Name: in vivo vascular injury readouts in mouse retina to promote reproducibility
Uploaded: 2022-04-21T13:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av National Science Foundation Graduate Research Fellowship Program (NSF-GRFP) gi DGE - 1644869(til CKCO), National Eye Institute (NEI) 5T32EY013933 (til AMP), National Institute of Neurological Disorders and Stroke (RO1 NS081333, R03 NS099920 til CMT), og Department of Defense Army / Air Force (DURIP til CMT).

Denne protokollen følger Association for Research in Vision and Ophthalmology (ARVO) uttalelse for bruk av dyr i oftalmisk og visjonsforskning. Gnagere eksperimenter ble godkjent og overvåket av Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) ved Columbia University.
MERK: Avbildning ble gjort på 2 måneder gamle C57BL / 6J hannmus som veide ca. 23 g.
1. Fremstilling av reagenser for retinal avbildning
<ol><li>Fremstilling av injiserbar flu...

<ol>
	<li>Tong, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+burden+of+cerebrovascular+disease+in+the+united+states.">The burden of cerebrovascular disease in the united states.</a> Preventing Chronic Disease. 16, 180411 (2019).</li><li>Nakahara, T., Mori, A., Kurauchi, Y., Sakamoto, K., Ishii, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurovascular+interactions+in+the+retina:+physiological+and+pathological+roles.">Neurovascular interactions in the retina: physiological and pathological roles.</a> Journal of Pharmacological Sciences. 123 (2), 79-84 (2013).</li><li>Jaulim, A., Ahmed, B., Khanam, T., Chatziralli, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Branch+retinal+vein+occlusion:+epidemiology,+pathogenesis,+risk+factors,+clinical+features,+diagnosis,+and+complications.+An+update+of+the+literature.">Branch retinal vein occlusion: epidemiology, pathogenesis, risk factors, clinical features, diagnosis, and complications. An update of the literature.</a> Retina. 33 (5), 901-910 (2013).</li><li>Ho, M., Liu, D. T. L., Lam, D. S. C., Jonas, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+vein+occlusions,+from+basics+to+the+latest+treatment.">Retinal vein occlusions, from basics to the latest treatment.</a> Retina. 36 (3), 432-448 (2016).</li><li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+new+mouse+model+of+branch+retinal+vein+occlusion+and+retinal+neovascularization.">Development of a new mouse model of branch retinal vein occlusion and retinal neovascularization.</a> Japanese Journal of Ophthalmology. 51 (4), 251-257 (2007).</li><li>Ebneter, A., Agca, C., Dysli, C., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+retinal+morphology+alterations+using+spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+a+mouse+model+of+retinal+branch+and+central+retinal+vein+occlusion.">Investigation of retinal morphology alterations using spectral domain optical coherence tomography in a mouse model of retinal branch and central retinal vein occlusion.</a> PLoS One. 10 (3), 0119046 (2015).</li><li>Fuma, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pharmacological+approach+in+newly+established+retinal+vein+occlusion+model.">A pharmacological approach in newly established retinal vein occlusion model.</a> Scientific Reports. 7, 43509 (2017).</li><li>Cavallerano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ophthalmic+fluorescein+angiography.">Ophthalmic fluorescein angiography.</a> Clinical Optometry. 5 (1), 1-23 (1996).</li><li>Laatikainen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fluorescein+angiography+revolution:+a+breakthrough+with+sustained+impact.">The fluorescein angiography revolution: a breakthrough with sustained impact.</a> Acta Ophthalmologica Scandinavica. 82 (4), 381-392 (2004).</li><li>Huang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography.">Optical coherence tomography.</a> Science. 254 (5035), 1178-1181 (1991).</li><li>Oberwahrenbrock, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reliability+of+intra-retinal+layer+thickness+estimates.">Reliability of intra-retinal layer thickness estimates.</a> PLoS One. 10 (9), 0137316 (2015).</li><li>Avrutsky, M. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+activation+of+caspase-9+promotes+neurovascular+injury+in+retinal+vein+occlusion.">Endothelial activation of caspase-9 promotes neurovascular injury in retinal vein occlusion.</a> Nature Communications. 11 (1), 3173 (2020).</li><li>Col&#243;n Ortiz, C., Potenski, A., Lawson, J., Smart, J., Troy, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+retinal+vein+occlusion+mouse+model+to+limit+variability.">Optimization of the retinal vein occlusion mouse model to limit variability.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (174), e62980 (2021).</li><li>Schmidt-Erfurth, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+management+of+retinal+vein+occlusion+by+the+European+society+of+retina+specialists+(EURETINA).">Guidelines for the management of retinal vein occlusion by the European society of retina specialists (EURETINA).</a> Ophthalmologica. 242 (3), 123-162 (2019).