Name: platelet-rich plasma lysate for treatment of eye surface diseases
Uploaded: 2022-08-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Platelet-Rich Plasma Lysate for Treatment of Eye Surface Diseases at JoVE.com

저자는 기증자 유래 혈소판 농축액을 제공 한 "Casa del Dono di Reggio Emilia"에 감사드립니다.

성장 인자의 정량적 평가에 사용되는 PRP-L은 AUSL-IRCCS di Reggio Emilia에서 수행되고 2019 년 1 월 10 일 Area Vasta Emilia Nord 윤리위원회의 승인 (프로토콜 번호 2019/0003319)에서 승인 된 재생 목적을위한 PRP 제품의 특성화에 대한 광범위한 연구에서 수집되었습니다. 기부자들은 헬싱키 선언에 따라 정보에 입각한 동의를 했습니다. 임상의가 안구 건조증 증상을 모니터링하기 위해 일상적으로 사용하는 안구 ?...

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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+lysate+promotes+re-epithelialization+of+persistent+epithelial+defects:+A+pilot+study.">Platelet lysate promotes re-epithelialization of persistent epithelial defects: A pilot study.</a> International Ophthalmology. 39 (7), 1483-1490 (2019).</li><li>Geremicca, W., Fonte, C., Vecchio, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+components+for+topical+use+in+tissue+regeneration:+evaluation+of+corneal+lesions+treated+with+platelet+lysate+and+considerations+on+repair+mechanisms.">Blood components for topical use in tissue regeneration: evaluation of corneal lesions treated with platelet lysate and considerations on repair mechanisms.</a> Blood Transfusion. 8 (2), 107-112 (2010).</li><li>De Paiva, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+TGF-&#946;+signaling+improves+ocular+surface+epithelial+disease+in+experimental+autoimmune+keratoconjunctivitis+sicca.">Disruption of TGF-&#946; signaling improves ocular surface epithelial disease in experimental autoimmune keratoconjunctivitis sicca.</a> PLoS One. 6 (12), 29017 (2011).</li></ol>

최근 몇 년 동안 안구 표면 병리에 대한 혈소판 기반 제품의 임상 적 사용이 증가했지만 과학적 견고성이 부족하여 확산이 방해 받고 있습니다. 이것은 주로 기증자 출처 및 준비 프로토콜의 광범위한 이질성으로 인해 발생하며, 이는 종종 완전히 공개되지 않았거나 분배 목적에 맞게 특별히 설계되지 않았습니다. 특히, 성분채집에 의해 수집된 혈소판 기반 제품에 대한 정보는 여전히 부족합니다...

