Name: in vivo vascular injury readouts in mouse retina to promote reproducibility
Uploaded: 2022-04-21T13:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af National Science Foundation Graduate Research Fellowship Program (NSF-GRFP) bevilling DGE - 1644869(til CKCO), National Eye Institute (NEI) 5T32EY013933 (til AMP), National Institute of Neurological Disorders and Stroke (RO1 NS081333, R03 NS099920 til CMT) og Department of Defense Army / Air Force (DURIP til CMT).

Denne protokol følger Association for Research in Vision and Ophthalmology (ARVO) erklæring til brug af dyr i oftalmisk og synsforskning. Gnaverforsøg blev godkendt og overvåget af Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) ved Columbia University.
BEMÆRK: Billeddannelse blev udført på 2 måneder gamle C57BL / 6J hanmus, der vejede ca. 23 g.
1. Fremstilling af reagenser til retinal billeddannelse
<ol><li>Fremstilling af injicerbar ...

<ol>
	<li>Tong, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+burden+of+cerebrovascular+disease+in+the+united+states.">The burden of cerebrovascular disease in the united states.</a> Preventing Chronic Disease. 16, 180411 (2019).</li><li>Nakahara, T., Mori, A., Kurauchi, Y., Sakamoto, K., Ishii, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurovascular+interactions+in+the+retina:+physiological+and+pathological+roles.">Neurovascular interactions in the retina: physiological and pathological roles.</a> Journal of Pharmacological Sciences. 123 (2), 79-84 (2013).</li><li>Jaulim, A., Ahmed, B., Khanam, T., Chatziralli, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Branch+retinal+vein+occlusion:+epidemiology,+pathogenesis,+risk+factors,+clinical+features,+diagnosis,+and+complications.+An+update+of+the+literature.">Branch retinal vein occlusion: epidemiology, pathogenesis, risk factors, clinical features, diagnosis, and complications. An update of the literature.</a> Retina. 33 (5), 901-910 (2013).</li><li>Ho, M., Liu, D. T. L., Lam, D. S. C., Jonas, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+vein+occlusions,+from+basics+to+the+latest+treatment.">Retinal vein occlusions, from basics to the latest treatment.</a> Retina. 36 (3), 432-448 (2016).</li><li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+new+mouse+model+of+branch+retinal+vein+occlusion+and+retinal+neovascularization.">Development of a new mouse model of branch retinal vein occlusion and retinal neovascularization.</a> Japanese Journal of Ophthalmology. 51 (4), 251-257 (2007).</li><li>Ebneter, A., Agca, C., Dysli, C., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+retinal+morphology+alterations+using+spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+a+mouse+model+of+retinal+branch+and+central+retinal+vein+occlusion.">Investigation of retinal morphology alterations using spectral domain optical coherence tomography in a mouse model of retinal branch and central retinal vein occlusion.</a> PLoS One. 10 (3), 0119046 (2015).</li><li>Fuma, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pharmacological+approach+in+newly+established+retinal+vein+occlusion+model.">A pharmacological approach in newly established retinal vein occlusion model.</a> Scientific Reports. 7, 43509 (2017).</li><li>Cavallerano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ophthalmic+fluorescein+angiography.">Ophthalmic fluorescein angiography.</a> Clinical Optometry. 5 (1), 1-23 (1996).</li><li>Laatikainen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fluorescein+angiography+revolution:+a+breakthrough+with+sustained+impact.">The fluorescein angiography revolution: a breakthrough with sustained impact.</a> Acta Ophthalmologica Scandinavica. 82 (4), 381-392 (2004).</li><li>Huang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography.">Optical coherence tomography.</a> Science. 254 (5035), 1178-1181 (1991).</li><li>Oberwahrenbrock, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reliability+of+intra-retinal+layer+thickness+estimates.">Reliability of intra-retinal layer thickness estimates.</a> PLoS One. 10 (9), 0137316 (2015).</li><li>Avrutsky, M. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+activation+of+caspase-9+promotes+neurovascular+injury+in+retinal+vein+occlusion.">Endothelial activation of caspase-9 promotes neurovascular injury in retinal vein occlusion.</a> Nature Communications. 11 (1), 3173 (2020).</li><li>Col&#243;n Ortiz, C., Potenski, A., Lawson, J., Smart, J., Troy, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+retinal+vein+occlusion+mouse+model+to+limit+variability.">Optimization of the retinal vein occlusion mouse model to limit variability.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (174), e62980 (2021).</li><li>Schmidt-Erfurth, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+management+of+retinal+vein+occlusion+by+the+European+society+of+retina+specialists+(EURETINA).">Guidelines for the management of retinal vein occlusion by the European society of retina specialists (EURETINA).