</li><li>Yoshimura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+analysis+of+inflammatory+immune+mediators+in+vitreoretinal+diseases.">Comprehensive analysis of inflammatory immune mediators in vitreoretinal diseases.</a> PLoS One. 4 (12), 8158 (2009).</li><li>Mezu-Ndubuisi, O. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+angiography+quantifies+oxygen-induced+retinopathy+vascular+recovery.">In vivo angiography quantifies oxygen-induced retinopathy vascular recovery.</a> Optometry and Vision Science. 93 (10), 1268-1279 (2016).</li><li>Hui, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+spatial+and+temporal+analysis+of+fluorescein+angiography+dynamics+in+the+eye.">Quantitative spatial and temporal analysis of fluorescein angiography dynamics in the eye.</a> PLoS One. 9 (11), 111330 (2014).</li><li>Berry, D., Thomas, A. S., Fekrat, S., Grewal, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+disorganization+of+retinal+inner+layers+with+ischemic+index+and+visual+acuity+in+central+retinal+vein+occlusion.">Association of disorganization of retinal inner layers with ischemic index and visual acuity in central retinal vein occlusion.</a> Ophthalmology. Retina. 2 (11), 1125-1132 (2018).</li><li>Nicholson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+accuracy+of+disorganization+of+the+retinal+inner+layers+in+detecting+macular+capillary+non-perfusion+in+diabetic+retinopathy.">Diagnostic accuracy of disorganization of the retinal inner layers in detecting macular capillary non-perfusion in diabetic retinopathy.</a> Clinical &amp; Experimental Ophthalmology. 43 (8), 735-741 (2015).</li><li>Obrosova, I., Chung, S., Kador, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetic+cataracts:+mechanisms+and+management.">Diabetic cataracts: mechanisms and management.</a> Diabetes/Metabolism Research and Reviews. 26 (3), 172-180 (2010).</li><li>Hegde, K., Henein, M., Varma, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+the+mouse+as+a+model+animal+for+the+study+of+diabetic+cataracts.">Establishment of the mouse as a model animal for the study of diabetic cataracts.</a> Ophthalmic Research. 35 (1), 12-18 (2003).</li><li>Takahashi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+collateral+vessel+formation+after+retinal+vein+occlusion+visualized+by+OCTA+and+elucidation+of+factors+in+their+formation.">Time course of collateral vessel formation after retinal vein occlusion visualized by OCTA and elucidation of factors in their formation.</a> Heliyon. 7 (1), 05902 (2021).</li><li>Haj Najeeb, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescein+angiography+in+diabetic+macular+edema:+A+new+approach+to+its+etiology.">Fluorescein angiography in diabetic macular edema: A new approach to its etiology.</a> Investigation Ophthalmology &amp; Visual Science. 58 (10), 3986-3990 (2017).</li><li>Alam, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+optical+coherence+tomography+angiography+features+for+objective+classification+and+staging+of+diabetic+retinopathy.">Quantitative optical coherence tomography angiography features for objective classification and staging of diabetic retinopathy.</a> Retina. 40 (2), 322-332 (2020).</li><li>Uddin, M., Jayagopal, A., McCollum, G., Yang, R., Penn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+retinal+hypoxia+using+HYPOX-4-dependent+fluorescence+in+a+mouse+model+of+laser-induced+retinal+vein+occlusion+(RVO).">In vivo imaging of retinal hypoxia using HYPOX-4-dependent fluorescence in a mouse model of laser-induced retinal vein occlusion (RVO).</a> Investigation Ophthalmology &amp; Visual Science. 58 (9), 3818-3824 (2017).</li><li>Qiang, W., Wei, R., Chen, Y., Chen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+pathological+features+and+current+animal+models+of+type+3+macular+neovascularization.">Clinical pathological features and current animal models of type 3 macular neovascularization.</a> Frontiers in Neuroscience. 15, 734860 (2021).</li><li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+laser-induced+choroidal+neovascularization+in+the+rodent+retina+using+optical+coherence+tomography+angiography.">Imaging laser-induced choroidal neovascularization in the rodent retina using optical coherence tomography angiography.</a> Investigation Ophthalmology &amp; Visual Science. 57 (9), 331 (2016).</li><li>Chen, J., Qian, H., Horai, R., Chan, C., Caspi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+optical+coherence+tomography+and+electroretinography+to+evaluate+retinal+pathology+in+a+mouse+model+of+autoimmune+uveitis.">Use of optical coherence tomography and electroretinography to evaluate retinal pathology in a mouse model of autoimmune uveitis.</a> PLoS One. 8 (5), 63904 (2013).</li></ol>

Ikke-invasiv gnager retinal imaging presenterer en avenue for å studere patologi og utvikle intervensjoner. Tidligere studier har utviklet og optimalisert en musemodell av RVO, som begrenser variabiliteten og muliggjør pålitelig oversettelse av vanlige kliniske patologier i murine retina 5,7,13. Utviklingen i oftalmisk bildebehandlingsteknologi tillater videre bruk av kliniske in vivo avbildningsteknikker som FA og O...

