Name: in vivo vascular injury readouts in mouse retina to promote reproducibility
Uploaded: 2022-04-21T13:50:00
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이 연구는 국립 과학 재단 대학원 연구 펠로우십 프로그램(NSF-GRFP) 보조금 DGE - 1644869(CKCO), 국립 안과 연구소(NEI) 5T32EY013933(AMP), 국립 신경 장애 및 뇌졸중 연구소(RO1 NS081333, R03 NS099920에서 CMT), 국방부 육군/공군(DURIP에서 CMT).

이 프로토콜은 안과 및 시력 연구에서 동물 사용에 대한 시력 및 안과 연구 협회 (ARVO) 성명서를 따릅니다. 설치류 실험은 컬럼비아 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인되고 모니터링되었습니다.
참고: 이미징은 무게가 약 23g인 2개월 된 C57BL/6J 수컷 마우스에서 수행되었습니다.
1. 망막 영상용 시약의 제조
<ol><li>주 사용 ?...

<ol>
	<li>Tong, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+burden+of+cerebrovascular+disease+in+the+united+states.">The burden of cerebrovascular disease in the united states.</a> Preventing Chronic Disease. 16, 180411 (2019).</li><li>Nakahara, T., Mori, A., Kurauchi, Y., Sakamoto, K., Ishii, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurovascular+interactions+in+the+retina:+physiological+and+pathological+roles.">Neurovascular interactions in the retina: physiological and pathological roles.</a> Journal of Pharmacological Sciences. 123 (2), 79-84 (2013).</li><li>Jaulim, A., Ahmed, B., Khanam, T., Chatziralli, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Branch+retinal+vein+occlusion:+epidemiology,+pathogenesis,+risk+factors,+clinical+features,+diagnosis,+and+complications.+An+update+of+the+literature.">Branch retinal vein occlusion: epidemiology, pathogenesis, risk factors, clinical features, diagnosis, and complications. An update of the literature.</a> Retina. 33 (5), 901-910 (2013).</li><li>Ho, M., Liu, D. T. L., Lam, D. S. C., Jonas, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+vein+occlusions,+from+basics+to+the+latest+treatment.">Retinal vein occlusions, from basics to the latest treatment.</a> Retina. 36 (3), 432-448 (2016).</li><li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+new+mouse+model+of+branch+retinal+vein+occlusion+and+retinal+neovascularization.">Development of a new mouse model of branch retinal vein occlusion and retinal neovascularization.</a> Japanese Journal of Ophthalmology. 51 (4), 251-257 (2007).</li><li>Ebneter, A., Agca, C., Dysli, C., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+retinal+morphology+alterations+using+spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+a+mouse+model+of+retinal+branch+and+central+retinal+vein+occlusion.">Investigation of retinal morphology alterations using spectral domain optical coherence tomography in a mouse model of retinal branch and central retinal vein occlusion.</a> PLoS One. 10 (3), 0119046 (2015).</li><li>Fuma, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pharmacological+approach+in+newly+established+retinal+vein+occlusion+model.">A pharmacological approach in newly established retinal vein occlusion model.</a> Scientific Reports. 7, 43509 (2017).</li><li>Cavallerano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ophthalmic+fluorescein+angiography.">Ophthalmic fluorescein angiography.</a> Clinical Optometry. 5 (1), 1-23 (1996).</li><li>Laatikainen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fluorescein+angiography+revolution:+a+breakthrough+with+sustained+impact.">The fluorescein angiography revolution: a breakthrough with sustained impact.</a> Acta Ophthalmologica Scandinavica. 82 (4), 381-392 (2004).</li><li>Huang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography.">Optical coherence tomography.</a> Science. 254 (5035), 1178-1181 (1991).</li><li>Oberwahrenbrock, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reliability+of+intra-retinal+layer+thickness+estimates.">Reliability of intra-retinal layer thickness estimates.</a> PLoS One. 10 (9), 0137316 (2015).</li><li>Avrutsky, M. 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(174), e62980 (2021).</li><li>Schmidt-Erfurth, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+management+of+retinal+vein+occlusion+by+the+European+society+of+retina+specialists+(EURETINA).">Guidelines for the management of retinal vein occlusion by the European society of retina specialists (EURETINA).</a> Ophthalmologica. 242 (3), 123-162 (2019).</li><li>Yoshimura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+analysis+of+inflammatory+immune+mediators+in+vitreoretinal+diseases.">Comprehensive analysis of inflammatory immune mediators in vitreoretinal diseases.</a> PLoS One. 4 (12), 8158 (2009).</li><li>Mezu-Ndubuisi, O. