Name: in vivo vascular injury readouts in mouse retina to promote reproducibility
Uploaded: 2022-04-21T13:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door de National Science Foundation Graduate Research Fellowship Program (NSF-GRFP) subsidie DGE - 1644869 (aan CKCO), het National Eye Institute (NEI) 5T32EY013933 (aan AMP), het National Institute of Neurological Disorders and Stroke (RO1 NS081333, R03 NS099920 aan CMT) en het Department of Defense Army / Air Force (DURIP aan CMT).

Dit protocol volgt de verklaring van de Association for Research in Vision and Ophthalmology (ARVO) voor het gebruik van dieren in oogheelkundig en visieonderzoek. Knaagdierexperimenten werden goedgekeurd en gecontroleerd door het Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) van Columbia University.
OPMERKING: Beeldvorming werd gedaan op 2 maanden oude C57BL / 6J mannelijke muizen die ongeveer 23 g wogen.
1. Bereiding van reagentia voor retinale beeldvo...

<ol>
	<li>Tong, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+burden+of+cerebrovascular+disease+in+the+united+states.">The burden of cerebrovascular disease in the united states.</a> Preventing Chronic Disease. 16, 180411 (2019).</li><li>Nakahara, T., Mori, A., Kurauchi, Y., Sakamoto, K., Ishii, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurovascular+interactions+in+the+retina:+physiological+and+pathological+roles.">Neurovascular interactions in the retina: physiological and pathological roles.</a> Journal of Pharmacological Sciences. 123 (2), 79-84 (2013).</li><li>Jaulim, A., Ahmed, B., Khanam, T., Chatziralli, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Branch+retinal+vein+occlusion:+epidemiology,+pathogenesis,+risk+factors,+clinical+features,+diagnosis,+and+complications.+An+update+of+the+literature.">Branch retinal vein occlusion: epidemiology, pathogenesis, risk factors, clinical features, diagnosis, and complications. An update of the literature.</a> Retina. 33 (5), 901-910 (2013).</li><li>Ho, M., Liu, D. T. L., Lam, D. S. C., Jonas, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+vein+occlusions,+from+basics+to+the+latest+treatment.">Retinal vein occlusions, from basics to the latest treatment.</a> Retina. 36 (3), 432-448 (2016).</li><li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+new+mouse+model+of+branch+retinal+vein+occlusion+and+retinal+neovascularization.">Development of a new mouse model of branch retinal vein occlusion and retinal neovascularization.</a> Japanese Journal of Ophthalmology. 51 (4), 251-257 (2007).</li><li>Ebneter, A., Agca, C., Dysli, C., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+retinal+morphology+alterations+using+spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+a+mouse+model+of+retinal+branch+and+central+retinal+vein+occlusion.">Investigation of retinal morphology alterations using spectral domain optical coherence tomography in a mouse model of retinal branch and central retinal vein occlusion.</a> PLoS One. 10 (3), 0119046 (2015).</li><li>Fuma, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pharmacological+approach+in+newly+established+retinal+vein+occlusion+model.">A pharmacological approach in newly established retinal vein occlusion model.</a> Scientific Reports. 7, 43509 (2017).</li><li>Cavallerano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ophthalmic+fluorescein+angiography.">Ophthalmic fluorescein angiography.</a> Clinical Optometry. 5 (1), 1-23 (1996).</li><li>Laatikainen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fluorescein+angiography+revolution:+a+breakthrough+with+sustained+impact.">The fluorescein angiography revolution: a breakthrough with sustained impact.</a> Acta Ophthalmologica Scandinavica. 82 (4), 381-392 (2004).</li><li>Huang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography.">Optical coherence tomography.</a> Science. 254 (5035), 1178-1181 (1991).</li><li>Oberwahrenbrock, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reliability+of+intra-retinal+layer+thickness+estimates.">Reliability of intra-retinal layer thickness estimates.</a> PLoS One. 10 (9), 0137316 (2015).</li><li>Avrutsky, M. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+activation+of+caspase-9+promotes+neurovascular+injury+in+retinal+vein+occlusion.">Endothelial activation of caspase-9 promotes neurovascular injury in retinal vein occlusion.</a> Nature Communications. 11 (1), 3173 (2020).</li><li>Col&#243;n Ortiz, C., Potenski, A., Lawson, J., Smart, J., Troy, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+retinal+vein+occlusion+mouse+model+to+limit+variability.">Optimization of the retinal vein occlusion mouse model to limit variability.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (174), e62980 (2021).</li><li>Schmidt-Erfurth, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+management+of+retinal+vein+occlusion+by+the+European+society+of+retina+specialists+(EURETINA).">Guidelines for the management of retinal vein occlusion by the European society of retina specialists (EURETINA).