Name: isogenic kidney glomerulus chip engineered from human induced pluripotent stem cells
Uploaded: 2022-11-04T13:15:00
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이 연구는 듀크 대학의 프랫 공과 대학, 듀크 의과 대학의 신장학과, 생물 의학 연구의 화이트 헤드 장학금 및 S. Musah의 Genentech 연구 상이 지원했습니다. Y. Roye는 듀크 대학교 의생명공학과에서 듀크 대학교-알프레드 P. 슬론 재단 장학금과 윌리엄 M. "몬티" 라이커트 대학원 펠로우십을 받고 있습니다. DU11 (Duke University 클론 #11) iPS 세포주는 Duke iPSC Core Facility에서 생성되었으며 Duke University의 Bursac Lab에서 제공했습니다. 저자는 기술 지원과 유용한 토론에 대해 N. Abutaleb, J. Holmes, R. Bhattacharya 및 Y. Zhou에게 감사드립니다. 저자는 또한 원고에 대한 유용한 의견을 주신 Musah Lab 회원들에게 감사드립니다. 저자는 Acuri C6 유세포분석기를 선물한 Segura Lab에 감사를 표합니다.

1. 기저막 매트릭스 용액 및 코팅 기판 준비
<ol><li>기저막 매트릭스 1을 4°C에서 얼음 위에서 밤새 해동시킨다. 희석 비율에 대한 제조업체의 제안에 따른 분취량. 50mL 원뿔형 튜브와 피펫을 사용하여 완전히 해동되고 용해될 때까지 적절한 양의 기저막 매트릭스 1을 25mL의 차가운 DMEM/F12에 완전히 혼합합니다.<ol><li>냉동 분취량을 용해하려면 200mL의 차가운 DMEM/F25에서 ~12μL를 취하여 ?...

<ol>
	<li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+disease+model+of+diabetic+nephropathy+in+a+glomerulus-on-a-chip+microdevice.">A disease model of diabetic nephropathy in a glomerulus-on-a-chip microdevice.</a> Lab on a Chip. 17 (10), 1749-1760 (2017).</li><li>Musah, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mature+induced-pluripotent-stem-cell-derived+human+podocytes+reconstitute+kidney+glomerular-capillary-wall+function+on+a+chip.">Mature induced-pluripotent-stem-cell-derived human podocytes reconstitute kidney glomerular-capillary-wall function on a chip.</a> Nature Biomedical Engineering. 1 (5), 1-12 (2017).</li><li>Petrosyan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+glomerulus-on-a-chip+to+recapitulate+the+human+glomerular+filtration+barrier.">A glomerulus-on-a-chip to recapitulate the human glomerular filtration barrier.</a> Nature Communications. 10 (1), 3656 (2019).</li><li>Hass, R., Kasper, C., B&#246;hm, S., Jacobs, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+populations+and+sources+of+human+mesenchymal+stem+cells+(MSC):+A+comparison+of+adult+and+neonatal+tissue-derived+MSC.">Different populations and sources of human mesenchymal stem cells (MSC): A comparison of adult and neonatal tissue-derived MSC.</a> Cell Communication and Signaling. 9, 12 (2011).</li><li>Altschuler, S. J., Wu, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+heterogeneity:+when+do+differences+make+a+difference.">Cellular heterogeneity: when do differences make a difference.</a> Cell. 141 (4), 559-563 (2010).</li><li>Da Sacco, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+source+of+cultured+podocytes.">A novel source of cultured podocytes.</a> PloS One. 8 (12), 81812 (2013).</li><li>Singh, V. K., Kalsan, M., Kumar, N., Saini, A., Chandra, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cells:+applications+in+regenerative+medicine,+disease+modeling,+and+drug+discovery.">Induced pluripotent stem cells: applications in regenerative medicine, disease modeling, and drug discovery.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 3, 2 (2015).</li><li>Ebert, A. D., Liang, P., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cells+as+a+disease+modeling+and+drug+screening+platform.">Induced pluripotent stem cells as a disease modeling and drug screening platform.</a> Journal of cardiovascular pharmacology. 60 (4), 408-416 (2012).</li><li>Patsch, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+vascular+endothelial+and+smooth+muscle+cells+from+human+pluripotent+stem+cells.">Generation of vascular endothelial and smooth muscle cells from human pluripotent stem cells.</a> Nature Cell Biology. 17 (8), 994-1003 (2015).</li><li>Musah, S., Dimitrakakis, N., Camacho, D. M., Church, G. M., Ingber, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+differentiation+of+human+induced+pluripotent+stem+cells+into+mature+kidney+podocytes+and+establishment+of+a+Glomerulus+Chip.">Directed differentiation of human induced pluripotent stem cells into mature kidney podocytes and establishment of a Glomerulus Chip.</a> Nature Protocols. 13 (7), 1662-1685 (2018).</li><li>Burt, M., Bhattachaya, R., Okafor, A. E., Musah, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guided+differentiation+of+mature+kidney+podocytes+from+human+induced+pluripotent+stem+cells+under+chemically+defined+conditions.">Guided differentiation of mature kidney podocytes from human induced pluripotent stem cells under chemically defined conditions.</a> Journal of Visualized Experiments. (161), e61299 (2020).</li><li>Roye, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+personalized+glomerulus+chip+engineered+from+stem+cell-derived+epithelium+and+vascular+endothelium.">A personalized glomerulus chip engineered from stem cell-derived epithelium and vascular endothelium.</a> Micromachines. 12 (8), 967 (2021).</li><li>Roselli, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Podocin+localizes+in+the+kidney+to+the+slit+diaphragm+area.">Podocin localizes in the kidney to the slit diaphragm area.</a> The American Journal of Pathology. 160 (1), 131-139 (2002).</li><li>Ruotsalainen, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephrin+is+specifically+located+at+the+slit+diaphragm+of+glomerular+podocytes.">Nephrin is specifically located at the slit diaphragm of glomerular podocytes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 96 (14), 7962-7967 (1999).</li><li>Privratsky, J. R., Newman, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PECAM-1:+regulator+of+endothelial+junctional+integrity.">PECAM-1: regulator of endothelial junctional integrity.</a> Cell and Tissue Research. 355 (3), 607-619 (2014).</li><li>Menon, M. C., Chuang, P. Y., He, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+glomerular+filtration+barrier:+components+and+crosstalk.">The glomerular filtration barrier: components and crosstalk.</a> International Journal of Nephrology. 2012, 749010 (2012).</li><li>Abutaleb, N. O., Truskey, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+and+characterization+of+human+iPSC-derived+vascular+endothelial+cells+under+physiological+shear+stress.">Differentiation and characterization of human iPSC-derived vascular endothelial cells under physiological shear stress.</a> STAR Protocols. 2 (2), 100394 (2021).</li><li>Pammolli, F., Magazzini, L., Riccaboni, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+productivity+crisis+in+pharmaceutical+R&amp;D.">The productivity crisis in pharmaceutical R&amp;D.</a> Nature Reviews. Drug Discovery. 10 (6), 428-438 (2011).</li><li>Atchison, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=iPSC-derived+endothelial+cells+affect+vascular+function+in+a+tissue-engineered+blood+vessel+model+of+Hutchinson-Gilford+progeria+syndrome.">iPSC-derived endothelial cells affect vascular function in a tissue-engineered blood vessel model of Hutchinson-Gilford progeria syndrome.</a> Stem Cell Reports. 14 (2), 325-337 (2020).</li></ol>

