Name: rectal organoid morphology analysis (roma): a diagnostic assay in cystic fibrosis
Uploaded: 2022-06-10T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rectal Organoid Morphology Analysis ROMA: A Diagnostic Assay in Cystic Fibrosis at JoVE.com

Мы благодарим пациентов и родителей, которые участвовали в этом исследовании. Мы благодарим Abida Bibi за всю работу по культивированию органоидов. Мы благодарим Эльса Эртгертса, Каролин Брунель, Клэр Коллард, Лилиан Коллиньон, Моник Дельфосс, Аню Дельпорт, Натали Фейертс, Сесиль Ламбремон, Лют Ньювборг, Натали Петерс, Энн Раман, Пима Сансена, Хильду Стивенс, Марианну Шульте, Элса Ван Рансбека, Кристель Ван де Бранде, Грет Ван ден Эйнде, Марлин Вандеркеркен, Инге Ван Дейк, Одри Вагенер, Монику Васкевич и Бернарда Вендерикса за материально-техническую поддержку. Мы также благодарим Mucovereniging/Association Muco, и в частности Стефана Йориса и д-ра Яна Ванлеуве, за их поддержку и финансирование. Мы благодарим всех сотрудников Бельгийского органоидного проекта: Хедвиг Боболи (CHR Citadelle, Льеж, Бельгия), Линду Буланже (Университетские больницы Лёвена, Бельгия), Жоржа Казимира (HUDERF, Брюссель, Бельгия), Бенедикта Де Мейера (Университетская клиника Гента, Бельгия), Эльке Де Вахтер (Университетская клиника Брюсселя, Бельгия), Дэнни Де Лооза (Университетская клиника Гента, Бельгия), Изабель Этьен (CHU Erasme, Брюссель, Бельгия), Лоуренса Ханссенса (HUDERF, Брюссель), Кристиан Кнуп (CHU Erasme, Брюссель, Бельгия), Моник Лекен (Университетская клиника Антверпена, Бельгия), Вики Нове (GZA St. Vincentius Hospital Antwerp), Дирк Штаессен (GZA St. Vincentius Hospital Antwerp), Стефани Ван Бирвлиет (Университетская клиника Гента, Бельгия), Ева Ван Брекель (Университетская клиника Гента, Бельгия), Ким Ван Хуренбек (Университетская клиника Антверпена, Бельгия), Эф Вандерхельст (Университетская клиника Брюсселя, Бельгия), Стейн Верхульст (Университетская клиника Антверпена, Бельгия), Стефани Винкен (Университетская клиника Брюсселя, Бельгия).

Для всех процедур, связанных с тканями человека, было получено одобрение Комитета по этике исследований UZ/KU Leuven (EC research). Все исследования проводились с информированного согласия и/или согласия родителей, представителей и/или пациентов.
ПРИМЕЧАНИЕ: Все процедуры, связанн?...

