Name: effect of hyaluronic acid 35 kda on an in vitro model of preterm small intestinal injury and healing using enteroid-derived monolayers
Uploaded: 2022-07-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Effect of Hyaluronic Acid 35 kDa on an In Vitro Model of Preterm Small Intestinal Injury and Healing Using Enteroid-Derived Monolayers at JoVE.com

Bu içerik yalnızca yazarların sorumluluğundadır ve Ulusal Sağlık Enstitüleri'nin resmi görüşlerini temsil etmek zorunda değildir. HC, Ulusal Sağlık Enstitüleri'nden P20GM134973 hibesi ile desteklenmektedir. KB, Çocuk Hastanesi Vakfı (CHF) ve Presbiteryen Sağlık Vakfı (PHF) hibesi ile desteklenmektedir. Kanser Fonksiyonel Genomik çekirdeği tarafından sağlanan canlı hücre görüntüleme hizmetleri kısmen Oklahoma Üniversitesi Sağlık Bilimleri Merkezi Stephenson Kanser Merkezi'ne verilen Ulusal Genel Tıp Bilimleri Enstitüsü Hibe P20GM103639 ve Ulusal Sağlık Enstitüleri Ulusal Kanser Enstitüsü Hibe P30CA225520 tarafından desteklenmiştir.

Bu çalışmadaki tüm hayvan prosedürleri, Oklahoma Üniversitesi Sağlık Bilimleri Merkezi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmıştır. Kurumsal onayı takiben, ayrı bir çalışma için ötenaziyi takiben, preterm insan dışı primattan (NHP,% 90 gebelik, zeytin babunu, Papio anubis) fetal ince bağırsak kolaylık örnekleri alındı (Protokol # 101523-16-039-I)20.
1. Preterm insan dışı primat 3D intestinal ent...

