Name: platelet-rich plasma lysate for treatment of eye surface diseases
Uploaded: 2022-08-02T14:00:00
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Die Autoren danken der "Casa del Dono di Reggio Emilia" für die Bereitstellung von Thrombozytenkonzentraten aus Spendern.

PRP-L, das für die quantitative Bewertung von Wachstumsfaktoren verwendet wird, wurde im Rahmen einer breiteren Studie zur Charakterisierung von PRP-Produkten für regenerative Zwecke gesammelt, die am AUSL-IRCCS di Reggio Emilia durchgeführt und am 10. Januar 2019 vom Ethikausschuss Area Vasta Emilia Nord genehmigt wurde (Protokollnummer 2019/0003319). Die Geber gaben ihre informierte Zustimmung gemäß der Deklaration von Helsinki. Für die Erfassung der aggregierten, anonymen Daten des OSDI-Fragebogens (Ocular Surfa...

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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+lysate+promotes+re-epithelialization+of+persistent+epithelial+defects:+A+pilot+study.">Platelet lysate promotes re-epithelialization of persistent epithelial defects: A pilot study.</a> International Ophthalmology. 39 (7), 1483-1490 (2019).</li><li>Geremicca, W., Fonte, C., Vecchio, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+components+for+topical+use+in+tissue+regeneration:+evaluation+of+corneal+lesions+treated+with+platelet+lysate+and+considerations+on+repair+mechanisms.">Blood components for topical use in tissue regeneration: evaluation of corneal lesions treated with platelet lysate and considerations on repair mechanisms.</a> Blood Transfusion. 8 (2), 107-112 (2010).</li><li>De Paiva, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+TGF-&#946;+signaling+improves+ocular+surface+epithelial+disease+in+experimental+autoimmune+keratoconjunctivitis+sicca.">Disruption of TGF-&#946; signaling improves ocular surface epithelial disease in experimental autoimmune keratoconjunctivitis sicca.</a> PLoS One. 6 (12), 29017 (2011).</li></ol>

In den letzten Jahren hat die klinische Verwendung von plättchenbasierten Produkten für Augenoberflächenpathologien zugenommen, aber ihre Diffusion wird durch den Mangel an wissenschaftlicher Robustheit behindert. Dies ist vor allem auf die große Heterogenität der Spenderquellen und Präparationsprotokolle zurückzuführen, die oft nicht vollständig offengelegt oder nicht speziell für den Zweck, für den sie abgegeben werden, ausgelegt sind. Insbesondere fehlen noch Informationen über plättchenbasierte Produkte,...

