Name: in vivo vascular injury readouts in mouse retina to promote reproducibility
Uploaded: 2022-04-21T13:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility at JoVE.com

Bu çalışma, Ulusal Bilim Vakfı Lisansüstü Araştırma Burs Programı (NSF-GRFP) hibe DGE - 1644869(CKCO'ya), Ulusal Göz Enstitüsü (NEI) 5T32EY013933 (AMP'ye), Ulusal Nörolojik Bozukluklar ve İnme Enstitüsü (RO1 NS081333, R03 NS099920 CMT'ye) ve Savunma Bakanlığı Ordusu / Hava Kuvvetleri (DUP'tan CMT'ye) tarafından desteklenmiştir.

Bu protokol, Görme ve Oftalmoloji Araştırmaları Derneği'nin (ARVO) oftalmik ve görme araştırmalarında hayvanların kullanımı için yaptığı açıklamayı takip eder. Kemirgen deneyleri, Columbia Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmış ve izlenmiştir.
NOT: Görüntüleme, yaklaşık 23 g ağırlığındaki 2 aylık C57BL/6J erkek fareler üzerinde yapıldı.
1. Retinal görüntüleme için re...

<ol>
	<li>Tong, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+burden+of+cerebrovascular+disease+in+the+united+states.">The burden of cerebrovascular disease in the united states.</a> Preventing Chronic Disease. 16, 180411 (2019).</li><li>Nakahara, T., Mori, A., Kurauchi, Y., Sakamoto, K., Ishii, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurovascular+interactions+in+the+retina:+physiological+and+pathological+roles.">Neurovascular interactions in the retina: physiological and pathological roles.</a> Journal of Pharmacological Sciences. 123 (2), 79-84 (2013).</li><li>Jaulim, A., Ahmed, B., Khanam, T., Chatziralli, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Branch+retinal+vein+occlusion:+epidemiology,+pathogenesis,+risk+factors,+clinical+features,+diagnosis,+and+complications.+An+update+of+the+literature.">Branch retinal vein occlusion: epidemiology, pathogenesis, risk factors, clinical features, diagnosis, and complications. An update of the literature.</a> Retina. 33 (5), 901-910 (2013).</li><li>Ho, M., Liu, D. T. L., Lam, D. S. C., Jonas, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+vein+occlusions,+from+basics+to+the+latest+treatment.">Retinal vein occlusions, from basics to the latest treatment.</a> Retina. 36 (3), 432-448 (2016).</li><li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+new+mouse+model+of+branch+retinal+vein+occlusion+and+retinal+neovascularization.">Development of a new mouse model of branch retinal vein occlusion and retinal neovascularization.</a> Japanese Journal of Ophthalmology. 51 (4), 251-257 (2007).</li><li>Ebneter, A., Agca, C., Dysli, C., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+retinal+morphology+alterations+using+spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+a+mouse+model+of+retinal+branch+and+central+retinal+vein+occlusion.">Investigation of retinal morphology alterations using spectral domain optical coherence tomography in a mouse model of retinal branch and central retinal vein occlusion.</a> PLoS One. 10 (3), 0119046 (2015).</li><li>Fuma, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pharmacological+approach+in+newly+established+retinal+vein+occlusion+model.">A pharmacological approach in newly established retinal vein occlusion model.</a> Scientific Reports. 7, 43509 (2017).</li><li>Cavallerano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ophthalmic+fluorescein+angiography.">Ophthalmic fluorescein angiography.</a> Clinical Optometry. 5 (1), 1-23 (1996).</li><li>Laatikainen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fluorescein+angiography+revolution:+a+breakthrough+with+sustained+impact.">The fluorescein angiography revolution: a breakthrough with sustained impact.</a> Acta Ophthalmologica Scandinavica. 82 (4), 381-392 (2004).</li><li>Huang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography.">Optical coherence tomography.</a> Science. 254 (5035), 1178-1181 (1991).</li><li>Oberwahrenbrock, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reliability+of+intra-retinal+layer+thickness+estimates.">Reliability of intra-retinal layer thickness estimates.</a> PLoS One. 10 (9), 0137316 (2015).</li><li>Avrutsky, M. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+activation+of+caspase-9+promotes+neurovascular+injury+in+retinal+vein+occlusion.">Endothelial activation of caspase-9 promotes neurovascular injury in retinal vein occlusion.</a> Nature Communications. 11 (1), 3173 (2020).</li><li>Col&#243;n Ortiz, C., Potenski, A., Lawson, J., Smart, J., Troy, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+retinal+vein+occlusion+mouse+model+to+limit+variability.">Optimization of the retinal vein occlusion mouse model to limit variability.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (174), e62980 (2021).</li><li>Schmidt-Erfurth, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+management+of+retinal+vein+occlusion+by+the+European+society+of+retina+specialists+(EURETINA).">Guidelines for the management of retinal vein occlusion by the European society of retina specialists (EURETINA).