혈액 유래 제품은 상처 치료1, 악안면 및 정형외과 수술, 안구건조증(DED)3과 같은 다양한 안구 표면 질환2의 치료에 널리 사용됩니다. DED에서 눈물 막 항상성은 눈물 생성 및 안구 표면 무결성 4,5와 관련된 여러 요인의 비정상적인 기능의 결과로 손상됩니다.
DED는 원인과 중증도6,7,8의 이질성을 특징으로 하며 노화, 성관계9, 콘택트렌즈, 국소 또는 전신 약물10 또는 쇼그렌 증후군10과 같은 기존 상태와 같은 다양한 요인의 결과일 수 있습니다. 경미한 증상에도 불구하고 DED는 전 세계 수백만 명의 사람들에게 영향을 미치며 삶의 질과 의료 시스템에도 영향을 미칩니다6.
이 병리에 대한 많은 치료법이보고되었지만 가장 효과적인 해결책12에 대한 합의는 아직 없습니다. 현재까지 인공 눈물은 눈물 막의 수성 조성물을 복원하기위한 치료의 첫 번째 라인이지만, 이들 대체물은 자연 눈물의 주요 생물학적 활성 용질을 포함하지 않습니다 6,11. 혈소판 기반 제품은 인공 눈물에 대한 유효한 대안12,13으로 간주되지만 임상 효능, 사용 권장 사항 및 준비 방법은 여전히 논쟁의 여지가 있습니다3.
혈액 기반 제품은 대사 산물14, 단백질, 지질, 비타민, 이온, 성장 인자 (GF), 항산화 화합물11 및 삼투압 (300 mOsm / L) 11 측면에서 유사한 구성을 눈물과 공유합니다. 성분의 시너지 활성을 통해 각막 상피의 재생을 촉진하고 염증성 사이토 카인의 방출을 억제하며 결막 2,3에서 잔 세포의 수와 뮤신의 발현을 증가시킵니다.
지금까지 안과 용 혈액 기반 제품의 이질성은 문헌에 문서화되었습니다. 이러한 제품은 헌혈자의 기원, 즉자가 또는 동종 혈액뿐만 아니라 혈액 공급원, 즉 말초 혈액, 제대혈, 혈청 또는 혈소판에 따라 분류 할 수 있습니다.
자가 제품이 가장 널리 보급되었지만3, 동종 제품은 더 높은 효능 및 안전성 표준15을 보장하고 비용16,17을 크게 절감하기 때문에 이제 선호되는 선택이 되고 있습니다. 실제로 이전 연구에서는 자가면역 및/또는 전신 질환 환자로부터 얻은 혈액 기반 제품이품질과 기능이 변경될 수 있음을 입증했습니다6,16,17. 혈청 기반 점안액이 가장 널리 퍼져 있음에도 불구하고 혈소판 기반 제품은 상당한 수준의 효능을 유지하면서 쉽게 준비 할 수 있기 때문에 최근 유효한 대안으로 확인되고 있습니다 3,11. 현재 사용 가능한 혈소판 기반 제품은 혈소판 풍부 혈장 (PRP), 혈소판 풍부 혈장 용해물 (PRP-L) 및 성장 인자 풍부 혈장 (PRGF)으로 나눌 수 있습니다 3.
그 중 PRP-L은 수명이 긴 냉동 제품이라는 장점이 있습니다. PRP-L은 성분채집, 버피 코트 또는 만료되는 혈소판(PLT)18,19에서 제조할 수 있어 낭비를 소중하게 줄일 수 있습니다. 분취량은 -80 ° C의 수혈 센터에서 수개월 동안 또는 -15 ° C의 환자 집에서도 더 짧은 기간 동안 보관할 수 있습니다.
PRP-L은 눈 표면 재생을 자극하는 것으로 입증 된 GF가 매우 풍부합니다 12,20,21. 그럼에도 불구하고이 분야에 대해보고 된 임상 연구는 거의 없으며 모두자가 출처 3,22를 사용했습니다. PRP-L은 준비, 분배및 보관에 대한 표준화된 지침이 없기 때문에 눈 표면 질환 치료에 일상적으로 사용하기 전에 추가 검증 및 특성 분석이 여전히 필요합니다3.
여기에서는 이탈리아 AUSL-IRCCS 디 레지오 에밀리아의 수혈 의학 부서에서 사용되는 PRP-L의 생산 및 DED 환자에 대한 분배에 대한 자세한 프로토콜이 공유됩니다. 우리는 과학계가 전 세계 연구 및 임상 접근법에서 동질성과 일관성을 높일 수있는 표준 준비 방법을 개발하도록 돕는 것을 목표로합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Equipments</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CompoSeal Mobilea II</td>
			<td>Fresenius Kabi, Germany</td>
			<td></td>
			<td>bag sealer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HeraSafe hood</td>
			<td>Heraeus Instruments, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Class II biohazard hood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MCS+ 9000 Mobile Platelet Collection System</td>
			<td>Haemonetics, Italy</td>
			<td></td>
			<td>automated plasma and multicomponent collection equipment for donating platelet, red cell, plasma, or combination blood components</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platelet shaker, PF396i</td>
			<td>Helmer, USA</td>
			<td></td>
			<td>Platelet shaker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Raycell X-ray Blood Irradiator</td>
			<td>MDS Nordion, Canada</td>
			<td></td>
			<td>X-ray Blood Irradiator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ROTIXA 50RS</td>
			<td>Hettich Zentrifugen, Germany</td>
			<td></td>
			<td>High speed entrifuge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sysmex XS-1000i</td>
			<td>Sysmex Europe GMBH, Germany</td>
			<td></td>
			<td>haemocytometer for platelet count</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warm bath, WB-M15</td>
			<td>Falc Instruments, Italy</td>
			<td></td>
			<td>Warm bath</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Materials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACD-A anticoagulant solution A</td>
			<td>Fenwal Inc., USA</td>
			<td>DIN 00788139</td>