이 보고서에서는 동종 인간 iPS 세포주에서 혈관 내피 및 사구체 상피(족세포)를 유도하는 프로토콜과 이러한 세포를 사용하여 신장 사구체의 구조, 조직-조직 인터페이스 및 분자 여과 기능을 모방하는 3D 장기 온 칩 시스템을 설계하는 방법을 간략하게 설명합니다. 이 사구체 칩에는 내피와 사구체 상피가 장착되어 있어 함께 분자를 선택적으로 필터링하는 장벽을 제공합니다. 
<p class="jove_conte...

Organ-on-a-chip 장치는 분자 및 기계적 자극과 혈관 형성을 사용하여 특정 장기의 구조와 기능을 모델링하는 조직-조직 인터페이스를 형성하는 동적 3D in vitro 모델입니다. 신장의 사구체 (사구체 칩)를 재현하는 것을 목표로하는 이전에 확립 된 organ-on-a-chip 장치는 동물 세포주 1 또는 이종 소스 2,3의 인간1 차 및 불멸화 된 세포주로 구성되었습니다. 유 전적으로 이질적인 세포 공급원의 사용은 환자 특이 적 반응 및 유전학 또는 질병 메커니즘에 대한 연구를 크게 제한하는 변이를 나타냅니다 4,5. 이 문제를 해결하는 것은 시험관 내 모델 2,3,6 엔지니어링을 위한 보다 정확한 미세 환경을 제공하기 위해 보존된 분자 및 유전적 프로필을 가진 특정 개체에서 유래하는 등종 세포주의 가용성에 달려 있습니다. 인간 기원의 이소겐 세포주는 이제 인간 iPS 세포 배양의 발전으로 인해 쉽게 생성될 수 있습니다. 인간 iPS 세포는 전형적으로 비침습적으로 공급되고, 무기한으로 자가 갱신될 수 있고, 거의 모든 세포 유형으로 분화하기 때문에, 이들은 사구체 칩 7,8과 같은 시험관내 모델의 확립을 위한 매력적인 세포 공급원 역할을 한다. 사구체 여과 장벽은 혈액 여과의 주요 부위입니다. 혈액은 먼저 사구체 기저막인 혈관 내피를 통해 여과되고 마지막으로 족세포라는 특수 상피를 통해 여과됩니다. 여과 장벽의 세 가지 구성 요소 모두 분자의 선택적 여과에 기여합니다. 여기에 제시된 것은 단일 인간 iPS 세포 공급원으로부터 혈관 내피 및 사구체 상피와 인터페이스되는 장기 온 칩 장치를 확립하는 프로토콜입니다. 이 프로토콜은 사구체 여과 장벽을 재현하기 위해 등종 및 혈관 화 칩을 설계하는 데 특히 유용하지만, 동종 성 '바디 온 칩'시스템과 같은 다른 유형의 개인화 된 장기 온 칩 및 다중 기관 플랫폼을 개발하기위한 청사진도 제공합니다.
본원에 기재된 프로토콜은 인간 iPS 세포를 2개의 별개의 혈통 - 측면 중배엽 및 중배엽 세포로 발산하는 것으로 시작하고, 이들은 연속적으로 각각 혈관 내피 및 사구체 상피로 분화된다. 측면 중배엽 세포를 생성하기 위해, 인간 iPS 세포를 기저막 매트릭스 1-코팅된 플레이트에 시딩하고, Wnt 활성제, CHIR 99021 및 강력한 중배엽 유도제인 뼈-형태형성 4(BMP4)가 보충된 N2B27 배지에서 3일(배지 교환 없이) 배양하였다. 생성된 측면 중배엽 세포는 이전에 근접(T), 혼합 쌍형 호메오박스(MIXL) 및 에오메소더민(EOMES)의 발현을 특징으로 했습니다.9. 이어서, 측면 중배엽 세포를 VEGF165 및 포스콜린이 보충된 배지에서 4일 동안 배양하여 자기 활성화 세포 분류(MACS)를 사용하여 VE-카데린 및/또는 PECAM-1 발현에 기초하여 분류된 혈관 내피 세포를 유도하였다. 생성된 혈관 내피 세포 (viEC)를 미세유체 장치에서 파종할 준비가 될 때까지 기저막 매트릭스 3-코팅된 플라스크 상에서 배양함으로써 확장시켰다.
중배엽 세포를 생성하기 위해, 인간 iPS 세포를 기저막 매트릭스 2-코팅된 플레이트에 시딩하고, 액티빈 A 및 CHIR99021을 함유하는 배지에서 2일 동안 배양하였다. 생성된 중배엽 세포는 이전에 기술된 바와 같이 HAND1, 구스코이드 및 상완골(T)의 발현을 특징으로 하였다 2,10,11. 중간 중배엽 (IM) 세포 분화를 유도하기 위해, 중배엽 세포를 BMP-7 및 CHIR99021이 보충된 배지에서 14일 동안 배양하였다. 생성된 IM 세포는 Wilm 종양 1 (WT1), 쌍을 이루는 상자 유전자 2 (PAX2) 및 홀수 건너뛴 관련 단백질 1 (OSR-1)2,10,11을 발현합니다.
2채널 폴리디메틸실록산(PDMS) 기반 미세유체 칩은 시험관 내에서 사구체 여과 장벽의 구조를 요약하도록 설계되었습니다. 비뇨기 채널은 1,000 μm x 1,000 μm (w x h)이고 모세관 채널 치수는 1,000 μm x 200 μm (w x h)입니다. 주기적 스트레칭 및 이완 주기는 유체 채널의 각 측면에 존재하는 중공 챔버에 의해 촉진되었습니다. 세포를 비뇨기 및 모세관 채널을 분리하는 유연한 PDMS 막(두께 50μm)에 시딩했습니다. 멤브레인에는 육각형 기공(직경 7μm, 간격 40μm)이 있어 세포 간 신호 전달을 촉진하는 데 도움이 됩니다(그림 1A)2,12. IM 유도가 완료되기 이틀 전에, 마이크로유체 칩을 기저막 매트릭스 2로 코팅하였다. viEC는 IM 유도가 완료되기 1일 전에 내피 유지 배지를 사용하여 미세유체 칩의 모세관 채널에 시딩하고, ECM 코팅된 PDMS 멤브레인의 기저부에서 세포 접착을 가능하게 하기 위해 칩을 거꾸로 뒤집었습니다. IM 유도가 완료된 날에, 세포를 BMP7, 액티빈 A, CHIR99021, VEGF165, 및 모든 트랜스레티노산이 보충된 배지를 사용하여 마이크로유체 칩의 비뇨기 채널 내로 시딩하여 칩 내 족세포 분화를 유도하였다. 다음날, 배지 저장소를 Podocyte 유도 배지 및 내피 유지 배지로 채우고 0.4Hz에서 10 % 기계적 변형 및 유체 흐름 (60μL / h)을 칩에 적용했습니다.
세포화된 미세유체 칩을 Podocyte 유도 배지(비뇨기 채널 내) 및 내피 유지 배지(혈관 채널 내)를 사용하여 추가로 5일 동안 배양하였다. 생성된 신장 사구체 칩을 족세포 및 내피 세포 모두에 대한 유지 배지에서 최대 7일 동안 추가로 배양하였다. 분화된 족세포는 포도신 및 네프린 13,14를 포함한 계통 특이적 단백질을 양성으로 발현한 반면, viEC는 혈통 식별 단백질 PECAM-1 및 VE-Cadherin을 양성으로 발현했으며, 이들 모두는 사구체 여과 장벽 15,16의 무결성을 유지하는 데 필수적인 분자입니다. . 족세포와 viEC는 모두 조직 성숙과 기능에도 중요한 가장 풍부한 사구체 기저막 단백질인 콜라겐 IV를 분비하는 것으로 밝혀졌습니다.
사구체 칩의 여과 장벽 (내피, 기저막 및 상피)의 3 성분 시스템은 분자를 선택적으로 필터링하고 화학 요법, 신 독성 약물 치료에 반응하는 것으로 밝혀졌습니다. 약물 치료 결과는 사구체 칩이 신 독성 연구 및 질병 모델링에 사용될 수 있음을 나타냅니다. 이 프로토콜은 등종 iPS 세포 유도체로부터 기능성 미세유체 신장 사구체 칩을 엔지니어링하기 위한 일반적인 지침을 제공합니다. 엔지니어링 칩의 다운스트림 분석은 연구원이 원하는 대로 수행할 수 있습니다. 사구체 칩을 사용하여 약물로 인한 사구체 손상을 모델링하는 방법에 대한 자세한 내용은 이전 간행물 2,12를 참조하십시오.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Antibodies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488- and Alexa Fluor 594-conjugated secondary antibodies</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>A32744; A32754; A-11076; A32790; A21203; A11015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen IV</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>14-9871-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nephrin</td>
			<td>Progen</td>
			<td>GP-N2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PECAM-1</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>AF806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Podocin</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab50339</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VE-Cadherin</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-9989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basement membrane matrices</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Fibronectin, Human</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356008</td>
			<td>Basement membrane (3)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iMatrix-511 Laminin-E8 (LM-E8) fragment</td>
			<td>Iwai North America</td>
			<td>N8922012</td>
			<td>Basement membrane matrix (2)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel hESC-qualified matrix, 5-mL vial</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>354277</td>
			<td>Basement membrane matrix (1); may show lot-to-lot variation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cells</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DU11 human iPS cells</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>The DU11 (Duke University clone #11) iPS cell line was generated at the Duke iPSC Core Facility and provided to us by the Bursac Lab at Duke University. The line has been tested and found to be free of mycoplasma (last test in November 2021) and karyotype abnormalities (July 2019)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture medium growth factors and media supplements</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5M EDTA, pH 8.0</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15575020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>21985023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin from Bovine serum, Texas Red conjugate</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>A23017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>All-trans retinoic acid (500 mg)</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>72262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 serum-free supplement</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 supplement (50x) without Vitamin A</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>12587010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHIR99021</td>
			<td>Stemgent</td>
			<td>04-0004</td>
			<td>May show lot-to-lot variation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete medium kit with CultureBoost-R</td>
			<td>Cell Systems</td>
			<td>4Z0-500-R</td>
			<td>Podocyte maintenance media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>12634028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12 with GlutaMAX supplement</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>10565042</td>
			<td>DMEM/F12 with glutamine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forskolin (Adenylyl cyclase activator)</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab120058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMAX supplement</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>35050061</td>
			<td>glutamine supplement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat-inactivated FBS</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>10082147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin solution</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>7980</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Activin A</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>PHC9544</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human BMP4</td>
			<td>Preprotech</td>