</a> Ophthalmologica. 242 (3), 123-162 (2019).</li><li>Yoshimura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+analysis+of+inflammatory+immune+mediators+in+vitreoretinal+diseases.">Comprehensive analysis of inflammatory immune mediators in vitreoretinal diseases.</a> PLoS One. 4 (12), 8158 (2009).</li><li>Mezu-Ndubuisi, O. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+angiography+quantifies+oxygen-induced+retinopathy+vascular+recovery.">In vivo angiography quantifies oxygen-induced retinopathy vascular recovery.</a> Optometry and Vision Science. 93 (10), 1268-1279 (2016).</li><li>Hui, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+spatial+and+temporal+analysis+of+fluorescein+angiography+dynamics+in+the+eye.">Quantitative spatial and temporal analysis of fluorescein angiography dynamics in the eye.</a> PLoS One. 9 (11), 111330 (2014).</li><li>Berry, D., Thomas, A. S., Fekrat, S., Grewal, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+disorganization+of+retinal+inner+layers+with+ischemic+index+and+visual+acuity+in+central+retinal+vein+occlusion.">Association of disorganization of retinal inner layers with ischemic index and visual acuity in central retinal vein occlusion.</a> Ophthalmology. Retina. 2 (11), 1125-1132 (2018).</li><li>Nicholson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+accuracy+of+disorganization+of+the+retinal+inner+layers+in+detecting+macular+capillary+non-perfusion+in+diabetic+retinopathy.">Diagnostic accuracy of disorganization of the retinal inner layers in detecting macular capillary non-perfusion in diabetic retinopathy.</a> Clinical &amp; Experimental Ophthalmology. 43 (8), 735-741 (2015).</li><li>Obrosova, I., Chung, S., Kador, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetic+cataracts:+mechanisms+and+management.">Diabetic cataracts: mechanisms and management.</a> Diabetes/Metabolism Research and Reviews. 26 (3), 172-180 (2010).</li><li>Hegde, K., Henein, M., Varma, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+the+mouse+as+a+model+animal+for+the+study+of+diabetic+cataracts.">Establishment of the mouse as a model animal for the study of diabetic cataracts.</a> Ophthalmic Research. 35 (1), 12-18 (2003).</li><li>Takahashi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+collateral+vessel+formation+after+retinal+vein+occlusion+visualized+by+OCTA+and+elucidation+of+factors+in+their+formation.">Time course of collateral vessel formation after retinal vein occlusion visualized by OCTA and elucidation of factors in their formation.</a> Heliyon. 7 (1), 05902 (2021).</li><li>Haj Najeeb, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescein+angiography+in+diabetic+macular+edema:+A+new+approach+to+its+etiology.">Fluorescein angiography in diabetic macular edema: A new approach to its etiology.</a> Investigation Ophthalmology &amp; Visual Science. 58 (10), 3986-3990 (2017).</li><li>Alam, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+optical+coherence+tomography+angiography+features+for+objective+classification+and+staging+of+diabetic+retinopathy.">Quantitative optical coherence tomography angiography features for objective classification and staging of diabetic retinopathy.</a> Retina. 40 (2), 322-332 (2020).</li><li>Uddin, M., Jayagopal, A., McCollum, G., Yang, R., Penn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+retinal+hypoxia+using+HYPOX-4-dependent+fluorescence+in+a+mouse+model+of+laser-induced+retinal+vein+occlusion+(RVO).">In vivo imaging of retinal hypoxia using HYPOX-4-dependent fluorescence in a mouse model of laser-induced retinal vein occlusion (RVO).</a> Investigation Ophthalmology &amp; Visual Science. 58 (9), 3818-3824 (2017).</li><li>Qiang, W., Wei, R., Chen, Y., Chen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+pathological+features+and+current+animal+models+of+type+3+macular+neovascularization.">Clinical pathological features and current animal models of type 3 macular neovascularization.</a> Frontiers in Neuroscience. 15, 734860 (2021).</li><li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+laser-induced+choroidal+neovascularization+in+the+rodent+retina+using+optical+coherence+tomography+angiography.">Imaging laser-induced choroidal neovascularization in the rodent retina using optical coherence tomography angiography.</a> Investigation Ophthalmology &amp; Visual Science. 57 (9), 331 (2016).</li><li>Chen, J., Qian, H., Horai, R., Chan, C., Caspi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+optical+coherence+tomography+and+electroretinography+to+evaluate+retinal+pathology+in+a+mouse+model+of+autoimmune+uveitis.">Use of optical coherence tomography and electroretinography to evaluate retinal pathology in a mouse model of autoimmune uveitis.</a> PLoS One. 8 (5), 63904 (2013).</li></ol>

