Name: in vivo vascular injury readouts in mouse retina to promote reproducibility
Uploaded: 2022-04-21T13:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility at JoVE.com

Detta arbete stöddes av National Science Foundation Graduate Research Fellowship Program (NSF-GRFP) bidrag DGE - 1644869(till CKCO), National Eye Institute (NEI) 5T32EY013933 (till AMP), National Institute of Neurological Disorders and Stroke (RO1 NS081333, R03 NS099920 till CMT) och Department of Defense Army / Air Force (DURIP till CMT).

Detta protokoll följer Association for Research in Vision and Ophthalmology (ARVO) uttalande för användning av djur i oftalmisk och synforskning. Gnagarförsök godkändes och övervakades av Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) vid Columbia University.
OBS: Avbildning gjordes på 2 månader gamla C57BL/6J hanmöss som vägde ca 23 g.
1. Beredning av reagenser för retinal avbildning
<ol><li>Framställning av injicerbar fluoresce...

<ol>
	<li>Tong, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+burden+of+cerebrovascular+disease+in+the+united+states.">The burden of cerebrovascular disease in the united states.</a> Preventing Chronic Disease. 16, 180411 (2019).</li><li>Nakahara, T., Mori, A., Kurauchi, Y., Sakamoto, K., Ishii, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurovascular+interactions+in+the+retina:+physiological+and+pathological+roles.">Neurovascular interactions in the retina: physiological and pathological roles.</a> Journal of Pharmacological Sciences. 123 (2), 79-84 (2013).</li><li>Jaulim, A., Ahmed, B., Khanam, T., Chatziralli, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Branch+retinal+vein+occlusion:+epidemiology,+pathogenesis,+risk+factors,+clinical+features,+diagnosis,+and+complications.+An+update+of+the+literature.">Branch retinal vein occlusion: epidemiology, pathogenesis, risk factors, clinical features, diagnosis, and complications. An update of the literature.</a> Retina. 33 (5), 901-910 (2013).</li><li>Ho, M., Liu, D. T. L., Lam, D. S. C., Jonas, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+vein+occlusions,+from+basics+to+the+latest+treatment.">Retinal vein occlusions, from basics to the latest treatment.</a> Retina. 36 (3), 432-448 (2016).</li><li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+new+mouse+model+of+branch+retinal+vein+occlusion+and+retinal+neovascularization.">Development of a new mouse model of branch retinal vein occlusion and retinal neovascularization.</a> Japanese Journal of Ophthalmology. 51 (4), 251-257 (2007).</li><li>Ebneter, A., Agca, C., Dysli, C., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+retinal+morphology+alterations+using+spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+a+mouse+model+of+retinal+branch+and+central+retinal+vein+occlusion.">Investigation of retinal morphology alterations using spectral domain optical coherence tomography in a mouse model of retinal branch and central retinal vein occlusion.</a> PLoS One. 10 (3), 0119046 (2015).</li><li>Fuma, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pharmacological+approach+in+newly+established+retinal+vein+occlusion+model.">A pharmacological approach in newly established retinal vein occlusion model.</a> Scientific Reports. 7, 43509 (2017).</li><li>Cavallerano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ophthalmic+fluorescein+angiography.">Ophthalmic fluorescein angiography.</a> Clinical Optometry. 5 (1), 1-23 (1996).</li><li>Laatikainen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fluorescein+angiography+revolution:+a+breakthrough+with+sustained+impact.">The fluorescein angiography revolution: a breakthrough with sustained impact.</a> Acta Ophthalmologica Scandinavica. 82 (4), 381-392 (2004).</li><li>Huang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography.">Optical coherence tomography.</a> Science. 254 (5035), 1178-1181 (1991).</li><li>Oberwahrenbrock, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reliability+of+intra-retinal+layer+thickness+estimates.">Reliability of intra-retinal layer thickness estimates.</a> PLoS One. 10 (9), 0137316 (2015).</li><li>Avrutsky, M. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+activation+of+caspase-9+promotes+neurovascular+injury+in+retinal+vein+occlusion.">Endothelial activation of caspase-9 promotes neurovascular injury in retinal vein occlusion.</a> Nature Communications. 11 (1), 3173 (2020).</li><li>Col&#243;n Ortiz, C., Potenski, A., Lawson, J., Smart, J., Troy, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+retinal+vein+occlusion+mouse+model+to+limit+variability.">Optimization of the retinal vein occlusion mouse model to limit variability.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (174), e62980 (2021).</li><li>Schmidt-Erfurth, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+management+of+retinal+vein+occlusion+by+the+European+society+of+retina+specialists+(EURETINA).">Guidelines for the management of retinal vein occlusion by the European society of retina specialists (EURETINA).</a> Ophthalmologica. 242 (3), 123-162 (2019).