<ol>
	<li>Lemons, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Very+low+birth+weight+outcomes+of+the+National+Institute+of+Child+Health+and+Human+Development+Neonatal+Research+Network,+January+1995+through+December+1996.">Very low birth weight outcomes of the National Institute of Child Health and Human Development Neonatal Research Network, January 1995 through December 1996.</a> Pediatrics. 107 (1), 1 (2001).</li><li>Burge, K., Vieira, F., Eckert, J., Chaaban, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+composition,+digestion,+and+absorption+differences+among+neonatal+feeding+strategies:+Potential+implications+for+intestinal+inflammation+in+preterm+infants.">Lipid composition, digestion, and absorption differences among neonatal feeding strategies: Potential implications for intestinal inflammation in preterm infants.</a> Nutrients. 13 (2), 550 (2021).</li><li>Duffy, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+mediating+bacterial+translocation+in+the+immature+intestine.">Interactions mediating bacterial translocation in the immature intestine.</a> The Journal of Nutrition. 130, 432-436 (2000).</li><li>Nanthakumar, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mechanism+of+excessive+intestinal+inflammation+in+necrotizing+enterocolitis:+An+immature+innate+immune+response.">The mechanism of excessive intestinal inflammation in necrotizing enterocolitis: An immature innate immune response.</a> PLoS One. 6 (3), 17776 (2011).</li><li>Nanthakumar, N. N., Fusunyan, R. D., Sanderson, I., Walker, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+in+the+developing+human+intestine:+A+possible+pathophysiologic+contribution+to+necrotizing+enterocolitis.">Inflammation in the developing human intestine: A possible pathophysiologic contribution to necrotizing enterocolitis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (11), 6043-6048 (2000).</li><li>He, Y., Lawlor, N. T., Newburg, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+milk+components+modulate+toll-like+receptor-mediated+inflammation.">Human milk components modulate toll-like receptor-mediated inflammation.</a> Advances in Nutrition. 7 (1), 102-111 (2016).</li><li>Walker, W. A., Iyengar, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+milk,+microbiota,+and+intestinal+immune+homeostasis.">Breast milk, microbiota, and intestinal immune homeostasis.</a> Pediatric Research. 77 (1-2), 220-228 (2015).</li><li>Westerbeek, E. A., vanden Berg, A., Lafeber, H. N., Fetter, W. P., van Elburg, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+enteral+supplementation+of+a+prebiotic+mixture+of+non-human+milk+galacto-,+fructo-+and+acidic+oligosaccharides+on+intestinal+permeability+in+preterm+infants.">The effect of enteral supplementation of a prebiotic mixture of non-human milk galacto-, fructo- and acidic oligosaccharides on intestinal permeability in preterm infants.</a> British Journal of Nutrition. 105 (2), 268-274 (2011).</li><li>vanden Berg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+glutamine-enriched+enteral+nutrition+on+intestinal+permeability+in+very-low-birth-weight+infants:+A+randomized+controlled+trial.">The effect of glutamine-enriched enteral nutrition on intestinal permeability in very-low-birth-weight infants: A randomized controlled trial.</a> Journal of Parenteral and Enteral Nutrition. 30 (5), 408-414 (2006).</li><li>Foster, J. P., Seth, R., Cole, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+immunoglobulin+for+preventing+necrotizing+enterocolitis+in+preterm+and+low+birth+weight+neonates.">Oral immunoglobulin for preventing necrotizing enterocolitis in preterm and low birth weight neonates.</a> The Cochrane Database of Systematic Reviews. 4 (4), (2016).</li><li>Maffei, D., Schanler, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+milk+is+the+feeding+strategy+to+prevent+necrotizing+enterocolitis.">Human milk is the feeding strategy to prevent necrotizing enterocolitis.</a> Seminars in Perinatology. 41 (1), 36-40 (2017).</li><li>Patel, A. L., Kim, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+milk+and+necrotizing+enterocolitis.">Human milk and necrotizing enterocolitis.</a> Seminars in Pediatric Surgery. 27 (1), 34-38 (2018).</li><li>Nolan, L. S., Parks, O. B., Good, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+the+immunomodulating+components+of+maternal+breast+milk+and+protection+against+necrotizing+enterocolitis.">A review of the immunomodulating components of maternal breast milk and protection against necrotizing enterocolitis.</a> Nutrients. 12 (1), 14 (2019).</li><li>Hill, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+milk+hyaluronan+enhances+innate+defense+of+the+intestinal+epithelium.">Human milk hyaluronan enhances innate defense of the intestinal epithelium.</a> Journal of Biological Chemistry. 288 (40), 29090-29104 (2013).</li><li>Burge, K., Bergner, E., Gunasekaran, A., Eckert, J., Chaaban, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+glycosaminoglycans+in+protection+from+neonatal+necrotizing+enterocolitis:+A+narrative+review.">The role of glycosaminoglycans in protection from neonatal necrotizing enterocolitis: A narrative review.</a> Nutrients. 12 (2), 546 (2020).</li><li>Chaaban, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acceleration+of+small+intestine+development+and+remodeling+of+the+microbiome+following+hyaluronan+35+kDa+treatment+in+neonatal+mice.">Acceleration of small intestine development and remodeling of the microbiome following hyaluronan 35 kDa treatment in neonatal mice.</a> Nutrients. 13 (6), 2030 (2021).</li><li>Gunasekaran, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyaluronan+35+kDa+enhances+epithelial+barrier+function+and+protects+against+the+development+of+murine+necrotizing+enterocolitis.">Hyaluronan 35 kDa enhances epithelial barrier function and protects against the development of murine necrotizing enterocolitis.</a> Pediatric Research. 87 (7), 1177-1184 (2020).</li><li>Montenegro-Miranda, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+organoid+model+of+damage+and+repair+identifies+HNF4&#945;+as+a+critical+regulator+of+intestinal+epithelial+regeneration.">A novel organoid model of damage and repair identifies HNF4&#945; as a critical regulator of intestinal epithelial regeneration.</a> Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology. 10 (2), 209-223 (2020).</li><li>Lee, C., Hong, S. N., Kim, E. R., Chang, D. K., Kim, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+regeneration+ability+of+Crohn's+disease+assessed+using+patient-derived+intestinal+organoids.">Epithelial regeneration ability of Crohn's disease assessed using patient-derived intestinal organoids.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (11), 6013 (2021).