Visa genom ett ljusmikroskop (10x). (A) Tidig organoidtillväxt som visar migration / invasion av GBM-celler i hela den lamininrika extracellulära matrisen. (B) Mogna organoider i förhållande till storleken på en krona. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63745/63745fig01large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63745/63745fig02.jpg"> Figur 2: Immunohistokemi av GBM-organoider. (A, B) GBM-organoider som visar fosfo-histon H3-färgade celler för aktiv spridning. Skalstänger är 600 μm och 300 μm för A respektive B. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63745/63745fig02large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63745/63745fig03.jpg"> Figur 3: Protokoll för luminescerande cellviabilitet för organoider. (A) Flytta enskilda organoider till små centrifugrör och ta bort överflödiga medier. (B) Tillsätt 500 μl 1:1 PBS och en blandning av analys av luminescerande cellviabilitet i varje rör och pipettera aggressivt för att bryta ner organoiden. (C) Tillsätt 25 μl av denna organoidblandning och 75 μl av samma 1:1 PBS och luminescerande cellviabilitetsanalysblandning till varje brunn på en 96-brunnsplatta. (D) Placera på en skakapparat i 2 minuter, följt av inkubation i 20 minuter vid RT, och läs sedan luminiscensen på en plattläsare. Figur gjord med BioRender.com. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63745/63745fig03large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63745/63745fig04.jpg"> Bild 4: Cellviabilitet. Cellviabilitetsdata för organoider i 0,1% dimetylsulfoxid (DMSO) för sex tekniska replikat av fyra organoider för fyra patientprover. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63745/63745fig04large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Komponent</td>
			<td>Kvantitet</td>
		</tr><tr><td>Neurobasalt medium minus fenolrött</td>
			<td>500 ml</td>
		</tr><tr><td>B-27 tillskott minus vitamin A (50x)</td>
			<td>10 ml</td>
		</tr><tr><td>Antibiotika-antimykotiska (100x)</td>
			<td>5 ml</td>
		</tr><tr><td>Natriumpyruvat (100 mM)</td>
			<td>5 ml</td>
		</tr><tr><td>Glutamin i 0,85% NaCl (200 mM)</td>
			<td>5 ml</td>
		</tr><tr><td>Rekombinant humant FGF basiskt (250 μg/ml)</td>
			<td>20 μl</td>
		</tr><tr><td>Rekombinant humant EFG-protein (250 μg/ml)</td>
			<td>20 μl</td>
		</tr><tr><td>Fenolröd</td>
			<td>500 μl</td>
		</tr></tbody></table>Tabell 1: Neurobasal medium komplett (NBMc) formulering
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Reagens</td>
			<td>Tid</td>
		</tr><tr><td>50% etanol</td>
			<td>3 minuter</td>
		</tr><tr><td>75% etanol</td>
			<td>3 minuter</td>
		</tr><tr><td>95% etanol</td>
			<td>3 minuter</td>
		</tr><tr><td>95% etanol</td>
			<td>4 minuter</td>
		</tr><tr><td>100% etanol</td>
			<td>2 minuter</td>
		</tr><tr><td>100% etanol</td>
			<td>3 minuter</td>
		</tr><tr><td>100% etanol</td>
			<td>4 minuter</td>
		</tr><tr><td>Xylen ersättare</td>
			<td>2 minuter</td>
		</tr><tr><td>Xylen ersättare</td>
			<td>3 minuter</td>
		</tr><tr><td>Xylen ersättare</td>
			<td>4 minuter</td>
		</tr><tr><td>Paraffinvax</td>
			<td>15 minuter</td>
		</tr><tr><td>Paraffinvax</td>
			<td>15 minuter</td>
		</tr></tbody></table>Tabell 2: Bearbetningsschema för små organoider (under 3 mm i diameter)
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Reagens</td>
			<td>Tid</td>
		</tr><tr><td>50% etanol</td>
			<td>6 minuter</td>
		</tr><tr><td>75% etanol</td>
			<td>6 minuter</td>
		</tr><tr><td>95% etanol</td>
			<td>5 minuter</td>
		</tr><tr><td>95% etanol</td>
			<td>8 minuter</td>
		</tr><tr><td>100% etanol</td>
			<td>5 minuter</td>
		</tr><tr><td>100% etanol</td>
			<td>5 minuter</td>
		</tr><tr><td>100% etanol</td>
			<td>8 minuter</td>
		</tr><tr><td>Xylen ersättare</td>
			<td>5 minuter</td>
		</tr><tr><td>Xylen ersättare</td>
			<td>5 minuter</td>
		</tr><tr><td>Xylen ersättare</td>
			<td>8 minuter</td>
		</tr><tr><td>Paraffinvax</td>
			<td>30 minuter</td>
		</tr><tr><td>Paraffinvax</td>
			<td>30 minuter</td>
		</tr></tbody></table>Tabell 3: Bearbetningsschema för stora organoider (över 3 mm i diameter)
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Reagens</td>
			<td>Tid</td>
		</tr><tr><td>Hematoxylin</td>
			<td>2 minuter</td>
		</tr><tr><td>Löpande diH2O</td>
			<td>2 minuter</td>
		</tr><tr><td>Nukleärt hematoxylinklarande reagens</td>
			<td>1 minuter</td>
		</tr><tr><td>Löpande diH2O</td>
			<td>1 minuter</td>
		</tr><tr><td>Bluing reagens</td>
			<td>1 minuter</td>
		</tr><tr><td>Löpande diH2O</td>
			<td>2 minuter</td>
		</tr><tr><td>70% etanol</td>
			<td>1 minuter</td>
		</tr><tr><td>100% etanol</td>
			<td>1 minuter</td>
		</tr><tr><td>100% etanol</td>
			<td>1 minuter</td>
		</tr><tr><td>Xylen ersättare</td>
			<td>2 minuter</td>
		</tr><tr><td>Xylen ersättare</td>
			<td>2 minuter</td>
		</tr></tbody></table>Tabell 4: Hematoxylinmotfärg