</li><li>Yoshimura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+analysis+of+inflammatory+immune+mediators+in+vitreoretinal+diseases.">Comprehensive analysis of inflammatory immune mediators in vitreoretinal diseases.</a> PLoS One. 4 (12), 8158 (2009).</li><li>Mezu-Ndubuisi, O. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+angiography+quantifies+oxygen-induced+retinopathy+vascular+recovery.">In vivo angiography quantifies oxygen-induced retinopathy vascular recovery.</a> Optometry and Vision Science. 93 (10), 1268-1279 (2016).</li><li>Hui, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+spatial+and+temporal+analysis+of+fluorescein+angiography+dynamics+in+the+eye.">Quantitative spatial and temporal analysis of fluorescein angiography dynamics in the eye.</a> PLoS One. 9 (11), 111330 (2014).</li><li>Berry, D., Thomas, A. S., Fekrat, S., Grewal, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+disorganization+of+retinal+inner+layers+with+ischemic+index+and+visual+acuity+in+central+retinal+vein+occlusion.">Association of disorganization of retinal inner layers with ischemic index and visual acuity in central retinal vein occlusion.</a> Ophthalmology. Retina. 2 (11), 1125-1132 (2018).</li><li>Nicholson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+accuracy+of+disorganization+of+the+retinal+inner+layers+in+detecting+macular+capillary+non-perfusion+in+diabetic+retinopathy.">Diagnostic accuracy of disorganization of the retinal inner layers in detecting macular capillary non-perfusion in diabetic retinopathy.</a> Clinical &amp; Experimental Ophthalmology. 43 (8), 735-741 (2015).</li><li>Obrosova, I., Chung, S., Kador, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetic+cataracts:+mechanisms+and+management.">Diabetic cataracts: mechanisms and management.</a> Diabetes/Metabolism Research and Reviews. 26 (3), 172-180 (2010).</li><li>Hegde, K., Henein, M., Varma, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+the+mouse+as+a+model+animal+for+the+study+of+diabetic+cataracts.">Establishment of the mouse as a model animal for the study of diabetic cataracts.</a> Ophthalmic Research. 35 (1), 12-18 (2003).</li><li>Takahashi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+collateral+vessel+formation+after+retinal+vein+occlusion+visualized+by+OCTA+and+elucidation+of+factors+in+their+formation.">Time course of collateral vessel formation after retinal vein occlusion visualized by OCTA and elucidation of factors in their formation.</a> Heliyon. 7 (1), 05902 (2021).</li><li>Haj Najeeb, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescein+angiography+in+diabetic+macular+edema:+A+new+approach+to+its+etiology.">Fluorescein angiography in diabetic macular edema: A new approach to its etiology.</a> Investigation Ophthalmology &amp; Visual Science. 58 (10), 3986-3990 (2017).</li><li>Alam, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+optical+coherence+tomography+angiography+features+for+objective+classification+and+staging+of+diabetic+retinopathy.">Quantitative optical coherence tomography angiography features for objective classification and staging of diabetic retinopathy.</a> Retina. 40 (2), 322-332 (2020).</li><li>Uddin, M., Jayagopal, A., McCollum, G., Yang, R., Penn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+retinal+hypoxia+using+HYPOX-4-dependent+fluorescence+in+a+mouse+model+of+laser-induced+retinal+vein+occlusion+(RVO).">In vivo imaging of retinal hypoxia using HYPOX-4-dependent fluorescence in a mouse model of laser-induced retinal vein occlusion (RVO).</a> Investigation Ophthalmology &amp; Visual Science. 58 (9), 3818-3824 (2017).</li><li>Qiang, W., Wei, R., Chen, Y., Chen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+pathological+features+and+current+animal+models+of+type+3+macular+neovascularization.">Clinical pathological features and current animal models of type 3 macular neovascularization.</a> Frontiers in Neuroscience. 15, 734860 (2021).</li><li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+laser-induced+choroidal+neovascularization+in+the+rodent+retina+using+optical+coherence+tomography+angiography.">Imaging laser-induced choroidal neovascularization in the rodent retina using optical coherence tomography angiography.</a> Investigation Ophthalmology &amp; Visual Science. 57 (9), 331 (2016).</li><li>Chen, J., Qian, H., Horai, R., Chan, C., Caspi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+optical+coherence+tomography+and+electroretinography+to+evaluate+retinal+pathology+in+a+mouse+model+of+autoimmune+uveitis.">Use of optical coherence tomography and electroretinography to evaluate retinal pathology in a mouse model of autoimmune uveitis.</a> PLoS One. 8 (5), 63904 (2013).</li></ol>

Noninvasive gnagare retinal imaging presenterar en väg att studera patologi och utveckla interventioner. Tidigare studier har utvecklat och optimerat en musmodell av RVO, vilket begränsar variabiliteten och möjliggör tillförlitlig översättning av vanliga kliniska patologier i den murina näthinnan 5,7,13. Utvecklingen inom oftalmisk avbildningsteknik möjliggör ytterligare användning av kliniska in vivo-avbildn...

