Name: in vivo vascular injury readouts in mouse retina to promote reproducibility
Uploaded: 2022-04-21T13:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility at JoVE.com

Эта работа была поддержана грантом DGE - 1644869 (CKCO), Национальным институтом глаз (NEI) 5T32EY013933 (для AMP), Национальным институтом глаз (NEI) 5T32EY013933 (для AMP), Национальным институтом неврологических расстройств и инсульта (RO1 NS081333, R03 NS099920 для CMT) и Министерством обороны армии / военно-воздушных сил (DURIP to CMT).

Этот протокол следует заявлению Ассоциации исследований в области зрения и офтальмологии (ARVO) для использования животных в офтальмологических и зрительных исследованиях. Эксперименты на грызунах были одобрены и контролировались Институциональным комитетом по уходу за животными и и?...

<ol>
	<li>Tong, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+burden+of+cerebrovascular+disease+in+the+united+states.">The burden of cerebrovascular disease in the united states.</a> Preventing Chronic Disease. 16, 180411 (2019).</li><li>Nakahara, T., Mori, A., Kurauchi, Y., Sakamoto, K., Ishii, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurovascular+interactions+in+the+retina:+physiological+and+pathological+roles.">Neurovascular interactions in the retina: physiological and pathological roles.</a> Journal of Pharmacological Sciences. 123 (2), 79-84 (2013).</li><li>Jaulim, A., Ahmed, B., Khanam, T., Chatziralli, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Branch+retinal+vein+occlusion:+epidemiology,+pathogenesis,+risk+factors,+clinical+features,+diagnosis,+and+complications.+An+update+of+the+literature.">Branch retinal vein occlusion: epidemiology, pathogenesis, risk factors, clinical features, diagnosis, and complications. An update of the literature.</a> Retina. 33 (5), 901-910 (2013).</li><li>Ho, M., Liu, D. T. L., Lam, D. S. C., Jonas, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+vein+occlusions,+from+basics+to+the+latest+treatment.">Retinal vein occlusions, from basics to the latest treatment.</a> Retina. 36 (3), 432-448 (2016).</li><li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+new+mouse+model+of+branch+retinal+vein+occlusion+and+retinal+neovascularization.">Development of a new mouse model of branch retinal vein occlusion and retinal neovascularization.</a> Japanese Journal of Ophthalmology. 51 (4), 251-257 (2007).</li><li>Ebneter, A., Agca, C., Dysli, C., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+retinal+morphology+alterations+using+spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+a+mouse+model+of+retinal+branch+and+central+retinal+vein+occlusion.">Investigation of retinal morphology alterations using spectral domain optical coherence tomography in a mouse model of retinal branch and central retinal vein occlusion.</a> PLoS One. 10 (3), 0119046 (2015).</li><li>Fuma, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pharmacological+approach+in+newly+established+retinal+vein+occlusion+model.">A pharmacological approach in newly established retinal vein occlusion model.</a> Scientific Reports. 7, 43509 (2017).</li><li>Cavallerano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ophthalmic+fluorescein+angiography.">Ophthalmic fluorescein angiography.</a> Clinical Optometry. 5 (1), 1-23 (1996).</li><li>Laatikainen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fluorescein+angiography+revolution:+a+breakthrough+with+sustained+impact.">The fluorescein angiography revolution: a breakthrough with sustained impact.</a> Acta Ophthalmologica Scandinavica. 82 (4), 381-392 (2004).</li><li>Huang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography.">Optical coherence tomography.</a> Science. 254 (5035), 1178-1181 (1991).</li><li>Oberwahrenbrock, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reliability+of+intra-retinal+layer+thickness+estimates.">Reliability of intra-retinal layer thickness estimates.</a> PLoS One. 10 (9), 0137316 (2015).</li><li>Avrutsky, M. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+activation+of+caspase-9+promotes+neurovascular+injury+in+retinal+vein+occlusion.">Endothelial activation of caspase-9 promotes neurovascular injury in retinal vein occlusion.</a> Nature Communications. 11 (1), 3173 (2020).</li><li>Col&#243;n Ortiz, C., Potenski, A., Lawson, J., Smart, J., Troy, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+retinal+vein+occlusion+mouse+model+to+limit+variability.">Optimization of the retinal vein occlusion mouse model to limit variability.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (174), e62980 (2021).</li><li>Schmidt-Erfurth, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+management+of+retinal+vein+occlusion+by+the+European+society+of+retina+specialists+(EURETINA).">Guidelines for the management of retinal vein occlusion by the European society of retina specialists (EURETINA).</a> Ophthalmologica. 242 (3), 123-162 (2019).