Name: in vivo vascular injury readouts in mouse retina to promote reproducibility
Uploaded: 2022-04-21T13:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי תוכנית עמיתי המחקר לתארים מתקדמים של הקרן הלאומית למדע (NSF-GRFP) מענק DGE - 1644869(ל- CKCO), מכון העיניים הלאומי (NEI) 5T32EY013933 (ל- AMP), המכון הלאומי להפרעות נוירולוגיות ושבץ מוחי (RO1 NS081333, R03 NS099920 ל- CMT), ומשרד ההגנה צבא / חיל האוויר (DURIP ל- CMT).

פרוטוקול זה תואם את הצהרת האגודה לחקר ראייה ועיניים (ARVO) לשימוש בבעלי חיים בחקר העיניים והראייה. ניסויים במכרסמים אושרו ונוטרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC) של אוניברסיטת קולומביה.
הערה: ההדמיה נעשתה על עכברים זכרים C57BL/6J בני חודשיים ששקלו כ-23 גרם.
<p cla...

<ol>
	<li>Tong, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+burden+of+cerebrovascular+disease+in+the+united+states.">The burden of cerebrovascular disease in the united states.</a> Preventing Chronic Disease. 16, 180411 (2019).</li><li>Nakahara, T., Mori, A., Kurauchi, Y., Sakamoto, K., Ishii, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurovascular+interactions+in+the+retina:+physiological+and+pathological+roles.">Neurovascular interactions in the retina: physiological and pathological roles.</a> Journal of Pharmacological Sciences. 123 (2), 79-84 (2013).</li><li>Jaulim, A., Ahmed, B., Khanam, T., Chatziralli, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Branch+retinal+vein+occlusion:+epidemiology,+pathogenesis,+risk+factors,+clinical+features,+diagnosis,+and+complications.+An+update+of+the+literature.">Branch retinal vein occlusion: epidemiology, pathogenesis, risk factors, clinical features, diagnosis, and complications. An update of the literature.</a> Retina. 33 (5), 901-910 (2013).</li><li>Ho, M., Liu, D. T. L., Lam, D. S. C., Jonas, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+vein+occlusions,+from+basics+to+the+latest+treatment.">Retinal vein occlusions, from basics to the latest treatment.</a> Retina. 36 (3), 432-448 (2016).</li><li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+new+mouse+model+of+branch+retinal+vein+occlusion+and+retinal+neovascularization.">Development of a new mouse model of branch retinal vein occlusion and retinal neovascularization.</a> Japanese Journal of Ophthalmology. 51 (4), 251-257 (2007).</li><li>Ebneter, A., Agca, C., Dysli, C., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+retinal+morphology+alterations+using+spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+a+mouse+model+of+retinal+branch+and+central+retinal+vein+occlusion.">Investigation of retinal morphology alterations using spectral domain optical coherence tomography in a mouse model of retinal branch and central retinal vein occlusion.</a> PLoS One. 10 (3), 0119046 (2015).</li><li>Fuma, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pharmacological+approach+in+newly+established+retinal+vein+occlusion+model.">A pharmacological approach in newly established retinal vein occlusion model.</a> Scientific Reports. 7, 43509 (2017).</li><li>Cavallerano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ophthalmic+fluorescein+angiography.">Ophthalmic fluorescein angiography.</a> Clinical Optometry. 5 (1), 1-23 (1996).</li><li>Laatikainen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fluorescein+angiography+revolution:+a+breakthrough+with+sustained+impact.">The fluorescein angiography revolution: a breakthrough with sustained impact.</a> Acta Ophthalmologica Scandinavica. 82 (4), 381-392 (2004).</li><li>Huang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography.">Optical coherence tomography.</a> Science. 254 (5035), 1178-1181 (1991).</li><li>Oberwahrenbrock, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reliability+of+intra-retinal+layer+thickness+estimates.">Reliability of intra-retinal layer thickness estimates.</a> PLoS One. 10 (9), 0137316 (2015).</li><li>Avrutsky, M. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+activation+of+caspase-9+promotes+neurovascular+injury+in+retinal+vein+occlusion.">Endothelial activation of caspase-9 promotes neurovascular injury in retinal vein occlusion.</a> Nature Communications. 11 (1), 3173 (2020).</li><li>Col&#243;n Ortiz, C., Potenski, A., Lawson, J., Smart, J., Troy, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+retinal+vein+occlusion+mouse+model+to+limit+variability.">Optimization of the retinal vein occlusion mouse model to limit variability.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (174), e62980 (2021).</li><li>Schmidt-Erfurth, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+management+of+retinal+vein+occlusion+by+the+European+society+of+retina+specialists+(EURETINA).">Guidelines for the management of retinal vein occlusion by the European society of retina specialists (EURETINA).