Neurovaskulär sjukdom är ett stort sjukvårdsproblem som är ansvarigt för ischemisk stroke, en ledande orsak till dödlighet och sjuklighet och retinala kärlsjukdomar som leder till synförlust 1,2. För att modellera neurovaskulär sjukdom använder vi en musmodell av retinal venocklusion (RVO). Denna modell är icke-invasiv och använder liknande in vivo-avbildningstekniker som de som används för att undersöka personer med retinal kärlsjukdom i klinisk miljö. Användningen av denna modell ökar således den translationella potentialen för studier som använder denna modell. Som med alla musmodeller är det viktigt att maximera modellens reproducerbarhet.
Retinala kärlsjukdomar är en viktig orsak till synförlust hos personer under 70 år. RVO är den näst vanligaste retinala kärlsjukdomen efter diabetisk retinopati3. Kliniska egenskaper som är karakteristiska för RVO inkluderar ischemisk skada, retinalt ödem och synförlust som en följd av neuronal förlust 3,4. Musmodeller av RVO med laserfotokoagulering av större kärl har utvecklats och förfinats för att replikera viktiga kliniska patologier observerade i human RVO 5,6,7. Framsteg inom oftalmisk avbildning möjliggör också replikering av icke-invasiva diagnostiska verktyg som används hos människor, nämligen fluoresceinangiografi (FA) och optisk koherenstomografi (OCT)6. Fluoresceinangiografi möjliggör observation av läckage på grund av nedbrytningen av blod-retinalbarriären (BRB) samt blodflödesdynamik i näthinnan, inklusive ocklusionsställen, med injektion av fluorescein, ett litet fluorescerande färgämne 8,9. OCT-avbildning möjliggör förvärv av högupplösta tvärsnittsbilder av näthinnan och studier av tjockleken och organisationen av retinala lager10. Analys av FA-bilder har historiskt sett varit till stor del kvalitativ, vilket begränsar potentialen för direkt och reproducerbar jämförelse mellan studier. Nyligen har ett antal metoder utvecklats för kvantifiering av skikttjocklek vid OCT-avbildning, även om det för närvarande inte finns något standardiserat analysprotokoll och platsen för OCT-bildförvärv varierar11. För att kunna utnyttja dessa verktyg på rätt sätt behövs standardiserad, kvantitativ och replikerbar dataanalysmetodik. I detta dokument presenterar vi tre sådana vaskulära avläsningar som används för att utvärdera patologiska skador i en musmodell av RVO-fluoresceinläckage, OCT-skikttjocklek och desorganisering av näthinneskikt.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AK-Fluor 10%</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC: 17478-253-10</td>
			<td>light-sensitive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Rimadyl</td>
			<td>NADA #141-199</td>
			<td>keep at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GenTeal</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>00658 06401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image J</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InSight 2D</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>OCT analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine Hydrochloride</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>NDC: 11695-0702-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenylephrine</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDCL174478-201-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron IV</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>Retinal imaging microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron Meridian Module</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>Laser photocoagulator software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron Optical Coherence Tomography Module</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>OCT imaging software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron StreamPix Module</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>Fundus imaging and acquisition targeting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photoshop</td>
			<td>Adobe</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refresh</td>
			<td>Allergan</td>
			<td>94170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC: 174478-102-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDCL 59399-110-20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo vascular injury readouts in mouse retina to promote reproducibility

