Name: platelet-rich plasma lysate for treatment of eye surface diseases
Uploaded: 2022-08-02T14:00:00
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著者らは、ドナー由来の血小板濃縮物を提供してくれた「カサ・デル・ドノ・ディ・レッジョ・エミリア」に感謝したい。

成長因子の定量的評価に使用されるPRP-Lは、AUSL-IRCCSディレッジョエミリアで実施され、2019年1月10日にエリアヴァスタエミリアノルド倫理委員会によって承認された、再生目的のPRP製品の特性評価に関するより広範な研究内で収集されました(プロトコル番号2019/0003319)。ドナーは、ヘルシンキ宣言に従ってインフォームドコンセントを行いました。ドライアイ症候群の症状を監視するために臨?...

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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+lysate+promotes+re-epithelialization+of+persistent+epithelial+defects:+A+pilot+study.">Platelet lysate promotes re-epithelialization of persistent epithelial defects: A pilot study.</a> International Ophthalmology. 39 (7), 1483-1490 (2019).</li><li>Geremicca, W., Fonte, C., Vecchio, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+components+for+topical+use+in+tissue+regeneration:+evaluation+of+corneal+lesions+treated+with+platelet+lysate+and+considerations+on+repair+mechanisms.">Blood components for topical use in tissue regeneration: evaluation of corneal lesions treated with platelet lysate and considerations on repair mechanisms.</a> Blood Transfusion. 8 (2), 107-112 (2010).</li><li>De Paiva, C. 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近年、眼の表面病理に対する血小板ベースの製品の臨床使用が増加しているが、それらの普及は科学的堅牢性の欠如によって妨げられている。これは主に、ドナーソースと調製プロトコルの幅広い異質性によって引き起こされ、それらはしばしば完全に開示されていないか、それらが調剤される目的のために特別に設計されていません。特に、アフェレーシスによって収集された血小板ベー?...

血液由来製品は、創傷ケア1、顎顔面および整形外科手術、およびドライアイ疾患(DED)3などのさまざまな眼表面疾患2の治療に広く使用されています。DEDでは、涙液膜の恒常性は、涙液の生成および眼の表面の完全性に関与するさまざまな要因の異常な機能の結果として損なわれます4,5。
DEDは、原因と重症度の不均一性を特徴とします6,7,8 そして、老化、性別9、コンタクトレンズ、局所または全身薬10、またはシェーグレン症候群10のような既存の状態などのさまざまな要因の結果である可能性があります。軽度の症状にもかかわらず、DEDは世界中の何百万人もの人々に影響を及ぼし、生活の質と医療システムにも影響を及ぼします6。
この病状に対して多くの治療法が報告されていますが、最も効果的な解決策についてはまだコンセンサスがありません12。今日まで、人工涙液は涙液膜の水性組成物を回復することを目的とした治療の第一線であるが、これらの代替物は天然涙液の主要な生物学的に活性な溶質を含まない6,11。血小板ベースの製品は、人工涙液の有効な代替品12,13と考えられていますが、その臨床効果、使用の推奨事項、および調製方法はまだ議論の問題です3。
血液ベースの製品は、代謝物14、タンパク質、脂質、ビタミン、イオン、成長因子(GF)、抗酸化化合物11、および浸透圧(300 mOsm / L)11の点で同様の組成を涙と共有します。それらの成分の相乗的活性を通して、それらは角膜上皮の再生を促進し、炎症性サイトカインの放出を阻害し、そして結膜における杯細胞の数およびムチンの発現を増加させる2,3。
これまでのところ、眼科用血液ベースの製品の不均一性が文献に記録されています。これらの製品は、献血者の起源、すなわち自家または同種、ならびに血液源、すなわち末梢血、臍帯血、血清、または血小板に従って分類することができる。
自家製品は最も普及していましたが3、同種異系製品は、より高い有効性と安全基準15を保証し、コストの大幅な削減を保証するため、現在、好ましい選択肢になりつつあります16,17。実際、以前の研究では、自己免疫疾患および/または全身性疾患の患者から得られた血液ベースの製品が、品質および機能の変化を示す可能性があることが証明されています6,16,17。血清ベースの点眼薬が最も普及しているという事実にもかかわらず、血小板ベースの製品は、有意なレベルの有効性を維持しながら容易に調製できるため、最近有効な代替品として確認されつつあります3,11。現在入手可能な血小板ベースの製品は、多血小板血漿(PRP)、多血小板血漿溶解物(PRP-L)、および成長因子に富む血漿(PRGF)に分けることができます3。
その中でも、PRP-Lは長寿命の冷凍品であるという利点があります。PRP-Lは、アフェレーシス、バフィーコート、さらには期限切れの血小板(PLT)18,19から調製することができ、無駄を大幅に削減します。アリコートは、-80°Cの輸血センターで数ヶ月間、または-15°Cの患者の自宅で短期間保管することができます。
PRP-LはGFが非常に豊富であり、眼の表面再生を刺激することが証明されています12,20,21。それにもかかわらず、この分野で報告された臨床研究はごくわずかであり、それらのすべてが自家源を使用していました3,22。PRP-Lは、その調製、調剤、および保管に関する標準化されたガイドラインがないため、眼表面疾患の治療に日常的に使用する前に、さらなる検証と特性評価が必要です3。
ここでは、イタリアのAUSL-IRCCSディレッジョエミリアの輸血医学ユニットで使用されるPRP-Lの製造、およびDED患者への調剤に関する詳細なプロトコルが共有されています。私たちは、科学界が標準的な調製方法を開発するのを支援することを目指しており、これにより、世界的な研究や臨床アプローチにおける均質性と一貫性が向上する可能性があります。

