Name: isogenic kidney glomerulus chip engineered from human induced pluripotent stem cells
Uploaded: 2022-11-04T13:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isogenic Kidney Glomerulus Chip Engineered from Human Induced Pluripotent Stem Cells at JoVE.com

Эта работа была поддержана Инженерной школой Пратта в Университете Дьюка, Отделом нефрологии в Департаменте медицины Дьюка, стипендией Уайтхеда в области биомедицинских исследований и премией Genentech Research Award для С. Мусы. Ю. Рой является стипендиатом Университета Дьюка-Альфреда. Слоуна и стипендии Уильяма М. «Монти» Райхерта с факультета биомедицинской инженерии Университета Дьюка. Клеточная линия iPS DU11 (клон #11 Университета Дьюка) была сгенерирована на объекте Duke iPSC Core Facility и предоставлена нам лабораторией Bursac в Университете Дьюка. Авторы благодарят Н. Абуталеба, Дж. Холмса, Р. Бхаттачарью и Ю. Чжоу за техническую помощь и полезные обсуждения. Авторы также хотели бы поблагодарить членов лаборатории Мусах за полезные комментарии к рукописи. Авторы благодарят лабораторию Segura за подарок проточного цитометра Acuri C6.

1. Подготовка растворов базальной мембранной матрицы и покрытых подложек
<ol><li>Оттаивание фундаментальной мембранной матрицы 1 ночью на льду при 4 °C. Аликвота в соответствии с предложением завода-изготовителя в отношении коэффициента разрежения. Используя коническую трубку ?...

<ol>
	<li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+disease+model+of+diabetic+nephropathy+in+a+glomerulus-on-a-chip+microdevice.">A disease model of diabetic nephropathy in a glomerulus-on-a-chip microdevice.</a> Lab on a Chip. 17 (10), 1749-1760 (2017).</li><li>Musah, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mature+induced-pluripotent-stem-cell-derived+human+podocytes+reconstitute+kidney+glomerular-capillary-wall+function+on+a+chip.">Mature induced-pluripotent-stem-cell-derived human podocytes reconstitute kidney glomerular-capillary-wall function on a chip.</a> Nature Biomedical Engineering. 1 (5), 1-12 (2017).</li><li>Petrosyan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+glomerulus-on-a-chip+to+recapitulate+the+human+glomerular+filtration+barrier.">A glomerulus-on-a-chip to recapitulate the human glomerular filtration barrier.</a> Nature Communications. 10 (1), 3656 (2019).</li><li>Hass, R., Kasper, C., B&#246;hm, S., Jacobs, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+populations+and+sources+of+human+mesenchymal+stem+cells+(MSC):+A+comparison+of+adult+and+neonatal+tissue-derived+MSC.">Different populations and sources of human mesenchymal stem cells (MSC): A comparison of adult and neonatal tissue-derived MSC.</a> Cell Communication and Signaling. 9, 12 (2011).</li><li>Altschuler, S. J., Wu, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+heterogeneity:+when+do+differences+make+a+difference.">Cellular heterogeneity: when do differences make a difference.</a> Cell. 141 (4), 559-563 (2010).</li><li>Da Sacco, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+source+of+cultured+podocytes.">A novel source of cultured podocytes.</a> PloS One. 8 (12), 81812 (2013).</li><li>Singh, V. K., Kalsan, M., Kumar, N., Saini, A., Chandra, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cells:+applications+in+regenerative+medicine,+disease+modeling,+and+drug+discovery.">Induced pluripotent stem cells: applications in regenerative medicine, disease modeling, and drug discovery.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 3, 2 (2015).</li><li>Ebert, A. D., Liang, P., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cells+as+a+disease+modeling+and+drug+screening+platform.">Induced pluripotent stem cells as a disease modeling and drug screening platform.</a> Journal of cardiovascular pharmacology. 60 (4), 408-416 (2012).