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+angiography+quantifies+oxygen-induced+retinopathy+vascular+recovery.">In vivo angiography quantifies oxygen-induced retinopathy vascular recovery.</a> Optometry and Vision Science. 93 (10), 1268-1279 (2016).</li><li>Hui, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+spatial+and+temporal+analysis+of+fluorescein+angiography+dynamics+in+the+eye.">Quantitative spatial and temporal analysis of fluorescein angiography dynamics in the eye.</a> PLoS One. 9 (11), 111330 (2014).</li><li>Berry, D., Thomas, A. S., Fekrat, S., Grewal, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+disorganization+of+retinal+inner+layers+with+ischemic+index+and+visual+acuity+in+central+retinal+vein+occlusion.">Association of disorganization of retinal inner layers with ischemic index and visual acuity in central retinal vein occlusion.</a> Ophthalmology. Retina. 2 (11), 1125-1132 (2018).</li><li>Nicholson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+accuracy+of+disorganization+of+the+retinal+inner+layers+in+detecting+macular+capillary+non-perfusion+in+diabetic+retinopathy.">Diagnostic accuracy of disorganization of the retinal inner layers in detecting macular capillary non-perfusion in diabetic retinopathy.</a> Clinical &amp; Experimental Ophthalmology. 43 (8), 735-741 (2015).</li><li>Obrosova, I., Chung, S., Kador, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetic+cataracts:+mechanisms+and+management.">Diabetic cataracts: mechanisms and management.</a> Diabetes/Metabolism Research and Reviews. 26 (3), 172-180 (2010).</li><li>Hegde, K., Henein, M., Varma, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+the+mouse+as+a+model+animal+for+the+study+of+diabetic+cataracts.">Establishment of the mouse as a model animal for the study of diabetic cataracts.</a> Ophthalmic Research. 35 (1), 12-18 (2003).</li><li>Takahashi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+collateral+vessel+formation+after+retinal+vein+occlusion+visualized+by+OCTA+and+elucidation+of+factors+in+their+formation.">Time course of collateral vessel formation after retinal vein occlusion visualized by OCTA and elucidation of factors in their formation.</a> Heliyon. 7 (1), 05902 (2021).</li><li>Haj Najeeb, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescein+angiography+in+diabetic+macular+edema:+A+new+approach+to+its+etiology.">Fluorescein angiography in diabetic macular edema: A new approach to its etiology.</a> Investigation Ophthalmology &amp; Visual Science. 58 (10), 3986-3990 (2017).</li><li>Alam, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+optical+coherence+tomography+angiography+features+for+objective+classification+and+staging+of+diabetic+retinopathy.">Quantitative optical coherence tomography angiography features for objective classification and staging of diabetic retinopathy.</a> Retina. 40 (2), 322-332 (2020).</li><li>Uddin, M., Jayagopal, A., McCollum, G., Yang, R., Penn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+retinal+hypoxia+using+HYPOX-4-dependent+fluorescence+in+a+mouse+model+of+laser-induced+retinal+vein+occlusion+(RVO).">In vivo imaging of retinal hypoxia using HYPOX-4-dependent fluorescence in a mouse model of laser-induced retinal vein occlusion (RVO).</a> Investigation Ophthalmology &amp; Visual Science. 58 (9), 3818-3824 (2017).</li><li>Qiang, W., Wei, R., Chen, Y., Chen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+pathological+features+and+current+animal+models+of+type+3+macular+neovascularization.">Clinical pathological features and current animal models of type 3 macular neovascularization.</a> Frontiers in Neuroscience. 15, 734860 (2021).</li><li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+laser-induced+choroidal+neovascularization+in+the+rodent+retina+using+optical+coherence+tomography+angiography.">Imaging laser-induced choroidal neovascularization in the rodent retina using optical coherence tomography angiography.</a> Investigation Ophthalmology &amp; Visual Science. 57 (9), 331 (2016).</li><li>Chen, J., Qian, H., Horai, R., Chan, C., Caspi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+optical+coherence+tomography+and+electroretinography+to+evaluate+retinal+pathology+in+a+mouse+model+of+autoimmune+uveitis.">Use of optical coherence tomography and electroretinography to evaluate retinal pathology in a mouse model of autoimmune uveitis.</a> PLoS One. 8 (5), 63904 (2013).</li></ol>