Neurovaskulær sykdom er et stort helseproblem som er ansvarlig for iskemiske slag, en ledende årsak til dødelighet og sykelighet, og retinale vaskulære sykdommer som fører til synstap 1,2. For å modellere nevrovaskulær sykdom bruker vi en musemodell av retinal vene okklusjon (RVO). Denne modellen er ikke-invasiv og bruker lignende in vivo bildebehandlingsteknikker til de som brukes til å undersøke personer med retinal vaskulær sykdom i en klinisk setting. Bruken av denne modellen øker dermed translasjonspotensialet til studier som bruker denne modellen. Som med alle musemodeller er det avgjørende å maksimere reproduserbarheten av modellen.
Retinal vaskulære sykdommer er en viktig årsak til synstap hos personer under 70 år. RVO er den nest vanligste retinale vaskulære sykdommen etter diabetisk retinopati3. Kliniske trekk som er karakteristiske for RVO inkluderer iskemisk skade, retinal ødem og synstap som følge av nevrontap 3,4. Musemodeller av RVO ved bruk av laserfotokoagulering av store fartøy er utviklet og raffinert for å replikere viktige kliniske patologier observert i human RVO 5,6,7. Fremskritt i oftalmisk avbildning tillater også replikering av ikke-invasive diagnostiske verktøy som brukes hos mennesker, nemlig fluoresceinangiografi (FA) og optisk koherenstomografi (OCT)6. Fluoresceinangiografi tillater observasjon av lekkasje på grunn av nedbrytning av blod-retinalbarrieren (BRB) samt blodstrømningsdynamikk i netthinnen, inkludert okklusjonssteder, ved bruk av injeksjon av fluorescein, et lite fluorescerende fargestoff 8,9. OCT-avbildning muliggjør oppkjøp av høyoppløselige tverrsnittsbilder av netthinnen og studiet av tykkelsen og organiseringen av retinale lag10. Analyse av FA-bilder har historisk sett i stor grad vært kvalitativ, noe som begrenser potensialet for direkte og reproduserbar sammenligning mellom studier. Nylig har en rekke metoder blitt utviklet for kvantifisering av lagtykkelse i OCT-bildebehandling, selv om det for øyeblikket ikke er noen standardisert analyseprotokoll, og stedet for OCT-bildeinnsamling varierer11. For å kunne utnytte disse verktøyene riktig, er det nødvendig med standardisert, kvantitativ og replikerbar dataanalysemetodikk. I dette papiret presenterer vi tre slike vaskulære avlesninger som brukes til å evaluere patologisk skade i en musemodell av RVO-fluoresceinlekkasje, OCT-lagtykkelse og uorganisering av retinale lag.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AK-Fluor 10%</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC: 17478-253-10</td>
			<td>light-sensitive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Rimadyl</td>
			<td>NADA #141-199</td>
			<td>keep at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GenTeal</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>00658 06401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image J</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InSight 2D</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>OCT analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine Hydrochloride</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>NDC: 11695-0702-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenylephrine</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDCL174478-201-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron IV</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>Retinal imaging microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron Meridian Module</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>Laser photocoagulator software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron Optical Coherence Tomography Module</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>OCT imaging software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron StreamPix Module</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>Fundus imaging and acquisition targeting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photoshop</td>
			<td>Adobe</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refresh</td>
			<td>Allergan</td>
			<td>94170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC: 174478-102-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDCL 59399-110-20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo vascular injury readouts in mouse retina to promote reproducibility

Fremskritt i oftalmiske bildebehandlingsverktøy gir et enestående nivå av tilgang til forskere som arbeider med dyremodeller av nevrovaskulær skade. For å utnytte denne større oversettbarheten på riktig måte, er det behov for å utarbeide reproduserbare metoder for å tegne kvantitative data fra disse bildene. Optisk koherens tomografi (OCT) avbildning kan løse retinal histologi ved mikrometeroppløsning og avsløre funksjonelle forskjeller i vaskulær blodstrøm. Her avgrenser vi ikke-invasive vaskulære avlesninger som vi bruker til å karakterisere patologisk skade etter vaskulær fornærmelse i en optimalisert musemodell av retinal veneokklusjon (RVO). Disse avlesningene inkluderer live imaging analyse av retinal morfologi, uorganisering av retinale indre lag (DRIL) måling av kapillær iskemi og fluorescein angiografi målinger av retinal ødem og vaskulær tetthet. Disse teknikkene samsvarer direkte med de som brukes til å undersøke pasienter med retinal sykdom i klinikken. Standardisering av disse metodene muliggjør direkte og reproduserbar sammenligning av dyremodeller med kliniske fenotyper av oftalmisk sykdom, noe som øker translasjonskraften til vaskulære skademodeller.