			<td>120-05ET</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human BMP7</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>PHC9544</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human VEGF</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>PHC9394</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inulin-FITC</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F3272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mTeSR1 medium</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>05850</td>
			<td>Human iPS cell culture media (CCM). Add 5x supplement according to the manufacturer. Human iPS CCM can be stored for up to 6 months at -20 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-2 Supplement (100x)</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>17502048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal media</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>21103049</td>
			<td>Lateral mesoderm basal media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (Phosphate-buffered saline)</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>14190-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin, liquid (100x)</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>15140-163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ROCK inhibitor (Y27632)</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>1254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemPro-34 SFM</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>10639011</td>
			<td>Endothelial cell culture medium (CCM). Add supplement according to manufacturer. Endothelial CCM can be stored for up to two weeks at 4 &#176;C or -20 &#176;C for up to 6 months.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TGF-Beta inhibitor (SB431542)</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>72234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzymes and other reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>A1110501</td>
			<td>Cell detachment buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl Suloxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D2438</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol solution, 70% (vol/vol), biotechnology grade</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97065-058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>28906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile distilled water</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>15230162</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97062-208</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin EDTA, 0.05%</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>25300-120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(Orb) Hub module</td>
			<td>Emulate</td>
			<td>ORB-HM1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100mm x 15 mm round petri dish</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>FB087579B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>120 x 120 mm square cell culture dish</td>
			<td>VWR</td>
			<td>688161</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accuri C6</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspirating pipettes, individually wrapped</td>
			<td>Corning</td>
			<td>29442-462</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspirating Unit</td>
			<td>SP Bel-Art</td>
			<td>F19917-0150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Avanti J-15R Centrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>B99516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical centrifuge tube, 15 mL</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical centrifuge tube, 50 mL</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EVOS M7000</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>AMF7000</td>
			<td>Fluorescent microscope to take images of fixed and stained cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemocytometer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>100503-092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heracell VIOS 160i CO2 incubator</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>51030403</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Zeiss Axio Observer equipeed with AxioCam 503 camera</td>
			<td>Carl Zeiss Micrscopy</td>
			<td>491916-0001-000(microscope) ; 426558-0000-000(camera)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimberly-Clark nitrile gloves</td>
			<td>VWR</td>
			<td>40101-346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes, large</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21905-049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leoca SP8 Upright Confocal Microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Media reservoir (POD Portable Module)</td>
			<td>Emulate</td>
			<td>POD-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate shaker</td>
			<td>VWR</td>
			<td>12620-926</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Organ-chip</td>
			<td>Emulate</td>
			<td>S-1 Chip</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Organ-chip holder</td>
			<td>Emulate</td>
			<td>AK-CCR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P10 precision barrier pipette tips</td>
			<td>Denville Scientific</td>
			<td>P1096-FR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P100 barrier pipette tips</td>
			<td>Denville Scientific</td>
			<td>P1125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P1000 barrier pipette tips</td>
			<td>Denville Scientific</td>
			<td>P1121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P20 barrier pipette tips</td>
			<td>Denville Scientific</td>
			<td>P1122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P200 barrier pipette tips</td>
			<td>Denville Scientific</td>
			<td>P1122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasma Asher</td>
			<td>Quorum tech</td>
			<td>K1050X RF</td>
			<td>This Plasma Etcher/Asher/Cleaner was used as a part of Duke University&#39;s Shared Materials Instrumentation Facility (SMiF).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round bottom polystyrene test tube with cell strainer snap cap</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipette, 10 mL, indivdually wrapped</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356551</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipette, 25 mL, indivdually wrapped</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipette, 5 mL, indivdually wrapped</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356543</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steriflip, 0.22 &#181;m, PES</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>SCGP00525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Microcentrifuge tubes</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td>1138W14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75cm2 cell culture flask with vent cap</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430641U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture-treated 12 well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture-treated 6 well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum modulator and perstaltic pump (Zoe Culture Module)</td>
			<td>Emulate</td>
			<td>ZOE-CM1</td>
			<td>Organ Chip Bioreactor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VE-Cadherin CD144 anti-human antibody - APC conjugated</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-126-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wide-beveled cell lifter</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD144 MicroBeads, human</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-097-857</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD31 MicroBead Kit, human</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-091-935</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LS columns</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-042-401</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isogenic kidney glomerulus chip engineered from human induced pluripotent stem cells