</li><li>Yoshimura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+analysis+of+inflammatory+immune+mediators+in+vitreoretinal+diseases.">Comprehensive analysis of inflammatory immune mediators in vitreoretinal diseases.</a> PLoS One. 4 (12), 8158 (2009).</li><li>Mezu-Ndubuisi, O. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+angiography+quantifies+oxygen-induced+retinopathy+vascular+recovery.">In vivo angiography quantifies oxygen-induced retinopathy vascular recovery.</a> Optometry and Vision Science. 93 (10), 1268-1279 (2016).</li><li>Hui, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+spatial+and+temporal+analysis+of+fluorescein+angiography+dynamics+in+the+eye.">Quantitative spatial and temporal analysis of fluorescein angiography dynamics in the eye.</a> PLoS One. 9 (11), 111330 (2014).</li><li>Berry, D., Thomas, A. S., Fekrat, S., Grewal, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+disorganization+of+retinal+inner+layers+with+ischemic+index+and+visual+acuity+in+central+retinal+vein+occlusion.">Association of disorganization of retinal inner layers with ischemic index and visual acuity in central retinal vein occlusion.</a> Ophthalmology. Retina. 2 (11), 1125-1132 (2018).</li><li>Nicholson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+accuracy+of+disorganization+of+the+retinal+inner+layers+in+detecting+macular+capillary+non-perfusion+in+diabetic+retinopathy.">Diagnostic accuracy of disorganization of the retinal inner layers in detecting macular capillary non-perfusion in diabetic retinopathy.</a> Clinical &amp; Experimental Ophthalmology. 43 (8), 735-741 (2015).</li><li>Obrosova, I., Chung, S., Kador, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetic+cataracts:+mechanisms+and+management.">Diabetic cataracts: mechanisms and management.</a> Diabetes/Metabolism Research and Reviews. 26 (3), 172-180 (2010).</li><li>Hegde, K., Henein, M., Varma, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+the+mouse+as+a+model+animal+for+the+study+of+diabetic+cataracts.">Establishment of the mouse as a model animal for the study of diabetic cataracts.</a> Ophthalmic Research. 35 (1), 12-18 (2003).</li><li>Takahashi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+collateral+vessel+formation+after+retinal+vein+occlusion+visualized+by+OCTA+and+elucidation+of+factors+in+their+formation.">Time course of collateral vessel formation after retinal vein occlusion visualized by OCTA and elucidation of factors in their formation.</a> Heliyon. 7 (1), 05902 (2021).</li><li>Haj Najeeb, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescein+angiography+in+diabetic+macular+edema:+A+new+approach+to+its+etiology.">Fluorescein angiography in diabetic macular edema: A new approach to its etiology.</a> Investigation Ophthalmology &amp; Visual Science. 58 (10), 3986-3990 (2017).</li><li>Alam, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+optical+coherence+tomography+angiography+features+for+objective+classification+and+staging+of+diabetic+retinopathy.">Quantitative optical coherence tomography angiography features for objective classification and staging of diabetic retinopathy.</a> Retina. 40 (2), 322-332 (2020).</li><li>Uddin, M., Jayagopal, A., McCollum, G., Yang, R., Penn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+retinal+hypoxia+using+HYPOX-4-dependent+fluorescence+in+a+mouse+model+of+laser-induced+retinal+vein+occlusion+(RVO).">In vivo imaging of retinal hypoxia using HYPOX-4-dependent fluorescence in a mouse model of laser-induced retinal vein occlusion (RVO).</a> Investigation Ophthalmology &amp; Visual Science. 58 (9), 3818-3824 (2017).</li><li>Qiang, W., Wei, R., Chen, Y., Chen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+pathological+features+and+current+animal+models+of+type+3+macular+neovascularization.">Clinical pathological features and current animal models of type 3 macular neovascularization.</a> Frontiers in Neuroscience. 15, 734860 (2021).</li><li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+laser-induced+choroidal+neovascularization+in+the+rodent+retina+using+optical+coherence+tomography+angiography.">Imaging laser-induced choroidal neovascularization in the rodent retina using optical coherence tomography angiography.</a> Investigation Ophthalmology &amp; Visual Science. 57 (9), 331 (2016).</li><li>Chen, J., Qian, H., Horai, R., Chan, C., Caspi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+optical+coherence+tomography+and+electroretinography+to+evaluate+retinal+pathology+in+a+mouse+model+of+autoimmune+uveitis.">Use of optical coherence tomography and electroretinography to evaluate retinal pathology in a mouse model of autoimmune uveitis.</a> PLoS One. 8 (5), 63904 (2013).</li></ol>

Неинвазивная визуализация сетчатки грызунов представляет собой путь для изучения патологии и разработки вмешательств. Предыдущие исследования разработали и оптимизировали мышиную модель RVO, ограничивающую изменчивость и позволяющую достоверно транслировать распространенные клин?...