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Equipments</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CompoSeal Mobilea II</td>
			<td>Fresenius Kabi, Germany</td>
			<td></td>
			<td>bag sealer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HeraSafe hood</td>
			<td>Heraeus Instruments, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Class II biohazard hood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MCS+ 9000 Mobile Platelet Collection System</td>
			<td>Haemonetics, Italy</td>
			<td></td>
			<td>automated plasma and multicomponent collection equipment for donating platelet, red cell, plasma, or combination blood components</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platelet shaker, PF396i</td>
			<td>Helmer, USA</td>
			<td></td>
			<td>Platelet shaker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Raycell X-ray Blood Irradiator</td>
			<td>MDS Nordion, Canada</td>
			<td></td>
			<td>X-ray Blood Irradiator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ROTIXA 50RS</td>
			<td>Hettich Zentrifugen, Germany</td>
			<td></td>
			<td>High speed entrifuge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sysmex XS-1000i</td>
			<td>Sysmex Europe GMBH, Germany</td>
			<td></td>
			<td>haemocytometer for platelet count</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warm bath, WB-M15</td>
			<td>Falc Instruments, Italy</td>
			<td></td>
			<td>Warm bath</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Materials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACD-A anticoagulant solution A</td>
			<td>Fenwal Inc., USA</td>
			<td>DIN 00788139</td>
			<td>anticoagulant solution for platelet apheresis (1000 ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD BACTEC Peds Plus/F Culture vials</td>
			<td>BD Biosciences, USA</td>
			<td>BD 442020</td>
			<td>Sterility assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD BACTEC Peds Plus/F Culture vials</td>
			<td>BD Biosciences, USA</td>
			<td>442020</td>
			<td>At least 2 vials for sterility assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Luer Lok Syringe</td>
			<td>BD Plastipack, USA</td>
			<td>300865</td>
			<td>At least 4 sterile syringes (50 ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Plex Human Cancer Panel 1</td>
			<td>BioRad Laboratories, USA</td>
			<td>171AC500M</td>
			<td>Standard panel for PDGF isoforms assessment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Plex Human Cancer Panel 2</td>
			<td>BioRad Laboratories, USA</td>
			<td>171AC600M</td>
			<td>Standard panel for EGF assessment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Plex MAGPIX Multiplex Reader</td>
			<td>BioRad Laboratories, USA</td>
			<td>Magpix</td>
			<td>This instrument allows multiple immunoassays using functionalized magnetic beads.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Plex Pro TGF-b Assay</td>
			<td>BioRad Laboratories, USA</td>
			<td>10024984</td>
			<td>Set and standards for TGFb isoforms assessment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BioRet</td>
			<td>ARIES s.r.l., Italy</td>
			<td>A2DH0020</td>
			<td>At least 4 piercing spike for blood bags</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood collection tube</td>
			<td>BD Vacutainer, USA</td>
			<td>367835</td>
			<td>1 tube, necessary to perform platelet counts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye drops kit. COL Medical Device for the application and preservation of eye drops from haemocomponents</td>
			<td>Biomed Device s.r.l., Italy</td>
			<td>COLC50</td>
			<td>Eye drops kit. At least 2 kits for each PRP unit collected</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Cancer PDGF-AB/BB Set 1x96well</td>
			<td>BioRad Laboratories, USA</td>
			<td>171BC511</td>
			<td>Set for PDGF isoforms assessment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Cancer2 EGF Set 1x96well</td>
			<td>BioRad Laboratories, USA</td>
			<td>171BC603M</td>
			<td>Set for EGF assessment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl 0.9% sterile solution</td>
			<td>Baxter S.p.A., Italy</td>
			<td>B05BB01</td>
			<td>1000 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OSDI Questionnaire</td>
			<td>Allergan Inc., USA</td>
			<td>OSDI</td>
			<td>Ocular Surface Disease Index Questionnaire</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Piercing spike</td>
			<td>BioRet ARIES s.r.l., Italy</td>
			<td>BS051004</td>
			<td>Spike</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platelet Additive Solution A+ T-PAS+</td>
			<td>TERUMO BCT Inc., Italy</td>
			<td>40842</td>
			<td>preservative solution for platelet concentrates (1000 ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software Excel</td>
			<td>Microsoft, USA</td>
			<td>Excel</td>
			<td>Data analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Teruflex Transfer bag 1000 ml</td>
			<td>TERUMO BCT Inc., Italy</td>
			<td>BB*T100BM</td>
			<td>1 for PRP dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Teruflex Transfer bag 300 ml</td>
			<td>TERUMO BCT Inc., Italy</td>
			<td>BB*030CM</td>
			<td>At least 6 for each PRP unit collected</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