만성 신장 질환(CKD)은 미국 성인 인구의 15%에 영향을 미치지만 인간의 생물학적 반응과 신독성을 정확하게 예측할 수 있는 기능 모델이 부족하여 표적 치료법의 확립이 제한되었습니다. 신장 정밀 의학의 발전은 이러한 한계를 극복하는 데 도움이 될 수 있습니다. 그러나, 이전에 확립된 인간 신장 사구체의 시험관내 모델(혈액 여과를 위한 주요 부위이자 많은 질병 및 약물 독성의 주요 표적)은 일반적으로 제한된 기능적 특성과 타의 추종을 불허하는 유전적 배경을 가진 이질적인 세포 집단을 사용합니다. 이러한 특성은 환자 특정 질병 모델링 및 치료 발견에 대한 적용을 크게 제한합니다. 
이 논문은 단일 환자의 인간 유도 만능 줄기 (iPS) 세포 유래 사구체 상피 (podocytes)와 혈관 내피를 통합하여 등성 및 혈관 화 된 미세 유체 신장 사구체 칩을 설계하는 프로토콜을 제시합니다. 결과 사구체 칩은 줄기 세포 유래 내피 및 상피 세포층으로 구성되어 계통 특이 적 마커를 발현하고 기저막 단백질을 생성하며 신장의 사구체 여과 장벽과 유사한 조직-조직 인터페이스를 형성합니다. 설계된 사구체 칩은 분자를 선택적으로 필터링하고 약물로 인한 신장 손상을 요약합니다. 이소제닉 세포 유형을 사용하여 신장 사구체의 구조와 기능을 재구성하는 능력은 환자 특이성으로 신장 질환을 모델링하고 신장 정밀 의학 및 관련 응용 분야를 위한 장기 온 칩의 유용성을 발전시킬 수 있는 기회를 제공합니다.