</a> Ophthalmologica. 242 (3), 123-162 (2019).</li><li>Yoshimura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+analysis+of+inflammatory+immune+mediators+in+vitreoretinal+diseases.">Comprehensive analysis of inflammatory immune mediators in vitreoretinal diseases.</a> PLoS One. 4 (12), 8158 (2009).</li><li>Mezu-Ndubuisi, O. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+angiography+quantifies+oxygen-induced+retinopathy+vascular+recovery.">In vivo angiography quantifies oxygen-induced retinopathy vascular recovery.</a> Optometry and Vision Science. 93 (10), 1268-1279 (2016).</li><li>Hui, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+spatial+and+temporal+analysis+of+fluorescein+angiography+dynamics+in+the+eye.">Quantitative spatial and temporal analysis of fluorescein angiography dynamics in the eye.</a> PLoS One. 9 (11), 111330 (2014).</li><li>Berry, D., Thomas, A. S., Fekrat, S., Grewal, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+disorganization+of+retinal+inner+layers+with+ischemic+index+and+visual+acuity+in+central+retinal+vein+occlusion.">Association of disorganization of retinal inner layers with ischemic index and visual acuity in central retinal vein occlusion.</a> Ophthalmology. Retina. 2 (11), 1125-1132 (2018).</li><li>Nicholson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+accuracy+of+disorganization+of+the+retinal+inner+layers+in+detecting+macular+capillary+non-perfusion+in+diabetic+retinopathy.">Diagnostic accuracy of disorganization of the retinal inner layers in detecting macular capillary non-perfusion in diabetic retinopathy.</a> Clinical &amp; Experimental Ophthalmology. 43 (8), 735-741 (2015).</li><li>Obrosova, I., Chung, S., Kador, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetic+cataracts:+mechanisms+and+management.">Diabetic cataracts: mechanisms and management.</a> Diabetes/Metabolism Research and Reviews. 26 (3), 172-180 (2010).</li><li>Hegde, K., Henein, M., Varma, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+the+mouse+as+a+model+animal+for+the+study+of+diabetic+cataracts.">Establishment of the mouse as a model animal for the study of diabetic cataracts.</a> Ophthalmic Research. 35 (1), 12-18 (2003).</li><li>Takahashi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+collateral+vessel+formation+after+retinal+vein+occlusion+visualized+by+OCTA+and+elucidation+of+factors+in+their+formation.">Time course of collateral vessel formation after retinal vein occlusion visualized by OCTA and elucidation of factors in their formation.</a> Heliyon. 7 (1), 05902 (2021).</li><li>Haj Najeeb, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescein+angiography+in+diabetic+macular+edema:+A+new+approach+to+its+etiology.">Fluorescein angiography in diabetic macular edema: A new approach to its etiology.</a> Investigation Ophthalmology &amp; Visual Science. 58 (10), 3986-3990 (2017).</li><li>Alam, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+optical+coherence+tomography+angiography+features+for+objective+classification+and+staging+of+diabetic+retinopathy.">Quantitative optical coherence tomography angiography features for objective classification and staging of diabetic retinopathy.</a> Retina. 40 (2), 322-332 (2020).</li><li>Uddin, M., Jayagopal, A., McCollum, G., Yang, R., Penn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+retinal+hypoxia+using+HYPOX-4-dependent+fluorescence+in+a+mouse+model+of+laser-induced+retinal+vein+occlusion+(RVO).">In vivo imaging of retinal hypoxia using HYPOX-4-dependent fluorescence in a mouse model of laser-induced retinal vein occlusion (RVO).</a> Investigation Ophthalmology &amp; Visual Science. 58 (9), 3818-3824 (2017).</li><li>Qiang, W., Wei, R., Chen, Y., Chen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+pathological+features+and+current+animal+models+of+type+3+macular+neovascularization.">Clinical pathological features and current animal models of type 3 macular neovascularization.</a> Frontiers in Neuroscience. 15, 734860 (2021).</li><li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+laser-induced+choroidal+neovascularization+in+the+rodent+retina+using+optical+coherence+tomography+angiography.">Imaging laser-induced choroidal neovascularization in the rodent retina using optical coherence tomography angiography.</a> Investigation Ophthalmology &amp; Visual Science. 57 (9), 331 (2016).</li><li>Chen, J., Qian, H., Horai, R., Chan, C., Caspi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+optical+coherence+tomography+and+electroretinography+to+evaluate+retinal+pathology+in+a+mouse+model+of+autoimmune+uveitis.">Use of optical coherence tomography and electroretinography to evaluate retinal pathology in a mouse model of autoimmune uveitis.</a> PLoS One. 8 (5), 63904 (2013).</li></ol>