Watch this Scientific Journal Video about Maintaining Human Glioblastoma Cellular Diversity Ex vivo using Three-Dimensional Organoid Culture at JoVE.com

Maintaining Human Glioblastoma Cellular Diversity Ex vivo using Three-Dimensional Organoid Culture

Här beskriver vi en metod för att generera glioblastom (GBM) organoider från primära patientprover eller patient-härledda cellkulturer och upprätthålla dem till mognad. Dessa GBM-organoider innehåller fenotypiskt olika cellpopulationer och återskapar tumörmikromiljöer ex vivo.

Upprätthålla humant glioblastom cellulär mångfald ex vivo med hjälp av tredimensionell organoidkultur

Glioblastoma (GBM) is the most commonly occurring primary malignant brain cancer with an extremely poor prognosis. Intra-tumoral cellular and molecular ...

Att hitta behandlingar för glioblastom är utmanande på grund av den cellulära mångfalden som finns i tumörer och interaktionerna mellan olika mikromiljöer. Organoider kan hjälpa till att återskapa en del av den rumsliga mångfalden, och vi kan använda detta för att bättre förstå tumörernas biologi. Medan traditionella cellodlingsmetoder tenderar att producera homogena tumörcellpopulationer, kan organoider bättre efterlikna den molekylära och cellulära mångfalden av glioblastom och bättre modellera intratumorala interaktioner.Organoider kan användas för att undersöka läkemedelseffektivitet och resistensmekanismer. Resistens mot kliniska terapier kan endast förekomma i organoider och inte i den traditionella sfärkulturen, vilket återspeglar den kliniska verkligheten av denna sjukdom. Organoider kan hjälpa till att visa de regionala effekterna av kemoterapier.De kan användas för att upptäcka nya nischspecifika terapier, och de kan också fungera som ett prediktivt verktyg för personlig medicin i framtiden. Vissa material som används för att skapa organoider är temperaturkänsliga, och att försumma att hålla dessa material vid rätt temperatur kan leda till svårigheter att skapa eller underhålla organoider. Börja förbereda de organoida formarna under en odlingshuv genom att ta vaxpapperet från parafilmarket och placera det mellan två sterila 96-brunns polymeraskedjereaktioner eller PCR-plattor.Se till att insidan av parafilmen är ren. Applicera jämnt tryck på toppplattan för att bilda små två millimeter djupa gropar i parafilmen utan att skapa hål. Separera plattorna.Den dimpled parafilmen kommer att hålla fast vid toppplattan. Lägg sedan toppplattan på torris i 30 sekunder. Använd sterila pincett för att dra bort parafilmen från toppplattan i en snabb rörelse.Fryst parafilm är lättare att ta bort. Placera den färdiga parafilmformen i en täckt, steril 10-centimeter cellodlingsskål. För att förbereda encellssuspensionen från glioblastom eller GBM-vidhäftande kultur, ta bort det använda mediet från plattan.Tillsätt sedan två ml cellavskiljningslösning vid rumstemperatur till plattan och inkubera plattan vid 37 grader i tre minuter. Efter att ha bekräftat cellavskiljning från plattan under mikroskopet, tillsätt åtta milliliter Neurobasal Medium complete, eller NBMc-medium, för