Name: in vivo vascular injury readouts in mouse retina to promote reproducibility
Uploaded: 2022-04-21T13:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility at JoVE.com

تم دعم هذا العمل من خلال منحة برنامج زمالة أبحاث الخريجين التابع لمؤسسة العلوم الوطنية (NSF-GRFP) DGE - 1644869 (إلى CKCO) ، والمعهد الوطني للعيون (NEI) 5T32EY013933 (إلى AMP) ، والمعهد الوطني للاضطرابات العصبية والسكتة الدماغية (RO1 NS081333 ، R03 NS099920 إلى CMT) ، ووزارة الدفاع الجيش / القوات الجوية (DURIP إلى CMT).

يتبع هذا البروتوكول بيان جمعية أبحاث الرؤية وطب العيون (ARVO) لاستخدام الحيوانات في أبحاث العيون والرؤية. تمت الموافقة على تجارب القوارض ومراقبتها من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوانات (IACUC) بجامعة كولومبيا.
ملاحظة: تم التصوير على ذكور C57BL / 6J البالغة من العمر شهرين ...

<ol>
	<li>Tong, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+burden+of+cerebrovascular+disease+in+the+united+states.">The burden of cerebrovascular disease in the united states.</a> Preventing Chronic Disease. 16, 180411 (2019).</li><li>Nakahara, T., Mori, A., Kurauchi, Y., Sakamoto, K., Ishii, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurovascular+interactions+in+the+retina:+physiological+and+pathological+roles.">Neurovascular interactions in the retina: physiological and pathological roles.</a> Journal of Pharmacological Sciences. 123 (2), 79-84 (2013).</li><li>Jaulim, A., Ahmed, B., Khanam, T., Chatziralli, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Branch+retinal+vein+occlusion:+epidemiology,+pathogenesis,+risk+factors,+clinical+features,+diagnosis,+and+complications.+An+update+of+the+literature.">Branch retinal vein occlusion: epidemiology, pathogenesis, risk factors, clinical features, diagnosis, and complications. An update of the literature.</a> Retina. 33 (5), 901-910 (2013).</li><li>Ho, M., Liu, D. T. L., Lam, D. S. C., Jonas, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+vein+occlusions,+from+basics+to+the+latest+treatment.">Retinal vein occlusions, from basics to the latest treatment.</a> Retina. 36 (3), 432-448 (2016).</li><li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+new+mouse+model+of+branch+retinal+vein+occlusion+and+retinal+neovascularization.">Development of a new mouse model of branch retinal vein occlusion and retinal neovascularization.</a> Japanese Journal of Ophthalmology. 51 (4), 251-257 (2007).</li><li>Ebneter, A., Agca, C., Dysli, C., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+retinal+morphology+alterations+using+spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+a+mouse+model+of+retinal+branch+and+central+retinal+vein+occlusion.">Investigation of retinal morphology alterations using spectral domain optical coherence tomography in a mouse model of retinal branch and central retinal vein occlusion.</a> PLoS One. 10 (3), 0119046 (2015).</li><li>Fuma, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pharmacological+approach+in+newly+established+retinal+vein+occlusion+model.">A pharmacological approach in newly established retinal vein occlusion model.</a> Scientific Reports. 7, 43509 (2017).</li><li>Cavallerano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ophthalmic+fluorescein+angiography.">Ophthalmic fluorescein angiography.</a> Clinical Optometry. 5 (1), 1-23 (1996).</li><li>Laatikainen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fluorescein+angiography+revolution:+a+breakthrough+with+sustained+impact.">The fluorescein angiography revolution: a breakthrough with sustained impact.</a> Acta Ophthalmologica Scandinavica. 82 (4), 381-392 (2004).</li><li>Huang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography.">Optical coherence tomography.</a> Science. 254 (5035), 1178-1181 (1991).</li><li>Oberwahrenbrock, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reliability+of+intra-retinal+layer+thickness+estimates.">Reliability of intra-retinal layer thickness estimates.</a> PLoS One. 10 (9), 0137316 (2015).</li><li>Avrutsky, M. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+activation+of+caspase-9+promotes+neurovascular+injury+in+retinal+vein+occlusion.">Endothelial activation of caspase-9 promotes neurovascular injury in retinal vein occlusion.</a> Nature Communications. 11 (1), 3173 (2020).</li><li>Col&#243;n Ortiz, C., Potenski, A., Lawson, J., Smart, J., Troy, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+retinal+vein+occlusion+mouse+model+to+limit+variability.">Optimization of the retinal vein occlusion mouse model to limit variability.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (174), e62980 (2021).</li><li>Schmidt-Erfurth, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+management+of+retinal+vein+occlusion+by+the+European+society+of+retina+specialists+(EURETINA).">Guidelines for the management of retinal vein occlusion by the European society of retina specialists (EURETINA).