Aus Blut gewonnene Produkte werden häufig in der Wundversorgung1, in der Kiefer- und Gesichtschirurgie und orthopädischen Chirurgie sowie zur Behandlung verschiedener Augenoberflächenerkrankungen2 wie der Erkrankung des trockenen Auges (DED)3 eingesetzt. Bei DED ist die Tränenfilmhomöostase infolge der abnormalen Funktion verschiedener Faktoren, die an der Tränenproduktion und der Integrität der Augenoberfläche beteiligt sind, beeinträchtigt 4,5.
DED ist durch Heterogenität in Ursachen und Schweregrad 6,7,8 gekennzeichnet und kann eine Folge verschiedener Faktoren wie Alterung, Geschlecht 9, Kontaktlinsen, topische oder systemische Medikamente 10 oder Vorerkrankungen wie das Sjögren-Syndrom10 sein. Trotz leichter Symptome betrifft DED Millionen von Menschen weltweit und beeinträchtigt ihre Lebensqualität und dasGesundheitssystem6.
Viele Behandlungen wurden für diese Pathologie berichtet, aber es gibt immer noch keinen Konsens über die wirksamste Lösung12. Bis heute sind künstliche Tränen die erste Therapielinie, die darauf abzielt, die wässrige Zusammensetzung des Tränenfilms wiederherzustellen, obwohl diese Ersatzstoffe nicht die wichtigsten biologisch aktiven gelösten Stoffe natürlicher Tränen enthalten 6,11. Produkte auf Thrombozytenbasis gelten als gültige Alternative12,13 zu künstlichen Tränen, obwohl ihre klinische Wirksamkeit, Anwendungsempfehlungen und Zubereitungsmethoden noch umstritten sind3.
Blutbasierte Produkte teilen mit Tränen eine ähnliche Zusammensetzung in Bezug auf Metaboliten14, Proteine, Lipide, Vitamine, Ionen, Wachstumsfaktoren (GFs), antioxidative Verbindungen 11 und Osmolarität (300 mOsm / L)11. Durch die synergistische Aktivität ihrer Bestandteile fördern sie die Regeneration des Hornhautepithels, hemmen die Freisetzung entzündlicher Zytokine und erhöhen die Anzahl der Becherzellen und die Expression von Mucinen in der Bindehaut 2,3.
Bisher ist die Heterogenität in ophthalmologischen blutbasierten Produkten in der Literatur dokumentiert; Diese Produkte können nach der Herkunft der Blutspender, d.h. autolog oder allogen, sowie nach der Blutquelle, d.h. peripherem Blut, Nabelschnurblut, Serum oder Blutplättchen, klassifiziert werden.
Obwohl autologe Produkte am weitesten verbreitet waren3, werden allogene Produkte jetzt zur bevorzugten Wahl, da sie höhere Wirksamkeits- und Sicherheitsstandards15 zusammen mit einer erheblichen Kostensenkung gewährleisten16,17. Frühere Studien haben in der Tat gezeigt, dass blutbasierte Produkte, die von Patienten mit Autoimmun- und/oder systemischen Erkrankungen gewonnen wurden, eine veränderte Qualität und Funktionalität aufweisen können 6,16,17. Trotz der Tatsache, dass Serum-basierte Augentropfen am weitesten verbreitet sind, werden Produkte auf Thrombozytenbasis in letzter Zeit als gültige Alternative bestätigt, da sie leicht hergestellt werden können, während sie ein signifikantesWirksamkeitsniveau beibehalten 3,11. Derzeit verfügbare plättchenbasierte Produkte können in plättchenreiches Plasma (PRP), plättchenreiches Plasmalysat (PRP-L) und wachstumsfaktorreiches Plasma (PRGF)3 unterteilt werden.
Unter ihnen hat PRP-L den Vorteil, ein langlebiges Tiefkühlprodukt zu sein. PRP-L kann aus Apherese, Buffy-Coats oder sogar aus auslaufenden Blutplättchen (PLTs)18,19 hergestellt werden, wodurch deren Verschwendung erheblich reduziert wird. Die Aliquots können monatelang in den Bluttransfusionszentren bei −80 °C oder sogar bei Patienten zu Hause bei −15 °C für kürzere Zeiträume gelagert werden.
PRP-L sind stark angereichert in GFs, die nachweislich die Regeneration der Augenoberfläche stimulieren 12,20,21. Dennoch gibt es nur wenige berichtete klinische Studien in diesem Bereich, und alle verwendeten autologe Quellen 3,22. PRP-L muss noch weiter validiert und charakterisiert werden, bevor es routinemäßig zur Behandlung von Augenoberflächenerkrankungen eingesetzt werden kann, da es keine standardisierten Richtlinien für seine Herstellung, Abgabe und Lagerung gibt3.
Hierin wird ein detailliertes Protokoll für die Herstellung von PRP-L in der Abteilung für Transfusionsmedizin in AUSL-IRCCS di Reggio Emilia, Italien, und die Abgabe an Patienten mit DED veröffentlicht. Unser Ziel ist es, die wissenschaftliche Gemeinschaft bei der Entwicklung von Standardpräparationsmethoden zu unterstützen, die die Homogenität und Konsistenz in weltweiten Studien und klinischen Ansätzen erhöhen können.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Equipments</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CompoSeal Mobilea II</td>
			<td>Fresenius Kabi, Germany</td>
			<td></td>
			<td>bag sealer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HeraSafe hood</td>
			<td>Heraeus Instruments, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Class II biohazard hood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MCS+ 9000 Mobile Platelet Collection System</td>