</li><li>Patsch, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+vascular+endothelial+and+smooth+muscle+cells+from+human+pluripotent+stem+cells.">Generation of vascular endothelial and smooth muscle cells from human pluripotent stem cells.</a> Nature Cell Biology. 17 (8), 994-1003 (2015).</li><li>Musah, S., Dimitrakakis, N., Camacho, D. M., Church, G. M., Ingber, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+differentiation+of+human+induced+pluripotent+stem+cells+into+mature+kidney+podocytes+and+establishment+of+a+Glomerulus+Chip.">Directed differentiation of human induced pluripotent stem cells into mature kidney podocytes and establishment of a Glomerulus Chip.</a> Nature Protocols. 13 (7), 1662-1685 (2018).</li><li>Burt, M., Bhattachaya, R., Okafor, A. E., Musah, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guided+differentiation+of+mature+kidney+podocytes+from+human+induced+pluripotent+stem+cells+under+chemically+defined+conditions.">Guided differentiation of mature kidney podocytes from human induced pluripotent stem cells under chemically defined conditions.</a> Journal of Visualized Experiments. (161), e61299 (2020).</li><li>Roye, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+personalized+glomerulus+chip+engineered+from+stem+cell-derived+epithelium+and+vascular+endothelium.">A personalized glomerulus chip engineered from stem cell-derived epithelium and vascular endothelium.</a> Micromachines. 12 (8), 967 (2021).</li><li>Roselli, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Podocin+localizes+in+the+kidney+to+the+slit+diaphragm+area.">Podocin localizes in the kidney to the slit diaphragm area.</a> The American Journal of Pathology. 160 (1), 131-139 (2002).</li><li>Ruotsalainen, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephrin+is+specifically+located+at+the+slit+diaphragm+of+glomerular+podocytes.">Nephrin is specifically located at the slit diaphragm of glomerular podocytes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 96 (14), 7962-7967 (1999).</li><li>Privratsky, J. R., Newman, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PECAM-1:+regulator+of+endothelial+junctional+integrity.">PECAM-1: regulator of endothelial junctional integrity.</a> Cell and Tissue Research. 355 (3), 607-619 (2014).</li><li>Menon, M. C., Chuang, P. Y., He, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+glomerular+filtration+barrier:+components+and+crosstalk.">The glomerular filtration barrier: components and crosstalk.</a> International Journal of Nephrology. 2012, 749010 (2012).</li><li>Abutaleb, N. O., Truskey, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+and+characterization+of+human+iPSC-derived+vascular+endothelial+cells+under+physiological+shear+stress.">Differentiation and characterization of human iPSC-derived vascular endothelial cells under physiological shear stress.</a> STAR Protocols. 2 (2), 100394 (2021).</li><li>Pammolli, F., Magazzini, L., Riccaboni, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+productivity+crisis+in+pharmaceutical+R&amp;D.">The productivity crisis in pharmaceutical R&amp;D.</a> Nature Reviews. Drug Discovery. 10 (6), 428-438 (2011).</li><li>Atchison, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=iPSC-derived+endothelial+cells+affect+vascular+function+in+a+tissue-engineered+blood+vessel+model+of+Hutchinson-Gilford+progeria+syndrome.">iPSC-derived endothelial cells affect vascular function in a tissue-engineered blood vessel model of Hutchinson-Gilford progeria syndrome.</a> Stem Cell Reports. 14 (2), 325-337 (2020).</li></ol>

В этом отчете мы описываем протокол для получения эндотелия сосудов и клубочкового эпителия (подоцитов) из изогенной клеточной линии iPS человека и использование этих клеток для разработки 3D-системы «орган на чипе», которая имитирует структуру, интерфейс ткани-ткань и молекулярную филь...