<ol>
	<li>Riordan, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+cystic+fibrosis+gene:+Cloning+and+characterization+of+complementary+DNA.">Identification of the cystic fibrosis gene: Cloning and characterization of complementary DNA.</a> Science. 245 (4922), 1066-1073 (1989).</li><li>Castellani, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ECFS+best+practice+guidelines:+the+2018+revision.">ECFS best practice guidelines: the 2018 revision.</a> Journal of Cystic Fibrosis. 17 (2), 153-178 (2018).</li><li>. CFTR2 Available from: <a target="_blank" href="https://www.cftr2.org/">https://www.cftr2.org/</a> (2022)</li><li>Farrell, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+of+cystic+fibrosis:+Consensus+guidelines+from+the+cystic+fibrosis+foundation.">Diagnosis of cystic fibrosis: Consensus guidelines from the cystic fibrosis foundation.</a> The Journal of Pediatrics. 181, 4-15 (2017).</li><li>Vermeulen, F., Lebecque, P., De Boeck, K., Leal, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+variability+of+the+sweat+chloride+in+diagnostic+sweat+tests:+A+retrospective+analysis.">Biological variability of the sweat chloride in diagnostic sweat tests: A retrospective analysis.</a> Journal of Cystic Fibrosis: Official Journal of the European Cystic Fibrosis Society. 16 (1), 30-35 (2017).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+expansion+of+epithelial+organoids+from+human+colon,+adenoma,+adenocarcinoma,+and+Barrett's+epithelium.">Long-term expansion of epithelial organoids from human colon, adenoma, adenocarcinoma, and Barrett's epithelium.</a> Gastroenterology. 141 (5), 1762-1772 (2011).</li><li>Boj, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forskolin-induced+swelling+in+intestinal+organoids:+An+in+vitro+assay+for+assessing+drug+response+in+cystic+fibrosis+patients.">Forskolin-induced swelling in intestinal organoids: An in vitro assay for assessing drug response in cystic fibrosis patients.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (120), e55159 (2017).</li><li>Friedmacher, F., Puri, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rectal+suction+biopsy+for+the+diagnosis+of+Hirschsprung's+disease:+a+systematic+review+of+diagnostic+accuracy+and+complications.">Rectal suction biopsy for the diagnosis of Hirschsprung's disease: a systematic review of diagnostic accuracy and complications.</a> Pediatric Surgery International. 31 (9), 821-830 (2015).</li><li>Dekkers, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+functional+CFTR+assay+using+primary+cystic+fibrosis+intestinal+organoids.">A functional CFTR assay using primary cystic fibrosis intestinal organoids.</a> Nature Medicine. 19 (7), 939-945 (2013).</li><li>Dekkers, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterizing+responses+to+CFTR-modulating+drugs+using+rectal+organoids+derived+from+subjects+with+cystic+fibrosis.">Characterizing responses to CFTR-modulating drugs using rectal organoids derived from subjects with cystic fibrosis.</a> Science Translational Medicine. 8 (344), (2016).</li><li>Vonk, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocol+for+application,+standardization+and+validation+of+the+forskolin-induced+swelling+assay+in+cystic+fibrosis+human+colon+organoids.">Protocol for application, standardization and validation of the forskolin-induced swelling assay in cystic fibrosis human colon organoids.</a> STAR Protocols. 1 (1), 100019 (2020).</li><li>Cuyx, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rectal+organoid+morphology+analysis+(ROMA)+as+a+promising+diagnostic+tool+in+cystic+fibrosis.">Rectal organoid morphology analysis (ROMA) as a promising diagnostic tool in cystic fibrosis.</a> Thorax. 76 (11), 1146-1149 (2021).</li><li>Wilschanski, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+the+cystic+fibrosis+transmembrane+regulator+gene+and+in+vivo+transepithelial+potentials.">Mutations in the cystic fibrosis transmembrane regulator gene and in vivo transepithelial potentials.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 174 (7), 787-794 (2006).</li><li>Derichs, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+current+measurement+for+diagnostic+classification+of+patients+with+questionable+cystic+fibrosis:+validation+and+reference+data.">Intestinal current measurement for diagnostic classification of patients with questionable cystic fibrosis: validation and reference data.</a> Thorax. 65 (7), 594-599 (2010).</li><li>Ramalho, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correction+of+CFTR+function+in+intestinal+organoids+to+guide+treatment+of+Cystic+Fibrosis.">Correction of CFTR function in intestinal organoids to guide treatment of Cystic Fibrosis.</a> European Respiratory Journal. 57, 1902426 (2020).</li></ol>

Мы предоставляем подробный протокол анализа морфологии ректальных органоидов (ROMA). Два индекса, рассчитанные с помощью ROMA, IR и CI, отличали органоиды от субъектов с муковисцидозом от тех, у кого не было МУКовисцидоза, с идеальной точностью. Таким образом, ROMA может функционировать как новы...