</a> Ophthalmologica. 242 (3), 123-162 (2019).</li><li>Yoshimura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+analysis+of+inflammatory+immune+mediators+in+vitreoretinal+diseases.">Comprehensive analysis of inflammatory immune mediators in vitreoretinal diseases.</a> PLoS One. 4 (12), 8158 (2009).</li><li>Mezu-Ndubuisi, O. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+angiography+quantifies+oxygen-induced+retinopathy+vascular+recovery.">In vivo angiography quantifies oxygen-induced retinopathy vascular recovery.</a> Optometry and Vision Science. 93 (10), 1268-1279 (2016).</li><li>Hui, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+spatial+and+temporal+analysis+of+fluorescein+angiography+dynamics+in+the+eye.">Quantitative spatial and temporal analysis of fluorescein angiography dynamics in the eye.</a> PLoS One. 9 (11), 111330 (2014).</li><li>Berry, D., Thomas, A. S., Fekrat, S., Grewal, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+disorganization+of+retinal+inner+layers+with+ischemic+index+and+visual+acuity+in+central+retinal+vein+occlusion.">Association of disorganization of retinal inner layers with ischemic index and visual acuity in central retinal vein occlusion.</a> Ophthalmology. Retina. 2 (11), 1125-1132 (2018).</li><li>Nicholson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+accuracy+of+disorganization+of+the+retinal+inner+layers+in+detecting+macular+capillary+non-perfusion+in+diabetic+retinopathy.">Diagnostic accuracy of disorganization of the retinal inner layers in detecting macular capillary non-perfusion in diabetic retinopathy.</a> Clinical &amp; Experimental Ophthalmology. 43 (8), 735-741 (2015).</li><li>Obrosova, I., Chung, S., Kador, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetic+cataracts:+mechanisms+and+management.">Diabetic cataracts: mechanisms and management.</a> Diabetes/Metabolism Research and Reviews. 26 (3), 172-180 (2010).</li><li>Hegde, K., Henein, M., Varma, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+the+mouse+as+a+model+animal+for+the+study+of+diabetic+cataracts.">Establishment of the mouse as a model animal for the study of diabetic cataracts.</a> Ophthalmic Research. 35 (1), 12-18 (2003).</li><li>Takahashi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+collateral+vessel+formation+after+retinal+vein+occlusion+visualized+by+OCTA+and+elucidation+of+factors+in+their+formation.">Time course of collateral vessel formation after retinal vein occlusion visualized by OCTA and elucidation of factors in their formation.</a> Heliyon. 7 (1), 05902 (2021).</li><li>Haj Najeeb, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescein+angiography+in+diabetic+macular+edema:+A+new+approach+to+its+etiology.">Fluorescein angiography in diabetic macular edema: A new approach to its etiology.</a> Investigation Ophthalmology &amp; Visual Science. 58 (10), 3986-3990 (2017).</li><li>Alam, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+optical+coherence+tomography+angiography+features+for+objective+classification+and+staging+of+diabetic+retinopathy.">Quantitative optical coherence tomography angiography features for objective classification and staging of diabetic retinopathy.</a> Retina. 40 (2), 322-332 (2020).</li><li>Uddin, M., Jayagopal, A., McCollum, G., Yang, R., Penn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+retinal+hypoxia+using+HYPOX-4-dependent+fluorescence+in+a+mouse+model+of+laser-induced+retinal+vein+occlusion+(RVO).">In vivo imaging of retinal hypoxia using HYPOX-4-dependent fluorescence in a mouse model of laser-induced retinal vein occlusion (RVO).</a> Investigation Ophthalmology &amp; Visual Science. 58 (9), 3818-3824 (2017).</li><li>Qiang, W., Wei, R., Chen, Y., Chen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+pathological+features+and+current+animal+models+of+type+3+macular+neovascularization.">Clinical pathological features and current animal models of type 3 macular neovascularization.</a> Frontiers in Neuroscience. 15, 734860 (2021).</li><li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+laser-induced+choroidal+neovascularization+in+the+rodent+retina+using+optical+coherence+tomography+angiography.">Imaging laser-induced choroidal neovascularization in the rodent retina using optical coherence tomography angiography.</a> Investigation Ophthalmology &amp; Visual Science. 57 (9), 331 (2016).</li><li>Chen, J., Qian, H., Horai, R., Chan, C., Caspi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+optical+coherence+tomography+and+electroretinography+to+evaluate+retinal+pathology+in+a+mouse+model+of+autoimmune+uveitis.">Use of optical coherence tomography and electroretinography to evaluate retinal pathology in a mouse model of autoimmune uveitis.</a> PLoS One. 8 (5), 63904 (2013).</li></ol>