			<td>anticoagulant solution for platelet apheresis (1000 ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD BACTEC Peds Plus/F Culture vials</td>
			<td>BD Biosciences, USA</td>
			<td>BD 442020</td>
			<td>Sterility assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD BACTEC Peds Plus/F Culture vials</td>
			<td>BD Biosciences, USA</td>
			<td>442020</td>
			<td>At least 2 vials for sterility assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Luer Lok Syringe</td>
			<td>BD Plastipack, USA</td>
			<td>300865</td>
			<td>At least 4 sterile syringes (50 ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Plex Human Cancer Panel 1</td>
			<td>BioRad Laboratories, USA</td>
			<td>171AC500M</td>
			<td>Standard panel for PDGF isoforms assessment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Plex Human Cancer Panel 2</td>
			<td>BioRad Laboratories, USA</td>
			<td>171AC600M</td>
			<td>Standard panel for EGF assessment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Plex MAGPIX Multiplex Reader</td>
			<td>BioRad Laboratories, USA</td>
			<td>Magpix</td>
			<td>This instrument allows multiple immunoassays using functionalized magnetic beads.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Plex Pro TGF-b Assay</td>
			<td>BioRad Laboratories, USA</td>
			<td>10024984</td>
			<td>Set and standards for TGFb isoforms assessment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BioRet</td>
			<td>ARIES s.r.l., Italy</td>
			<td>A2DH0020</td>
			<td>At least 4 piercing spike for blood bags</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood collection tube</td>
			<td>BD Vacutainer, USA</td>
			<td>367835</td>
			<td>1 tube, necessary to perform platelet counts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye drops kit. COL Medical Device for the application and preservation of eye drops from haemocomponents</td>
			<td>Biomed Device s.r.l., Italy</td>
			<td>COLC50</td>
			<td>Eye drops kit. At least 2 kits for each PRP unit collected</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Cancer PDGF-AB/BB Set 1x96well</td>
			<td>BioRad Laboratories, USA</td>
			<td>171BC511</td>
			<td>Set for PDGF isoforms assessment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Cancer2 EGF Set 1x96well</td>
			<td>BioRad Laboratories, USA</td>
			<td>171BC603M</td>
			<td>Set for EGF assessment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl 0.9% sterile solution</td>
			<td>Baxter S.p.A., Italy</td>
			<td>B05BB01</td>
			<td>1000 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OSDI Questionnaire</td>
			<td>Allergan Inc., USA</td>
			<td>OSDI</td>
			<td>Ocular Surface Disease Index Questionnaire</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Piercing spike</td>
			<td>BioRet ARIES s.r.l., Italy</td>
			<td>BS051004</td>
			<td>Spike</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platelet Additive Solution A+ T-PAS+</td>
			<td>TERUMO BCT Inc., Italy</td>
			<td>40842</td>
			<td>preservative solution for platelet concentrates (1000 ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software Excel</td>
			<td>Microsoft, USA</td>
			<td>Excel</td>
			<td>Data analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Teruflex Transfer bag 1000 ml</td>
			<td>TERUMO BCT Inc., Italy</td>
			<td>BB*T100BM</td>
			<td>1 for PRP dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Teruflex Transfer bag 300 ml</td>
			<td>TERUMO BCT Inc., Italy</td>
			<td>BB*030CM</td>
			<td>At least 6 for each PRP unit collected</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