Муковисцидоз (CF) является аутосомно-рецессивным заболеванием, вызванным мутациями в гене трансмембранного регулятора проводимости CF (CFTR). Белок CFTR представляет собой хлоридно-бикарбонатный канал, обеспечивающий гидратацию нескольких эпителий1. Муковисцидоз является тяжелым, укорачивающим жизнь, многосистемным заболеванием, проявляющимся в первую очередь как респираторное заболевание, но также поражающим желудочно-кишечный тракт, поджелудочную железу, печень и репродуктивный тракт2.
Болезнетворные мутации CFTR приводят к уменьшению количества или функции CFTR, что, в свою очередь, вызывает обезвоживание слизи. Более 2000 вариантов гена CFTR были описаны3, из которых только 466 были тщательно охарактеризованы4.
Диагноз МВ может быть поставлен, когда концентрация хлорида пота (SCC) выше порога 60 ммоль/л или когда выявлены две болезнетворные мутации CFTR (согласно базе данных CFTR2) 4,5. У субъектов с только промежуточным повышенным (30-60 ммоль /л) SCC, который встречается примерно в 4%-5% тестов пота6, и мутациями CFTR с различными или неизвестными клиническими последствиями, диагноз не может быть подтвержден или исключен, даже если у них есть симптомы, совместимые с муковисцидозом, или положительный неонатальный скрининг-тест. Для этих случаев в диагностический алгоритм были включены физиологические анализы CFTR второй линии (разность носовых потенциалов (NPD) и измерения кишечного тока (ICM)). Эти тесты недоступны в большинстве центров и не возможны во всех возрастах, особенно у младенцев5 лет.
Ректальные органоиды представляют собой 3D-структуры, выращенные из lgr5(+) взрослых кишечных стволовых клеток из кишечных крипт, полученных путем ректальной биопсии7. Органоиды все чаще используются в биомедицинских исследованиях, таких как тестирование модуляторного лечения приCF 8. Жизнеспособная биопсия может быть получена либо путем отсасывания, либо путем щипцовой биопсии, процедуры, которая вызывает только минимальный дискомфорт и безопасна даже у младенцев, с низкой частотой осложнений9. Крипты, выделенные из ректальных биопсий, обогащаются стволовыми клетками, и при определенных условиях культивирования они самоорганизуются в ректальные органоиды. Морфология этих органоидов определяется экспрессией и функцией CFTR, расположенного на апикальной мембране эпителиальных клеток. Функциональный CFTR позволяет хлориду и воде проникать в органоидный просвет, тем самым вызывая отек органоидов, не относящихся к CF. Органоиды cf не набухают и не имеют видимого просвета10,11.
Анализ морфологии ректальных органоидов (ROMA) позволяет различать органоиды CF и без CF на основе этих различий в морфологии органоидов. Органоиды, не относящиеся к МУКовисцидозу, более круглые и имеют видимый просвет, в то время как для органоидов муковисцидоза верно обратное. Для этого анализа органоиды, специфичные для пациента, покрываются в 32 лунках 96-луночной пластины. После 1 дня роста органоиды окрашиваются кальцеином зеленого цвета и визуализируются в конфокальный микроскоп. Органоиды без CF показывают более круглую форму и менее флуоресцентную центральную часть, так как просвет содержит жидкость, а пятна кальцеина только клетки. Эти различия в морфологии количественно оцениваются с использованием двух индексов ROMA: индекс циркулярности (CI) количественно определяет округлость органоидов, в то время как коэффициент интенсивности (IR) является мерой наличия или отсутствия центрального просвета. В этом отчете мы подробно описываем протокол для получения этих дискриминирующих индексов, чтобы обеспечить репликацию метода.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL microcentrifuge tubes</td>
			<td>Sorenson</td>
			<td>17040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL conical tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>525-0605</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3526</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well plates</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>655101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brightfield microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axiovert 40C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 incubator</td>
			<td>Binder</td>
			<td>CB160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Computer</td>
			<td>Hewlett-Packard</td>
			<td>Z240</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope&#160;</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LSM 800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar flow hood</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>51025413</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Material for organoid culture as detailed in previous protocol10</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipettes (20, 200, and 1000 &#181;L)</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>3123000039, 3123000055, 3123000063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td>Microsoft Excel 2019 MSO 64-bit</td>
			<td>Spreadsheet software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIS-Elements Advanced Research Analysis Imaging Software&#160;</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>v.5.02.00</td>
			<td>Imaging software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tips (20, 200, and 1000 &#181;L)</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>774288, 775353, 750288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss Zen Blue software&#160;</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>v2.6</td>
			<td>Imaging software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rectal organoid morphology analysis (roma): a diagnostic assay in cystic fibrosis