platelet-rich plasma lysate for treatment of eye surface diseases

さまざまな眼の表面疾患は、血液由来の点眼薬で治療されます。それらの使用は、眼の表面再生を促進する代謝産物および成長因子含有量のために臨床診療において導入されている。血液ベースの点眼薬は、さまざまな供給源(すなわち、全血または血小板アフェレーシスの寄付)から、および異なるプロトコル(例えば、異なる希釈および凍結/解凍サイクル)で調製することができる。この変動性は、臨床プロトコルの標準化を妨げ、その結果、臨床効果の評価を妨げます。方法論的手順を詳述し、共有することは、共通のガイドラインの定義に貢献する可能性がある。過去数年間、同種異系製品は、より高い有効性基準を保証するため、自家治療の代替として普及しています。その中で、多血小板血漿溶解物(PRP-L)点眼剤は簡単な製造手順で調製されます。イタリアのAUSL-IRCCSディレッジョエミリアの輸血医学ユニットでは、PRP-Lは血小板アフェレーシスの提供から得られます。この製品は、最初に0.9%NaClで0.3 x 109 血小板/ mL(1 x 109 血小板/ mLの平均濃度から開始)に希釈されます。希釈された血小板は凍結/解凍され、その後、破片を除去するために遠心分離されます。最終容量を1.45 mLアリコートに分割し、-80°Cで保存します。 患者に調剤される前に、点眼薬は無菌性についてテストされます。患者は血小板溶解物を-15°Cで最大1か月間保存できます。成長因子組成も無作為に選択されたアリコートから評価され、平均値がここで報告されます。

血清由来の点眼薬(眼表面疾患の治療に最も頻繁に使用される血液ベースの製品)を使用する理論的根拠は、循環血小板にほぼ完全に由来するGFの含有量にあります。PRPには、末梢血血清と比較して有意に多くの血小板(およびその結果として血小板由来GF)が含まれており、0.15 x 10 9-0.45 x10 9 PLT / mLの範囲です。.イタリアの法律によると、PRP単位の血小板数は少なくとも0.9 x 10 9-1<s...