비침습적 설치류 망막 영상은 병리학을 연구하고 중재를 개발할 수 있는 방법을 제시합니다. 이전 연구에서는 RVO의 마우스 모델을 개발하고 최적화하여 가변성을 제한하고 쥐 망막 5,7,13에서 일반적인 임상 병리의 신뢰할 수있는 번역을 허용했습니다. 안과 영상 기술의 발전은 실험 동물에서 FA 및 OCT와 같은 임상 생체 내</e...

신경혈관 질환은 사망률 및 이환율의 주요 원인인 허혈성 뇌졸중과시력 상실로 이어지는 망막 혈관 질환의 주요 의료 문제입니다1,2. 신경 혈관 질환을 모델링하기 위해 망막 정맥 폐색 (RVO)의 마우스 모델을 사용합니다. 이 모델은 비침습적이며 임상 환경에서 망막 혈관 질환이 있는 사람들을 검사하는 데 사용되는 것과 유사한 생체 내 이미징 기술을 활용합니다. 따라서이 모델을 사용하면이 모델을 활용하는 연구의 번역 잠재력이 증가합니다. 모든 마우스 모델과 마찬가지로 모델의 재현성을 극대화하는 것이 중요합니다.
망막 혈관 질환은 70 세 미만의 사람들의 시력 상실의 주요 원인입니다. RVO는 당뇨병성 망막병증3 다음으로 두 번째로 흔한 망막혈관 질환입니다. RVO의 특징적인 임상 특징에는 허혈성 손상, 망막 부종 및 신경 손실의 결과로 인한 시력 상실이 포함됩니다 3,4. 주요 혈관의 레이저 광응고를 사용하는 RVO의 마우스 모델은 인간 RVO 5,6,7에서 관찰된 주요 임상 병리를 복제하기 위해 개발 및 개선되었습니다. 안과 영상의 발전은 또한 인간에게 사용되는 비침습적 진단 도구, 즉 형광 혈관 조영술(FA) 및 광학 간섭 단층 촬영(OCT)의 복제를 허용합니다6. Fluorescein 혈관 조영술은 작은 형광 염료인 fluorescein의 주입을 사용하여 폐색 부위를 포함하여 망막의 혈류 역학뿐만 아니라 혈액 망막 장벽 (BRB)의 파괴로 인한 누출을 관찰 할 수 있습니다 8,9. OCT 이미징은 망막의 고해상도 단면 이미지의 획득 및 망막 층(10)의 두께 및 조직에 대한 연구를 가능하게합니다. FA 이미지의 분석은 역사적으로 대체로 질적이어서 연구 간의 직접적이고 재현 가능한 비교 가능성을 제한합니다. 최근에, OCT 이미징에서 층 두께의 정량화를 위한 많은 방법들이 개발되고 있지만, 현재 표준화된 분석 프로토콜은 없고, OCT 이미지 획득장소는 다양하다11. 이러한 도구를 적절하게 활용하려면 표준화되고 정량적이며 복제 가능한 데이터 분석 방법론이 필요합니다. 이 논문에서는 RVO- 플루오 레세인 누출, OCT 층 두께 및 망막 층의 해체에 대한 마우스 모델에서 병리학 적 손상을 평가하는 데 사용되는 세 가지 혈관 판독 값을 제시합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AK-Fluor 10%</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC: 17478-253-10</td>
			<td>light-sensitive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Rimadyl</td>
			<td>NADA #141-199</td>
			<td>keep at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GenTeal</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>00658 06401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image J</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InSight 2D</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>OCT analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine Hydrochloride</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>NDC: 11695-0702-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenylephrine</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDCL174478-201-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron IV</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>Retinal imaging microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron Meridian Module</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>Laser photocoagulator software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron Optical Coherence Tomography Module</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>OCT imaging software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron StreamPix Module</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>Fundus imaging and acquisition targeting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photoshop</td>
			<td>Adobe</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refresh</td>
			<td>Allergan</td>
			<td>94170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC: 174478-102-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDCL 59399-110-20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo vascular injury readouts in mouse retina to promote reproducibility