			<td>Haemonetics, Italy</td>
			<td></td>
			<td>automated plasma and multicomponent collection equipment for donating platelet, red cell, plasma, or combination blood components</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platelet shaker, PF396i</td>
			<td>Helmer, USA</td>
			<td></td>
			<td>Platelet shaker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Raycell X-ray Blood Irradiator</td>
			<td>MDS Nordion, Canada</td>
			<td></td>
			<td>X-ray Blood Irradiator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ROTIXA 50RS</td>
			<td>Hettich Zentrifugen, Germany</td>
			<td></td>
			<td>High speed entrifuge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sysmex XS-1000i</td>
			<td>Sysmex Europe GMBH, Germany</td>
			<td></td>
			<td>haemocytometer for platelet count</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warm bath, WB-M15</td>
			<td>Falc Instruments, Italy</td>
			<td></td>
			<td>Warm bath</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Materials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACD-A anticoagulant solution A</td>
			<td>Fenwal Inc., USA</td>
			<td>DIN 00788139</td>
			<td>anticoagulant solution for platelet apheresis (1000 ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD BACTEC Peds Plus/F Culture vials</td>
			<td>BD Biosciences, USA</td>
			<td>BD 442020</td>
			<td>Sterility assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD BACTEC Peds Plus/F Culture vials</td>
			<td>BD Biosciences, USA</td>
			<td>442020</td>
			<td>At least 2 vials for sterility assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Luer Lok Syringe</td>
			<td>BD Plastipack, USA</td>
			<td>300865</td>
			<td>At least 4 sterile syringes (50 ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Plex Human Cancer Panel 1</td>
			<td>BioRad Laboratories, USA</td>
			<td>171AC500M</td>
			<td>Standard panel for PDGF isoforms assessment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Plex Human Cancer Panel 2</td>
			<td>BioRad Laboratories, USA</td>
			<td>171AC600M</td>
			<td>Standard panel for EGF assessment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Plex MAGPIX Multiplex Reader</td>
			<td>BioRad Laboratories, USA</td>
			<td>Magpix</td>
			<td>This instrument allows multiple immunoassays using functionalized magnetic beads.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Plex Pro TGF-b Assay</td>
			<td>BioRad Laboratories, USA</td>
			<td>10024984</td>
			<td>Set and standards for TGFb isoforms assessment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BioRet</td>
			<td>ARIES s.r.l., Italy</td>
			<td>A2DH0020</td>
			<td>At least 4 piercing spike for blood bags</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood collection tube</td>
			<td>BD Vacutainer, USA</td>
			<td>367835</td>
			<td>1 tube, necessary to perform platelet counts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye drops kit. COL Medical Device for the application and preservation of eye drops from haemocomponents</td>
			<td>Biomed Device s.r.l., Italy</td>
			<td>COLC50</td>
			<td>Eye drops kit. At least 2 kits for each PRP unit collected</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Cancer PDGF-AB/BB Set 1x96well</td>
			<td>BioRad Laboratories, USA</td>
			<td>171BC511</td>
			<td>Set for PDGF isoforms assessment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Cancer2 EGF Set 1x96well</td>
			<td>BioRad Laboratories, USA</td>
			<td>171BC603M</td>
			<td>Set for EGF assessment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl 0.9% sterile solution</td>
			<td>Baxter S.p.A., Italy</td>
			<td>B05BB01</td>
			<td>1000 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OSDI Questionnaire</td>
			<td>Allergan Inc., USA</td>
			<td>OSDI</td>
			<td>Ocular Surface Disease Index Questionnaire</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Piercing spike</td>
			<td>BioRet ARIES s.r.l., Italy</td>
			<td>BS051004</td>
			<td>Spike</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platelet Additive Solution A+ T-PAS+</td>
			<td>TERUMO BCT Inc., Italy</td>
			<td>40842</td>
			<td>preservative solution for platelet concentrates (1000 ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software Excel</td>
			<td>Microsoft, USA</td>
			<td>Excel</td>
			<td>Data analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Teruflex Transfer bag 1000 ml</td>
			<td>TERUMO BCT Inc., Italy</td>
			<td>BB*T100BM</td>
			<td>1 for PRP dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Teruflex Transfer bag 300 ml</td>
			<td>TERUMO BCT Inc., Italy</td>
			<td>BB*030CM</td>
			<td>At least 6 for each PRP unit collected</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