Niet-invasieve retinale beeldvorming van knaagdieren biedt een manier om pathologie te bestuderen en interventies te ontwikkelen. Eerdere studies hebben een muismodel van RVO ontwikkeld en geoptimaliseerd, waardoor variabiliteit wordt beperkt en een betrouwbare vertaling van veel voorkomende klinische pathologieën in het muizennetvliesmogelijk is 5,7,13. Ontwikkelingen in oogheelkundige beeldvormingstechnologie maken het gebrui...

Neurovasculaire ziekte is een groot gezondheidsprobleem dat verantwoordelijk is voor ischemische beroertes, een belangrijke oorzaak van mortaliteit en morbiditeit, en retinale vaatziekten die leiden tot verlies van het gezichtsvermogen 1,2. Om neurovasculaire ziekte te modelleren, gebruiken we een muismodel van retinale ader occlusie (RVO). Dit model is niet-invasief en maakt gebruik van vergelijkbare in vivo beeldvormingstechnieken als die worden gebruikt om mensen met retinale vaatziekten in een klinische setting te onderzoeken. Het gebruik van dit model verhoogt dus het translationele potentieel van studies die dit model gebruiken. Zoals bij alle muismodellen is het van cruciaal belang om de reproduceerbaarheid van het model te maximaliseren.
Retinale vaatziekten zijn een belangrijke oorzaak van verlies van het gezichtsvermogen bij mensen jonger dan 70 jaar. RVO is de tweede meest voorkomende retinale vaatziekte na diabetische retinopathie3. Klinische kenmerken die kenmerkend zijn voor RVO zijn ischemisch letsel, retinaal oedeem en verlies van het gezichtsvermogen als gevolg van neuronaal verlies 3,4. Muismodellen van RVO met behulp van laserfotocoagulatie van belangrijke vaten zijn ontwikkeld en verfijnd om belangrijke klinische pathologieën te repliceren die zijn waargenomen in humane RVO 5,6,7. Vooruitgang in oogheelkundige beeldvorming maakt ook replicatie mogelijk van niet-invasieve diagnostische hulpmiddelen die bij mensen worden gebruikt, namelijk fluoresceïneangiografie (FA) en optische coherentietomografie (OCT)6. Fluoresceïneangiografie maakt het mogelijk om lekkage te observeren als gevolg van de afbraak van de bloed-retinale barrière (BRB) en de bloedstroomdynamiek in het netvlies, inclusief plaatsen van occlusie, met behulp van de injectie van fluoresceïne, een kleine fluorescerende kleurstof 8,9. OCT-beeldvorming maakt het mogelijk om hoge resolutie dwarsdoorsnedebeelden van het netvlies te verkrijgen en de dikte en organisatie van retinale lagente bestuderen 10. Analyse van FA-beelden is historisch gezien grotendeels kwalitatief geweest, wat het potentieel voor directe en reproduceerbare vergelijking tussen studies beperkt. Onlangs zijn een aantal methoden ontwikkeld voor de kwantificering van laagdikte in OCT-beeldvorming, hoewel er momenteel geen gestandaardiseerd analyseprotocol is en de plaats van OCT-beeldacquisitie varieert11. Om deze tools goed te kunnen benutten, zijn gestandaardiseerde, kwantitatieve en repliceerbare data-analysemethodologie nodig. In dit artikel presenteren we drie van dergelijke vasculaire uitlezingen die worden gebruikt om pathologische schade te evalueren in een muismodel van RVO-fluoresceïnelekkage, OCT-laagdikte en desorganisatie van retinale lagen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AK-Fluor 10%</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC: 17478-253-10</td>
			<td>light-sensitive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Rimadyl</td>
			<td>NADA #141-199</td>
			<td>keep at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GenTeal</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>00658 06401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image J</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InSight 2D</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>OCT analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine Hydrochloride</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>NDC: 11695-0702-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenylephrine</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDCL174478-201-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron IV</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>Retinal imaging microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron Meridian Module</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>Laser photocoagulator software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron Optical Coherence Tomography Module</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>OCT imaging software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron StreamPix Module</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>Fundus imaging and acquisition targeting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photoshop</td>
			<td>Adobe</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refresh</td>
			<td>Allergan</td>
			<td>94170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC: 174478-102-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDCL 59399-110-20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo vascular injury readouts in mouse retina to promote reproducibility