</a> Ophthalmologica. 242 (3), 123-162 (2019).</li><li>Yoshimura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+analysis+of+inflammatory+immune+mediators+in+vitreoretinal+diseases.">Comprehensive analysis of inflammatory immune mediators in vitreoretinal diseases.</a> PLoS One. 4 (12), 8158 (2009).</li><li>Mezu-Ndubuisi, O. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+angiography+quantifies+oxygen-induced+retinopathy+vascular+recovery.">In vivo angiography quantifies oxygen-induced retinopathy vascular recovery.</a> Optometry and Vision Science. 93 (10), 1268-1279 (2016).</li><li>Hui, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+spatial+and+temporal+analysis+of+fluorescein+angiography+dynamics+in+the+eye.">Quantitative spatial and temporal analysis of fluorescein angiography dynamics in the eye.</a> PLoS One. 9 (11), 111330 (2014).</li><li>Berry, D., Thomas, A. S., Fekrat, S., Grewal, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+disorganization+of+retinal+inner+layers+with+ischemic+index+and+visual+acuity+in+central+retinal+vein+occlusion.">Association of disorganization of retinal inner layers with ischemic index and visual acuity in central retinal vein occlusion.</a> Ophthalmology. Retina. 2 (11), 1125-1132 (2018).</li><li>Nicholson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+accuracy+of+disorganization+of+the+retinal+inner+layers+in+detecting+macular+capillary+non-perfusion+in+diabetic+retinopathy.">Diagnostic accuracy of disorganization of the retinal inner layers in detecting macular capillary non-perfusion in diabetic retinopathy.</a> Clinical &amp; Experimental Ophthalmology. 43 (8), 735-741 (2015).</li><li>Obrosova, I., Chung, S., Kador, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetic+cataracts:+mechanisms+and+management.">Diabetic cataracts: mechanisms and management.</a> Diabetes/Metabolism Research and Reviews. 26 (3), 172-180 (2010).</li><li>Hegde, K., Henein, M., Varma, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+the+mouse+as+a+model+animal+for+the+study+of+diabetic+cataracts.">Establishment of the mouse as a model animal for the study of diabetic cataracts.</a> Ophthalmic Research. 35 (1), 12-18 (2003).</li><li>Takahashi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+collateral+vessel+formation+after+retinal+vein+occlusion+visualized+by+OCTA+and+elucidation+of+factors+in+their+formation.">Time course of collateral vessel formation after retinal vein occlusion visualized by OCTA and elucidation of factors in their formation.</a> Heliyon. 7 (1), 05902 (2021).</li><li>Haj Najeeb, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescein+angiography+in+diabetic+macular+edema:+A+new+approach+to+its+etiology.">Fluorescein angiography in diabetic macular edema: A new approach to its etiology.</a> Investigation Ophthalmology &amp; Visual Science. 58 (10), 3986-3990 (2017).</li><li>Alam, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+optical+coherence+tomography+angiography+features+for+objective+classification+and+staging+of+diabetic+retinopathy.">Quantitative optical coherence tomography angiography features for objective classification and staging of diabetic retinopathy.</a> Retina. 40 (2), 322-332 (2020).</li><li>Uddin, M., Jayagopal, A., McCollum, G., Yang, R., Penn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+retinal+hypoxia+using+HYPOX-4-dependent+fluorescence+in+a+mouse+model+of+laser-induced+retinal+vein+occlusion+(RVO).">In vivo imaging of retinal hypoxia using HYPOX-4-dependent fluorescence in a mouse model of laser-induced retinal vein occlusion (RVO).</a> Investigation Ophthalmology &amp; Visual Science. 58 (9), 3818-3824 (2017).</li><li>Qiang, W., Wei, R., Chen, Y., Chen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+pathological+features+and+current+animal+models+of+type+3+macular+neovascularization.">Clinical pathological features and current animal models of type 3 macular neovascularization.</a> Frontiers in Neuroscience. 15, 734860 (2021).</li><li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+laser-induced+choroidal+neovascularization+in+the+rodent+retina+using+optical+coherence+tomography+angiography.">Imaging laser-induced choroidal neovascularization in the rodent retina using optical coherence tomography angiography.</a> Investigation Ophthalmology &amp; Visual Science. 57 (9), 331 (2016).</li><li>Chen, J., Qian, H., Horai, R., Chan, C., Caspi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+optical+coherence+tomography+and+electroretinography+to+evaluate+retinal+pathology+in+a+mouse+model+of+autoimmune+uveitis.">Use of optical coherence tomography and electroretinography to evaluate retinal pathology in a mouse model of autoimmune uveitis.</a> PLoS One. 8 (5), 63904 (2013).</li></ol>