הדמיית רשתית מכרסמים לא פולשנית מציגה דרך לחקור פתולוגיה ולפתח התערבויות. מחקרים קודמים פיתחו וייעלו מודל עכברי של RVO, המגבילים את השונות ומאפשרים תרגום אמין של פתולוגיות קליניות נפוצות ברשתית מורין 5,7,13. התפתחויות בטכנולוגיית דימות עינ?...

מחלות נוירו-וסקולריות הן בעיה בריאותית מרכזית האחראית לשבץ איסכמי, הגורם המוביל לתמותה ותחלואה, ולמחלות כלי דם ברשתית המובילות לאובדן ראייה 1,2. כדי ליצור מודלים של מחלות נוירו-וסקולריות, אנו משתמשים במודל עכברי של חסימת ורידים ברשתית (RVO). מודל זה אינו פולשני ומשתמש בטכניקות הדמיה דומות של in vivo לאלה המשמשות לבדיקת אנשים עם מחלות כלי דם ברשתית במסגרת קלינית. השימוש במודל זה מגדיל אפוא את הפוטנציאל התרגומי של מחקרים המשתמשים במודל זה. כמו בכל דגמי העכברים, חיוני למקסם את יכולת השחזור של המודל.
מחלות כלי דם ברשתית הן גורם מרכזי לאובדן ראייה אצל אנשים מתחת לגיל 70. RVO היא מחלת כלי הדם השנייה בשכיחותה ברשתית אחרי רטינופתיה סוכרתית3. המאפיינים הקליניים האופייניים ל-RVO כוללים פגיעה איסכמית, בצקת ברשתית ואובדן ראייה כתוצאה מאובדן עצבי 3,4. מודלים של עכברים של RVO באמצעות פוטוקואגולציה בלייזר של כלי שיט עיקריים פותחו ושוכללו כדי לשכפל פתולוגיות קליניות מרכזיות שנצפו ב- RVO 5,6,7 אנושי. ההתקדמות בהדמיה אופתלמית מאפשרת גם שכפול של כלי אבחון לא פולשניים המשמשים בבני אדם, כלומר, אנגיוגרפיה פלואורסצנטית (FA) וטומוגרפיה קוהרנטית אופטית (OCT)6. אנגיוגרפיה פלואורסצנטית מאפשרת תצפית על דליפה עקב פירוק מחסום הדם-רשתית (BRB) וכן דינמיקה של זרימת הדם ברשתית, כולל אתרי חסימה, באמצעות הזרקת פלואורסצין, צבע פלואורסצנטי קטן 8,9. הדמיית OCT מאפשרת רכישת תמונות חתך ברזולוציה גבוהה של הרשתית וחקר העובי והארגון של שכבות הרשתית10. ניתוח תמונות FA היה מבחינה היסטורית איכותי במידה רבה, מה שמגביל את הפוטנציאל להשוואה ישירה וניתנת לשחזור בין מחקרים. לאחרונה פותחו מספר שיטות לכימות עובי שכבה בהדמיית OCT, אם כי אין כיום פרוטוקול ניתוח סטנדרטי והאתר של רכישת תמונות OCT משתנה11. על מנת למנף כראוי כלים אלה, יש צורך במתודולוגיית ניתוח נתונים סטנדרטית, כמותית וניתנת לשכפול. במאמר זה אנו מציגים שלוש קריאות כלי דם כאלה המשמשות להערכת נזק פתולוגי במודל עכבר של דליפת RVO-פלואורסצין, עובי שכבת OCT וחוסר ארגון של שכבות הרשתית.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AK-Fluor 10%</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC: 17478-253-10</td>
			<td>light-sensitive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Rimadyl</td>
			<td>NADA #141-199</td>
			<td>keep at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GenTeal</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>00658 06401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image J</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InSight 2D</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>OCT analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine Hydrochloride</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>NDC: 11695-0702-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenylephrine</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDCL174478-201-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron IV</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>Retinal imaging microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron Meridian Module</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>Laser photocoagulator software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron Optical Coherence Tomography Module</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>OCT imaging software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron StreamPix Module</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>Fundus imaging and acquisition targeting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photoshop</td>
			<td>Adobe</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refresh</td>
			<td>Allergan</td>
			<td>94170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC: 174478-102-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDCL 59399-110-20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo vascular injury readouts in mouse retina to promote reproducibility