Framsteg inom oftalmiska avbildningsverktyg erbjuder en oöverträffad nivå av tillgång till forskare som arbetar med djurmodeller av neurovaskulär skada. För att korrekt utnyttja denna större översättningsbarhet finns det ett behov av att utforma reproducerbara metoder för att dra kvantitativa data från dessa bilder. Optisk koherenstomografi (OCT) -avbildning kan lösa retinal histologi vid mikrometerupplösning och avslöja funktionella skillnader i vaskulärt blodflöde. Här avgränsar vi icke-invasiva vaskulära avläsningar som vi använder för att karakterisera patologisk skada efter vaskulär förolämpning i en optimerad musmodell av retinal venocklusion (RVO). Dessa avläsningar inkluderar levande avbildningsanalys av retinal morfologi, desorganisering av retinala inre lager (DRIL) mått på kapillär ischemi och fluoresceinangiografimått av retinalt ödem och vaskulär densitet. Dessa tekniker motsvarar direkt de som används för att undersöka patienter med retinal sjukdom i kliniken. Genom att standardisera dessa metoder möjliggörs direkt och reproducerbar jämförelse av djurmodeller med kliniska fenotyper av oftalmisk sjukdom, vilket ökar den translationella kraften hos kärlskademodeller.

Dessa analysmetoder möjliggör kvantifiering av retinal patologi fångad av FA- och OCT-avbildning. Experimenten från vilka de representativa uppgifterna extraheras använde C57BL / 6J hanmöss som antingen fungerade som oskadade kontroller eller genomgick RVO-proceduren och fick antingen Pen1-XBir3-behandlingsögondroppar eller Pen1-saltlösning vegetabiliska ögondroppar. RVO-skademodellen involverade laserbestrålning (532 nm) av de stora venerna i varje öga på en bedövad mus efter en svansveninjektion av rosenbe...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility at JoVE.com

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

Här presenterar vi tre dataanalysprotokoll för fluoresceinangiografi (FA) och optisk koherenstomografi (OCT) i studien av retinal venocklusion (RVO).

In vivo Avläsningar av kärlskador i musens näthinna för att främja reproducerbarhet

Advancements in ophthalmic imaging tools offer an unprecedented level of access to researchers working with animal models of neurovascular injury. To ...

Detta protokoll gör det möjligt för användaren att kvantitativt mäta kliniskt analoga markörer för skador vid musretinal avbildning, vilket stärker översättningsbarheten för efterföljande fynd. Dessa metoder gör det möjligt för oss att effektivisera analysen och ge oss möjlighet att på ett tillförlitligt sätt jämföra avbildning mellan försöksdjur. Medan dessa metoder utvecklades för att studera en musmodellöversikt, kan de enkelt utvidgas till forskning om alla näthinnesjukdomar som använder samma bildtekniker.Slå på retinal bildmikroskopljuslådan, den optiska koherenstomografimaskinen och den uppvärmda musplattformen. Slå på datorn och öppna bildprogrammet. Tillsätt en droppe fenylefrin och tropikamid till varje öga.Injicera 100 mikroliter 1% fluorescein intraperitoneal. Rymma musen på plattformen. Justera plattformens höjd och vinkel tills utsikten över retinal fundus är tydlig och fokuserad.Ta en bild av fundus. Öppna programvaran för bild- och optisk koherenstomografi. I det optiska koherenstomografiprogrammet justera nudge till 10.Ta en optisk koherenstomografibild, lägg till 75 mikrometer distal från bränningen. Upprepa för de andra tre kvadranterna i näthinnan. Byt kameran till ett 488 nanometer filter.Öka kameraförstärkningen till 5. Ta en bild av fundus exakt 5 minuter efter fluoresceininjektion. Öppna fluorescein-bilden på bildbehandlingsprogrammet.Duplicera bilden. Använd ett urvalsverktyg för att noggrant spåra de viktigaste fartygen. Ignorera alla fartyg som förgrenar sig från dessa fartyg.I den första bilden tar du bort markeringen och lämnar bara fartyget. Spara den här maskerade bilden. Flytta markeringen till den andra bilden, invertera markeringen och ta bort och isolera bakgrunden.Spara den här maskerade bilden. Öppna bakgrundsbilden och mät den integrerade densiteten. Öppna fartygsbilden, välj fartygens kontur och mät sedan medelintensiteten.Dela bakgrundens integrerade densitet med kärlens medelintensitet, vilket genererar läckageförhållandet för ögat. Registrera detta läckageförhållande för varje öga i en experimentell kohort. För att ytterligare kontrollera bakgrunden, normalisera experimentella ögon till det genomsnittliga läckageförhållandet för oskadade kontrollögon.Öppna bilden för optisk koherenstomografi i bildbehandlingsprogrammet. Spåra gränserna för ganglioncellskiktet, det inre plexiformskiktet, det inre kärnskiktet, det yttre plexiformskiktet, fotoreceptorskiktet och RPE-lagret. Exportera filerna som CSV.Mät medeltjockleken på varje lager och upprepa för varje öga i experimentkohorten. Öppna bilden av optisk koherenstomografi i bild J.Använd linjeverktyget för att mäta avståndet där den övre gränsen för det yttre plexiformskiktet är otydligt. Mät horisontellt och behåll latitud där desorganisationen börjar.Beräkna summan av de oorganiserade avstånden i bilden. Dela längden på desorganisation med näthinnans totala längd för att få förhållandet mellan desorganisation. Upprepa mätningen och beräkningen för optiska koherenstomografibilder från de andra tre kvadranterna i näthinnan.Ta medelvärdet av förhållandena för desorganisation från de fyra optiska koherenstomografibilderna. Detta nummer representerar den genomsnittliga desorganisationen för hela näthinnan. Upprepa för varje öga i den experimentella kohorten.De maskerade bilderna som används för beräkning av förhållandet mellan läckage för varje näthinnebild kan jämföras med andra och analyseras, vilket skiljer den stora kärlen från andra områden i näthinnan. Fluoresceinkvantifiering möjliggör jämförelse av skadans svårighetsgrad och behandlingseffekt samt studier av förändringar i läckage under skadetiden. En avgränsning av näthinnans lager i en OCT-bild observeras.Kvantifieringen av tjockleken för varje retinalskikt visar att det initiala edematösa svaret har en mer djupgående effekt på de inre retinala skikten. Från en analys av en tidsförlopp av retinal venocklusionsskada kan den initiala inflammatoriska svullnaden av retinala skikt och den eventuella degenerativa gallringen observeras. Det inre kärnskiktet upplever ett mycket större svar på den initiala skadan, men det inre plexiformskiktet visar allvarligare gallring efter att det initiala ödemet har stabiliserats och återgår till baslinjen.Disorganiseringen av det inre retinala skiktet manifesteras som ett försvinnande av den övre gränsen för det yttre plexiformskiktet, som blandar de yttre plexiforma och inre kärnskikten tillsammans. Retinal desorganisation av två experimentella grupper jämfördes för att undersöka effekten av en hämmare för att mildra näthinneskador. Bildkvaliteten är mycket viktig för analyskvaliteten.När du förvärvar retinala bilder, ta dig tid att se till att fundus- och retinalskikten är så tydliga och fokuserade som möjligt. Dessa icke-invasiva metoder kan användas longitudinellt och i samband med biokemiska och immunohistokemiska studier av vävnad för att skapa mer mångfacetterade och detaljerade sjukdomsprofiler. Denna teknik möjliggör tillförlitlig kvantifiering av in Vivo retinala avbildningsdata i modeller av neurovaskulär sjukdom så att data lättare kan översättas till mänsklig sjukdom.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfektion av Mouse retinal ganglion celler genom att In vivo Elektroporation