Нейрососудистые заболевания являются основной проблемой здравоохранения, ответственной за ишемические инсульты, ведущую причину смертности и заболеваемости, а также сосудистые заболевания сетчатки, которые приводят к потере зрения 1,2. Для моделирования нейрососудистых заболеваний мы используем мышиную модель окклюзии вен сетчатки (RVO). Эта модель является неинвазивной и использует методы визуализации in vivo, аналогичные тем, которые используются для обследования людей с сосудистыми заболеваниями сетчатки в клинических условиях. Таким образом, использование этой модели увеличивает трансляционный потенциал исследований, использующих эту модель. Как и во всех моделях мыши, крайне важно максимизировать воспроизводимость модели.
Сосудистые заболевания сетчатки являются основной причиной потери зрения у людей в возрасте до 70 лет. RVO является вторым наиболее распространенным сосудистым заболеванием сетчатки после диабетической ретинопатии3. Клинические признаки, характерные для RVO, включают ишемическое повреждение, отек сетчатки и потерю зрения как следствие потери нейронов 3,4. Мышиные модели RVO с использованием лазерной фотокоагуляции крупных сосудов были разработаны и усовершенствованы для воспроизведения ключевых клинических патологий, наблюдаемых у человека RVO 5,6,7. Достижения в области офтальмологической визуализации также позволяют воспроизводить неинвазивные диагностические инструменты, используемые у людей, а именно флуоресцеиновую ангиографию (ФА) и оптическую когерентную томографию (ОКТ)6. Флуоресцеиновая ангиография позволяет наблюдать утечку из-за разрушения гемато-ретинального барьера (BRB), а также динамику кровотока в сетчатке, включая участки окклюзии, с помощью инъекции флуоресцеина, небольшого флуоресцентного красителя 8,9. OCT-визуализация позволяет получать изображения с высоким разрешением поперечного сечения сетчатки и изучать толщину и организацию слоев сетчатки10. Анализ изображений ФА исторически был в значительной степени качественным, что ограничивает потенциал для прямого и воспроизводимого сравнения между исследованиями. В последнее время был разработан ряд методов количественной оценки толщины слоя в OCT-визуализации, хотя в настоящее время не существует стандартизированного протокола анализа, а место получения изображений OCT варьируетсяна 11. Чтобы правильно использовать эти инструменты, необходима стандартизированная, количественная и воспроизводимая методология анализа данных. В этой статье мы представляем три таких сосудистых считывания, используемых для оценки патологического повреждения в мышиной модели утечки RVO-флуоресцеина, толщины слоя OCT и дезорганизации слоев сетчатки.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AK-Fluor 10%</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC: 17478-253-10</td>
			<td>light-sensitive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Rimadyl</td>
			<td>NADA #141-199</td>
			<td>keep at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GenTeal</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>00658 06401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image J</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InSight 2D</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>OCT analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine Hydrochloride</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>NDC: 11695-0702-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenylephrine</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDCL174478-201-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron IV</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>Retinal imaging microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron Meridian Module</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>Laser photocoagulator software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron Optical Coherence Tomography Module</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>OCT imaging software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron StreamPix Module</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>Fundus imaging and acquisition targeting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photoshop</td>
			<td>Adobe</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refresh</td>
			<td>Allergan</td>
			<td>94170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC: 174478-102-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDCL 59399-110-20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo vascular injury readouts in mouse retina to promote reproducibility