ההתקדמות בכלי הדמיה אופתלמיים מציעה רמה חסרת תקדים של גישה לחוקרים העובדים עם מודלים של בעלי חיים של פגיעה נוירו-וסקולרית. כדי למנף כראוי את יכולת התרגום הגדולה הזו, יש צורך להמציא שיטות הניתנות לשחזור של ציור נתונים כמותיים מתמונות אלה. הדמיית טומוגרפיה קוהרנטית אופטית (OCT) יכולה לפתור היסטולוגיה של הרשתית ברזולוציית מיקרומטר ולחשוף הבדלים תפקודיים בזרימת הדם הווסקולרי. כאן, אנו מגדירים קריאות כלי דם לא פולשניות שבהן אנו משתמשים כדי לאפיין נזק פתולוגי לאחר עלבון כלי דם במודל עכבר אופטימלי של חסימת ורידים ברשתית (RVO). קריאות אלה כוללות ניתוח הדמיה חיה של מורפולוגיה ברשתית, חוסר ארגון של שכבות פנימיות ברשתית (DRIL) של איסכמיה נימית, ומדדי אנגיוגרפיה פלואורסצנטית של בצקת רשתית וצפיפות כלי דם. טכניקות אלה תואמות ישירות את אלה המשמשים לבדיקת חולים עם מחלת רשתית במרפאה. סטנדרטיזציה של שיטות אלה מאפשרת השוואה ישירה וניתנת לשחזור של מודלים של בעלי חיים עם פנוטיפים קליניים של מחלות עיניים, ומגדילה את כוח התרגום של מודלים של פגיעה בכלי הדם.

שיטות ניתוח אלה מאפשרות כימות של פתולוגיה רשתית שנלכדה על ידי הדמיית FA ו- OCT. בניסויים שמהם מופקים הנתונים המייצגים נעשה שימוש בעכברים זכרים C57BL/6J ששימשו כבקרות לא מרוסנות או עברו את הליך ה-RVO וקיבלו טיפות עיניים לטיפול Pen1-XBir3 או טיפות עיניים של Pen1-Saline. מודל הפציעה של RVO כלל את קרינת הלייזר (532 ?...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility at JoVE.com

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

כאן אנו מציגים שלושה פרוטוקולי ניתוח נתונים עבור אנגיוגרפיה פלואורסצנטית (FA) וטומוגרפיה של קוהרנטיות אופטית (OCT) במחקר של חסימת ורידים ברשתית (RVO).

In vivo קריאות פגיעה בכלי דם ברשתית העכבר כדי לקדם את יכולת השחזור

Advancements in ophthalmic imaging tools offer an unprecedented level of access to researchers working with animal models of neurovascular injury. To ...