</a> Ophthalmologica. 242 (3), 123-162 (2019).</li><li>Yoshimura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+analysis+of+inflammatory+immune+mediators+in+vitreoretinal+diseases.">Comprehensive analysis of inflammatory immune mediators in vitreoretinal diseases.</a> PLoS One. 4 (12), 8158 (2009).</li><li>Mezu-Ndubuisi, O. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+angiography+quantifies+oxygen-induced+retinopathy+vascular+recovery.">In vivo angiography quantifies oxygen-induced retinopathy vascular recovery.</a> Optometry and Vision Science. 93 (10), 1268-1279 (2016).</li><li>Hui, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+spatial+and+temporal+analysis+of+fluorescein+angiography+dynamics+in+the+eye.">Quantitative spatial and temporal analysis of fluorescein angiography dynamics in the eye.</a> PLoS One. 9 (11), 111330 (2014).</li><li>Berry, D., Thomas, A. S., Fekrat, S., Grewal, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+disorganization+of+retinal+inner+layers+with+ischemic+index+and+visual+acuity+in+central+retinal+vein+occlusion.">Association of disorganization of retinal inner layers with ischemic index and visual acuity in central retinal vein occlusion.</a> Ophthalmology. Retina. 2 (11), 1125-1132 (2018).</li><li>Nicholson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+accuracy+of+disorganization+of+the+retinal+inner+layers+in+detecting+macular+capillary+non-perfusion+in+diabetic+retinopathy.">Diagnostic accuracy of disorganization of the retinal inner layers in detecting macular capillary non-perfusion in diabetic retinopathy.</a> Clinical &amp; Experimental Ophthalmology. 43 (8), 735-741 (2015).</li><li>Obrosova, I., Chung, S., Kador, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetic+cataracts:+mechanisms+and+management.">Diabetic cataracts: mechanisms and management.</a> Diabetes/Metabolism Research and Reviews. 26 (3), 172-180 (2010).</li><li>Hegde, K., Henein, M., Varma, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+the+mouse+as+a+model+animal+for+the+study+of+diabetic+cataracts.">Establishment of the mouse as a model animal for the study of diabetic cataracts.</a> Ophthalmic Research. 35 (1), 12-18 (2003).</li><li>Takahashi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+collateral+vessel+formation+after+retinal+vein+occlusion+visualized+by+OCTA+and+elucidation+of+factors+in+their+formation.">Time course of collateral vessel formation after retinal vein occlusion visualized by OCTA and elucidation of factors in their formation.</a> Heliyon. 7 (1), 05902 (2021).</li><li>Haj Najeeb, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescein+angiography+in+diabetic+macular+edema:+A+new+approach+to+its+etiology.">Fluorescein angiography in diabetic macular edema: A new approach to its etiology.</a> Investigation Ophthalmology &amp; Visual Science. 58 (10), 3986-3990 (2017).</li><li>Alam, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+optical+coherence+tomography+angiography+features+for+objective+classification+and+staging+of+diabetic+retinopathy.">Quantitative optical coherence tomography angiography features for objective classification and staging of diabetic retinopathy.</a> Retina. 40 (2), 322-332 (2020).</li><li>Uddin, M., Jayagopal, A., McCollum, G., Yang, R., Penn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+retinal+hypoxia+using+HYPOX-4-dependent+fluorescence+in+a+mouse+model+of+laser-induced+retinal+vein+occlusion+(RVO).">In vivo imaging of retinal hypoxia using HYPOX-4-dependent fluorescence in a mouse model of laser-induced retinal vein occlusion (RVO).</a> Investigation Ophthalmology &amp; Visual Science. 58 (9), 3818-3824 (2017).</li><li>Qiang, W., Wei, R., Chen, Y., Chen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+pathological+features+and+current+animal+models+of+type+3+macular+neovascularization.">Clinical pathological features and current animal models of type 3 macular neovascularization.</a> Frontiers in Neuroscience. 15, 734860 (2021).</li><li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+laser-induced+choroidal+neovascularization+in+the+rodent+retina+using+optical+coherence+tomography+angiography.">Imaging laser-induced choroidal neovascularization in the rodent retina using optical coherence tomography angiography.</a> Investigation Ophthalmology &amp; Visual Science. 57 (9), 331 (2016).</li><li>Chen, J., Qian, H., Horai, R., Chan, C., Caspi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+optical+coherence+tomography+and+electroretinography+to+evaluate+retinal+pathology+in+a+mouse+model+of+autoimmune+uveitis.">Use of optical coherence tomography and electroretinography to evaluate retinal pathology in a mouse model of autoimmune uveitis.</a> PLoS One. 8 (5), 63904 (2013).</li></ol>