Достижения в области инструментов офтальмологической визуализации предлагают беспрецедентный уровень доступа к исследователям, работающим с животными моделями нейрососудистых повреждений. Чтобы должным образом использовать эту большую переводимость, необходимо разработать воспроизводимые методы извлечения количественных данных из этих изображений. Оптическая когерентная томография (ОКТ) может разрешить гистологию сетчатки при микрометровом разрешении и выявить функциональные различия в сосудистом кровотоке. Здесь мы очерчиваем неинвазивные сосудистые показания, которые мы используем для характеристики патологического повреждения после сосудистого инсульта в оптимизированной мышиной модели окклюзии вен сетчатки (RVO). Эти показания включают анализ морфологии сетчатки в реальном времени, измерение дезорганизации внутренних слоев сетчатки (DRIL) капиллярной ишемии и флуоресцеиновую ангиографию отека сетчатки и плотности сосудов. Эти методы напрямую соответствуют тем, которые используются для обследования пациентов с заболеваниями сетчатки в клинике. Стандартизация этих методов позволяет проводить прямое и воспроизводимое сравнение моделей животных с клиническими фенотипами офтальмологических заболеваний, увеличивая поступательную силу моделей сосудистых повреждений.

Эти методы анализа позволяют количественно оценить патологию сетчатки, захваченную визуализацией FA и OCT. В экспериментах, из которых извлекаются репрезентативные данные, использовали самцов мышей C57BL/6J, которые либо служили в качестве неповрежденных контрольных органов, либо проходил...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility at JoVE.com

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

Здесь мы представляем три протокола анализа данных для флуоресцеиновой ангиографии (FA) и изображений оптической когерентной томографии (OCT) в исследовании окклюзии вен сетчатки (RVO).

In vivo Показания сосудистых повреждений в сетчатке мыши для повышения воспроизводимости

Advancements in ophthalmic imaging tools offer an unprecedented level of access to researchers working with animal models of neurovascular injury. To ...

Этот протокол позволяет пользователю количественно измерять клинически аналогичные маркеры повреждения в визуализации сетчатки мыши, что укрепляет переводимость последующих результатов. Эти методы позволяют нам оптимизировать анализ и дают нам возможность надежно сравнивать изображения между экспериментальными животными. Хотя эти методы были разработаны для изучения обзора мышиной модели, они могут легко распространяться на исследования любых заболеваний сетчатки, которые используют те же методы визуализации.Включите световой короб микроскопа для визуализации сетчатки, аппарат оптической когерентной томографии и нагретую платформу мыши. Включите компьютер и откройте программу создания образов. Добавьте по одной капле фенилэфрина и тропикамида в каждый глаз.Вводят 100 микролитров 1% флуоресцеина внутрибрюшинного. Разместите мышь на платформе. Отрегулируйте высоту и угол наклона платформы до тех пор, пока вид глазного дна сетчатки не станет четким и сфокусированным.Сфотографируйте глазное дно. Откройте программное обеспечение для визуализации и оптической когерентной томографии. В программе оптической когерентной томографии отрегулируйте подталкивание до 10.Сделайте оптическую когерентную томографию, добавьте 75 микрометров дистально от ожога. Повторите для трех других квадрантов сетчатки. Переключите камеру на 488-нанометровый фильтр.Увеличьте коэффициент усиления камеры до 5. Сделайте снимок глазного дна ровно через 5 минут после инъекции флуоресцеина. Откройте флуоресцеиновое изображение в программном обеспечении для обработки изображений.Продублируйте изображение. Используя инструмент выделения, тщательно проследите основные сосуды. Игнорируйте любые суда, ответвляющиеся от этих судов.На первом изображении удалите выделенную область, оставив только судно. Сохраните это замаскированное изображение. Переместите выделенную область ко второму изображению, инвертируйте выделенную область и удалите ее, изолируя фон.Сохраните это замаскированное изображение. Откройте фоновое изображение и измерьте встроенную плотность. Откройте изображение сосудов, выберите контур сосудов, а затем измерьте среднюю интенсивность.Разделите интегральную плотность фона на среднюю интенсивность сосудов, создав коэффициент утечки для глаза. Запишите этот коэффициент утечки для каждого глаза в экспериментальной когорте. Для дальнейшего контроля за фоном нормализуйте экспериментальные глаза до среднего коэффициента утечки неповрежденных контрольных глаз.Откройте изображение оптической когерентной томографии в программном обеспечении для обработки изображений. Проследите границы слоя ганглиозных клеток, внутреннего плексиформного слоя, внутреннего ядерного слоя, наружного плексиформного слоя, слоя фоторецепторов и слоя RPE. Экспортируйте файлы в формате CSV.Измерьте среднюю толщину каждого слоя и повторите для каждого глаза в экспериментальной когорте. Откройте изображение оптической когерентной томографии на изображении J.С помощью линейного инструмента измерьте расстояние, на котором верхняя граница наружного плексиформного слоя нечеткая. Измеряйте горизонтально, сохраняя широту, где начинается дезорганизация.Рассчитайте сумму неорганизованных расстояний на изображении. Разделите длину дезорганизации на общую длину сетчатки, чтобы получить соотношение дезорганизации. Повторите измерение и расчет для получения изображений оптической когерентной томографии из трех других квадрантов сетчатки.Возьмем среднее значение коэффициентов дезорганизации из четырех изображений оптической когерентной томографии. Это число представляет собой среднюю дезорганизацию для всей сетчатки. Повторить для каждого глаза в экспериментальной когорте.Замаскированные изображения, используемые для расчета соотношения утечек для каждого изображения сетчатки, можно сравнить с другими и проанализировать, отделив основную сосудистую систему от других областей сетчатки. Количественная оценка флуоресцеина позволяет сравнивать тяжесть травмы и эффективность лечения, а также изучать изменения в утечке в течение времени травмы. Наблюдается разграничение слоев сетчатки на изображении OCT.Количественная оценка толщины для каждого слоя сетчатки показывает, что начальная отечная реакция оказывает более глубокое влияние на внутренние слои сетчатки. Из анализа временного течения повреждения окклюзии вен сетчатки можно наблюдать начальный воспалительный отек слоев сетчатки и возможное дегенеративное истончение. Внутренний ядерный слой испытывает гораздо большую реакцию на первоначальную травму, но внутренний плексиформный слой демонстрирует более сильное истончение после того, как первоначальный отек стабилизировался и вернулся к исходному уровню.Дезорганизация внутреннего слоя сетчатки проявляется исчезновением верхней границы наружного плексиформного слоя, смешивая наружный плексиформный и внутренний ядерные слои вместе. Дезорганизацию сетчатки двух экспериментальных групп сравнивали для исследования эффективности ингибитора в смягчении повреждения сетчатки. Качество изображения жизненно важно для качества анализа.При получении изображений сетчатки потратьте время, чтобы убедиться, что слои глазного дна и сетчатки максимально четкие и сфокусированные. Эти неинвазивные методы могут использоваться продольно и в сочетании с биохимическим и иммуногистохимическим исследованием тканей для создания более многогранных и подробных профилей заболевания. Этот метод позволяет надежно количественно оценить данные визуализации сетчатки in vivo в моделях нейрососудистых заболеваний, чтобы данные можно было легче перевести в болезнь человека.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Трансфекция Мышь ганглиозных клеток сетчатки при В естественных условиях Электропорация