פרוטוקול זה מאפשר למשתמש למדוד באופן כמותי סמנים אנלוגיים קליניים של נזק בהדמיית רשתית עכברים, מה שמחזק את יכולת התרגום של הממצאים הבאים. שיטות אלה מאפשרות לנו לייעל את הניתוח ולתת לנו את היכולת להשוות באופן מהימן הדמיה בין חיות ניסוי. בעוד ששיטות אלה פותחו כדי לחקור סקירה כללית של מודל עכברים, הן יכולות בקלות להתרחב למחקר על כל מחלות רשתית המשתמשות באותן טכניקות הדמיה.הפעל את תיבת האור של מיקרוסקופ הדמיית הרשתית, את מכונת טומוגרפיה קוהרנטית אופטית ואת פלטפורמת העכבר המחומם. הפעל את המחשב ופתח את תוכנית ההדמיה. הוסיפו טיפה אחת של פנילפרין וטרופיקמיד לכל עין.להזריק 100 מיקרוליטר של 1% פלואורסצין intraperitoneal. התאימו את העכבר לרציף. התאימו את הגובה והזווית של הפלטפורמה עד שהתצוגה של פונדוס הרשתית תהיה ברורה וממוקדת.צלם תמונה של הפונדוס. פתח את תוכנת טומוגרפיה הדמיה וקוהרנטיות אופטית. בתוכנית טומוגרפיה קוהרנטית אופטית להתאים נדנוד ל 10.צלם תמונת טומוגרפיה קוהרנטית אופטית, הוסף 75 מיקרומטר דיסטלי מהכוויה. חזור על הפעולה עבור שלושת הרבעים האחרים של הרשתית. העבר את המצלמה למסנן של 488 ננומטר.הגדל את רווח המצלמה ל-5. צלם תמונה של הפונדוס בדיוק 5 דקות לאחר הזרקת פלואורסצין. פתח את תמונת הפלואורסצ'יין בתוכנת עיבוד התמונה.שכפל את התמונה. באמצעות כלי בחירה, לעקוב בקפידה אחר הכלים העיקריים. התעלמו מכל כלי שיט המסתעפים מכלי שיט אלה.בתמונה הראשונה, מחק את הבחירה, והשאיר רק את כלי השיט. שמור תמונה מוסווית זו. הזיזו את הבחירה לתמונה השנייה, הפכו את הבחירה ומחקו, תוך בידוד הרקע.שמור תמונה מוסווית זו. פתח את תמונת הרקע ומדוד את הצפיפות המשולבת. פתח את תמונת כלי השיט, בחר את קווי המתאר של הכלים ולאחר מכן מדוד את העוצמה הממוצעת.חלקו את הצפיפות המשולבת של הרקע בעוצמה הממוצעת של כלי הדם, ויצרו את יחס הדליפה לעין. רשום את יחס הדליפה הזה עבור כל עין בקבוצת ניסוי. כדי להגביר את השליטה על הרקע, נרמלו את העיניים הניסיוניות ליחס הדליפה הממוצע של עיני בקרה לא פגועות.פתח את תמונת טומוגרפיה קוהרנטית אופטית בתוכנת עיבוד התמונה. עקוב אחר הגבולות של שכבת תאי הגנגליון, שכבת הפרספקס הפנימית, השכבה הגרעינית הפנימית, שכבת הפלקסיפורם החיצונית, שכבת הפוטורצפטור ושכבת RPE. ייצא את הקבצים כ- CSV.יש למדוד את העובי הממוצע של כל שכבה ולחזור על הפעולה עבור כל עין בקבוצת הניסוי. פתח את תמונת טומוגרפיה קוהרנטית אופטית בתמונה J.באמצעות כלי הקו, מדוד את המרחק שבו הגבול העליון של שכבת הפרספקס החיצונית אינו ברור. מדוד אופקית, תוך שמירה על קו הרוחב שבו מתחיל חוסר הארגון.חשב את סכום המרחקים הלא מאורגנים בתמונה. חלק את אורך חוסר הארגון באורך הכולל של הרשתית כדי לקבל את היחס של חוסר ארגון. חזור על המדידה והחישוב עבור תמונות טומוגרפיה קוהרנטית אופטית משלושת הרבעים האחרים של הרשתית.קח את הממוצע של יחסי חוסר הארגון מארבע תמונות טומוגרפיה קוהרנטית אופטית. מספר זה מייצג את חוסר הארגון הממוצע עבור הרשתית כולה. יש לחזור על הפעולה עבור כל עין בקבוצת הניסוי.ניתן להשוות את תמונות המסכות המשמשות לחישוב יחס הדליפה עבור כל תמונת רשתית לאחרות ולנתח אותן, תוך הפרדת כלי הדם העיקריים מאזורים אחרים ברשתית. כימות פלואורסצין מאפשר השוואה בין חומרת הפציעה ויעילות הטיפול, כמו גם חקר השינויים בדליפה במהלך זמן הפציעה. נצפה תיחום של שכבות הרשתית בתמונת OCT.כימות העובי של כל שכבת רשתית מראה שלתגובה הראשונית של הרשתית יש השפעה עמוקה יותר על שכבות הרשתית הפנימיות. מניתוח של מהלך זמן של נזק לחסימת ורידים ברשתית, ניתן לראות את הנפיחות הדלקתית הראשונית של שכבות הרשתית, ואת ההידלדלות הניוונית בסופו של דבר. השכבה הגרעינית הפנימית חווה תגובה הרבה יותר גדולה לפגיעה הראשונית, אך שכבת הפרספקס הפנימית מדגימה הידלדלות חמורה יותר לאחר שהבצקת הראשונית התייצבה וחזרה לנקודת ההתחלה.חוסר הארגון של שכבת הרשתית הפנימית מתבטא בהיעלמות הגבול העליון של שכבת הפלקסיפום החיצונית, תוך מיזוג השכבות החיצוניות והגרעיניות הפנימיות יחד. חוסר הארגון ברשתית של שתי קבוצות ניסוי הושווה כדי לחקור את היעילות של מעכב בהפחתת נזק לרשתית. איכות התמונה חשובה ביותר לאיכות הניתוח.בעת רכישת תמונות רשתית, קח את הזמן כדי להבטיח ששכבות הפונדוס והרשתית יהיו ברורות וממוקדות ככל האפשר. ניתן להשתמש בשיטות לא פולשניות אלה לאורך ובשילוב עם מחקר ביוכימי ואימונוהיסטוכימי של רקמות כדי ליצור פרופילים רבגוניים ומפורטים יותר של מחלות. טכניקה זו מאפשרת כימות אמין של נתוני הדמיית רשתית in Vivo במודלים של מחלות נוירו-וסקולריות, כך שניתן יהיה לתרגם את הנתונים ביתר קלות למחלות אנושיות.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfection של תאים עכבר רשתית גנגליון על ידי In vivo Electroporation