platelet-rich plasma lysate for treatment of eye surface diseases

Verschiedene Augenoberflächenerkrankungen werden mit Augentropfen aus Blut behandelt. Ihre Verwendung wurde aufgrund ihres Metaboliten- und Wachstumsfaktorgehalts, der die Regeneration der Augenoberfläche fördert, in die klinische Praxis eingeführt. Blutbasierte Augentropfen können aus verschiedenen Quellen (z. B. Vollblut- oder Thrombozytenapheresespende) sowie mit verschiedenen Protokollen (z. B. verschiedene Verdünnungen und Gefrier- / Tauzyklen) hergestellt werden. Diese Variabilität behindert die Standardisierung klinischer Protokolle und damit die Bewertung ihrer klinischen Wirksamkeit. Die Einzelheiten und der Austausch der methodischen Verfahren können zur Festlegung gemeinsamer Leitlinien beitragen. In den letzten Jahren haben sich allogene Produkte als Alternative zu den autologen Behandlungen verbreitet, da sie höhere Wirksamkeitsstandards garantieren. unter ihnen werden die plättchenreichen Plasmalysat (PRP-L) Augentropfen mit einfachen Herstellungsverfahren hergestellt. In der Abteilung für Transfusionsmedizin am AUSL-IRCCS di Reggio Emilia, Italien, wird PRP-L aus einer Thrombozytenapheresespende gewonnen. Dieses Produkt wird zunächst auf 0,3 x 10 9 Thrombozyten/ml (ausgehend von einer durchschnittlichen Konzentration von 1 x 10 9 Thrombozyten/ml) in0,9% NaCl verdünnt. Verdünnte Blutplättchen werden eingefroren/aufgetaut und anschließend zentrifugiert, um Ablagerungen zu beseitigen. Das Endvolumen wird in 1,45 ml Aliquots aufgeteilt und bei −80 °C gelagert. Vor der Abgabe an Patienten werden Augentropfen auf Sterilität getestet. Patienten können Thrombozytenlysate bei −15 °C für bis zu 1 Monat lagern. Die Zusammensetzung des Wachstumsfaktors wird ebenfalls aus zufällig ausgewählten Aliquots bewertet, und die Mittelwerte werden hier angegeben.

Der Grund für die Verwendung von Serum-basierten Augentropfen (das am häufigsten zur Behandlung von Augenoberflächenerkrankungen verwendete blutbasierte Produkt) liegt in ihrem Gehalt an GFs, die fast vollständig aus zirkulierenden Blutplättchen gewonnen werden. PRP enthält eine signifikant höhere Anzahl von Blutplättchen (und folglich von aus Blutplättchen gewonnenen GFs) im Vergleich zu peripherem Blutserum, zwischen 0,15 x 10 9-0,45 x 109 PLTs/ml. Nach italienischem Recht sollte die Thro...

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Platelet-Rich Plasma Lysate for Treatment of Eye Surface Diseases

Thrombozytenlysate stellen ein aufstrebendes Werkzeug für die Behandlung von Augenoberflächenerkrankungen dar. Hier schlagen wir eine Methode zur Herstellung, Dispensation, Lagerung und Charakterisierung von Thrombozytenlysat vor, das von Thrombozytenspendern gewonnen wurde.

Plättchenreiches Plasmalysat zur Behandlung von Erkrankungen der Augenoberfläche

Various ocular surface diseases are treated with blood-derived eye drops. Their use has been introduced in clinical practice because of their metabolite ...