Disse analysemetodene tillater kvantifisering av retinal patologi fanget av FA og OCT imaging. Forsøkene som de representative dataene ekstraheres fra, brukte C57BL / 6J hannmus som enten fungerte som ubesudlede kontroller eller gjennomgikk ROVO-prosedyren og mottok enten Pen1-XBir3 behandlingsøyedråper eller Pen1-Saline kjøretøy øyedråper. ROVO-skademodellen involverte laserbestråling (532 nm) av de viktigste venene i hvert øye av en bedøvet mus etter en hale-veneinjeksjon av rosebengal, et fotoaktivatorfarges...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility at JoVE.com

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

Her presenterer vi tre dataanalyseprotokoller for fluoresceinangiografi (FA) og optisk koherenstomografi (OCT) bilder i studien av retinal veneokklusjon (RVO).

In vivo Vaskulær skade avlesninger i mus netthinnen for å fremme reproduserbarhet

Advancements in ophthalmic imaging tools offer an unprecedented level of access to researchers working with animal models of neurovascular injury. To ...

Denne protokollen lar brukeren kvantitativt måle klinisk analoge markører for skade i musens retinalbilder, noe som styrker oversettbarheten av påfølgende funn. Disse metodene tillater oss å strømlinjeforme analysen og gi oss muligheten til å pålitelig sammenligne bildebehandling mellom eksperimentelle dyr. Mens disse metodene ble utviklet for å studere en musemodelloversikt, kan de lett utvide til forskning på retinale sykdommer som bruker de samme bildebehandlingsteknikkene.Slå på retinal imaging microscope light box, den optiske koherenstomografimaskinen og den oppvarmede museplattformen. Slå på datamaskinen og åpne bildebehandlingsprogrammet. Tilsett en dråpe fenylefrin og tropicamid til hvert øye.Injiser 100 mikroliter 1% fluorescein intraperitoneal. Få plass til musen på plattformen. Juster høyden og vinkelen på plattformen til visningen av retinal fundus er klar og fokusert.Ta et bilde av fundus. Åpne programvaren for bildebehandling og optisk koherenstomografi. I det optiske koherenstomografiprogrammet justeres nudge til 10.Ta et optisk koherens tomografi bilde, legg til 75 mikrometer distalt fra brenningen. Gjenta for de tre andre kvadrantene av netthinnen. Bytt kameraet til et 488 nanometer filter.Øk kameraforsterkningen til 5. Ta et bilde av fundus nøyaktig 5 minutter etter fluoresceininjeksjon. Åpne fluoresceinbildet på bildebehandlingsprogramvaren.Dupliser bildet. Bruk et utvalgsverktøy til å spore de store fartøyene nøye. Ignorer eventuelle fartøy som forgrener seg fra disse fartøyene.I det første bildet sletter du markeringen, slik at bare fartøyet blir igjen. Lagre dette maskerte bildet. Flytt markeringen til det andre bildet, inverter markeringen og slett, isoler bakgrunnen.Lagre dette maskerte bildet. Åpne bakgrunnsbildet og mål den integrerte tettheten. Åpne fartøybildet, velg omrisset av fartøyene, og mål deretter middelintensiteten.Del den integrerte tettheten av bakgrunnen med fartøyets gjennomsnittlige intensitet, og generer lekkasjeforholdet for øyet. Registrer dette lekkasjeforholdet for hvert øye i en eksperimentell kohort. For ytterligere kontroll for bakgrunn, normaliser eksperimentelle øyne til gjennomsnittlig lekkasjeforhold for ubesudlede kontrolløyne.Åpne det optiske koherenstomografibildet i bildebehandlingsprogramvaren. Spor kantene til ganglioncellelaget, det indre pleksiforme laget, det indre kjernelaget, det ytre pleksiformlaget, fotoreseptorlaget og RPE-laget. Eksporter filene som CSV.Mål gjennomsnittlig tykkelse på hvert lag og gjenta for hvert øye i eksperimentell kohort. Åpne bildet av optisk koherenstomografi i bilde J.Bruk linjeverktøyet til å måle avstanden der den øvre grensen til det ytre plexiformlaget er utydelig. Mål horisontalt, og oppretthold breddegraden der uorganiseringen begynner.Beregn summen av de uorganiserte avstandene i bildet. Del lengden på uorganisering med den totale lengden på netthinnen for å oppnå forholdet mellom uorganisering. Gjenta måling og beregning for optiske koherenstomografibilder fra de tre andre kvadrantene i netthinnen.Ta gjennomsnittet av forholdet mellom uorganisering fra de fire optiske koherenstomografibildene. Dette tallet representerer gjennomsnittlig uorganisering for hele netthinnen. Gjenta for hvert øye i den eksperimentelle kohorten.De maskerte bildene som brukes til beregning av forholdet mellom lekkasje for hvert retinabilde, kan sammenlignes med andre og analyseres, og separerer den store vaskulaturen fra andre områder av netthinnen. Fluoresceinkvantifisering gjør det mulig å sammenligne skadens alvorlighetsgrad og behandlingseffekt, samt studere endringer i lekkasje i løpet av skadetiden. En avgrensning av lagene i netthinnen i et OCT-bilde observeres.Kvantifiseringen av tykkelsen for hvert retinallag viser at den første edematøse responsen har en dypere effekt på de indre retinale lagene. Fra en analyse av et tidsforløp av retinal vene okklusjonsskade, kan den første inflammatoriske hevelsen av retinale lag og eventuell degenerativ tynning observeres. Det indre kjernelaget opplever en mye større respons på den første skaden, men det indre pleksiforme laget viser mer alvorlig tynning etter at det første ødemet er stabilisert og går tilbake til baseline.Desorganiseringen av indre retinallag manifesterer seg som en forsvinning av den øvre grensen til det ytre pleksiforme laget, og blander de ytre pleksiforme og indre kjernelagene sammen. Retinal disorganisering av to eksperimentelle grupper ble sammenlignet for å undersøke effekten av en inhibitor for å redusere retinal skade. Bildekvalitet er svært viktig for analysekvaliteten.Når du kjøper retinale bilder, ta deg tid til å sikre at fundus- og retinallagene er så klare og fokuserte som mulig. Disse ikke-invasive metodene kan brukes i lengderetningen og i forbindelse med biokjemisk og immunhistokjemisk studie av vev for å skape mer mangefasetterte og detaljerte sykdomsprofiler. Denne teknikken muliggjør pålitelig kvantifisering av in vivo retinal imaging data i modeller av nevrovaskulær sykdom, slik at data lettere kan oversettes til menneskelig sykdom.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