안과 영상 도구의 발전은 신경 혈관 손상의 동물 모델을 연구하는 연구자에게 전례없는 수준의 접근을 제공합니다. 이러한 더 큰 번역 가능성을 적절하게 활용하려면 이러한 이미지에서 정량적 데이터를 그리는 재현 가능한 방법을 고안할 필요가 있습니다. 광학 간섭 단층 촬영(OCT) 영상은 마이크로미터 분해능에서 망막 조직학을 해결하고 혈관 혈류의 기능적 차이를 밝힐 수 있습니다. 여기에서는 망막 정맥 폐색(RVO)의 최적화된 마우스 모델에서 혈관 모욕 후 병리학적 손상을 특성화하는 데 사용하는 비침습적 혈관 판독을 설명합니다. 이러한 판독값에는 망막 형태의 라이브 이미징 분석, 모세관 허혈의 망막 내층 해체(DRIL) 측정, 망막 부종 및 혈관 밀도의 플루오레세인 혈관 조영술 측정이 포함됩니다. 이 기술은 클리닉에서 망막 질환 환자를 검사하는 데 사용되는 기술과 직접 일치합니다. 이러한 방법을 표준화하면 동물 모델을 안과 질환의 임상 표현형과 직접적이고 재현 가능한 비교가 가능하여 혈관 손상 모델의 번역 능력이 향상됩니다.

이러한 분석 방법을 통해 FA 및 OCT 영상으로 캡처 한 망막 병리의 정량화를 가능하게합니다. 대표 데이터를 추출한 실험은 손상되지 않은 대조군 역할을 하거나 RVO 절차를 거치고 Pen1-XBir3 치료 안약 또는 Pen1-식염수 차량 안약을 받은 C57BL/6J 수컷 마우스를 사용했습니다. RVO 손상 모델은 광활성제 염료12인 로즈 벵갈의 꼬리 정맥 주사 후 마취된 마우스의 각 눈에 있는 주요 정맥의 ...

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In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

여기에서는 망막 정맥 폐색(RVO) 연구에서 형광 혈관 조영술(FA) 및 광학 간섭 단층 촬영(OCT) 이미지에 대한 세 가지 데이터 분석 프로토콜을 제시합니다.

생체 내 재현성 촉진을 위한 마우스 망막의 혈관 손상 판독

Advancements in ophthalmic imaging tools offer an unprecedented level of access to researchers working with animal models of neurovascular injury. To ...