PRP Lysat ist ein neues plättchenbasiertes Produkt zur Behandlung von Augenoberflächenerkrankungen. Hier möchten wir unser Produktionsprotokoll teilen und detailliert beschreiben, um die Entwicklung gemeinsamer methodischer Richtlinien abzudecken. Halo-Genprodukte haben sich als Alternative zu autologen Behandlungen verbreitet.Da sie höhere Wirksamkeitsstandards garantieren. PRP-Lysat enthält eine hohe Konzentration an Wachstumsfaktoren. Seine Herstellung ist kostengünstig und einfach und es kann für eine lange Zeit gelagert werden.Die Verwendung von Blutprodukten zur Behandlung von Augen- oder Gesichtserkrankungen ist in der Literatur weitgehend dokumentiert. Dennoch haben ihre Anträge immer noch keinen Konsens gefunden. Einer der Gründe ist die Variabilität der Methoden, die für ihre Herstellung verwendet werden.Unser Ziel ist es, unser Protokoll zu teilen, um gemeinsame Methoden zu entwickeln. Führen Sie zunächst eine Thrombozytenzahl mit einem Hämozystometer durch, wobei die Probe aus dem Hauptbeutel durch einen Piercing-Spike entnommen wird. Verdünnen Sie plättchenreiches Plasma mit einer ausreichenden Menge sterilem Natriumchlorid von 0,9%.Das verdünnte plättchenreiche Plasma wird in 300 Milliliter leere Auffangbeutel aufgeteilt, um ein Nettovolumen von 190 Milliliter pro Beutel zu erreichen. Verwenden Sie ein Aliquot von verdünntem verdünntem plättchenreichem Plasma, um Qualitätskontrollen durchzuführen und eine mögliche mikrobielle Kontamination zu bewerten. Bereiten Sie einen Sterilitätstest nach den Anweisungen des Herstellers vor, der in einem mikrobiologischen Labor getestet werden soll.Lagern Sie verdünnte plättchenreiche Plasmabeutel maximal zwei Monate bei minus 80 Grad Celsius, bevor sie auftauen. Stellen Sie sicher, dass ein warmes Bad auf 37 Grad Celsius eingestellt ist. Legen Sie die plättchenreichen Plasmabeutel in das warme Bad und warten Sie, bis sie vollständig aufgetaut sind.Zentrifugieren Sie die plättchenreichen Plasmabeutel bei 3000 mal G für 30 Minuten bei Raumtemperatur. Verbinden Sie den zentrifugierten Beutel unter Ausnutzung des Piercing-Spikes des Transferbeutels mit einem leeren sterilen 300-Milliliter-Transferbeutel. Übertragen Sie den PRP Lysat-Überstand vorsichtig und vermeiden Sie Schmutz in den neuen Beutel.Verschließen Sie das Anschlussrohr der PRP Lysate Einheit mit einem Beutelverschließer. Sammeln Sie 30 bis 60 Milliliter PRP-Lysat mit einer sterilen Spritze und verbinden Sie die Spritze mit dem Luer-Lock-Anschluss an der Abfülllinie. Drehen Sie den Absperrhahn gemäß den Anweisungen des Herstellers um eine halbe Umdrehung, um die Leitung zwischen der PRP-Lysat-haltigen Spritze und der vorangeschlossenen Spritze zu öffnen.Füllen Sie die vorkonfektionierte Spritze mit PRP-Lysat. Trennen Sie die PRP Lysate Spritze. Schließen Sie die Schlauchkappe des Luer Lock Anschlusses und drehen Sie den Absperrhahn in die ursprüngliche Position.Verwenden Sie die Augentropfen-Kit-Spritze, um die Durchstechflaschen mit PRP-Lysat zu füllen. Stellen Sie sicher, dass jeder Applikator ordnungsgemäß gefüllt ist. Anschließend verschließen Sie sie einzeln mit einem Beutelverschließer.Wiederholen Sie den Vorgang mit einem neuen Augentropfen-Kit. Verwenden Sie ein kleines Aliquot an verdünntem verdünntem PRP-Restlysat, um eine mögliche mikrobielle Kontamination zu beurteilen. Beschriften Sie jeden Applikator richtig und legen Sie ihn in einen Plastikbeutel.Beschriften Sie auch die Plastiktüte. Achten Sie darauf, die Blutgruppe des Spenders hervorzuheben. Lagerung bei minus 80 Grad Celsius für maximal 24 Monate vor der Patientenzuweisung gemäß dem italienischen Gesetz und den Richtlinien.Eine quantitative Bewertung des epidermalen Wachstumsfaktors, des thrombozytenabgeleiteten Wachstumsfaktors und der transformierenden Wachstumsfaktor-Beta-Isoform in PRP-Lysat von zwei verschiedenen Donatoren zeigt, dass die Ergebnisse der 0,3 mal 10 bis neunten Thrombozyten pro Milliliter Verdünnung der Tränenzusammensetzung am ähnlichsten waren. Nach einer sechsmonatigen Therapie mit PRP Lysat sank der Index der Augenoberflächenerkrankung von 56 plus minus 21 auf 45 plus minus 21. Hinweis auf eine Verbesserung der Lebensqualität des Patienten.Die methodischen Unterschiede zwischen verschiedenen Methoden zur Herstellung des allogenen PRP-Lysats erwiesen sich nicht als nachteilig für die Regenerationsfähigkeit des an den anderen Geweben getesteten PRP-Lysats. Die Verdünnung des Plasmas mit Natriumchlorid und die Lagerung von plättchenreichem Plasma muss mit Vorsicht durchgeführt werden. Da dies die Zusammensetzung des PRP-Lysats verändern könnte.Vergleichende Analysen sind notwendig, um Variationen in diesen Schritten zu untersuchen.

Research

JoVE Journal

Medicine

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Medizin

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