att neutralisera cellavskiljningslösningen. Sila suspensionen genom en enda 70-mikron cellsil.Snurra ner cellerna vid 120 gånger G i fem minuter. Ta sedan bort supernatanten och återsuspendera cellerna i en milliliter NBMc. Räkna cellerna från encellssuspensionen med hjälp av en cellimpermeanterad fläck.För att göra organoider från en encellssuspension, tillsätt en lämplig mängd lamininrik extracellulär matris, eller lrECM, i ett litet centrifugrör i en ishink eller kallt block. Förbered en cellblandning innehållande 20 000 celler per organoid. Blanda lrECM-cellsuspensionsblandningen noggrant för att undvika att cellerna sätter sig, vilket skulle resultera i ojämn organoidbildning.Pipettera sedan försiktigt 20 mikroliter av blandningen på en parafilmform för att bilda en pärlliknande droppe. Se till att kyla pipettspetsen varannan till tre organoider för att förhindra lrECM-polymerisation. När det önskade antalet organoider pipetteras på parafilmformen i en 10-centimeter odlingsplatta, inkubera organoiderna vid 37 grader Celsius i en till två timmar i en cellodlingsinkubator.Efter att organoiderna har stelnat, spola organoiderna försiktigt från parafilmformen med NBMc-medium med en P1000-spets och samla dem i en ny 10-centimeter odlingsplatta innehållande 20 ml NBMc. Placera odlingsplattan i en inkubator utan att skaka i fyra dagar. Efter fyra dagar, byt ut media i plattan.För att göra detta, placera en bit mörkt papper under cellodlingsplattan. Luta plattan och vänta i 20 sekunder. När organoiderna helt sätter sig i botten av skålen, ta långsamt bort mediet med en stor öppningsglaspipett.Efter att ha lagt till nya medier, placera plattan i inkubatorn på en orbital shaker vid 80 RPM och byt media varannan till var tredje dag därefter. Tillväxten av organoiden observerades med hjälp av ljusmikroskopi. I mittvyn visade tidig organoidtillväxt migration och encellsinvasion genom lrECM.De mogna organoiderna vid sju veckor var i förhållande till storleken på en krona. Den immunohistokemiska färgningen av GBM-organoiderna med fosfo-histon H3 avslöjade mycket proliferativa celler med ett brunt eller lila utseende i organoidomkretsen jämfört med kärnan. Cellviabilitetsdata för organoider i 0,1% DMSO visade intraorganoid och interorganoid konsistens.Var uppmärksam på organoid biomassa och mediaförsurning. Om organoiderna går igenom media för snabbt, var noga med att byta media oftare eller dela organoiderna mellan ytterligare plattor. Mogna organoider kan användas för experiment med terapier eller inbäddade och sektionerade för användning med immunhistokemi eller immunofluorescens.De dissocierade organoiderna kan användas för FACS-analys. Dessa organoider användes nyligen i tredimensionell funktionell screening för att upptäcka mål som är väsentliga i rumsligt distinkta cancerstamcellsnischer. Vi använder också dessa modeller för att prioritera olika läkemedel och terapier före in vivo-testning.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Maintaining Human Glioblastoma Cellular Diversity Ex vivo using Three-Dimensional Organoid Culture