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

In vivo elektroporering av utvecklingsländer Mouse Retina

The functional characterization of genes expressed during mammalian retinal development remains a significant challenge.  Gene targeting to generate ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Funktionell hjärnavbildning med ultraljud Blod-hjärnbarriären störningar och mangan-förstärkt MRT

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

Hela Mount immunfluorescensfärgning av neonatal mus Retina att undersöka Angiogenesis<em&gt; In vivo</em

Angiogenesis  is the complex process of new blood vessel formation defined by the sprouting  of new blood vessels from a pre-existing vessel network. ...

Assessment of Vascular Regeneration in the CNS Using the Mouse Retina

Bedömning av Vascular Regeneration i CNS Använda musen Retina

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). ...

Vibratome Sectioning Mouse Retina to Prepare Photoreceptor Cultures

Vibratome Sektione mus Retina man förbereder ljusmätare kulturer

The retina is a part of the central nervous system that has organized architecture, with neurons in layers from the photoreceptors, both rods and cones in ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

En<em&gt; Ex vivo</em&gt; Laser-inducerad ryggmärgsskada modell för bedömning Mekanismer axonal degeneration i realtid

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Samtidig<em&gt; Ex vivo</em&gt; Funktionstest av två näthinnor efter<em&gt; In vivo</em&gt; Elektroretinogram System

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

An In Vivo Duo-color Method for Imaging Vascular Dynamics Following Contusive Spinal Cord Injury

An In Vivo Duo-color Method for Imaging Vascular Dynamics Following Contusive Spinal Cord Injury

En In Vivo Duo-färg metod för Imaging vaskulär Dynamics efter Contusive ryggmärgsskada

Spinal cord injury (SCI) causes significant vascular disruption at the site of injury. Vascular pathology occurs immediately after SCI and continues ...

Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina

Transpupillär tvåfotoner in vivo-avbildning av musens näthinna

The retina transforms light signals from the environment into electrical signals that are propagated to the brain. Diseases of the retina are prevalent ...