이 프로토콜을 통해 사용자는 마우스 망막 영상에서 임상적으로 유사한 손상 마커를 정량적으로 측정할 수 있으며, 이는 후속 결과의 번역 가능성을 강화합니다. 이러한 방법을 통해 분석을 간소화하고 실험 동물 간의 이미징을 안정적으로 비교할 수 있습니다. 이러한 방법은 마우스 모델 개요를 연구하기 위해 개발되었지만 동일한 이미징 기술을 사용하는 망막 질환에 대한 연구로 쉽게 확장 할 수 있습니다.망막 영상 현미경 라이트 박스, 광학 간섭 단층 촬영 기계 및 가열된 마우스 플랫폼을 켭니다. 컴퓨터를 켜고 이미징 프로그램을 엽니다. 각 눈에 페닐에 프린과 트로피 아미드 한 방울을 첨가하십시오.100 마이크로 리터의 1 % 플루오레세인을 복강 내 주사하십시오. 플랫폼에 마우스를 수용하십시오. 망막 안저의 시야가 선명하고 초점이 맞춰질 때까지 플랫폼의 높이와 각도를 조정하십시오.안저 사진을 찍습니다. 이미징 및 광학 간섭 단층 촬영 소프트웨어를 엽니다. 광학 간섭 단층 촬영 프로그램에서 넛지를 10으로 조정합니다.광학 간섭 단층 촬영 이미지를 가져 와서 화상에서 75 마이크로 미터 떨어진 곳에 추가하십시오. 망막의 다른 세 사분면에 대해 반복하십시오. 카메라를 488나노미터 필터로 전환합니다.카메라 게인을 5로 늘립니다. 플루오레세인 주사 후 정확히 5분 후에 안저 사진을 찍습니다. 이미지 처리 소프트웨어에서 플루오레세인 이미지를 엽니다.이미지를 복제합니다. 선택 도구를 사용하여 주요 선박을주의 깊게 추적하십시오. 이 선박에서 분기되는 선박은 무시하십시오.첫 번째 이미지에서 선택 항목을 삭제하고 선박 만 남겨 둡니다. 이 마스크된 이미지를 저장합니다. 선택 영역을 두 번째 이미지로 이동하고 선택 영역을 반전하고 삭제하여 배경을 분리합니다.이 마스크된 이미지를 저장합니다. 배경 이미지를 열고 통합 밀도를 측정합니다. 혈관 이미지를 열고 혈관의 윤곽을 선택한 다음 평균 강도를 측정합니다.배경의 통합 밀도를 혈관의 평균 강도로 나누어 눈의 누출 비율을 생성합니다. 실험 코호트에서 각 눈에 대한 이 누출 비율을 기록합니다. 배경을 추가로 제어하려면 실험용 눈을 다치지 않은 대조군 눈의 평균 누출 비율로 정규화합니다.이미지 처리 소프트웨어에서 광학 간섭 단층 촬영 이미지를 엽니다. 신경절 세포층, 내부 플렉시 폼 층, 내부 핵층, 외부 플렉시 폼 층, 광 수용체 층 및 RPE 층의 경계를 추적하십시오. 파일을 CSV로 내보냅니다.각 층의 평균 두께를 측정하고 실험 코호트에서 각 눈에 대해 반복합니다. 이미지 J에서 광학 간섭 단층 촬영 이미지를 엽니 다. 선 도구를 사용하여 외부 플렉시 폼 층의 상단 경계가 불명료 한 거리를 측정합니다. 무질서가 시작되는 위도를 유지하면서 수평으로 측정하십시오.이미지에서 무질서한 거리의 합을 계산합니다. 무질서의 길이를 망막의 전체 길이로 나누어 무질서의 비율을 구하십시오. 망막의 다른 세 사분면으로부터의 광학 간섭 단층 촬영 이미지에 대해 측정 및 계산을 반복하십시오.4 개의 광학 간섭 단층 촬영 이미지에서 무질서 비율의 평균을 취하십시오. 이 숫자는 전체 망막의 평균 무질서를 나타냅니다. 실험 코호트의 각 눈에 대해 반복합니다.각 망막 영상에 대한 누출 비율 계산에 사용되는 마스킹 된 이미지는 다른 이미지와 비교하고 분석하여 망막의 다른 영역과 주요 혈관계를 분리 할 수 있습니다. Fluorescein 정량화는 부상 심각도와 치료 효능의 비교뿐만 아니라 부상 시간 경과에 따른 누출 변화에 대한 연구를 허용합니다. OCT 이미지에서 망막 층의 윤곽이 관찰됩니다.각 망막 층에 대한 두께의 정량화는 초기 부종 반응이 내부 망막 층에 더 큰 영향을 미친다는 것을 보여줍니다. 망막 정맥 폐색 손상의 시간 경과 분석에서 망막 층의 초기 염증성 부종 및 최종 퇴행성 얇아짐이 관찰 될 수 있습니다. 내부 핵층은 초기 손상에 대해 훨씬 더 큰 반응을 경험하지만 내부 플렉시 폼 층은 초기 부종이 안정화되고 기준선으로 돌아온 후 더 심한 얇아짐을 나타냅니다.내부 망막 층의 해체는 외부 플렉시 폼 층의 상부 경계가 사라지는 것으로 나타나 외부 플렉시 폼과 내부 핵 층을 함께 혼합합니다. 망막 손상을 완화시키는 억제제의 효능을 조사하기 위해 두 실험 그룹의 망막 해체를 비교했습니다. 이미지 품질은 분석 품질에 매우 중요합니다.망막 이미지를 획득 할 때 시간을내어 안저층과 망막 층이 가능한 한 선명하고 집중되어 있는지 확인하십시오. 이러한 비 침습적 방법은 종단 적으로 그리고 조직의 생화학 및 면역 조직 화학적 연구와 함께 사용하여보다 다각적이고 상세한 질병 프로파일을 만들 수 있습니다. 이 기술은 신경 혈관 질환 모델에서 생체 내 망막 영상 데이터의 신뢰할 수있는 정량화를 가능하게하여 데이터를보다 쉽게 인간 질병으로 변환 할 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