Диагностика муковисцидоза (МВ) не всегда проста, особенно когда концентрация хлорида пота является промежуточной и/или менее двух болезнетворных мутаций CFTR . Физиологические анализы CFTR (разность носовых потенциалов, измерение кишечного тока) были включены в диагностический алгоритм, но не всегда легко доступны или осуществимы (например, у младенцев). Ректальные органоиды представляют собой 3D-структуры, которые растут из стволовых клеток, выделенных из крипт ректальной биопсии при культивировании в определенных условиях. Органоиды у субъектов, не страдающих CF, имеют круглую форму и заполненный жидкостью просвет, поскольку Опосредованный CFTR транспорт хлоридов приводит воду в просвет. Органоиды с дефектной функцией CFTR не набухают, сохраняя неправильную форму и не имея видимого просвета. Различия в морфологии между органоидами МВ и без МВ количественно определены в «Анализе морфологии ректальных органоидов» (ROMA) в качестве нового физиологического анализа CFTR. Для анализа ROMA органоиды покрываются 96-луночными пластинами, окрашиваются кальцеином и визуализируются в конфокальном микроскопе. Морфологические различия количественно оцениваются с использованием двух индексов: индекс циркулярности (CI) количественно определяет округлость органоидов, а коэффициент интенсивности (IR) является мерой наличия центрального просвета. Органоиды, не относящиеся к CF, имеют высокий CI и низкий IR по сравнению с органоидами CF. Индексы ROMA идеально различали 167 субъектов с муковисцидозом из 22 субъектов без муковисцидоза, что делает ROMA привлекательным физиологическим анализом CFTR, помогающим в диагностике муковисцидоза. Ректальные биопсии могут регулярно выполняться в любом возрасте в большинстве больниц, а ткани могут быть отправлены в центральную лабораторию для культуры органоидов и ROMA. В будущем ROMA может также применяться для проверки эффективности модуляторов CFTR in vitro. Цель настоящего доклада состоит в том, чтобы полностью разъяснить методы, используемые для РОМА, с тем чтобы можно было воспроизвести их в других лабораториях.

Органоиды у 212 испытуемых были собраны во время обычных клинических посещений. Никаких побочных эффектов не произошло во время или после процедуры биопсии прямой кишки. Органоиды были изображены одним исследователем, слепым к предметным характеристикам, таким как генотип и клиническа...

Watch this Scientific Journal Video about Rectal Organoid Morphology Analysis ROMA: A Diagnostic Assay in Cystic Fibrosis at JoVE.com

Rectal Organoid Morphology Analysis ROMA: A Diagnostic Assay in Cystic Fibrosis

Этот протокол описывает анализ морфологии ректальных органоидов (ROMA), новый диагностический анализ муковисцидоза (МВ). Морфологические характеристики, а именно округлость (индекс циркулярности, CI) и наличие светового потока (коэффициент интенсивности, IR), являются мерой функции CFTR. Анализ 189 испытуемых показал идеальную дискриминацию между муковисцидозом и без муковисцидоза.

Анализ морфологии органоидов прямой кишки (ROMA): диагностический анализ при муковисцидозе

Diagnosis of cystic fibrosis (CF) is not always straightforward, especially when sweat chloride concentration is intermediate and/or less than two ...