يقدم تصوير شبكية القوارض غير الباضعة وسيلة لدراسة علم الأمراض وتطوير التدخلات. طورت الدراسات السابقة وحسنت نموذجا للفأر من RVO ، مما حد من التباين وسمح بترجمة موثوقة للأمراض السريرية الشائعة في شبكية العين5،7،13. تسمح التطورات في تكنولوجيا...

أمراض الأوعية الدموية العصبية هي مشكلة رعاية صحية رئيسية مسؤولة عن السكتات الدماغية الإقفارية ، وهي سبب رئيسي للوفيات والمراضة ، وأمراض الأوعية الدموية في شبكية العين التي تؤدي إلى فقدان البصر 1,2. لنمذجة الأمراض الوعائية العصبية ، نستخدم نموذج فأر لانسداد الوريد الشبكي (RVO). هذا النموذج غير جراحي ويستخدم تقنيات تصوير مماثلة لتلك المستخدمة لفحص الأشخاص المصابين بأمراض الأوعية الدموية في شبكية العين في بيئة سريرية. وبالتالي فإن استخدام هذا النموذج يزيد من إمكانات الترجمة للدراسات التي تستخدم هذا النموذج. كما هو الحال مع جميع طرز الماوس ، من الأهمية بمكان زيادة قابلية استنساخ النموذج.
أمراض الأوعية الدموية في شبكية العين هي سبب رئيسي لفقدان البصر لدى الأشخاص الذين تقل أعمارهم عن 70 عاما. RVO هو ثاني أكثر أمراض الأوعية الدموية الشبكية شيوعا بعد اعتلال الشبكية السكري3. تشمل السمات السريرية المميزة ل RVO الإصابة الإقفارية وذمة الشبكية وفقدان البصر نتيجة لفقدان الخلايا العصبية 3,4. تم تطوير نماذج الفئران من RVO باستخدام التخثير الضوئي بالليزر للأوعية الرئيسية وصقلها لتكرار الأمراض السريرية الرئيسية التي لوحظت في RVOالبشري 5،6،7. تسمح التطورات في تصوير العيون أيضا بتكرار أدوات التشخيص غير الباضعة المستخدمة في البشر ، وهي تصوير الأوعية بالفلوريسئين (FA) والتصوير المقطعي للتماسك البصري (OCT)6. يسمح تصوير الأوعية بالفلوريسئين بمراقبة التسرب بسبب انهيار حاجز الدم والشبكية (BRB) وكذلك ديناميكيات تدفق الدم في شبكية العين ، بما في ذلك مواقع الانسداد ، باستخدام حقن الفلوريسئين ، صبغة فلورسنت صغيرة 8,9. يسمح التصوير المقطعي المحوسب بالحصول على صور مقطعية عالية الدقة لشبكية العين ودراسة سمك وتنظيم طبقات الشبكية10. كان تحليل صور FA تاريخيا نوعيا إلى حد كبير ، مما يحد من إمكانية المقارنة المباشرة والقابلة للتكرار بين الدراسات. في الآونة الأخيرة ، تم تطوير عدد من الطرق لتحديد سمك الطبقة في تصوير OCT ، على الرغم من عدم وجود بروتوكول تحليل موحد حاليا ويختلف موقع الحصول على صورة OCT11. من أجل الاستفادة بشكل صحيح من هذه الأدوات ، هناك حاجة إلى منهجية تحليل بيانات موحدة وكمية وقابلة للتكرار. في هذه الورقة ، نقدم ثلاث قراءات وعائية تستخدم لتقييم الضرر المرضي في نموذج فأر لتسرب RVO-fluorescein ، وسمك طبقة OCT ، وعدم تنظيم طبقات الشبكية.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AK-Fluor 10%</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC: 17478-253-10</td>
			<td>light-sensitive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Rimadyl</td>
			<td>NADA #141-199</td>
			<td>keep at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GenTeal</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>00658 06401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image J</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InSight 2D</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>OCT analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine Hydrochloride</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>NDC: 11695-0702-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenylephrine</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDCL174478-201-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron IV</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>Retinal imaging microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron Meridian Module</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>Laser photocoagulator software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron Optical Coherence Tomography Module</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>OCT imaging software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron StreamPix Module</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>Fundus imaging and acquisition targeting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photoshop</td>
			<td>Adobe</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refresh</td>
			<td>Allergan</td>
			<td>94170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC: 174478-102-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDCL 59399-110-20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo vascular injury readouts in mouse retina to promote reproducibility