</li><li>Gurung, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+Zika+virus+(ZIKV)+infection+following+vaginal+inoculation+with+ZIKV-infected+semen+in+timed-pregnant+olive+baboons.">Maternal Zika virus (ZIKV) infection following vaginal inoculation with ZIKV-infected semen in timed-pregnant olive baboons.</a> Journal of Virology. 94 (11), 00058 (2020).</li><li>Suarez-Arnedo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+image+J+plugin+for+the+high+throughput+image+analysis+of+in+vitro+scratch+wound+healing+assays.">An image J plugin for the high throughput image analysis of in vitro scratch wound healing assays.</a> PLoS One. 15 (7), 0232565 (2020).</li><li>Kobelt, D., Walther, W., Stein, U. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+cell+migration+monitoring+to+analyze+drug+synergism+in+the+scratch+assay+using+the+IncuCyte+system.">Real-time cell migration monitoring to analyze drug synergism in the scratch assay using the IncuCyte system.</a> Methods in Molecular Biology. 2294, 133-142 (2021).</li><li>de Jong, J. C. W., Ijssennagger, N., van Mil, S. W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+milk+nutrients+driving+intestinal+epithelial+layer+maturation+via+Wnt+and+Notch+signaling:+Implications+for+necrotizing+enterocolitis.">Breast milk nutrients driving intestinal epithelial layer maturation via Wnt and Notch signaling: Implications for necrotizing enterocolitis.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Molecular Basis of Disease. 1867 (11), 166229 (2021).</li><li>Yu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythropoietin+protects+epithelial+cells+from+excessive+autophagy+and+apoptosis+in+experimental+neonatal+necrotizing+enterocolitis.">Erythropoietin protects epithelial cells from excessive autophagy and apoptosis in experimental neonatal necrotizing enterocolitis.</a> PLoS One. 8 (7), 69620 (2013).</li><li>Kessler, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multifunctional+role+of+35+kilodalton+hyaluronan+in+promoting+defense+of+the+intestinal+epithelium.">Multifunctional role of 35 kilodalton hyaluronan in promoting defense of the intestinal epithelium.</a> The Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 66 (4), 273-287 (2018).</li><li>Fraser, J. R. E., Laurent, T. C., Laurent, U. B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyaluronan:+Its+nature,+distribution,+functions+and+turnover.">Hyaluronan: Its nature, distribution, functions and turnover.</a> Journal of Internal Medicine. 242 (1), 27-33 (1997).</li><li>Kim, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyaluronan+35kDa+treatment+protects+mice+from+Citrobacter+rodentium+infection+and+induces+epithelial+tight+junction+protein+ZO-1+in+vivo.">Hyaluronan 35kDa treatment protects mice from Citrobacter rodentium infection and induces epithelial tight junction protein ZO-1 in vivo.</a> Matrix Biology. 62, 28-39 (2017).</li><li>Prehm, P., Schumacher, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+hyaluronan+export+from+human+fibroblasts+by+inhibitors+of+multidrug+resistance+transporters.">Inhibition of hyaluronan export from human fibroblasts by inhibitors of multidrug resistance transporters.</a> Biochemical Pharmacology. 68 (7), 1401-1410 (2004).</li><li>Stenson, W. F., Ciorba, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonmicrobial+activation+of+TLRs+controls+intestinal+growth,+wound+repair,+and+radioprotection.">Nonmicrobial activation of TLRs controls intestinal growth, wound repair, and radioprotection.</a> Frontiers in Immunology. 11 (3591), 617510 (2021).</li><li>Riehl, T. E., Ee, X., Stenson, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyaluronic+acid+regulates+normal+intestinal+and+colonic+growth+in+mice.">Hyaluronic acid regulates normal intestinal and colonic growth in mice.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 303 (3), 377-388 (2012).</li><li>Riehl, T. E., Santhanam, S., Foster, L., Ciorba, M., Stenson, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD44+and+TLR4+mediate+hyaluronic+acid+regulation+of+Lgr5++stem+cell+proliferation,+crypt+fission,+and+intestinal+growth+in+postnatal+and+adult+mice.">CD44 and TLR4 mediate hyaluronic acid regulation of Lgr5+ stem cell proliferation, crypt fission, and intestinal growth in postnatal and adult mice.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 309 (11), 874-887 (2015).</li><li>Hill, D. R., Kessler, S. P., Rho, H. K., Cowman, M. K., de la Motte, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific-sized+hyaluronan+fragments+promote+expression+of+human+beta-defensin+2+in+intestinal+epithelium.">Specific-sized hyaluronan fragments promote expression of human beta-defensin 2 in intestinal epithelium.</a> Journal of Biological Chemistry. 287 (36), 30610-30624 (2012).</li><li>Fernando, E. H., Gordon, M. H., Beck, P. L., MacNaughton, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+intestinal+epithelial+wound+healing+through+protease-activated+receptor-2+activation+in+Caco2+cells.">Inhibition of intestinal epithelial wound healing through protease-activated receptor-2 activation in Caco2 cells.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 367 (2), 382-392 (2018).</li><li>Nyegaard, S., Christensen, B., Rasmussen, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+optimized+method+for+accurate+quantification+of+cell+migration+using+human+small+intestine+cells.">An optimized method for accurate quantification of cell migration using human small intestine cells.</a> Metabolic Engineering Communications. 3, 76-83 (2016).</li><li>Roodsant, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+human+2D+primary+organoid-derived+epithelial+monolayer+model+to+study+host-pathogen+interaction+in+the+small+intestine.">A human 2D primary organoid-derived epithelial monolayer model to study host-pathogen interaction in the small intestine.</a> Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 10, 272 (2020).</li><li>Singh, A., Poling, H. M., Spence, J. R., Wells, J. M., Helmrath, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gastrointestinal+organoids:+a+next-generation+tool+for+modeling+human+development.">Gastrointestinal organoids: a next-generation tool for modeling human development.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 319 (3), 375-381 (2020).</li><li>Foulke-Abel, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+enteroids+as+an+ex-vivo+model+of+host-pathogen+interactions+in+the+gastrointestinal+tract.">Human enteroids as an ex-vivo model of host-pathogen interactions in the gastrointestinal tract.</a> Experimental Biology and Medicine. 239 (9), 1124-1134 (2014).</li><li>Foulke-Abel, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+enteroids+as+a+model+of+upper+small+intestinal+ion+transport+physiology+and+pathophysiology.">Human enteroids as a model of upper small intestinal ion transport physiology and pathophysiology.</a> Gastroenterology. 150 (3), 638-649 (2016).</li></ol>