Ikke-invasiv gnaver retinal billeddannelse præsenterer en vej til at studere patologi og udvikle interventioner. Tidligere undersøgelser har udviklet og optimeret en musemodel af RVO, hvilket begrænser variabiliteten og giver mulighed for pålidelig oversættelse af almindelige kliniske patologier i murine nethinde 5,7,13. Udviklingen inden for oftalmisk billeddannelsesteknologi giver yderligere mulighed for anvendelse af kli...

Neurovaskulær sygdom er et stort sundhedsproblem, der er ansvarlig for iskæmiske slagtilfælde, en førende årsag til dødelighed og sygelighed, og retinale vaskulære sygdomme, der fører til synstab 1,2. For at modellere neurovaskulær sygdom anvender vi en musemodel af retinal veneokklusion (RVO). Denne model er ikke-invasiv og anvender lignende in vivo-billeddannelsesteknikker som dem, der bruges til at undersøge mennesker med retinal vaskulær sygdom i kliniske omgivelser. Brugen af denne model øger således det translationelle potentiale i undersøgelser, der anvender denne model. Som med alle musemodeller er det afgørende at maksimere modellens reproducerbarhed.
Retinale vaskulære sygdomme er en væsentlig årsag til synstab hos mennesker under 70 år. RVO er den næsthyppigste retinale vaskulære sygdom efter diabetisk retinopati3. Kliniske træk, der er karakteristiske for RVO, omfatter iskæmisk skade, retinalt ødem og synstab som følge af neuronalt tab 3,4. Musemodeller af RVO ved hjælp af laserfotokoagulation af større fartøjer er blevet udviklet og raffineret til at replikere vigtige kliniske patologier observeret i human RVO 5,6,7. Fremskridt inden for oftalmisk billeddannelse giver også mulighed for replikation af ikke-invasive diagnostiske værktøjer, der anvendes hos mennesker, nemlig fluorescein angiografi (FA) og optisk kohærenstomografi (OCT)6. Fluorescein Angiography giver mulighed for observation af lækage på grund af nedbrydning af blod-retinal barrieren (BRB) samt blodgennemstrømningsdynamik i nethinden, herunder okklusionssteder, ved hjælp af injektion af fluorescein, et lille fluorescerende farvestof 8,9. OCT-billeddannelse giver mulighed for erhvervelse af højopløsningstværsnitsbilleder af nethinden og undersøgelsen af tykkelsen og organisationen af retinale lag10. Analyse af FA-billeder har historisk set været stort set kvalitativ, hvilket begrænser potentialet for direkte og reproducerbar sammenligning mellem undersøgelser. For nylig er der udviklet en række metoder til kvantificering af lagtykkelse i OCT-billeddannelse, selvom der i øjeblikket ikke er nogen standardiseret analyseprotokol, og stedet for OCT-billedoptagelse varierer11. For at kunne udnytte disse værktøjer korrekt er der behov for standardiseret, kvantitativ og replikerbar dataanalysemetode. I dette papir præsenterer vi tre sådanne vaskulære udlæsninger, der bruges til at evaluere patologisk skade i en musemodel af RVO-fluoresceinlækage, OCT-lagtykkelse og desorganisering af retinale lag.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AK-Fluor 10%</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC: 17478-253-10</td>
			<td>light-sensitive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Rimadyl</td>
			<td>NADA #141-199</td>
			<td>keep at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GenTeal</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>00658 06401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image J</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InSight 2D</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>OCT analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine Hydrochloride</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>NDC: 11695-0702-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenylephrine</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDCL174478-201-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron IV</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>Retinal imaging microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron Meridian Module</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>Laser photocoagulator software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron Optical Coherence Tomography Module</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>OCT imaging software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron StreamPix Module</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>Fundus imaging and acquisition targeting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photoshop</td>
			<td>Adobe</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refresh</td>
			<td>Allergan</td>
			<td>94170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC: 174478-102-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDCL 59399-110-20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo vascular injury readouts in mouse retina to promote reproducibility