Vooruitgang in oogheelkundige beeldvormingstools biedt een ongekend niveau van toegang tot onderzoekers die werken met diermodellen van neurovasculair letsel. Om deze grotere vertaalbaarheid goed te benutten, is het nodig om reproduceerbare methoden te ontwikkelen om kwantitatieve gegevens uit deze afbeeldingen te halen. Optische coherentie tomografie (OCT) beeldvorming kan retinale histologie met micrometerresolutie oplossen en functionele verschillen in vasculaire bloedstroom onthullen. Hier schetsen we niet-invasieve vasculaire uitlezingen die we gebruiken om pathologische schade na vasculaire belediging te karakteriseren in een geoptimaliseerd muismodel van retinale ader occlusie (RVO). Deze uitlezingen omvatten live beeldvormingsanalyse van retinale morfologie, desorganisatie van retinale binnenste lagen (DRIL) meting van capillaire ischemie en fluoresceïneangiografie metingen van retinaal oedeem en vasculaire dichtheid. Deze technieken komen rechtstreeks overeen met die welke worden gebruikt om patiënten met netvliesaandoeningen in de kliniek te onderzoeken. Het standaardiseren van deze methoden maakt directe en reproduceerbare vergelijking van diermodellen met klinische fenotypen van oogheelkundige aandoeningen mogelijk, waardoor de translationele kracht van vasculaire letselmodellen toeneemt.

Deze analysemethoden maken de kwantificering van retinale pathologie mogelijk die is vastgelegd door FA- en OCT-beeldvorming. De experimenten waaruit de representatieve gegevens worden geëxtraheerd, gebruikten C57BL / 6J mannelijke muizen die ofwel dienden als ongedeerde controles of de RVO-procedure ondergingen en ofwel Pen1-XBir3-behandelingsoogdruppels of Pen1-Saline voertuigoogdruppels ontvingen. Het RVO-verwondingsmodel omvatte de laserbestraling (532 nm) van de belangrijkste aderen in elk oog van een verdoofde mui...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility at JoVE.com

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

Hier presenteren we drie data-analyseprotocollen voor fluoresceïneangiografie (FA) en optische coherentietomografie (OCT) beelden in de studie van Retinal Vein Occlusion (RVO).

In vivo Vasculaire letseluitlezingen in het netvlies van muizen om de reproduceerbaarheid te bevorderen

Advancements in ophthalmic imaging tools offer an unprecedented level of access to researchers working with animal models of neurovascular injury. To ...