توفر التطورات في أدوات تصوير العيون مستوى غير مسبوق من الوصول إلى الباحثين الذين يعملون مع نماذج حيوانية لإصابات الأوعية الدموية العصبية. للاستفادة بشكل صحيح من هذه القابلية الأكبر للترجمة ، هناك حاجة إلى ابتكار طرق قابلة للتكرار لاستخلاص البيانات الكمية من هذه الصور. يمكن لتصوير التصوير المقطعي للتماسك البصري (OCT) حل أنسجة الشبكية بدقة ميكرومتر والكشف عن الاختلافات الوظيفية في تدفق الدم الوعائي. هنا ، نحدد قراءات الأوعية الدموية غير الباضعة التي نستخدمها لتوصيف الضرر المرضي بعد إهانة الأوعية الدموية في نموذج فأر محسن لانسداد الوريد الشبكي (RVO). تشمل هذه القراءات تحليل التصوير المباشر لمورفولوجيا الشبكية ، وقياس عدم تنظيم الطبقات الداخلية للشبكية (DRIL) لنقص تروية الشعيرات الدموية ، ومقاييس تصوير الأوعية بالفلوريسئين لوذمة الشبكية وكثافة الأوعية الدموية. تتوافق هذه التقنيات مباشرة مع تلك المستخدمة لفحص المرضى الذين يعانون من أمراض الشبكية في العيادة. يتيح توحيد هذه الأساليب مقارنة مباشرة وقابلة للتكرار للنماذج الحيوانية مع الأنماط الظاهرية السريرية لأمراض العيون ، مما يزيد من القوة الانتقالية لنماذج إصابات الأوعية الدموية.

تسمح طرق التحليل هذه بالقياس الكمي لأمراض الشبكية التي تم التقاطها بواسطة تصوير FA و OCT. استخدمت التجارب التي تم استخراج البيانات التمثيلية منها ذكور الفئران C57BL / 6J التي كانت إما بمثابة عناصر تحكم غير مصابة أو خضعت لإجراء RVO وتلقت إما قطرات العين المعالجة Pen1-XBir3 أو قطرات العين Pen1-Saline للمركبة....

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility at JoVE.com

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

هنا ، نقدم ثلاثة بروتوكولات لتحليل البيانات لتصوير الأوعية بالفلوريسئين (FA) والتصوير المقطعي للتماسك البصري (OCT) في دراسة انسداد الوريد الشبكي (RVO).

في الجسم الحي قراءات إصابة الأوعية الدموية في شبكية الفأر لتعزيز التكاثر

Advancements in ophthalmic imaging tools offer an unprecedented level of access to researchers working with animal models of neurovascular injury. To ...