Preterm bir bebeğin gastrointestinal sistemi, dysbiosis, inflamatuar bakteriyel metabolitler ve toksinler ve aralıklı hipoksi23,24 ile ilişkili çevresel hakaretlere tekrar tekrar maruz kalmaktan kaynaklanan sürekli rejeneratif baskı altındadır. Ne yazık ki, preterm bebeğin bağırsak epiteli, fonksiyonel bütünlüğü hızlı bir şekilde oluşturamamaktadır23, bariyer disfonksiyonu, artmış bağırsak geçirgenliği ve ciddi...

Nekrotizan enterokolit (NEC) preterm bebeklerde en sık görülen gastrointestinal acillerden biridir1. Hastalık, bağırsak nekrozu, sepsis ve potansiyel olarak ölüme hızla bozulabilen şiddetli bağırsak iltihabı ile karakterizedir. Etiyolojisi belirsiz olmasına rağmen, kanıtlar NEC'nin multifaktöriyel olduğunu ve beslenmenin karmaşık bir etkileşiminin, anormal bakteriyel kolonizasyonun ve olgunlaşmamış bir bağırsak epitelinin sonucu olduğunu düşündürmektedir 2,3. Preterm bebeklerde bağırsak geçirgenliği, anormal bakteriyel kolonizasyon ve düşük enterosit rejeneratif kapasitesi4,5 artmış, intestinal bariyer disfonksiyonu, bakteriyel translokasyon ve NEC gelişimi riskini arttırmıştır. Bu nedenle, bağırsak epitel olgunlaşmasını hızlandırmak ve bağırsak epitelinin yenilenmesini veya iyileşmesini teşvik etmek için stratejilerin veya müdahalelerin belirlenmesi, bu ölümcül hastalığın önlenmesinde kritik öneme sahiptir.
Çalışmalar, insan sütünün (HM) preterm bebeklerde NEC'ye karşı koruyucu olduğunu göstermiştir 6,7,8,9,10,11. Hem insan hem de hayvan çalışmaları, sığır bazlı formülün bağırsak geçirgenliğini arttırdığını ve bağırsak epitel hücreleri için doğrudan toksik olduğunu göstermiştir 2,12. Tam olarak aydınlatılamamasına rağmen, kanıtlar HM'nin koruyucu etkilerinin laktoferrin, immünoglobulin A (IgA) ve HM oligosakkaritler13 gibi biyoaktif bileşenler aracılığıyla aracılık ettiğini göstermektedir. HM ayrıca, tekrarlayan D-glukuronik asit ve N-asetil-D-glukozamin disakkaritleri14,15 ile benzersiz bir sülfatlanmamış glikozaminoglikan olan hyaluronan (HA) bakımından da zengindir. Önemli olarak, bir HM HA taklidi olan oral 35 kDa HA'nın (HA35), bağırsak hasarının şiddetini azalttığını, bakteriyel translokasyonu önlediğini ve murin NEC benzeri bir bağırsak hasarı modelinde mortaliteyi azalttığını gösterdik16,17.
Burada, HA35'in bağırsak iyileşmesi ve in vitro rejenerasyonu üzerindeki etkileri daha ayrıntılı olarak araştırılmıştır. Günümüzde bağırsak yaralanması ve onarımı için en yaygın kullanılan in vitro tahlil, kolorektal kanser (KRK) hücre tek katmanlarında yapılan bir çizik yara testidir. Böyle bir modelin preterm bebek bağırsağı ile fizyolojik ilgisi sınırlıdır, çünkü CRC hücrelerinin yara onarımı, kök hücre güdümlü onarım süreçlerinden ziyade kanser hücrelerinin yüksek derecede proliferatif doğasına dayanır18. Bu sınırlamanın üstesinden gelmek için, birincil kök hücre kaynaklı ince bağırsak enteroidlerinin preterm insan olmayan primatlardan (NHP) izole edilmesi ve sürdürülmesi prosedürü de dahil olmak üzere bir 2D enteroid çizik yara modelinin kurulması burada açıklanmaktadır. Preterm NEC'nin en sık distal ince bağırsakta bildirildiği göz önüne alındığında, primer epitel hücreli organoidlerin bağırsak hasarı ve onarımı modelinde kullanılması, geleneksel kolorektal monokatmanları kullanan mevcut modellere kıyasla daha fizyolojik olarak çevrilebilir bir in vitro model sağlar18,19.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10 mL Serological Pipet</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-675-49</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100x21mm Dish, Nunclon Delta</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>172931</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL Conical tube</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89039-666</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-Well, TC-Treated, Flat Bottom Plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37 &#181;M Reversible Cell Strainer</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>27215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Conical tube</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89039-658</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 &#181;m Sterile Cell Strainers</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB22-363-548</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin, Bovine (BSA)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>0332-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTiter-Glo 3D Cell Viability Assay</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G9681</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Medium/Nutrient Ham&#39;s Mixture F-12 (DMEM-F12) with 15 mM HEPES buffer</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>36254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentle Cell Dissociation Reagent</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>100-0485</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>NIH</td>
			<td>imagej.nih.gov/ij/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incucyte S3 Live-Cell Analysis Instrument</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>4647</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incucyte Scratch Wound Analysis Software Module</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>9600-0012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IntestiCult Organoid Growth Medium (Human)</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>06010</td>
			<td>This is HOGMY, but without the Y-27632 or antibiotics. Also used as base for HOGM, but then only missing the antibiotics.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipopolysaccharides from Escherichia coli O111:B4, purified by gel filtration chromatography</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>L3012-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Growth Factor Reduced (GFR) Basement Membrane Matrix, Phenol Red-Free</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MicroWell 96-Well, Nunclon Delta-Treated, Flat-Bottom Microplate</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>136101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (Phosphate-Buffered Saline), 1X [-] Calcium, Magnesium, pH 7.4</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-040-CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primocin</td>
			<td>Invivogen</td>
			<td>ant-pm-1</td>
			<td>This is broad-spectrum antibiotics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hyaluronate, Research Grade, HA20K</td>
			<td>Lifecore Biomedical</td>
			<td>HA20K-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC20 Automated Cell Counter</td>
			<td>Company: Bio-Rad</td>
			<td>1450102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA 1X, 0.25% Trypsin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>MT25053CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-27632</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>72302</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