Noninvaziv kemirgen retinal görüntüleme, patolojiyi incelemek ve müdahaleler geliştirmek için bir yol sunar. Önceki çalışmalar, değişkenliği sınırlayan ve murin retinadaki yaygın klinik patolojilerin güvenilir bir şekilde çevrilmesine izin veren bir RVO fare modeli geliştirmiş ve optimize etmiştir 5,7,13. Oftalmik görüntüleme teknolojisindeki gelişmeler, deney hayvanlarında FA ve OCT gibi klinik in...

Nörovasküler hastalık, mortalite ve morbiditenin önde gelen nedenlerinden biri olan iskemik inmelerden ve görme kaybına yol açan retinal vasküler hastalıklardan sorumlu önemli bir sağlık sorunudur 1,2. Nörovasküler hastalığı modellemek için, retinal ven tıkanıklığının (RVO) bir fare modelini kullanıyoruz. Bu model noninvazivdir ve retinal vasküler hastalığı olan kişileri klinik ortamda incelemek için kullanılanlara benzer in vivo görüntüleme tekniklerini kullanır. Bu modelin kullanılması, bu modeli kullanan çalışmaların çeviri potansiyelini arttırmaktadır. Tüm fare modellerinde olduğu gibi, modelin tekrarlanabilirliğini en üst düzeye çıkarmak çok önemlidir.
Retinal damar hastalıkları 70 yaşın altındaki kişilerde görme kaybının önemli bir nedenidir. RVO, diyabetik retinopatiden sonra en sık görülen ikinci retinal vasküler hastalıktır3. RVO'nun karakteristik klinik özellikleri arasında iskemik hasar, retina ödemi ve nöronal kaybın bir sonucu olarak görme kaybıyer alır 3,4. Büyük damarların lazer fotokoagülasyonunu kullanan RVO'nun fare modelleri, insan RVO 5,6,7'de gözlenen temel klinik patolojileri çoğaltmak için geliştirilmiş ve rafine edilmiştir. Oftalmik görüntülemedeki gelişmeler ayrıca insanlarda kullanılan noninvaziv tanı araçlarının, yani floresein anjiyografi (FA) ve optik koherens tomografinin (OCT)6 replikasyonuna da olanak sağlamaktadır. Floresein Anjiyografi, kan-retinal bariyerin (BRB) parçalanmasının yanı sıra retinadaki kan akış dinamiklerinin yanı sıra, küçük bir floresan boya olan floresein enjeksiyonu kullanılarak tıkanma bölgeleri de dahil olmak üzere kan akış dinamiklerinin gözlenmesine izin verir 8,9. OCT görüntüleme, retinanın yüksek çözünürlüklü kesitsel görüntülerinin elde edilmesine ve retina katmanlarının kalınlığının ve organizasyonunun incelenmesine olanak tanır10. FA görüntülerinin analizi tarihsel olarak büyük ölçüde nitel olmuştur, bu da çalışmalar arasında doğrudan ve tekrarlanabilir karşılaştırma potansiyelini sınırlar. Son zamanlarda, OCT görüntülemede katman kalınlığının ölçülmesi için bir dizi yöntem geliştirilmiştir, ancak şu anda standartlaştırılmış bir analiz protokolü yoktur ve OCT görüntü elde etme yeri11'e kadar değişmektedir. Bu araçlardan düzgün bir şekilde yararlanmak için standartlaştırılmış, nicel ve çoğaltılabilir veri analizi metodolojisine ihtiyaç vardır. Bu yazıda, RVO-floresein kaçağı, OCT tabakası kalınlığı ve retina tabakalarının düzensizliğinin bir fare modelinde patolojik hasarı değerlendirmek için kullanılan üç vasküler okuma sunulmuştur.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AK-Fluor 10%</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC: 17478-253-10</td>
			<td>light-sensitive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Rimadyl</td>
			<td>NADA #141-199</td>
			<td>keep at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GenTeal</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>00658 06401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image J</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InSight 2D</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>OCT analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine Hydrochloride</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>NDC: 11695-0702-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenylephrine</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDCL174478-201-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron IV</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>Retinal imaging microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron Meridian Module</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>Laser photocoagulator software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron Optical Coherence Tomography Module</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>OCT imaging software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phoenix Micron StreamPix Module</td>
			<td>Phoenix Technology Group</td>
			<td></td>
			<td>Fundus imaging and acquisition targeting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photoshop</td>
			<td>Adobe</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refresh</td>
			<td>Allergan</td>
			<td>94170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC: 174478-102-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDCL 59399-110-20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo vascular injury readouts in mouse retina to promote reproducibility