ROMA может различать органоиды от субъектов с муковисцидозом и без него, когда обнаружено менее двух болезнетворных мутаций CFTR и когда фторид пота является промежуточным. ROMA может быть выполнен в любом возрасте и с низкой частотой осложнений. Анализ является полуавтоматизированным и стандартизированным, и биопсия может быть отправлена в центральную лабораторию для анализа.Органоиды, используемые для ROMA, также могут быть использованы для доступа к модуляторной эффективности CFTR, а ROMA может помочь в измерении степени восстановления функции CFTR. Через сутки после нанесения покрытия окрасьте органоиды кальциевым зеленым цветом. Поверните и слегка наклоните пластину с крышкой на несколько раз, чтобы обеспечить равномерное распределение кальциевого зеленого во всей лунке.Снова инкубируйте пластину, в течение 15-30 минут при 37 градусах Цельсия и 5% углекислого газа, чтобы обеспечить окрашивание всех органоидов в колодцах. Чтобы сосредоточиться на органоидах, определите оптимальное положение X и Y и сосредоточьтесь на органоидах в каждой лунке вручную, используя конфокальный микроскоп. И сохраните эти позиции в программном обеспечении для обработки изображений.Затем, используя настройки визуализации живых клеток, установите излучение на 488 нанометров и возбуждение на 515 нанометров и объектив увеличения LD на 5X. Чтобы получить органоидные снимки, делайте снимки единичным направленным способом с разрешением 1024 пикселя на 1024 пикселя и глубиной 16 бит с помощью конфокального микроскопа. Выберите интенсивность лазера и мастер-усиление для оптимальной визуализации морфологических различий между органоидами муковисцидоза и нецистинозного фиброза.Запустите эксперимент для захвата изображений. После этого сохраните одно изображение на скважину для всех 32 скважин в формате микроскопа и экспортируйте их в виде файлов TIFF. Сначала загрузите файлы TIFF в программное обеспечение для анализа изображений, а затем выполните первую проверку качества на основе критериев исключения, определенных оператором.Исключите набор изображений, если присутствует много дифференцированных или мертвых структур или обломков, когда плотность покрытия недостаточна, когда присутствует слишком много или слишком мало органоидов, и в случае неадекватного распределения флуоресценции. Чтобы подготовить изображения к анализу, создайте и откройте один сетевой файл данных из всех 32 изображений для каждой органоидной культуры, что позволит одновременно анализировать все 32 изображения на субъект. И перекалибруйте изображения так, чтобы один пиксель соответствовал 2,5 на 2,5 микрометра.Затем очертите структуры, используя более низкий порог интенсивности 4 500 и верхний порог 65 535, отключив функции плавности и очистки, включив функцию заполнения отверстий и поместив отдельную функцию в 3X. Чтобы подсчитать органоиды, выберите все структуры, превышающие или равные 40 микрометрам. Затем нажмите кнопку обновления измерения ND, и подсчитанные органоиды будут пронумерованы.Чтобы измерить интенсивность и цикличность для расчета, выберите все структуры, превышающие или равные 60 микрометрам, и подсчитайте. Затем удалите все структуры, касающиеся границ картины. Затем размываем один пиксель от границы каждой, более или равной 60-микрометровой структуре, и измеряем среднюю интенсивность каждой структуры.После этого снова выберите все структуры, превышающие или равные 60 микрометрам, и размывайте 10 пикселей от границы каждой, более или равной структуре 60 микрометров. Затем измерьте среднюю интенсивность каждой эродированной структуры и цикличность каждой структуры. Затем рассчитайте коэффициент интенсивности, разделив измерение интенсивности после эрозии 25 микрометров от границы каждой, более или равной 60 микрометровой структуре на среднее измерение интенсивности после эрозии 2,5 микрометров от границы каждой, более или равной 60 микрометровой структуре.Выполните вторую проверку качества на основе критериев исключения, определенных программным обеспечением, как описано в рукописи. Органоиды из 212 субъектов были собраны и сфотографированы. После исключения 23 наборов изображений, органоидных изображений от 167 субъектов с муковисцидозом и двумя мутациями CFTR, вызывающими заболевание, и от 22 субъектов, не связанных с муковисцидозом, было обнаружено, что среднее количество органоидов на культуру составляет 1 519.Соотношение интенсивности и индекс циркулярности были определены для органоидов субъектов с муковисцидозом и без него. Используя эти два индекса, была получена идеальная различение между органоидами от субъектов с муковисцидозом и без него не только при использовании данных из всех 32 скважин, но и когда восемь лунок были выбраны случайным образом для каждой культуры. Получены гистограммы для четырех иллюстративных культур, показывающие распределение значений циркулярности, интенсивности центральной части органоида и интенсивности всего органоида.Контроль качества имеет важное значение, так как для точного расчета коэффициента интенсивности и индекса цикличности требуются высококачественные снимки. Органоидные культуры, созданные для ROMA, также могут быть использованы для физических пособий для проверки эффекта лечения CFTR. РНК, ДНК и белок могут быть извлечены для дальнейшей характеристики вариантов CFTR.