마우스 망막 신경절 세포 Transfection로 생체내에 Electroporation

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

연구

신경과학

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

개발 마우스 망막의 생체내 Electroporation에

The functional characterization of genes expressed during mammalian retinal development remains a significant challenge.  Gene targeting to generate ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

초음파 혈액 - 뇌 장벽 파괴 및 망간 향상된 MRI를 사용하여 기능성 Neuroimaging

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

혈관을 조사하기 위해 신생아 마우스 망막의 전체 마운트 면역 형광 염색<em&gt; 생체 내</em

Angiogenesis  is the complex process of new blood vessel formation defined by the sprouting  of new blood vessels from a pre-existing vessel network. ...

Assessment of Vascular Regeneration in the CNS Using the Mouse Retina

마우스 망막을 사용하여 중추 신경계의 혈관 재생의 평가

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). ...

Vibratome Sectioning Mouse Retina to Prepare Photoreceptor Cultures

에 vibratome 단면 마우스 망막 광 수용체의 문화를 준비하는 방법

The retina is a part of the central nervous system that has organized architecture, with neurons in layers from the photoreceptors, both rods and cones in ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

<em&gt; 전의 VIVO</em&gt; 레이저에 의한 척수 손상 모델은 실시간으로 축삭 변성의 메커니즘을 평가하기 위해

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

동시<em&gt; 생체</em두 망막의&gt; 기능 테스트로<em&gt; 생체</em&gt; 전위도 시스템

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

An In Vivo Duo-color Method for Imaging Vascular Dynamics Following Contusive Spinal Cord Injury

An In Vivo Duo-color Method for Imaging Vascular Dynamics Following Contusive Spinal Cord Injury

에 비보 듀오 컬러 이미징 혈관 역학 Contusive 척수 상해를 따르는 방법

Spinal cord injury (SCI) causes significant vascular disruption at the site of injury. Vascular pathology occurs immediately after SCI and continues ...

Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina

경동공 이광자 마우스 망막의 생체 내 이미징

The retina transforms light signals from the environment into electrical signals that are propagated to the brain. Diseases of the retina are prevalent ...