Oftalmik görüntüleme araçlarındaki gelişmeler, nörovasküler hasarın hayvan modelleriyle çalışan araştırmacılara benzeri görülmemiş bir erişim seviyesi sunmaktadır. Bu daha büyük çevrilebilirlikten düzgün bir şekilde yararlanmak için, bu görüntülerden nicel veriler çizmek için tekrarlanabilir yöntemler tasarlamaya ihtiyaç vardır. Optik koherens tomografi (OKT) görüntüleme, retina histolojisini mikrometre çözünürlükte çözebilir ve vasküler kan akımındaki fonksiyonel farklılıkları ortaya çıkarabilir. Burada, retinal ven tıkanıklığının (RVO) optimize edilmiş bir fare modelinde vasküler hakaret sonrası patolojik hasarı karakterize etmek için kullandığımız noninvaziv vasküler okumaları tanımladık. Bu okumalar arasında retina morfolojisinin canlı görüntüleme analizi, retinal iç tabakaların düzensizliği (DRIL) kılcal iskemi ölçümü ve retina ödemi ve vasküler yoğunluğun floresein anjiyografi ölçümleri yer almaktadır. Bu teknikler doğrudan klinikte retina hastalığı olan hastaları incelemek için kullanılanlara karşılık gelir. Bu yöntemlerin standartlaştırılması, hayvan modellerinin oftalmik hastalığın klinik fenotipleri ile doğrudan ve tekrarlanabilir bir şekilde karşılaştırılmasını sağlayarak vasküler yaralanma modellerinin translasyonel gücünü arttırır.

Bu analiz yöntemleri, FA ve OCT görüntüleme ile yakalanan retinal patolojinin nicelleştirilmesine izin verir. Temsili verilerin çıkarıldığı deneylerde, yaralanmamış kontroller olarak görev yapan veya RVO prosedüründen geçen ve Pen1-XBir3 tedavisi göz damlası veya Pen1-Salin araç göz damlası alan C57BL / 6J erkek fareleri kullanıldı. RVO yaralanma modeli, bir fotoaktivatör boya12 olan gül bengalinin kuyruk damarı enjeksiyonunu takiben anestezi uygulanmış bir farenin her...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility at JoVE.com

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

Burada, Retinal Ven Tıkanıklığı (RVO) çalışmasında floresein anjiyografi (FA) ve optik koherens tomografi (OCT) görüntüleri için üç veri analizi protokolü sunulmuştur.

İn vivo Tekrarlanabilirliği Artırmak için Fare Retinasında Vasküler Yaralanma Okumaları

Advancements in ophthalmic imaging tools offer an unprecedented level of access to researchers working with animal models of neurovascular injury. To ...