يسمح هذا البروتوكول للمستخدم بالقياس الكمي للعلامات المماثلة سريريا للتلف في تصوير شبكية العين في الفئران ، مما يعزز قابلية ترجمة النتائج اللاحقة. تسمح لنا هذه الطرق بتبسيط التحليل ومنحنا القدرة على مقارنة التصوير بشكل موثوق بين التجارب. بينما تم تطوير هذه الطرق لدراسة نظرة عامة على نموذج الفأر ، إلا أنها يمكن أن تمتد بسهولة إلى البحث عن أي أمراض شبكية تستخدم نفس تقنيات التصوير.قم بتشغيل صندوق ضوء مجهر تصوير الشبكية ، وجهاز التصوير المقطعي للتماسك البصري ، ومنصة الماوس الساخنة. قم بتشغيل الكمبيوتر وافتح برنامج التصوير. أضف قطرة واحدة من فينيليفرين وتروبيكاميد إلى كل عين.حقن 100 ميكرولتر من 1٪ فلوريسئين داخل الصفاق. استيعاب الماوس على المنصة. اضبط ارتفاع وزاوية المنصة حتى يصبح عرض قاع الشبكية واضحا ومركزا.التقط صورة لقاع العين. افتح برنامج التصوير والتصوير المقطعي للتماسك البصري. في برنامج التصوير المقطعي للتماسك البصري ، اضبط الدفع إلى 10.خذ صورة التصوير المقطعي للتماسك البصري ، أضف 75 ميكرومتر بعيدا عن الحرق. كرر ذلك مع الأرباع الثلاثة الأخرى من شبكية العين. قم بتبديل الكاميرا إلى مرشح 488 نانومتر.زيادة كسب الكاميرا إلى 5. التقط صورة لقاع العين بعد 5 دقائق بالضبط من حقن الفلوريسين. افتح صورة الفلوريسئين على برنامج معالجة الصور.تكرار الصورة. باستخدام أداة الاختيار ، تتبع بعناية الأوعية الرئيسية. تجاهل أي سفن متفرعة من هذه السفن.في الصورة الأولى ، احذف التحديد ، ولم يتبق سوى السفينة. احفظ هذه الصورة المقنعة. انقل التحديد إلى الصورة الثانية ، واعكس التحديد وحذفه ، وعزل الخلفية.احفظ هذه الصورة المقنعة. افتح صورة الخلفية وقم بقياس الكثافة المدمجة. افتح صورة الأوعية ، وحدد الخطوط العريضة للأوعية ، ثم قم بقياس متوسط الشدة.قسم الكثافة المتكاملة للخلفية على متوسط شدة الأوعية ، مما يولد نسبة التسرب للعين. سجل نسبة التسرب هذه لكل عين في مجموعة تجريبية. لمزيد من التحكم في الخلفية ، قم بتطبيع العيون التجريبية إلى متوسط نسبة التسرب لعيون التحكم غير المصابة.افتح صورة التصوير المقطعي للتماسك البصري في برنامج معالجة الصور. تتبع حدود طبقة الخلية العقدية ، وطبقة الضفيرة الداخلية ، والطبقة النووية الداخلية ، وطبقة الضفيرة الخارجية ، وطبقة مستقبلات الضوء ، وطبقة RPE. تصدير الملفات بتنسيق CSV.قم بقياس متوسط سمك كل طبقة وكرر لكل عين في المجموعة التجريبية. افتح صورة التصوير المقطعي للتماسك البصري في الصورة J.باستخدام أداة الخط ، قم بقياس المسافة التي يكون فيها الحد العلوي لطبقة الضفيرة الخارجية غير واضح. قياس أفقيا ، والحفاظ على خط العرض حيث يبدأ عدم التنظيم.احسب مجموع المسافات غير المنظمة في الصورة. قسم طول عدم التنظيم على الطول الكلي للشبكية للحصول على نسبة عدم التنظيم. كرر القياس والحساب لصور التصوير المقطعي للتماسك البصري من الأرباع الثلاثة الأخرى من شبكية العين.خذ متوسط نسب عدم التنظيم من صور التصوير المقطعي التماسك البصري الأربعة. يمثل هذا الرقم متوسط عدم التنظيم لشبكية العين بأكملها. كرر لكل عين في المجموعة التجريبية.يمكن مقارنة الصور المقنعة المستخدمة لحساب نسبة التسرب لكل صورة شبكية مع غيرها وتحليلها ، وفصل الأوعية الدموية الرئيسية عن مناطق أخرى من شبكية العين. يسمح القياس الكمي للفلوريسئين بمقارنة شدة الإصابة وفعالية العلاج بالإضافة إلى دراسة التغيرات في التسرب على مدار فترة الإصابة. لوحظ ترسيم طبقات شبكية العين في صورة OCT.يظهر القياس الكمي للسمك لكل طبقة شبكية أن الاستجابة الوذمية الأولية لها تأثير أكثر عمقا على طبقات الشبكية الداخلية. من تحليل المسار الزمني لتلف انسداد الوريد الشبكي ، يمكن ملاحظة التورم الالتهابي الأولي لطبقات الشبكية ، والترقق التنكسي في نهاية المطاف. تتعرض الطبقة النووية الداخلية لاستجابة أكبر بكثير للإصابة الأولية ، لكن الطبقة الضفيرية الداخلية تظهر ترققا أكثر شدة بعد استقرار الوذمة الأولية والعودة إلى خط الأساس.يتجلى عدم تنظيم طبقة الشبكية الداخلية على أنه اختفاء للحدود العليا لطبقة الضفيرة الخارجية ، حيث يمزج بين الضفيرة الخارجية والطبقات النووية الداخلية معا. تمت مقارنة اضطراب الشبكية لمجموعتين تجريبيتين للتحقيق في فعالية المانع في التخفيف من تلف الشبكية. جودة الصورة مهمة للغاية لجودة التحليل.عند الحصول على صور شبكية العين ، خذ الوقت الكافي للتأكد من أن طبقات قاع العين والشبكية واضحة ومركزة قدر الإمكان. يمكن استخدام هذه الطرق غير الغازية طوليا وبالاقتران مع الدراسة البيوكيميائية والمناعية للأنسجة لإنشاء ملامح متعددة الأوجه ومفصلة للمرض. تتيح هذه التقنية القياس الكمي الموثوق به لبيانات تصوير الشبكية في الجسم الحي في نماذج أمراض الأوعية الدموية العصبية بحيث يمكن ترجمة البيانات بسهولة أكبر إلى مرض بشري.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