Устройства «орган на чипе» представляют собой динамические 3D-модели in vitro, которые используют молекулярную и механическую стимуляцию, а также васкуляризацию для формирования ткане-тканевых интерфейсов, которые моделируют структуру и функцию конкретных органов. Ранее установленные устройства «орган на чипе», целью которых было повторение клубочка почки (клубочковые чипы), состояли из клеточных линий животных1 или первичных и увековеченных клеточных линий человека гетерогенных источников 2,3. Использование генетически гетерогенных клеточных источников представляет вариации, которые значительно ограничивают исследования специфических для пациента реакций и генетики или механизмов заболевания 4,5. Решение этой проблемы зависит от наличия изогенных клеточных линий, происходящих от конкретных людей с сохраненными молекулярными и генетическими профилями, чтобы обеспечить более точную микросреду для разработки моделей in vitro 2,3,6. Изогенные клеточные линии человеческого происхождения теперь могут быть легко сгенерированы благодаря достижениям в культуре iPS-клеток человека. Поскольку человеческие iPS-клетки, как правило, неинвазивно получены, могут самообновляться бесконечно и дифференцироваться практически в любой тип клеток, они служат привлекательным источником клеток для создания моделей in vitro, таких как чип клубочка 7,8. Клубочковый фильтрационный барьер является первичным участком для фильтрации крови. Кровь сначала фильтруется через эндотелий сосудов, клубочковую базальную мембрану и, наконец, через специализированный эпителий, называемый подоцитами. Все три компонента фильтрационного барьера способствуют селективной фильтрации молекул. Здесь представлен протокол для создания устройства «орган на чипе», сопряженного с эндотелием сосудов и клубочковым эпителием из одного источника iPS-клеток человека. Хотя этот протокол особенно полезен для разработки изогенного и васкуляризированного чипа для рекапитуляции клубочкового фильтрационного барьера, он также обеспечивает план для разработки других типов персонализированных органов на чипах и мультиорганных платформ, таких как изогенная система «тело на чипе».
Протокол, описанный в настоящем описании, начинается с дивергентной дифференцировки iPS-клеток человека в две отдельные линии - боковые клетки мезодермы и мезодермы, которые впоследствии дифференцируются в эндотелий сосудов и клубочковый эпителий соответственно. Для генерации боковых клеток мезодермы человеческие iPS-клетки были посеяны на пластинах с покрытием 1-слойной базальной мембраны и культивированы в течение 3 дней (без обмена средой) в среде N2B27, дополненной активатором Wnt, CHIR 99021, и мощным индуктором мезодермы, костно-морфогенетическим 4 (BMP4). Полученные боковые клетки мезодермы ранее характеризовались экспрессией брахиуры (Т), смешанного парного гомеобокса (MIXL) и эомезодермина (EOMES)9. Впоследствии боковые клетки мезодермы культивировали в течение 4 дней в среде, дополненной VEGF165 и Forskolin, чтобы индуцировать сосудистые эндотелиальные клетки, которые были отсортированы на основе экспрессии VE-cadherin и / или PECAM-1 с использованием магнитно-активированной сортировки клеток (MACS). Полученные сосудистые эндотелиальные клетки (viEC) расширяли путем культивирования их на колбах с 3-покрытым базальной мембраной матрикс до готовности к посеву в микрофлюидном устройстве.
Для генерации клеток мезодермы человеческие iPS-клетки были посеяны на пластинах с покрытием 2-слойной базальной мембраны и культивированы в течение 2 дней в среде, содержащей активин А и CHIR99021. Полученные клетки мезодермы характеризовались экспрессией HAND1, гусеницы и брачуры (Т), как описано ранее 2,10,11. Чтобы индуцировать дифференцировку клеток промежуточной мезодермы (IM), клетки мезодермы культивировали в течение 14 дней в среде, дополненной BMP-7 и CHIR99021. Полученные IM-клетки экспрессируют опухоль Вильма 1 (WT1), парный бокс-ген 2 (PAX2) и нечетно пропущенный родственный белок 1 (OSR-1)2,10,11.