Dit protocol stelt de gebruiker in staat om klinisch analoge markers van schade in retinale beeldvorming van muizen kwantitatief te meten, wat de vertaalbaarheid van latere bevindingen versterkt. Deze methoden stellen ons in staat om de analyse te stroomlijnen en geven ons de mogelijkheid om op betrouwbare wijze beeldvorming tussen proefdieren te vergelijken. Hoewel deze methoden zijn ontwikkeld om een overzicht van muismodellen te bestuderen, kunnen ze zich gemakkelijk uitbreiden tot onderzoek naar netvliesaandoeningen die dezelfde beeldvormingstechnieken gebruiken.Zet de retinale beeldvormende microscoop lichtbak, de optische coherentie tomografie machine en het verwarmde muis platform aan. Schakel de computer in en open het beeldbewerkingsprogramma. Voeg een druppel fenylefrine en tropicamide toe aan elk oog.Injecteer 100 microliter 1% fluoresceïne intraperitoneaal. Plaats de muis op het platform. Pas de hoogte en hoek van het platform aan totdat het zicht op de retinale fundus duidelijk en gefocust is.Maak een foto van de fundus. Open de software voor beeldvormende en optische coherentietomografie. In het optische coherentie tomografie programma nudge aanpassen aan 10.Maak een optische coherentie tomografie afbeelding, voeg 75 micrometer distale van de brandwond toe. Herhaal dit voor de andere drie kwadranten van het netvlies. Schakel de camera over naar een filter van 488 nanometer.Verhoog de camerawinst naar 5. Maak een foto van de fundus precies 5 minuten na fluoresceïne injectie. Open de fluoresceïneafbeelding in de beeldverwerkingssoftware.Dupliceer de afbeelding. Gebruik een selectietool om de belangrijkste schepen zorgvuldig te traceren. Negeer alle schepen die zich van deze schepen vertakken.Verwijder in de eerste afbeelding de selectie, waardoor alleen het vat overblijft. Sla deze gemaskeerde afbeelding op. Verplaats de selectie naar de tweede afbeelding, keer de selectie om en verwijder, waarbij de achtergrond wordt geïsoleerd.Sla deze gemaskeerde afbeelding op. Open de achtergrondafbeelding en meet de geïntegreerde dichtheid. Open de afbeelding van de vaten, selecteer de omtrek van de vaten en meet vervolgens de gemiddelde intensiteit.Deel de geïntegreerde dichtheid van de achtergrond door de gemiddelde intensiteit van de vaten, waardoor de lekkageverhouding voor het oog wordt gegenereerd. Noteer deze lekkageratio voor elk oog in een experimenteel cohort. Om de controle voor de achtergrond te bevorderen, normaliseert u experimentele ogen tot de gemiddelde lekkageratio van niet-gewonde controleogen.Open het optische coherentietomografiebeeld in de beeldverwerkingssoftware. Traceer de randen van de ganglioncellaag, de binnenste plexiformlaag, de binnenste nucleaire laag, de buitenste plexiformlaag, de fotoreceptorlaag en de RPE-laag. Exporteer de bestanden als CSV.Meet de gemiddelde dikte van elke laag en herhaal voor elk oog in het experimentele cohort. Open de optische coherentietomografieafbeelding in afbeelding J.Meet met behulp van het lijngereedschap de afstand waar de bovenrand van de buitenste plexiforme laag onduidelijk is. Meet horizontaal en behoud de breedtegraad waar de desorganisatie begint.Bereken de som van de ongeorganiseerde afstanden in de afbeelding. Deel de lengte van de desorganisatie door de totale lengte van het netvlies om de verhouding van desorganisatie te verkrijgen. Herhaal de meting en berekening voor optische coherentietomografiebeelden van de andere drie kwadranten van het netvlies.Neem het gemiddelde van de desorganisatieverhoudingen van de vier optische coherentietomografiebeelden. Dit getal vertegenwoordigt de gemiddelde desorganisatie voor het hele netvlies. Herhaal dit voor elk oog in het experimentele cohort.De gemaskeerde beelden die worden gebruikt voor de berekening van de lekkageverhouding voor elk netvliesbeeld kunnen worden vergeleken met andere en geanalyseerd, waarbij de belangrijkste vasculatuur wordt gescheiden van andere delen van het netvlies. Fluoresceïnekwantificering maakt het mogelijk om de ernst van het letsel en de werkzaamheid van de behandeling te vergelijken, evenals de studie van veranderingen in lekkage gedurende het verloop van de letseltijd. Een afbakening van de lagen van het netvlies in een OCT-beeld wordt waargenomen.De kwantificering van de dikte voor elke retinale laag laat zien dat de initiële oedemateuze respons een diepgaander effect heeft op de interne retinale lagen. Uit een analyse van een tijdsverloop van retinale ader occlusieschade, de initiële inflammatoire zwelling van retinale lagen en de uiteindelijke degeneratieve verdunning kan worden waargenomen. De binnenste nucleaire laag ervaart een veel grotere reactie op de initiële verwonding, maar de binnenste plexiforme laag vertoont ernstiger verdunning nadat het initiële oedeem is gestabiliseerd en keert terug naar de basislijn.De desorganisatie van de binnenste retinale laag manifesteert zich als een verdwijning van de bovengrens van de buitenste plexiforme laag, waarbij de buitenste plexiforme en binnenste nucleaire lagen samenvloeien. De retinale desorganisatie van twee experimentele groepen werd vergeleken om de werkzaamheid van een remmer bij het beperken van retinale schade te onderzoeken. Beeldkwaliteit is van vitaal belang voor de analysekwaliteit.Neem bij het verkrijgen van retinale beelden de tijd om ervoor te zorgen dat de fundus- en retinale lagen zo helder en gefocust mogelijk zijn. Deze niet-invasieve methoden kunnen longitudinaal en in combinatie met biochemische en immunohistochemische studie van weefsel worden gebruikt om meer veelzijdige en gedetailleerde ziekteprofielen te creëren. Deze techniek maakt de betrouwbare kwantificering mogelijk van in Vivo retinale beeldvormingsgegevens in modellen van neurovasculaire aandoeningen, zodat gegevens gemakkelijker kunnen worden vertaald naar menselijke ziekten.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfectie van Mouse retinale ganglioncellen door In vivo Elektroporatie