여기서 우리는 사구체의 기능적 3D 시험관 내 모델이 인간 iPS 세포의 등종 공급원으로부터 혈관화되고 상피화될 수 있음을 보여줍니다. 특히, 이 프로토콜은 인간 iPS 세포 기술, 특히 특수 세포 유형으로 분화하는 능력을 적용하여 환자 특정 수준에서 인간 신장의 구조와 기능을 모델링하기 위해 미세유체 장치와 통합될 수 있는 신장 사구체 상피(podocytes) 및 혈관 내피(viECs)를 생성하는 방법...

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Isogenic Kidney Glomerulus Chip Engineered from Human Induced Pluripotent Stem Cells

여기에 제시된 것은 인간 유도 만능 줄기 세포에서 분화 된 유 전적으로 일치하는 상피 및 혈관 내피 세포를 통합하여 신장 사구체 여과 장벽의 구조와 기능을 요약하는 개인화 된 장기 온 칩 시스템을 설계하는 프로토콜입니다. 이 생체 공학 시스템은 신장 정밀 의학 및 관련 응용 분야를 발전시킬 수 있습니다.

인간 유도 만능 줄기 세포로 설계된 Isogenic 신장 사구체 칩

Chronic kidney disease (CKD) affects 15% of the U.S. adult population, but the establishment of targeted therapies has been limited by the lack of ...