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

ב electroporation vivo של הרשתית עכבר פיתוח

The functional characterization of genes expressed during mammalian retinal development remains a significant challenge.  Gene targeting to generate ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

הדמייה תפקודית באמצעות שיבוש Ultrasonic הדם למוח הגדר מנגן משופרת MRI

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

מכתים Immunofluorescent הר שלם של רשתית עכבר ילודים לחקר אנגיוגנזה<em&gt; בvivo</em

Angiogenesis  is the complex process of new blood vessel formation defined by the sprouting  of new blood vessels from a pre-existing vessel network. ...

Assessment of Vascular Regeneration in the CNS Using the Mouse Retina

הערכה של כלי דם התחדשות במערכת העצבים המרכזית באמצעות רשתית העכבר

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). ...

Vibratome Sectioning Mouse Retina to Prepare Photoreceptor Cultures

Vibratome חתך רשתית העכבר להכין תרבויות קולטי אור

The retina is a part of the central nervous system that has organized architecture, with neurons in layers from the photoreceptors, both rods and cones in ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

<em&gt; Ex Vivo</em&gt; חוט השדרה מושרה לייזר הפגיעה דגם להערכת מנגנוני axonal הניוון בזמן אמת

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

בו זמנית<em&gt; Vivo לשעבר</em&gt; בדיקות פונקציונליות של שתי הרשתיות על ידי<em&gt; In vivo</emמערכת electroretinogram&gt;

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

An In Vivo Duo-color Method for Imaging Vascular Dynamics Following Contusive Spinal Cord Injury

An In Vivo Duo-color Method for Imaging Vascular Dynamics Following Contusive Spinal Cord Injury

Vivo דואו-צבע שיטת הדמיה Dynamics כלי הדם בעקבות פגיעה בחוט השדרה Contusive

Spinal cord injury (SCI) causes significant vascular disruption at the site of injury. Vascular pathology occurs immediately after SCI and continues ...

Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina

הדמיה טרנס-אימונית של שני פוטונים In vivo של רשתית העכבר

The retina transforms light signals from the environment into electrical signals that are propagated to the brain. Diseases of the retina are prevalent ...