Двухканальный микрофлюидный чип на основе полидиметилсилоксана (PDMS) был разработан для рекапитуляции структуры клубочкового фильтрационного барьера in vitro. Мочевой канал составляет 1000 мкм x 1000 мкм (Ш х В), а размер капиллярного канала составляет 1000 мкм х 200 мкм (Ш х В). Циклические циклы растяжения и релаксации облегчались полыми камерами, присутствующими с каждой стороны флюидных каналов. Клетки были посеяны на гибкую мембрану PDMS (толщиной 50 мкм), которая разделяет мочевой и капиллярный каналы. Мембрана оснащена гексагональными порами (диаметр 7 мкм, 40 мкм друг от друга), чтобы способствовать межклеточной сигнализации (рисунок 1A)2,12. За два дня до завершения индукции IM микрофлюидные чипы были покрыты базальной мембранной матрицей 2. viEC были посеяны в капиллярный канал микрофлюидного чипа с использованием эндотелиальной поддерживающей среды за 1 день до завершения индукции IM, и чип был перевернут вверх ногами, чтобы обеспечить адгезию клеток на базальной стороне мембраны PDMS, покрытой ECM. В день завершения индукции IM клетки были засеяны в мочевой канал микрофлюидного чипа с использованием среды, дополненной BMP7, активином A, CHIR99021, VEGF165 и всей трансретиноевой кислотой, чтобы индуцировать дифференцировку подоцитов внутри чипа. На следующий день резервуары среды были заполнены средой индукции подоцитов и средой эндотелиального обслуживания, и на микросхемы была нанесена 10% механическая деформация при 0,4 Гц и поток жидкости (60 мкл/ч).
Клеточные микрофлюидные чипы культивировали в течение 5 дополнительных дней с использованием среды индукции подоцитов (в мочевом канале) и эндотелиальной поддерживающей среды (в сосудистом канале). Полученные чипы почечного клубочка культивировали в течение 7 дополнительных дней в поддерживающей среде как для подоцитарных, так и для эндотелиальных клеток. Дифференцированные подоциты положительно экспрессировали специфические для линии белки, включая подоцин и нефрин 13,14, в то время как viECs положительно экспрессировали белки идентификации линии PECAM-1 и VE-Cadherin, все из которых являются необходимыми молекулами для поддержания целостности клубочкового фильтрационного барьера15,16 . Было обнаружено, что подоциты и viEC секретируют наиболее распространенный белок клубочковой базальной мембраны, коллаген IV, который также важен для созревания и функции тканей.
Было обнаружено, что трехкомпонентная система фильтрационного барьера - эндотелий, базальная мембрана и эпителий - в клубочковых чипах избирательно фильтрует молекулы и реагирует на химиотерапевтическое, нефротоксическое лекарственное лечение. Результаты медикаментозного лечения показали, что чип клубочков может быть использован для исследований нефротоксичности и для моделирования заболеваний. Этот протокол обеспечивает общее руководство по разработке функционального микрофлюидного чипа почечного клубочка из иззогенных производных iPS-клеток. Последующий анализ инженерного чипа может быть выполнен по желанию исследователя. Для получения дополнительной информации об использовании чипа клубочка для моделирования клубочкового повреждения, вызванного лекарственными средствами, обратитесь к предыдущим публикациям 2,12.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Antibodies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488- and Alexa Fluor 594-conjugated secondary antibodies</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>A32744; A32754; A-11076; A32790; A21203; A11015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen IV</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>14-9871-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nephrin</td>
			<td>Progen</td>
			<td>GP-N2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PECAM-1</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>AF806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Podocin</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab50339</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VE-Cadherin</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-9989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basement membrane matrices</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Fibronectin, Human</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356008</td>
			<td>Basement membrane (3)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iMatrix-511 Laminin-E8 (LM-E8) fragment</td>
			<td>Iwai North America</td>
			<td>N8922012</td>
			<td>Basement membrane matrix (2)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel hESC-qualified matrix, 5-mL vial</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>354277</td>
			<td>Basement membrane matrix (1); may show lot-to-lot variation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cells</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DU11 human iPS cells</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>The DU11 (Duke University clone #11) iPS cell line was generated at the Duke iPSC Core Facility and provided to us by the Bursac Lab at Duke University. The line has been tested and found to be free of mycoplasma (last test in November 2021) and karyotype abnormalities (July 2019)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture medium growth factors and media supplements</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5M EDTA, pH 8.0</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15575020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>21985023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin from Bovine serum, Texas Red conjugate</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>A23017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>All-trans retinoic acid (500 mg)</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>72262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 serum-free supplement</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 supplement (50x) without Vitamin A</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>12587010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHIR99021</td>
			<td>Stemgent</td>
			<td>04-0004</td>
			<td>May show lot-to-lot variation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete medium kit with CultureBoost-R</td>
			<td>Cell Systems</td>
			<td>4Z0-500-R</td>
			<td>Podocyte maintenance media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>12634028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12 with GlutaMAX supplement</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>10565042</td>
			<td>DMEM/F12 with glutamine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forskolin (Adenylyl cyclase activator)</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab120058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMAX supplement</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>35050061</td>