effect of hyaluronic acid 35 kda on an in vitro model of preterm small intestinal injury and healing using enteroid-derived monolayers

In vitro çizik yara testleri, çeşitli doku tiplerinde epitel iyileşmesinin mekanizmalarını ve özelliklerini araştırmak için yaygın olarak kullanılmaktadır. Burada, terminal ileumun bağırsak kriptlerinden türetilen üç boyutlu (3B) insan dışı primat enteroidlerinden iki boyutlu (2B) bir tek katman oluşturmak için bir protokol açıklıyoruz. Bu enteroid türevi monokatmanlar daha sonra, bir insan sütü HA taklidi olan hyaluronan 35 kDa'nın (HA35) epitel yara kenarı boyunca hücre göçünü ve proliferasyonunu teşvik etme yeteneğini test etmek için in vitro çizik yara testinde kullanıldı. Tek katmanlar akıcılığa yükseltildikten sonra, manuel olarak çizildi ve HA35 (50 μg / mL, 100 μg / mL, 200 μg / mL) veya kontrol (PBS) ile muamele edildi. Hücre göçü ve boşluğa proliferasyon, canlı hücre görüntüleme için donatılmış bir iletilmiş ışık mikroskobu kullanılarak görüntülendi. Yara kapanması, ImageJ'deki Yara İyileştirme Boyutu Eklentisi kullanılarak yara iyileşmesinin yüzdesi olarak ölçüldü. HA35 in vitro , ince bağırsak enteroid tek katmanlarında, muhtemelen yara kenarındaki hücre proliferasyonu ve yara bölgesine göçün bir kombinasyonu yoluyla, yara iyileşmesini hızlandırır. Bu yöntemler potansiyel olarak erken insan ince bağırsağında bağırsak yenilenmesini keşfetmek için bir model olarak kullanılabilir.

HA'nın çeşitli doku ve organlarda doku onarımı ve yara iyileşmesi üzerindeki etkileri iyi belgelenmiştir; Bununla birlikte, moleküler ağırlığı 35 kDa'lık olan HA'nın fetal veya yenidoğan ince bağırsak iyileşmesi ve rejenerasyonu üzerindeki spesifik etkileri şu anda bilinmemektedir. HA35'in fetal veya yenidoğan ince bağırsağının bir modelinde yara iyileşmesini destekleme yeteneğini test etmek için, NHP ileal dokusundan 3D bağırsak enteroidleri ürettik ve 2D enteroid türevi tek katmanlar ...