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

In vivo Elektroporatie van de ontwikkelingslanden Mouse Retina

The functional characterization of genes expressed during mammalian retinal development remains a significant challenge.  Gene targeting to generate ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Functionele neuroimaging Met behulp van ultrasone bloed-hersen barrière verstoring en mangaan-enhanced MRI

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

Hele Mount immunofluorescentiekleuring van de Neonatale Mouse Retina naar Angiogenese Onderzoek<em&gt; In vivo</em

Angiogenesis  is the complex process of new blood vessel formation defined by the sprouting  of new blood vessels from a pre-existing vessel network. ...

Assessment of Vascular Regeneration in the CNS Using the Mouse Retina

Beoordeling van de Vasculaire Regeneratie in het CZS met de muis Retina

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). ...

Vibratome Sectioning Mouse Retina to Prepare Photoreceptor Cultures

Vibratome Sectioning Mouse Retina te Fotoreceptor culturen Bereid

The retina is a part of the central nervous system that has organized architecture, with neurons in layers from the photoreceptors, both rods and cones in ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

Een<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Laser-induced Spinal Cord Injury Model Mechanismen van axonale degeneratie Beoordeel in real-time

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Simultaan<em&gt; Ex vivo</em&gt; Functioneel testen van Two netvliezen door<em&gt; In vivo</em&gt; Elektroretinogram System

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

An In Vivo Duo-color Method for Imaging Vascular Dynamics Following Contusive Spinal Cord Injury

An In Vivo Duo-color Method for Imaging Vascular Dynamics Following Contusive Spinal Cord Injury

Een In Vivo Duo-kleur methode voor Imaging-vasculaire Dynamics na Contusive dwarslaesie

Spinal cord injury (SCI) causes significant vascular disruption at the site of injury. Vascular pathology occurs immediately after SCI and continues ...

Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina

Transpupillaire twee-fotonen in vivo beeldvorming van het netvlies van de muis

The retina transforms light signals from the environment into electrical signals that are propagated to the brain. Diseases of the retina are prevalent ...