Bu protokol, kullanıcının fare retinal görüntülemesinde klinik olarak benzer hasar belirteçlerini nicel olarak ölçmesine olanak tanır ve bu da sonraki bulguların çevrilebilirliğini destekler. Bu yöntemler, analizi kolaylaştırmamıza ve deney hayvanları arasındaki görüntülemeyi güvenilir bir şekilde karşılaştırma yeteneği vermemize olanak tanır. Bu yöntemler bir fare modeline genel bakışı incelemek için geliştirilmiş olsa da, aynı görüntüleme tekniklerini kullanan herhangi bir retina hastalığı üzerine yapılan araştırmalara kolayca uzanabilirler.Retinal görüntüleme mikroskobu ışık kutusunu, optik koherens tomografi makinesini ve ısıtılmış fare platformunu açın. Bilgisayarı açın ve görüntüleme programını açın. Her göze bir damla fenilefrin ve tropikamidin ekleyin.100 mikrolitre% 1 floresein intraperitoneal enjekte edin. Fareyi platforma yerleştirin. Retinal fundusun görünümü net ve odaklanmış olana kadar platformun yüksekliğini ve açısını ayarlayın.Fundusun fotoğrafını çekin. Görüntüleme ve optik koherens tomografi yazılımını açın. Optik koherens tomografi programında dürtmeyi 10'a ayarlayın.Optik koherens tomografi görüntüsü alın, yanıktan 75 mikrometre distal ekleyin. Retinanın diğer üç kadranını tekrarlayın. Fotoğraf makinesini 488 nanometre filtreye geçirin.Kamera kazancını 5'e yükseltin. Floresein enjeksiyonundan tam 5 dakika sonra fundusun fotoğrafını çekin. Görüntü işleme yazılımında floresein görüntüsünü açın.Görüntüyü çoğaltın. Bir seçim aracı kullanarak, ana gemileri dikkatlice izleyin. Bu gemilerden dallanan gemileri görmezden gelin.İlk görüntüde, yalnızca gemiyi bırakarak seçimi silin. Bu maskelenmiş görüntüyü kaydedin. Seçimi ikinci görüntüye taşıyın, seçimi tersine çevirin ve arka planı yalıtarak silin.Bu maskelenmiş görüntüyü kaydedin. Arka plan görüntüsünü açın ve entegre yoğunluğu ölçün. Gemiler görüntüsünü açın, gemilerin ana hatlarını seçin ve ardından ortalama yoğunluğu ölçün.Arka planın entegre yoğunluğunu damarların ortalama yoğunluğuna bölün ve göz için sızıntı oranını oluşturun. Her göz için bu sızıntı oranını deneysel bir kohortta kaydedin. Arka plan için daha fazla kontrol sağlamak için, deneysel gözleri yaralanmamış kontrol gözlerinin ortalama sızıntı oranına normalleştirin.Görüntü işleme yazılımında optik koherens tomografi görüntüsünü açın. Ganglion hücre tabakasının, iç pleksiform tabakanın, iç nükleer tabakanın, dış pleksiform tabakanın, fotoreseptör tabakasının ve RPE tabakasının sınırlarını izleyin. Dosyaları CSV olarak dışa aktarın.Her katmanın ortalama kalınlığını ölçün ve deney kohortundaki her göz için tekrarlayın. Optik koherens tomografi görüntüsünü J görüntüsünde açın.Çizgi aracını kullanarak, dış pleksiform tabakanın üst sınırının belirsiz olduğu mesafeyi ölçün. Dağınıklığın başladığı enlemi koruyarak yatay olarak ölçün.Görüntüdeki düzensiz mesafelerin toplamını hesaplayın. Düzensizlik oranını elde etmek için düzensizlik uzunluğunu retinanın toplam uzunluğuna bölün. Retinanın diğer üç kadranından optik koherens tomografi görüntüleri için ölçüm ve hesaplamayı tekrarlayın.Dört optik koherens tomografi görüntüsünden düzensizlik oranlarının ortalamasını alın. Bu sayı, tüm retina için ortalama düzensizliği temsil eder. Deneysel kohorttaki her göz için tekrarlayın.Her retina görüntüsü için sızıntı oranının hesaplanmasında kullanılan maskeli görüntüler diğerleriyle karşılaştırılabilir ve analiz edilerek majör vaskülatürü retinanın diğer bölgelerinden ayırılabilir. Floresein miktarı, yaralanma şiddeti ve tedavi etkinliğinin karşılaştırılmasına ve yaralanma süresi boyunca sızıntıdaki değişikliklerin incelenmesine olanak tanır. OCT görüntüsünde retina katmanlarının bir tasviri gözlenir.Her retina tabakası için kalınlığın ölçülmesi, başlangıçtaki ödemli yanıtın iç retina tabakaları üzerinde daha derin bir etkiye sahip olduğunu göstermektedir. Retinal ven tıkanıklığı hasarının bir zaman seyrinin analizinden, retina tabakalarının ilk enflamatuar şişmesi ve nihai dejeneratif incelme gözlenebilir. İç nükleer tabaka ilk yaralanmaya çok daha büyük bir tepki verir, ancak iç pleksiform tabaka, ilk ödem stabilize edildikten ve taban çizgisine döndükten sonra daha şiddetli incelme gösterir.İç retina tabakasının dağınıklığı, dış pleksiform tabakanın üst sınırının kaybolması, dış pleksiform ve iç nükleer tabakaların bir araya gelmesi olarak kendini gösterir. İki deney grubunun retinal disorganizasyonu, retina hasarını hafifletmede bir inhibitörün etkinliğini araştırmak için karşılaştırıldı. Görüntü kalitesi, analiz kalitesi için hayati öneme sahiptir.Retinal görüntüler elde ederken, fundus ve retina tabakalarının mümkün olduğunca net ve odaklanmış olduğundan emin olmak için zaman ayırın. Bu non-invaziv yöntemler, hastalığın daha çok yönlü ve ayrıntılı profillerini oluşturmak için uzunlamasına ve dokunun biyokimyasal ve immünohistokimyasal çalışması ile birlikte kullanılabilir. Bu teknik, nörovasküler hastalık modellerinde in Vivo retinal görüntüleme verilerinin güvenilir bir şekilde ölçülmesini sağlar, böylece veriler insan hastalığına daha kolay çevrilebilir.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Fare Retina Ganglion Hücreleri Transfeksiyon tarafından In vivo Elektroporasyon