Watch this Scientific Journal Video about Effect of Hyaluronic Acid 35 kDa on an In Vitro Model of Preterm Small Intestinal Injury and Healing Using Enteroid-Derived Monolayers at JoVE.com

Effect of Hyaluronic Acid 35 kDa on an In Vitro Model of Preterm Small Intestinal Injury and Healing Using Enteroid-Derived Monolayers

Bu protokol, insan dışı primat ileumundan izole edilen üç boyutlu (3B) enteroidlerden türetilen iki boyutlu (2B) tek katmanlı tabakalar üzerinde bir çizik yara testi oluşturmak ve gerçekleştirmek için bir yöntem açıklamaktadır.

Hyaluronik Asit 35 kDa'nın Enteroid Kaynaklı Tek Katmanlı Erken İnce Bağırsak Hasarı ve İyileşmesinin In Vitro Modeline Etkisi

In vitro scratch wound assays are commonly used to investigate the mechanisms and characteristics of epithelial healing in a variety of tissue types. ...

Bu protokol, ince bağırsağın tüm ana hücre tiplerini temsil eden enteroid türevi tek katmanlı rejenerasyon çalışmaları için kullanılan çok yaygın çizik yara testini genişletir. Bu teknik, bağırsak rejenerasyonunun erken dönem 2D enteroid tek katmanlı modelinde yara kapanmasının gerçek zamanlı olarak görselleştirilmesini sağlar. Tekniğimiz, dönüştürülmüş kolorektal kanser hücre hatları kullanılarak tipik olarak kötü modellenen preterm memeli bağırsağının çalışmasına uygulanabilir.96 mikrolitre hücre dışı matrisi veya ECM bazlı hidrojel BME'yi, iki ila sekiz santigrat derecede buz üzerinde gece boyunca çözerek başlayın. ECM bazlı hidrojeli ve buz gibi soğuk PBS'yi kalsiyum veya magnezyum olmadan bir ila 50 oranında seyreltin. 24 delikli bir doku kültürü plakasının her bir kuyucuğunu, 200 mikrolitre buz gibi soğuk seyreltilmiş ECM bazlı hidrojel ile kaplayın ve kaplanmış plakayı 37 santigrat derecede ve% 5 karbondioksitte en az bir saat inkübe edin.Daha sonra, medyayı tek katmanlara yönelik 3D enteroidleri içeren 24 delikli kültür plakasından aspire edin ve kuyucuk başına 500 mikrolitre hücre ayrışma reaktifi ile değiştirin. ECM bazlı hidrojel kubbeleri, sekiz ila 12 kez yukarı ve aşağı pipetleyerek ve 12 kuyucuğun içeriğini 15 mililitrelik konik bir tüpe aktararak manuel olarak bozun. Tüm enteroidlerin çıkarıldığından emin olmak için 12 boş kuyuyu 250 mikrolitre hücre ayrışma reaktifi ile yıkayın ve içeriği 15 mililitrelik konik tüplere aktarın.Konik tüpleri 300g'da dört santigrat derecede beş dakika boyunca santrifüj yapın ve süpernatanı atın. Konik tüplere 10 mililitre buz gibi soğuk DMEM/F-12 yıkama tamponu ekleyin ve tüpleri ters çevirerek enteroid peletleri askıya alın. Dört santigrat derecede beş dakika boyunca 300g'da santrifüj yapın ve süpernatanı çıkarın.Hücre peletlerini 12 mililitre 37 santigrat derece Tripsin-EDTA'da yeniden askıya alın ve tüpleri 10 dakika boyunca veya hücreler çözünür görünene kadar 37 santigrat derece su banyosuna yerleştirin. Tripsin-EDTA'yı seyreltmek için her tüpe üç mililitre DMEM / F-12 yıkama tamponu ekleyin. Tüpleri ters çevirerek karıştırın ve buzun üzerine yerleştirin.Ayrışmış enteroidleri 37 mikrometrelik bir ağ hücre süzgecinden süzün. İçeriği temiz 15 mililitrelik konik tüplere toplayın ve tüpleri dört santigrat derecede beş dakika boyunca 300g'da santrifüj edin. Süpernatantı konik tüplerden çıkarın ve hücre peletlerini altı mililitre HOMGY ile yeniden askıya alın.Daha sonra, ECM bazlı hidrojel kaplı plakayı inkübatörden çıkarın ve kaplanmış yüzeyi çizmeden veya plakayı tamamen kurutmadan fazla ECM bazlı hidrojel çözeltisini aspire edin. ECM bazlı hidrojel ile kaplanmış 24 delikli plakanın her bir kuyucuğuna kombine 12 mililitre HOMGY hücre süspansiyonunun 500 mikrolitresini ekleyin. Kuyucuklar içindeki hücrelerin eşit dağılımını sağlamak için plakayı kapakla döndürün.Plakayı 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte inkübe edin, tek katmanlar% 90'dan fazla akıcılığa ulaşana kadar her iki günde bir HOMGY ortamını değiştirin. Tek katmanlar% 90'dan fazla akıcılığa ulaştığında, yapışamayan hücreleri çıkarmak için ortamı aspire edin. Hücreleri, 24 saat boyunca HOMGY'de çözünmüş 500 mikrolitre HA35 veya PBS ile tedavi edin.Bundan sonra, tek katmanın yüzeyini bozmadan ortamı çıkarın. 