platelet-rich plasma lysate for treatment of eye surface diseases

다양한 안구 표면 질환은 혈액 유래 점안액으로 치료됩니다. 그들의 사용은 눈 표면 재생을 촉진하는 대사 산물 및 성장 인자 함량 때문에 임상 실습에 도입되었습니다. 혈액 기반 점안액은 다양한 출처(예: 전혈 또는 혈소판 성분채혈 기증)와 다양한 프로토콜(예: 다양한 희석 및 동결/해동 주기)로 준비할 수 있습니다. 이러한 가변성은 임상 프로토콜의 표준화를 방해하고 결과적으로 임상 효능의 평가를 방해합니다. 방법론적 절차를 자세히 설명하고 공유하면 공통 지침을 정의하는 데 기여할 수 있습니다. 지난 몇 년 동안 동종 제제는 더 높은 효능 표준을 보장하기 때문에자가 치료의 대안으로 확산되었습니다. 그 중 혈소판이 풍부한 혈장 용해물 (PRP-L) 점안액은 간단한 제조 절차로 준비됩니다. 이탈리아 AUSL-IRCCS di Reggio Emilia의 수혈 의학 부서에서 PRP-L은 혈소판 성분채집 기증으로 얻습니다. 이 제품은 처음에 0.9 % NaCl에서 0.3 x 10 9 혈소판 / mL (1 x 109 혈소판 / mL의 평균 농도에서 시작)로 희석됩니다. 희석 된 혈소판은 냉동 / 해동 된 후 원심 분리되어 파편을 제거합니다. 최종 부피는 1.45mL 분취량으로 분할되고 -80°C에서 저장됩니다. 환자에게 분배되기 전에 안약을 불임 상태로 테스트합니다. 환자는 혈소판 용해물을 -15 ° C에서 최대 1 개월 동안 저장할 수 있습니다. 성장 인자 조성은 또한 무작위로 선택된 부분 표본으로부터 평가되며, 평균값은 여기에보고된다.

혈청 유래 점안액 (눈 표면 질환 치료에 가장 자주 사용되는 혈액 기반 제품)의 사용에 대한 근거는 순환 혈소판에서 거의 완전히 파생 된 GF의 함량에 있습니다. PRP는 말초 혈청에 비해 0.15 x 10 9-0.45 x 109 PLT / mL 범위의 훨씬 더 많은 수의 혈소판 (결과적으로 혈소판 유래 GF)을 포함합니다. 이탈리아 법률에 따르면 PRP 단위의 혈소판 수는 0.9 x 10 9-1 x 109 PLT / mL 이상이어야합니?...

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Platelet-Rich Plasma Lysate for Treatment of Eye Surface Diseases

혈소판 용해물은 안구 표면 질환 치료를위한 새로운 도구를 나타냅니다. 여기에서는 혈소판 공여자로부터 수집 한 혈소판 용해물의 준비, 분배, 저장 및 특성화 방법을 제안합니다.

눈 표면 질환 치료를 위한 혈소판이 풍부한 혈장 용해물

Various ocular surface diseases are treated with blood-derived eye drops. Their use has been introduced in clinical practice because of their metabolite ...