동종 사구체 칩은 환자 특이적 질병 모델링 및 신독성 테스트 및 고급 정밀 의학 응용 프로그램을 가능하게 합니다. 사구체 상피와 내피는 인간 유도 만능 줄기 세포 또는 IPSC의 단일 집단에서 파생됩니다. IPSC는 무제한자가 재생을 가지고 있으며 거의 모든 세포 유형으로 분화 할 수 있습니다.이 기술은 병리학 적 세포 표현형 및 질병을 평가하는 데 사용할 수 있습니다. 환자 별 장기 칩은 약물 스크리닝 및 기계 연구를위한 플랫폼 역할도 할 수 있습니다. 이 모델은 특정 환자에게 개인화 된 바디 온 칩 시스템의 개발에 적용될 수 있습니다.이 시스템은 임상 테스트 전에 환자 별 반응을 예측할 수있는 잠재력을 가지고 있습니다. 25 마이크로 리터의 기저막 매트릭스 2 용액을 비뇨기 채널에 부드럽게 추가하고 20 마이크로 리터를 칩의 모세관 채널에 추가하여 시작하십시오. 두 개의 멸균 15 밀리리터 원추형 튜브 캡을 가져 와서 500 마이크로 리터의 멸균 증류수로 채 웁니다.건조를 방지하기 위해 페트리 접시에 뚜껑을 놓고 접시에 뚜껑을 놓습니다. 섭씨 37도에서 밤새 배양하십시오. 진행하여, 혈관 내피 세포의 15일간 배양물을 함유하는 T75 플라스크로부터 배지를 90% confluency로 흡인한다.5 밀리리터의 세포 분리 완충액을 추가하고 섭씨 37도에서 5-7 분 동안 배양합니다. 그런 다음 세포를 15 밀리리터 원추형 튜브로 옮기고 5 밀리리터의 DMEM / F-12를 추가합니다. 200배 G에서 5분 동안 원심분리합니다.상청액을 제거하고 세포를 300 마이크로리터의 내피 유지 배지에 재현탁시킨다. 혈구계로 세포를 세어 약 2 백만 개의 세포를 얻습니다. P200 배리어 팁을 사용하여 미세유체 칩의 상단 및 하단 채널을 200마이크로리터의 DMEM/F-12로 플러시하는 동시에 콘센트 주변에서 흡인합니다.흡인기에 부착된 P200 배리어 팁을 하단 채널의 출구에서 멀리 떨어뜨려 칩을 단단히 잡습니다. 20 마이크로 리터의 혈관 내피 세포 현탁액을 칩의 모세 혈관 채널에 단단히 주입하고 출구 주변에서 배지를 조심스럽게 흡인합니다. 현미경으로 기포 또는 고르지 않은 파종 밀도를 확인하십시오.세포가 유연한 PDMS 멤브레인의 기저부에 부착 될 수 있도록 칩을 부드럽게 뒤집습니다. 칩을 홀더 카트리지에 넣고 멤브레인이 마르지 않도록 카트리지에 PBS 3ml를 추가합니다. 칩을 섭씨 37도에서 3 시간 동안 배양하십시오.현미경으로 하단 채널을 확인하여 유연한 PDMS 멤브레인에 부착된 세포의 합류 층이 있는지 확인합니다. 모세관 채널 출구의 주변으로부터 흡인하면서 바닥 채널의 입구에 200 마이크로리터의 내피 유지 배지를 첨가하여 부착되지 않은 세포를 세척한다. 칩을 홀더 카트리지에 다시 넣고 섭씨 37도에서 밤새 배양합니다.다음날, 모세관 채널을 200 마이크로 리터의 내피 유지 배지로 부드럽게 씻어냅니다. 200 마이크로 리터의 DMEM / F-12로 비뇨기 채널을 플러시하고 입구 및 출구 포트에 50 마이크로 리터의 DMEM / F-12를 떨어 뜨립니다. 중간 중배엽 세포를 진행하고, 12 웰 플레이트의 각 웰에서 중간 중배엽 유도 배지를 1 밀리리터의 트립신 EDTA로 교체하고 섭씨 37도에서 5 분 동안 배양한다.세포 리프터를 사용하여 세포를 부드럽게 긁어내고 피펫팅을 사용하여 세포를 해리합니다. 각 웰에 2 밀리리터의 트립신 중화 용액을 넣고 세포를 50 밀리리터의 원추형 튜브로 옮깁니다. DMEM/F-12로 세포 현탁액의 부피를 50ml로 구성하고 200배 G에서 5분 동안 원심분리합니다.상청액을 흡인하고 세포를 500 마이크로리터의 중간 중배엽 유도 배지에 재현탁시켜 약 300만 개의 세포를 얻습니다. 혈구계로 세포를 세십시오. 칩을 잡고 25마이크로리터의 세포 현탁액을 칩의 비뇨기 채널에 단단히 주입하면서 출구 주변에서 배지를 조심스럽게 흡인합니다.거품이나 고르지 않은 세포 파종 밀도를 확인하십시오. 3 밀리리터의 PBS를 칩 홀더 카트리지에 넣고 섭씨 37도에서 3 시간 동안 배양합니다. 배양 후, 두 채널을 200 마이크로리터의 각각의 세포 배양 배지로 플러시한다.빈 P200 장벽 팁을 비뇨기 및 모세관 채널의 양쪽 출구에 부착합니다. 