200 mikrolitrelik pipet ucu kullanarak, tek katmanların kurumasına izin vermemeye dikkat ederek, her bir kuyucuktaki tek katmanın tam yüzey çapı boyunca doğrusal bir çizik yapın. Çizilmiş tek katmanları 500 mikrolitre 1X PBS ile bir kez yıkayın ve HOMGY'de çözünmüş 500 mikrolitre HA35 veya PBS ekleyin.Plakayı 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksit inkübatörü içinde canlı hücre analiz cihazına aktarın. Canlı hücre analiz yazılımındaki Program simgesinin altında, Yeni Gemi Ekleme Sihirbazını Başlat simgesine tıklayın. Programa göre Tara'yı seçin, ardından İleri'ye tıklayın.Gemi Oluştur altında Yeni'yi seçin ve İleri'ye tıklayın, ardından Tarama Türü altında Tam Kuyu'yu seçin ve İleri'ye tıklayın. Görüntü kanalları için Aşama'yı ve reklam verme amacı için 4x'i seçin. Sağlanan listeden plaka üreticisini ve katalog numarasını seçin ve İleri'yi tıklatın.Boş bir gemi konumu ve ardından istenen tarama desenini seçin. Ad alanına plaka adını girin, ardından bir plaka düzeni oluşturmak için artı simgesini seçin. Bir tedavi adı oluşturmak için küçük artı'yı seçin.Kısa adı ve ardından Tamam'ı girin. Bu işleme karşılık gelen plaka kuyularını vurgulayın ve bu işlemle kuyuları belirlemek için büyük artıya vurun. Bileşik konsantrasyonunu girin ve Tamam'ı tıklatın. Plaka tamamlandığında Tamam, İleri'yi seçin. Analizi daha sonraya ertele'yi ve ardından Dört saatlik aralıklarla taramalarla yeni zamanlama oluştur'u seçin.Taramayı bir günde, sıfır saatte durdurun. Özetin doğru olduğundan emin olun ve ardından zamanlamaya ekleyin. Canlı hücre analizi yazılımında, ekranın üst kısmındaki Görüntüle'yi seçin.Gemi Adı menüsünden, tamamlanan 24 saatlik taramanıza gidin ve gemi adına çift tıklayın. Soldaki Görüntüleri ve filmleri dışa aktar simgesini ve ardından Görüntülendiği Gibi seçeneğini seçin. İlgilendiğiniz kuyuları vurgulayın ve ardından İlgi çekici zaman noktalarını ve Görüntü Serisini Görüntüleniyor olarak seçin.Sıra türünün ve taramaların doğru olduğundan emin olun. İstediğiniz hedef klasör konumunu seçin. Açılır menüden JPEG'i ve ardından Dışa Aktar'ı seçin.ImageJ yazılımını açın ve çizik yara tahlili görüntüsünü yükleyin. Görüntü'yü seçin, sonra görüntüyü 24 bit RGB'den değiştirmek için 8 bit yazın. Yara İyileştirme Boyutu Eklentisini yüklemek için Eklentiler, Makrolar, Yükle Wound_healing_size eklentisini seçin.Bundan sonra, varyans penceresi yarıçapını 20'ye, eşik değerini 100'e, doymuş piksellerin yüzdesini 0.001'e ayarlayın. Set Scale global için Evet ve ardından Tamam'a tıklayın. Belirtilen alanın yara alanı olduğunu doğrulayın ve ek çizikler için tekrarlayın. Son olarak, ekranda gösterilen denklemi kullanarak 24 saat boyunca göç eden veya çoğalan hücrelerin çizik alanı yara iyileşmesinin yüzdesini hesaplayın.Burada, T0 sıfır saat zamanındaki alandır ve TC sıfır saat, dört saat, 12 saat veya 24 saatlik alandır. Bu görüntülerde enteroid jenerasyon ve enteroid kaynaklı tek katmanlı yara iyileşmesi testi prosedürü gösterilmiştir. Üç boyutlu, insan olmayan primat bağırsak enteroidlerinin kültürü, iki boyutlu tek katmanlara ayrışmak için kullanılır.Tek katmanlar, 24 delikli bir plakada% 90'dan fazla birleşime kadar büyütüldü ve daha sonra 24 saat boyunca HA35 veya PBS ile muamele edildi. Tek katmanlar daha sonra bir P200 pipet ucu ile çizildi. Burada, insan dışı primat enteroid monokatmanlarının kontrol tedavilerinde HA35'in temsili görüntüleri gösterilmektedir.Görüntüler, P200 pipet ucuyla çizik yapıldıktan sonra sıfır saat, dört saat, 12 saat ve 24 saatte elde edildi. HA35'in yara iyileşmesi ve oid monokatmanlar üzerindeki etkisi burada gösterilmiştir. Enteroid tek katmanlı çocuklarda zamanla yara iyileşmesindeki değişim, HA35 tedavi konsantrasyonuna bağlıdır.HA35, kontrole kıyasla mililitre başına 100 mikrogram ve mililitre başına 200 mikrogramda dört saat ve 12 saat sonra yara iyileşmesini önemli ölçüde arttırdı, ancak iyileşme oranları tedaviler arasında 24 saat yakınsadı. Bu prosedürle hatırlanması gereken en önemli şeylerden biri, bağırsak enteroid monokatmanlarının kısa ömürlü olmasıdır. Bu nedenle,% 90 konakışkan olduklarında, araştırmacılar bunları hızlı bir şekilde kullanmaya çalışmalıdır.Bu teknik, özellikle enflamatuar yaralanmadan ziyade daha mekanik olarak ilgileniyorsak, in vitro erken bağırsak rejenerasyonu için başvurduğumuz model haline gelmiştir.