Fremskridt inden for oftalmiske billeddannelsesværktøjer giver et hidtil uset niveau af adgang til forskere, der arbejder med dyremodeller af neurovaskulær skade. For at udnytte denne større oversættelighed korrekt er der behov for at udtænke reproducerbare metoder til at trække kvantitative data fra disse billeder. Optisk kohærenstomografi (OCT) billeddannelse kan løse retinal histologi ved mikrometeropløsning og afsløre funktionelle forskelle i vaskulær blodgennemstrømning. Her afgrænser vi ikke-invasive vaskulære udlæsninger, som vi bruger til at karakterisere patologisk skade efter vaskulær fornærmelse i en optimeret musemodel af retinal veneokklusion (RVO). Disse aflæsninger omfatter levende billeddannelsesanalyse af retinal morfologi, disorganisering af retinale indre lag (DRIL) måling af kapillær iskæmi og fluorescein angiografi målinger af retinalt ødem og vaskulær tæthed. Disse teknikker svarer direkte til dem, der anvendes til at undersøge patienter med retinal sygdom i klinikken. Standardisering af disse metoder muliggør direkte og reproducerbar sammenligning af dyremodeller med kliniske fænotyper af oftalmisk sygdom, hvilket øger den translationelle kraft af vaskulære skademodeller.

Disse analysemetoder muliggør kvantificering af retinal patologi fanget af FA- og OCT-billeddannelse. Forsøgene, hvorfra de repræsentative data ekstraheres, brugte C57BL / 6J hanmus, der enten fungerede som uskadte kontroller eller gennemgik RVO-proceduren og modtog enten Pen1-XBir3-behandlingsbriller eller Pen1-Saline køretøjs øjendråber. RVO-skademodellen involverede laserbestråling (532 nm) af de store vener i hvert øje på en bedøvet mus efter en hale-veneinjektion af rosenbengal, et fotoaktivatorfarvestof<...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility at JoVE.com

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

Her præsenterer vi tre dataanalyseprotokoller for fluorescein angiografi (FA) og optisk kohærenstomografi (OCT) billeder i undersøgelsen af Retinal Vein Occlusion (RVO).