Research

JoVE Journal

Medicine

Rectal Organoid Morphology Analysis (ROMA): A Diagnostic Assay in Cystic Fibrosis

Diagnostic Ultrasound Imaging of Mouse Diaphragm Function

Диагностическая ультразвуковая Визуализация Мышь диафрагмы функции

Function analysis of rodent respiratory skeletal muscles, particularly the diaphragm, is commonly performed by isolating muscle strips using invasive ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Сонной артерии Настои для Фармакокинетические и фармакодинамические анализ Таксаны в мышах

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat

Диметилнитрозамин Индуцированные печени Фиброз Модель в Rat

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg ...

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

Форсколин-индуцированной Отек в кишечном органоидов:<em&gt; In Vitro</em&gt; Анализ для оценки ответа на наркотики в больных муковисцидозом

Recently-developed cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR)-modulating drugs correct surface expression and/or function of the mutant ...

Semi-automated Analysis of Mouse Skeletal Muscle Morphology and Fiber-type Composition

Полуавтоматические анализ морфологии скелетных мышц мыши и волоконно тип состава

For years, distinctions between skeletal muscle fiber types were best visualized by myosin-ATPase staining. More recently, immunohistochemical staining of ...

Optimized LC-MS/MS Method for the High-throughput Analysis of Clinical Samples of Ivacaftor, Its Major Metabolites, and Lumacaftor in Biological Fluids of Cystic Fibrosis Patients

Оптимизированный метод LC-MS/MS для высокой пропускной способности анализа клинических образцов Ivacaftor, его основных метаболитов и Lumacaftor в биологических жидкостях больных муковисцидозом

Defects in the cystic fibrosis trans-membrane conductance regulator (CFTR) are the cause of cystic fibrosis (CF), a disease with life-threatening ...

Standardized Measurement of Nasal Membrane Transepithelial Potential Difference (NPD)

Standardized Measurement of Nasal Membrane Transepithelial Potential Difference NPD

Стандартные измерения перепада Transepithelial потенциал слизистой (NPD)

We describe a standardized measurement of nasal potential difference (NPD). In this technique, cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) ...

Generation of Human Nasal Epithelial Cell Spheroids for Individualized Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Study

Поколение сфероидов человеческого носа эпителиальных клеток для исследования регулятор трансмембранной проводимости индивидуализированные муковисцидоза

While the introduction of Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) modulator drugs has revolutionized care in Cystic Fibrosis (CF), the ...

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of &#946;-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Количественный анализ микро CT Aortopathy в мышиной модели β-aminopropionitrile индуцированной аневризмы аорты и рассечение

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of ...

Design and Development of a Model to Study the Effect of Supplemental Oxygen on the Cystic Fibrosis Airway Microbiome

Проектирование и разработка модели для изучения влияния дополнительного кислорода на микробиом дыхательных путей муковисцидоза

Airway microbial communities are thought to play an important role in the progression of cystic fibrosis (CF) and other chronic pulmonary diseases. ...