Ex Vivo Imaging of Resident CD8 T Lymphocytes in Human Lung Tumor Slices Using Confocal Microscopy

Ex Vivo Imaging of Resident CD8 T Lymphocytes in Human Lung Tumor Slices Using Confocal Microscopy

Ex Vivo Avbildning av bosatta CD8 T-lymfocyter i Human Lung tumör skivor med konfokalmikroskopi

CD8 T cell are key players in the fight against cancer. In order for CD8 T cells to kill tumor cells they need to enter into the tumor, migrate within the ...

Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

Fluorescens molekylär tomografi för In Vivo Imaging av Glioblastoma xenograft

Tumorigenicity is the capability of cancer cells to form a tumor mass. A widely used approach to determine if the cells are tumorigenic is by injecting ...

Longitudinal Morphological and Physiological Monitoring of Three-dimensional Tumor Spheroids Using Optical Coherence Tomography

Längsgående morfologiska och fysiologiska övervakning av tredimensionella tumör Spheroids använder optisk koherenstomografi

Tumor spheroids have been developed as a three-dimensional (3D) cell culture model in cancer research and anti-cancer drug discovery. However, currently, ...

Fully Human Tumor-based Matrix in Three-dimensional Spheroid Invasion Assay

Helt mänsklig tumör-baserade Matrix i tredimensionell sfäroid invasion assay

Two-dimensional cell culture-based assays are commonly used in in vitro cancer research. However, they lack several basic elements that form the tumor ...

Evaluating the Differentiation Capacity of Mouse Prostate Epithelial Cells Using Organoid Culture

Utvärdering av differentierings kapacitet av mus prostata epitelceller med Organoid kultur

The prostate epithelium is comprised predominantly of basal and luminal cells. In vivo lineage tracing has been utilized to define the differentiation ...

Co-culture of Glioblastoma Stem-like Cells on Patterned Neurons to Study Migration and Cellular Interactions

Samkultur av Glioblastoma stamliknande celler på mönstrade nervceller för att studera migration och cellulära interaktioner

Glioblastomas (GBMs), grade IV malignant gliomas, are one of the deadliest types of human cancer because of their aggressive characteristics. Despite ...

Three-Dimensional In Vitro Biomimetic Model of Neuroblastoma Using Collagen-Based Scaffolds

Three-Dimensional In Vitro Biomimetic Model of Neuroblastoma Using Collagen-Based Scaffolds

Tredimensionell in vitro biomimetisk modell av neuroblastom med hjälp av kollagenbaserade strukturer

Neuroblastoma is the most common extracranial solid tumor in children, accounting for 15% of overall pediatric cancer deaths. The native tumor tissue is a ...

Ex Vivo Organoid Model of Adenovirus-Cre Mediated Gene Deletions in Mouse Urothelial Cells

Ex Vivo Organoid Model of Adenovirus-Cre Mediated Gene Deletions in Mouse Urothelial Cells

Ex Vivo Organoidmodell av adenovirus-kreiterade genraderingar i musurotelceller

Bladder cancer is an understudied area, particularly in genetically engineered mouse models (GEMMs). Inbred GEMMs with tissue-specific Cre and loxP sites ...

Phospholipid Mediator Induced Transformation in Three-Dimensional Cultures

Fosfolipidmediatörinducerad transformation i tredimensionella kulturer

Several models have been developed to study cancer, such as rodent models and established cell lines. Valuable insights into carcinogenesis have been ...

Three-Dimensional Culture of Murine Colonic Crypts to Study Intestinal Stem Cell Function Ex Vivo

Three-Dimensional Culture of Murine Colonic Crypts to Study Intestinal Stem Cell Function Ex Vivo

Tredimensionell kultur av murina kolonkrypter för att studera tarmstamcellsfunktion ex vivo

The intestinal epithelium regenerates every 5-7 days, and is controlled by the intestinal epithelial stem cell (IESC) population located at the bottom of ...