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

Gelişmekte olan Fare Retina in vivo Elektroporasyon olarak

The functional characterization of genes expressed during mammalian retinal development remains a significant challenge.  Gene targeting to generate ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Ultrasonik Kan-beyin bariyeri bozulması ve Manganez kontrastlı MRG kullanma İşlevsel beyin görüntüleme

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

Anjiyogenez Araştırma Yenidoğan Fare Retina Tüm Dağı Immunofluorescent Boyama<em&gt; In vivo</em

Angiogenesis  is the complex process of new blood vessel formation defined by the sprouting  of new blood vessels from a pre-existing vessel network. ...

Assessment of Vascular Regeneration in the CNS Using the Mouse Retina

Fare Retina kullanma CNS&#39;deki Vasküler Rejenerasyon Değerlendirilmesi

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). ...

Vibratome Sectioning Mouse Retina to Prepare Photoreceptor Cultures

Vibratome Kesit Fare Retina fotoreseptör Kültürler hazırlayın

The retina is a part of the central nervous system that has organized architecture, with neurons in layers from the photoreceptors, both rods and cones in ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

Bir<em&gt; Ex vivo</em&gt; Lazer kaynaklı Omurilik Felçlileri Modeli Gerçek zamanlı aksonal Dejenerasyon mekanizmaları değerlendirmek için

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Eşzamanlı<em&gt; Ex vivo</emİki retina&gt; Fonksiyonel Test tarafından<em&gt; In vivo</em&gt; Elektroretinogram Sistemi

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

An In Vivo Duo-color Method for Imaging Vascular Dynamics Following Contusive Spinal Cord Injury

An In Vivo Duo-color Method for Imaging Vascular Dynamics Following Contusive Spinal Cord Injury

İçinde bir Vivo Vasküler Dynamics Contusive Medulla Spinalis Yaralanmalarında takip görüntüleme için duo-renk yöntemi

Spinal cord injury (SCI) causes significant vascular disruption at the site of injury. Vascular pathology occurs immediately after SCI and continues ...

Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina

Transpupiller İki Foton Fare Retinasının In vivo Görüntülenmesi

The retina transforms light signals from the environment into electrical signals that are propagated to the brain. Diseases of the retina are prevalent ...