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

В естественных условиях Электропорация развивающихся Мышь Retina

The functional characterization of genes expressed during mammalian retinal development remains a significant challenge.  Gene targeting to generate ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Функциональные нейровизуализации с использованием ультразвуковых Гематоэнцефалический Разрушение барьеров и марганца-МРТ

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

Всего горе иммунофлуоресцентного окрашивания новорожденных Retina мыши по расследованию ангиогенеза<em&gt; В естественных условиях</em

Angiogenesis  is the complex process of new blood vessel formation defined by the sprouting  of new blood vessels from a pre-existing vessel network. ...

Assessment of Vascular Regeneration in the CNS Using the Mouse Retina

Оценка сосудистой регенерации в ЦНС Использование мыши Retina

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). ...

Vibratome Sectioning Mouse Retina to Prepare Photoreceptor Cultures

Vibratome секционирования мыши Retina Подготовка фоторецептора культур

The retina is a part of the central nervous system that has organized architecture, with neurons in layers from the photoreceptors, both rods and cones in ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Лазерно-индуцированное Травма спинного мозга модель для оценки Механизмы дегенерации аксонов в режиме реального времени

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Одновременный<em&gt; Экс естественных условиях</em&gt; Функциональное тестирование двух сетчатки по<em&gt; В естественных условиях</em&gt; Система электроретинограммы

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

An In Vivo Duo-color Method for Imaging Vascular Dynamics Following Contusive Spinal Cord Injury

An In Vivo Duo-color Method for Imaging Vascular Dynamics Following Contusive Spinal Cord Injury

В естественных условиях Дуэт цветной метод для визуализации сосудистой динамика после тупыми спинного мозга

Spinal cord injury (SCI) causes significant vascular disruption at the site of injury. Vascular pathology occurs immediately after SCI and continues ...

Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina

Транспупиллярная двухфотонная визуализация сетчатки мыши In vivo

The retina transforms light signals from the environment into electrical signals that are propagated to the brain. Diseases of the retina are prevalent ...