ترنسفكأيشن من خلايا الشبكية بواسطة الماوس العقدة في الجسم الحي Electroporation

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

Electroporation في الجسم الحي من الشبكية ماوس النامية

The functional characterization of genes expressed during mammalian retinal development remains a significant challenge.  Gene targeting to generate ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

تصوير الأعصاب وظيفية عن طريق الموجات فوق الصوتية تعطيل حاجز الدم في الدماغ والتصوير بالرنين المغناطيسي المنغنيز معززة لل

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

كله جبل تلوين مناعي للشبكية الفأر حديثي الولادة المعنية بالتحقيق في الأوعية الدموية<em&gt; في الجسم الحي</em

Angiogenesis  is the complex process of new blood vessel formation defined by the sprouting  of new blood vessels from a pre-existing vessel network. ...

Assessment of Vascular Regeneration in the CNS Using the Mouse Retina

تقييم الأوعية الدموية التجديد في الجهاز العصبي المركزي عن طريق الماوس الشبكية

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). ...

Vibratome Sectioning Mouse Retina to Prepare Photoreceptor Cultures

Vibratome باجتزاء شبكية العين الفأر لإعداد الثقافات مبصرة

The retina is a part of the central nervous system that has organized architecture, with neurons in layers from the photoreceptors, both rods and cones in ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

ل<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; يسببها الليزر اصابات الحبل الشوكي نموذج لتقييم آليات محور عصبي تنكس في الوقت الحقيقي

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

متزامنة<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; اختبار وظيفي اثنين من شبكية العين من قبل<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; نظام مخطط كهربية

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

An In Vivo Duo-color Method for Imaging Vascular Dynamics Following Contusive Spinal Cord Injury

An In Vivo Duo-color Method for Imaging Vascular Dynamics Following Contusive Spinal Cord Injury

فيفو في الأسلوب الثنائي-اللون لتصوير الأوعية الدموية ديناميات بعد إصابة الحبل الشوكي كونتوسيفي

Spinal cord injury (SCI) causes significant vascular disruption at the site of injury. Vascular pathology occurs immediately after SCI and continues ...

Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina

تصوير الفوتون عبر الحدقة في الجسم الحي لشبكية العين الفأرية

The retina transforms light signals from the environment into electrical signals that are propagated to the brain. Diseases of the retina are prevalent ...