In vivo Aflæsninger af vaskulær skade i musens nethinde for at fremme reproducerbarhed

Advancements in ophthalmic imaging tools offer an unprecedented level of access to researchers working with animal models of neurovascular injury. To ...

Denne protokol giver brugeren mulighed for kvantitativt at måle klinisk analoge markører for skader i musens retinal billeddannelse, hvilket styrker oversættelsen af efterfølgende fund. Disse metoder giver os mulighed for at strømline analyse og give os mulighed for pålideligt at sammenligne billeddannelse mellem forsøgsdyr. Mens disse metoder blev udviklet til at studere en musemodeloversigt, kan de let udvides til forskning i nethindesygdomme, der bruger de samme billeddannelsesteknikker.Tænd lysboksen til nethindebilledmikroskopet, den optiske kohærenstomografimaskine og den opvarmede museplatform. Tænd computeren, og åbn billedprogrammet. Tilsæt en dråbe phenylephrin og tropicamid til hvert øje.Injicer 100 mikroliter 1% fluorescein intraperitoneal. Plads musen på platformen. Juster platformens højde og vinkel, indtil udsigten til nethinden er klar og fokuseret.Tag et billede af fundus. Åbn softwaren til billeddannelse og optisk kohærenstomografi. I det optiske kohærenstomografiprogram justeres nudge til 10.Tag et optisk kohærenstomografibillede, tilføj 75 mikrometer distal fra forbrændingen. Gentag for de tre andre kvadranter i nethinden. Skift kameraet til et 488 nanometer filter.Forøg kameraforstærkningen til 5. Tag et billede af fundus nøjagtigt 5 minutter efter fluoresceininjektion. Åbn fluorescein-billedet på billedbehandlingssoftwaren.Dupliker billedet. Brug et udvælgelsesværktøj til omhyggeligt at spore de store fartøjer. Ignorer eventuelle fartøjer, der forgrener sig fra disse fartøjer.På det første billede skal du slette markeringen og kun efterlade fartøjet. Gem dette maskerede billede. Flyt markeringen til det andet billede, inverter markeringen og slet, og isolering af baggrunden.Gem dette maskerede billede. Åbn baggrundsbilledet, og mål den integrerede tæthed. Åbn fartøjsbilledet, vælg konturen af fartøjerne, og mål derefter gennemsnitsintensiteten.Opdel den integrerede tæthed af baggrunden med den gennemsnitlige intensitet af karrene, hvilket genererer lækageforholdet for øjet. Optag dette lækageforhold for hvert øje i en eksperimentel kohorte. For yderligere kontrol for baggrund skal du normalisere eksperimentelle øjne til det gennemsnitlige lækageforhold for uskadte kontroløjne.Åbn det optiske kohærenstomografibillede i billedbehandlingssoftwaren. Spor grænserne for ganglioncellelaget, det indre plexiformlag, det indre nukleare lag, det ydre plexiformlag, fotoreceptorlaget og RPE-laget. Eksporter filerne som CSV.Mål den gennemsnitlige tykkelse af hvert lag og gentag for hvert øje i den eksperimentelle kohorte. Åbn billedet af optisk kohærenstomografi i billede J.Brug linjeværktøjet til at måle afstanden, hvor den øvre kant af det ydre plexiformlag er utydelig. Mål vandret, og oprethold bredden, hvor uorganiseringen begynder.Beregn summen af de uorganiserede afstande i billedet. Opdel længden af uorganisering med nethindens samlede længde for at opnå forholdet mellem uorganisering. Gentag målingen og beregningen for optisk kohærenstomografibilleder fra de tre andre kvadranter på nethinden.Tag gennemsnittet af forholdet mellem uorganisering fra de fire optiske kohærenstomografibilleder. Dette tal repræsenterer den gennemsnitlige uorganisering for hele nethinden. Gentag for hvert øje i den eksperimentelle kohorte.De maskerede billeder, der bruges til beregning af lækageforholdet for hvert nethindebillede, kan sammenlignes med andre og analyseres, hvilket adskiller den store vaskulatur fra andre områder af nethinden. Fluoresceinkvantificering gør det muligt at sammenligne skadens sværhedsgrad og behandlingseffektivitet samt undersøgelse af ændringer i lækage i løbet af skadesforløbet. En afgrænsning af lagene i nethinden i et OCT-billede observeres.Kvantificeringen af tykkelsen for hvert retinalt lag viser, at det indledende edematøse respons har en mere dybtgående virkning på de indre retinale lag. Fra en analyse af et tidsforløb af retinal veneokklusionsskade kan den indledende inflammatoriske hævelse af retinale lag og den eventuelle degenerative udtynding observeres. Det indre nukleare lag oplever en meget større reaktion på den oprindelige skade, men det indre plexiformlag viser mere alvorlig udtynding, efter at det oprindelige ødem er blevet stabiliseret og vender tilbage til baseline.Disorganiseringen af det indre retinale lag manifesterer sig som en forsvinden af den øvre grænse for det ydre plexiformlag, der blander de ydre plexiforme og indre nukleare lag sammen. Retinal desorganisering af to eksperimentelle grupper blev sammenlignet for at undersøge effekten af en hæmmer til at afbøde retinal skade. Billedkvalitet er meget vigtig for analysekvaliteten.Når du erhverver retinale billeder, skal du tage dig tid til at sikre, at fundus og retinale lag er så klare og fokuserede som muligt. Disse ikke-invasive metoder kan anvendes i længderetningen og i forbindelse med biokemisk og immunohistokemisk undersøgelse af væv for at skabe mere mangesidede og detaljerede sygdomsprofiler. Denne teknik muliggør pålidelig kvantificering af in Vivo retinale billeddannelsesdata i modeller af neurovaskulær sygdom, så data lettere kan oversættes til menneskelig sygdom.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