Research

JoVE Journal

Medicine

Effect of Hyaluronic Acid 35 kDa on an In Vitro Model of Preterm Small Intestinal Injury and Healing Using Enteroid-Derived Monolayers

A Contusive Model of Unilateral Cervical Spinal Cord Injury Using the Infinite Horizon Impactor

Sonsuz Horizon Darbeli kullanarak tek taraflı Servikal Spinal Kord Yaralanması bir Contusive Modeli

While the majority of human spinal cord injuries occur in the cervical spinal cord, the vast majority of laboratory research employs animal models of ...

Murine Model of Wound Healing

Yara Şifa murin Modeli

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. ...

An Alkali-burn Injury Model of Corneal Neovascularization in the Mouse

Fare Kornea Neovaskülarizasyonunun bir Alkali-yanık Yaralanma Modeli

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the ...

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Murin için Endoskop<em&gt; In Vivo</em&gt; Karsinojenez ve bağırsak Değerlendirilmesi Multimodaller Görüntüleme Yara İyileşmesi ve İltihap

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions ...

Development of an Algorithm to Perform a Comprehensive Study of Autonomic Dysreflexia in Animals with High Spinal Cord Injury Using a Telemetry Device

Bir Algoritma Geliştirme Telemetri Cihazı Kullanımı Yüksek Omurilik Yaralanmalı Hayvanlarda otonomik disrefleksi kapsamlı bir çalışma gerçekleştirmek için

Spinal cord injury (SCI) is a debilitating neurological condition characterized by somatic and autonomic dysfunctions. In particular, SCI above the ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Bağırsak İskemi-reperfüzyon Hasarı Murin Modeli

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Open Tracheostomy Gastric Acid Aspiration Murine Model of Acute Lung Injury Results in Maximal Acute Nonlethal Lung Injury

Akut Akciğer Hasarı Açık Trakeostomi Gastrik Asit Aspirasyon Fare Modeli Maksimal Akut Ölümcül olmayan Akciğer Hasarı Sonuçlar

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute ...

Improved Method for the Establishment of an In Vitro Blood-Brain Barrier Model Based on Porcine Brain Endothelial Cells

Improved Method for the Establishment of an In Vitro Blood-Brain Barrier Model Based on Porcine Brain Endothelial Cells

Yöntem bir Vitro kan - beyin bariyerini modeli domuz beyin endotel hücreleri temel alan kurulması için geliştirilmiş

The aim of this protocol presents an optimized procedure for the purification and cultivation of pBECs and to establish in vitro blood-brain barrier (BBB) ...

In Vivo Evaluation of Fracture Callus Development During Bone Healing in Mice Using an MRI-compatible Osteosynthesis Device for the Mouse Femur

In Vivo Evaluation of Fracture Callus Development During Bone Healing in Mice Using an MRI-compatible Osteosynthesis Device for the Mouse Femur

Vivo Fare uyluk için bir MRI uyumlu Osteosentez aygıtı kullanma farelerde kemik iyileşme sırasında kırık Kallus gelişimi değerlendirme

Endochondral fracture healing is a complex process involving the development of fibrous, cartilaginous, and osseous tissue in the fracture callus. The ...