The functional characterization of genes expressed during mammalian retinal development remains a significant challenge.  Gene targeting to generate ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Funksjonell Bildediagnostiske Bruke Ultrasonic blod-hjerne barrieren avbrudd og mangan forbedret MR

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

Hele Mount Immunofluorescent Farging av Neonatal Mouse Retina å etterforske Angiogenesis<em&gt; In vivo</em

Angiogenesis  is the complex process of new blood vessel formation defined by the sprouting  of new blood vessels from a pre-existing vessel network. ...

Assessment of Vascular Regeneration in the CNS Using the Mouse Retina

Assessment of Vascular Regeneration i CNS Bruke musen Retina

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). ...

Vibratome Sectioning Mouse Retina to Prepare Photoreceptor Cultures

Vibratome Seksjonering Mouse Retina å Forbered fotoreseptorlidelser kulturer

The retina is a part of the central nervous system that has organized architecture, with neurons in layers from the photoreceptors, both rods and cones in ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

En<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Laser-indusert ryggmargsskade Model å vurdere Mekanismer av aksonal degenerasjon i sanntid

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Samtidig<em&gt; Ex vivo</em&gt; Funksjonell testing av to netthinne etter<em&gt; In vivo</em&gt; Elektroretinogrammet System

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

An In Vivo Duo-color Method for Imaging Vascular Dynamics Following Contusive Spinal Cord Injury

An In Vivo Duo-color Method for Imaging Vascular Dynamics Following Contusive Spinal Cord Injury

En i Vivo Duo-farge metode for Imaging vaskulær Dynamics etter Contusive ryggmargsskade

Spinal cord injury (SCI) causes significant vascular disruption at the site of injury. Vascular pathology occurs immediately after SCI and continues ...

Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina

Transpupillary To-foton In vivo Avbildning av musens netthinne

The retina transforms light signals from the environment into electrical signals that are propagated to the brain. Diseases of the retina are prevalent ...