200 마이크로리터의 내피 유지 배지를 피펫팅하고 그 중 절반을 모세관 채널 입구에 주입한다. 채널의 입구와 출구가 매체로 채워진 피펫 팁에 부착되도록 입구 내부의 피펫 팁을 해제합니다.200 마이크로 리터의 중간 중배엽 유지 배지가있는 비뇨기 채널 입구에 대해이 절차를 반복하십시오. 칩을 섭씨 37도에 내장된 팁으로 밤새 배양합니다. 칩을 장기 칩 바이오리액터에 연결하려면 먼저 채널에서 P200 팁을 제거합니다.건조를 방지하기 위해 비뇨기 및 모세관 채널의 입구와 출구에 각 매체의 물방울을 추가합니다. 3 밀리리터의 따뜻한 족세포 유도 배지를 소변 입구 저장소에 추가하고 3 밀리리터의 따뜻한 내피 유지 배지를 모세 혈관 입구 저장소에 추가합니다. 300마이크로리터의 각 매체를 출구 포트 바로 위의 출구 저장소에 추가합니다.포드를 트레이와 장기 칩 생물 반응기에 밀어 넣습니다. 회전 다이얼을 사용하여 2분 동안 프라임 사이클을 선택하고 시작합니다. 포드 밑면에 4개의 유체 포트 모두에서 작은 물방울이 있는지 육안으로 검사합니다.포드 밑면과 미세유체 칩 포트 사이의 유체 대 유체 접촉을 달성하려면 칩 캐리어를 포드 안으로 부드럽게 밀어 넣습니다. 칩 캐리어 탭을 안팎으로 부드럽게 누릅니다. 칩 표면에서 과도한 매체를 흡입합니다.장기 칩 바이오리액터 유량을 시간당 60마이크로리터로 설정합니다. 순환 변형률을 0.4Hz에서 10%로 설정합니다. 장기 칩 바이오리액터의 회전 다이얼을 사용하여 조절 주기를 선택하고 2시간 동안 실행합니다.출구 저장소에서 매체 수준의 증가를 육안으로 검사하십시오. 장기 칩 바이오리액터의 회전 다이얼을 사용하여 조절 주기를 선택합니다. 배양 17일 후, 매일 비뇨기 채널 출구 저장소에서 포트에서 대각선으로 떨어진 배지를 흡입하되 일부 배지는 저장소에 보관합니다.비뇨기 채널 입구 저장소에 5 일 동안 2 일마다 최대 3 밀리리터의 족 세포 유도 배지를 보충하십시오. 5 일 후, 비뇨기 채널에서 배지를 흡입하되 일부 배지는 저장소에 보관하십시오. 비뇨기 채널 입구 저장소에 매일 3 밀리리터의 족세포 유지 배지를 보충하십시오.유사하게, 모세관 채널 출구에서 배지를 흡입하고 내피 유지 배지로 입구 저장소를 매일 보충합니다. 이 프로토콜을 사용하여 인간 유도 만능 줄기 세포를 사용하여 혈관 내피 세포 및 족세포를 증식시킴으로써 사구체의 기능적 시험관 내 모델을 개발하기 위해 사용하였다. 족세포 유도 및 혈관 내피 증식 후 21일째에 칩 내 세포는 족세포에 대한 포도신 및 네프린, 혈관 내피 세포에 대한 VE Cadherin 및 PECAM-1과 같은 계통 식별 마커를 발현했습니다.족 세포와 혈관 내피 세포층 모두 신장 사구체에서 가장 풍부한 GBM 단백질 인 콜라겐 IV를 발현했습니다. 사구체 칩은 모세관에서 비뇨기 채널로 이눌린과 같은 작은 분자를 선택적으로 여과하는 동시에 알부민과 같은 큰 단백질이 모세관 채널을 떠나는 것을 방지하여 선택적 분자 여과 기능을 보여줍니다. 4-7 일에 내피 유도 동안 세포 수가 증가하면 세포의 2 차 층이 생길 수 있지만 과도하게 파종하면 응집이 발생하여 분화를 방해 할 수 있습니다.PDMS 칩 구성 요소의 부적절한 결합, 유체 유로의 막힘 또는 손상된 여과 장벽의 경우 비뇨기 및 모세관 채널 사이의 예기치 않은 유체 교차 흐름이 관찰될 수 있습니다. 내피와 상피를 파종하고 15 일부터 칩을 유지할 때 모든 단계에서 채널의 기포를 육안으로 검사하는 것이 중요합니다. 동종 사구체 칩에서, 임상적으로 관련된 약물 후보를 투여하여 이들의 치료 잠재력 또는 독성 수준을 시험할 수 있다.이 기술은 이제 인간 신장 질환의 유전 적 기초를 이해하고 개인화 된 치료법을 개발할 수있는 기회를 열어줍니다.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Development, Expansion, and In vivo Monitoring of Human NK Cells from Human Embryonic Stem Cells (hESCs) and Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs)