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Platelet-Rich Plasma Lysate for Treatment of Eye Surface Diseases

血小板溶解物は、眼の表面疾患の治療のための新たなツールを表しています。ここでは、血小板ドナーから採取した血小板溶解液の調製、分注、保存、および特性評価の方法を提案する。

眼表面疾患の治療のための多血小板血漿ライセート

Various ocular surface diseases are treated with blood-derived eye drops. Their use has been introduced in clinical practice because of their metabolite ...

PRPライセートは、眼の表面疾患の治療のための新しい血小板ベースの製品です。ここでは、共通の方法論的ガイドラインの開発をカバーするために、生産プロトコルを共有し、詳細に説明したいと思います。ハロージェニック製品は、自家治療の代替として普及しています。彼らはより高い有効性基準を保証するので。PRPライセートには高濃度の成長因子が含まれています。その生産は安価で簡単で、長期間保存することができます。目や顔の病気の治療のための血液製剤の使用は、文献に大部分が文書化されています。それにもかかわらず、彼らのアプリケーションはまだコンセンサスを見つけていません。その理由の1つは、それらの製造に使用される方法の多様性です。私たちの目的は、共通の方法論を開発するためにプロトコルを共有することです。まず、メインバッグからピアススパイクを通して採取したサンプルを使用して、血膀胱計で血小板数を実行します。多血小板血漿を適切な量の滅菌0.9%塩化ナトリウムで希釈する。希釈した多血小板血漿を300ミリリットルの空の収集バッグに分割して、バッグあたり190ミリリットルの正味容量に到達します。残留希釈多血小板血漿のアリコートを使用して品質管理を行い、微生物汚染の可能性を評価します。微生物学研究所で試験する製造業者の指示に従って無菌アッセイを準備します。希釈した多血小板血漿バッグを摂氏マイナス80度で最大2か月間保管してから解凍します。温浴が摂氏37度に設定されていることを確認してください。多血小板血漿バッグを温浴に入れ、完全に解凍するまで待ちます。多血小板血漿バッグを3000倍Gで室温で30分間遠心分離します。トランスファーバッグのピアススパイクを利用して、遠心分離バッグを空の滅菌300ミリリットルのトランスファーバッグに接続します。破片を避けながら、PRPライセート上清を新しいバッグに慎重に移します。PRPライセートユニットの接続チューブをバッグシーラーでシールします。滅菌シリンジで30〜60ミリリットルのPRPライセートを収集し、シリンジを充填ラインのルアーロック接続にリンクします。製造元の指示に従って、活栓を半回転させて、PRPライセート含有シリンジと事前に接続されたシリンジの間のラインを開きます。事前に接続されたシリンジにPRPライセートを充填します。PRPライセートシリンジを外します。ルアーロック接続のチューブキャップを閉じ、活栓を元の位置に回転させます。点眼キットシリンジを使用して、バイアルにPRPライセートを充填します。各アプリケーターが適切に充填されていることを確認してください。次に、バッグシーラーで個別に密封します。新しい点眼キットで手順を繰り返します。少量の残留希釈PRPライセートを使用して、微生物汚染の可能性を評価します。各アプリケーターに適切なラベルを付け、ビニール袋に入れます。ビニール袋にもラベルを付けます。ドナーの血液型を強調するように注意してください。イタリアの法律とガイドラインに従って、患者の割り当て前に最大80か月間摂氏マイナス24度で保管してください。2つの異なるドナーからのPRPライセート中の上皮成長因子、血小板由来成長因子、およびトランスフォーミング成長因子ベータアイソフォームの定量的評価は、ミリリットル希釈あたり0.3倍の10〜9番目の血小板の結果が涙液組成に最も類似していることが判明したことを示しています。PRP Lysate眼表面疾患指数スコアによる6か月の治療後、スコアは56プラスマイナス21から45プラスマイナス21に減少しました。.患者の生活の質の改善を示します。同種異系PRPライセートを調製する異なる方法間の方法論的な違いは、他の組織で試験されたPRPライセートの再生能力に有害であることが証明されませんでした。塩化ナトリウムによる血漿の希釈および多血小板血漿の保存は注意して行う必要がある。これにより、PRPライセートの組成が変わる可能性があるためです。これらのステップの変動を調査するには、比較分析が必要です。

Research

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