The functional characterization of genes expressed during mammalian retinal development remains a significant challenge.  Gene targeting to generate ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Funktionel Neuroimaging Med Ultrasonic blod-hjerne barrieren forstyrrelser og mangan-forstærket MRI

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

Hele Mount immunfluorescensfarvning af Neonatal Mouse Retina at undersøge Angiogenesis<em&gt; In vivo</em

Angiogenesis  is the complex process of new blood vessel formation defined by the sprouting  of new blood vessels from a pre-existing vessel network. ...

Assessment of Vascular Regeneration in the CNS Using the Mouse Retina

Vurdering af Vascular Regeneration i CNS Brug af musen Retina

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). ...

Vibratome Sectioning Mouse Retina to Prepare Photoreceptor Cultures

Vibratome Sektionsinddeling Mouse Retina Forbered fotoreceptoren kulturer

The retina is a part of the central nervous system that has organized architecture, with neurons in layers from the photoreceptors, both rods and cones in ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

En<em&gt; Ex vivo</em&gt; Laser-induceret Rygmarvsskader model til opgørelse Mekanismer axon Degeneration i realtid

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Samtidige<em&gt; Ex vivo</em&gt; Functional Test af to nethinder af<em&gt; In vivo</em&gt; Elektroretinogrammet System

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

An In Vivo Duo-color Method for Imaging Vascular Dynamics Following Contusive Spinal Cord Injury

An In Vivo Duo-color Method for Imaging Vascular Dynamics Following Contusive Spinal Cord Injury

En In Vivo Duo-farve metode for Imaging vaskulære Dynamics efter Contusive rygmarvsskade

Spinal cord injury (SCI) causes significant vascular disruption at the site of injury. Vascular pathology occurs immediately after SCI and continues ...

Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina

Transpupillær to-foton In vivo Billeddannelse af musens nethinde

The retina transforms light signals from the environment into electrical signals that are propagated to the brain. Diseases of the retina are prevalent ...