Development, Expansion, and In vivo Monitoring of Human NK Cells from Human Embryonic Stem Cells hESCs and Induced Pluripotent Stem Cells iPSCs

개발, 확대,<em&gt; 생체 내</em&gt; 인간 배아 줄기 세포 (hESCs에)에서 인간 NK 세포의 모니터링 및 및 유도 된 pluripotent 줄기 세포 (유도 만능)

We present a method for deriving natural killer (NK) cells from undifferentiated hESCs and iPSCs using a feeder-free approach. This method gives rise to ...

연구

생체공학

Transplantation of Induced Pluripotent Stem Cell-derived Mesoangioblast-like Myogenic Progenitors in Mouse Models of Muscle Regeneration

근육 재생의 마우스 모델에서 유도 만능 줄기 세포 유래 메소안지오블라스트 와 같은 근생 성 전구의 이식

Patient-derived iPSCs could be an invaluable source of cells for future autologous cell therapy protocols. iPSC-derived myogenic stem/progenitor cells ...

Isolation of Mesenchymal Stem Cells from Human Alveolar Periosteum and Effects of Vitamin D on Osteogenic Activity of Periosteum-derived Cells

인간의 치경과 파생 셀 Osteogenic 활동에 비타민 D의 효과에서 중간 엽 줄기 세포의 분리

Mesenchymal stem cells (MSCs) are present in a variety of tissues and can be differentiated into numerous cell types, including osteoblasts. Among the ...

Isolation of Adult Human Dermal Fibroblasts from Abdominal Skin and Generation of Induced Pluripotent Stem Cells Using a Non-Integrating Method

비통합 방법을 사용하여 복부 피부에서 성인 인간 진피 섬유 아세포의 분리 및 유도 만능 줄기 세포의 생성

Induced pluripotent stem cells (iPSCs) could be considered, to date, a promising source of pluripotent cells for the management of currently untreatable ...

Scalable Generation of Mature Cerebellar Organoids from Human Pluripotent Stem Cells and Characterization by Immunostaining

인간 다능성 줄기 세포에서 성숙한 소뇌 오르가노이드의 확장 가능한 생성 및 면역 염색에 의한 특성화

The cerebellum plays a critical role in the maintenance of balance and motor coordination, and a functional defect in different cerebellar neurons can ...

Preparation of Mesh-Shaped Engineered Cardiac Tissues Derived from Human iPS Cells for In Vivo Myocardial Repair

생체 내 심근 수리를 위한 인간 iPS 세포에서 파생된 메쉬 모양의 조작된 심장 조직의 준비

The current protocol describes methods to generate scalable, mesh-shaped engineered cardiac tissues (ECTs) composed of cardiovascular cells derived from ...

Guided Differentiation of Mature Kidney Podocytes from Human Induced Pluripotent Stem Cells Under Chemically Defined Conditions

화학적으로 정의된 조건하에서 인간 유도된 다능성 줄기 세포에서 성숙한 신장 분피의 유도된 분화

Kidney disease affects more than 10% of the global population and costs billions of dollars in federal expenditures. The most severe forms of kidney ...

Single-Cell Optical Action Potential Measurement in Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes

인간 유도 만능 줄기 세포 유래 심근 세포에서 단세포 광학 작용 잠재적 측정

Conventional intracellular microelectrode techniques to quantify cardiomyocyte electrophysiology are extremely complex, labor intensive, and typically ...

Fibroblast Derived Human Engineered Connective Tissue for Screening Applications

섬유아세포, 선별 애플리케이션을 위한 인간 공학형 결합 조직

Fibroblasts are phenotypically highly dynamic cells, which quickly transdifferentiate into myofibroblasts in response to biochemical and biomechanical ...

Generation of Human Blood Vessel Organoids from Pluripotent Stem Cells

만능줄기세포(Pluripotent Stem Cells)에서 인간 혈관 오가노이드(Human Blood Vessel Organoids)의 생성

An organoid is defined as an engineered multicellular in vitro tissue that mimics its corresponding in vivo organ such that it can be used to study ...