PRP 용해물은 안구 표면 질환 치료를위한 새로운 혈소판 기반 제품입니다. 여기서 우리는 일반적인 방법론적 지침의 개발을 다루기 위해 생산 프로토콜을 공유하고 자세히 설명하고자 합니다. Halo 유전자 제품은자가 치료의 대안으로 확산되고 있습니다.더 높은 효능 표준을 보장하기 때문입니다. PRP 용해물은 고농도의 성장 인자를 함유하고 있습니다. 생산은 저렴하고 간단하며 장기간 보관할 수 있습니다.눈 또는 얼굴 질환의 치료를위한 혈액 제제의 사용은 주로 문헌에 문서화되어있다. 그럼에도 불구하고 그들의 응용 프로그램은 여전히 합의를 찾지 못했습니다. 그 이유 중 하나는 생산에 사용되는 방법의 다양성입니다.우리의 목표는 공통 방법론을 개발하기 위해 프로토콜을 공유하는 것입니다. 시작하려면 피어싱 스파이크를 통해 메인 백에서 수집 한 샘플을 사용하여 혈액 방광계로 혈소판 수를 수행하십시오. 혈소판이 풍부한 혈장을 적절한 양의 멸균 0.9% 염화나트륨으로 희석합니다.희석 된 혈소판이 풍부한 혈장을 300 밀리리터의 빈 수집 백으로 분할하여 백 당 190 밀리리터의 순 부피에 도달합니다. 잔류 희석 혈소판이 풍부한 혈장의 분취량을 사용하여 품질 관리를 수행하고 가능한 미생물 오염을 평가합니다. 미생물학 실험실에서 테스트할 제조업체의 지침에 따라 멸균 분석을 준비합니다.희석된 혈소판이 풍부한 혈장 백은 해동하기 전에 최대 섭씨 영하 80도에서 최대 2개월 동안 보관하십시오. 따뜻한 목욕이 섭씨 37도로 설정되어 있는지 확인하십시오. 혈소판이 풍부한 혈장 주머니를 따뜻한 욕조에 넣고 완전히 해동 될 때까지 기다리십시오.혈소판이 풍부한 혈장 백을 실온에서 30분 동안 3000배 G로 원심분리한다. 이송 백의 피어싱 스파이크를 이용하여 원심 분리 된 백을 빈 멸균 300 밀리리터 이송 백과 연결하십시오. 파편을 피하면서 PRP 용해물 상청액을 새 백으로 조심스럽게 옮깁니다.PRP 용해물 장치의 연결 튜브를 백 실러로 밀봉하십시오. 멸균 주사기로 30-60 밀리리터의 PRP 용해물을 수집하고 주사기를 충전 라인의 Luer Lock 연결부에 연결합니다. 제조업체의 지침에 따라 스톱 콕을 반 바퀴 돌려 주사기가 들어있는 PRP 용해물과 사전 연결된 주사기 사이의 선을 엽니 다.사전 연결된 주사기에 PRP 용해물을 채웁니다. PRP 용해물 주사기를 분리합니다. Luer Lock 연결부의 튜브 캡을 닫고 스톱 콕을 원래 위치로 돌립니다.점안액 키트 주사기를 사용하여 바이알에 PRP 용해물을 채 웁니다. 각 애플리케이터가 제대로 채워져 있는지 확인하십시오. 그런 다음 백 실러로 개별적으로 밀봉하십시오.새 안약 키트로 절차를 반복하십시오. 잔류 희석 PRP 용해물의 작은 분취량을 사용하여 가능한 미생물 오염을 평가하십시오. 각 애플리케이터에 라벨을 붙이고 비닐 봉지에 넣으십시오.비닐 봉지에도 라벨을 붙입니다. 기증자의 혈액형을 강조하기 위해주의하십시오. 이탈리아 법률 및 지침에 따라 환자 배정 전 최대 24개월 동안 섭씨 영하 80도에서 보관하십시오.2개의 상이한 공여자로부터의 PRP 용해물에서 표피 성장 인자, 혈소판 유래 성장 인자, 및 형질전환 성장 인자 베타 이소형의 정량적 평가는 0.3배 밀리리터당 10 내지 9번째 혈소판 희석의 결과가 눈물 조성물과 가장 유사한 것으로 밝혀졌다는 것을 보여준다. PRP 용해물로 6개월 동안 치료한 후 안구 표면 질환 지수 점수는 56 플러스 마이너스 21에서 45 플러스 마이너스 21로 감소했습니다. 환자의 삶의 질 향상을 나타냅니다.동종 PRP 용해물을 제조하는 상이한 방법 사이의 방법론적 차이는 다른 조직에서 시험된 PRP 용해물의 재생 능력에 해로운 것으로 입증되지 않았다. 염화나트륨으로 혈장을 희석하고 혈소판이 풍부한 혈장을 저장하는 것은 주의해서 수행해야 합니다. 이것은 PRP 용해물의 조성을 변경할 수 있기 때문입니다.이러한 단계의 변동을 조사하려면 비교 분석이 필요합니다.

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