			<td>glutamine supplement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat-inactivated FBS</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>10082147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin solution</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>7980</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Activin A</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>PHC9544</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human BMP4</td>
			<td>Preprotech</td>
			<td>120-05ET</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human BMP7</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>PHC9544</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human VEGF</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>PHC9394</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inulin-FITC</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F3272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mTeSR1 medium</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>05850</td>
			<td>Human iPS cell culture media (CCM). Add 5x supplement according to the manufacturer. Human iPS CCM can be stored for up to 6 months at -20 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-2 Supplement (100x)</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>17502048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal media</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>21103049</td>
			<td>Lateral mesoderm basal media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (Phosphate-buffered saline)</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>14190-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin, liquid (100x)</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>15140-163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ROCK inhibitor (Y27632)</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>1254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemPro-34 SFM</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>10639011</td>
			<td>Endothelial cell culture medium (CCM). Add supplement according to manufacturer. Endothelial CCM can be stored for up to two weeks at 4 &#176;C or -20 &#176;C for up to 6 months.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TGF-Beta inhibitor (SB431542)</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>72234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzymes and other reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>A1110501</td>
			<td>Cell detachment buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl Suloxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D2438</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol solution, 70% (vol/vol), biotechnology grade</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97065-058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>28906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile distilled water</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>15230162</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97062-208</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin EDTA, 0.05%</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>25300-120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(Orb) Hub module</td>
			<td>Emulate</td>
			<td>ORB-HM1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100mm x 15 mm round petri dish</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>FB087579B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>120 x 120 mm square cell culture dish</td>
			<td>VWR</td>
			<td>688161</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accuri C6</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspirating pipettes, individually wrapped</td>
			<td>Corning</td>
			<td>29442-462</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspirating Unit</td>
			<td>SP Bel-Art</td>
			<td>F19917-0150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Avanti J-15R Centrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>B99516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical centrifuge tube, 15 mL</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical centrifuge tube, 50 mL</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EVOS M7000</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>AMF7000</td>
			<td>Fluorescent microscope to take images of fixed and stained cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemocytometer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>100503-092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heracell VIOS 160i CO2 incubator</td>
			<td>Thermo/Life Technologies</td>
			<td>51030403</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Zeiss Axio Observer equipeed with AxioCam 503 camera</td>
			<td>Carl Zeiss Micrscopy</td>
			<td>491916-0001-000(microscope) ; 426558-0000-000(camera)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimberly-Clark nitrile gloves</td>
			<td>VWR</td>
			<td>40101-346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes, large</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21905-049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leoca SP8 Upright Confocal Microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Media reservoir (POD Portable Module)</td>
			<td>Emulate</td>
			<td>POD-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate shaker</td>
			<td>VWR</td>
			<td>12620-926</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Organ-chip</td>
			<td>Emulate</td>
			<td>S-1 Chip</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Organ-chip holder</td>
			<td>Emulate</td>
			<td>AK-CCR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P10 precision barrier pipette tips</td>
			<td>Denville Scientific</td>
			<td>P1096-FR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P100 barrier pipette tips</td>
			<td>Denville Scientific</td>
			<td>P1125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P1000 barrier pipette tips</td>
			<td>Denville Scientific</td>
			<td>P1121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P20 barrier pipette tips</td>
			<td>Denville Scientific</td>
			<td>P1122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P200 barrier pipette tips</td>
			<td>Denville Scientific</td>
			<td>P1122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasma Asher</td>
			<td>Quorum tech</td>
			<td>K1050X RF</td>
			<td>This Plasma Etcher/Asher/Cleaner was used as a part of Duke University&#39;s Shared Materials Instrumentation Facility (SMiF).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round bottom polystyrene test tube with cell strainer snap cap</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipette, 10 mL, indivdually wrapped</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356551</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipette, 25 mL, indivdually wrapped</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipette, 5 mL, indivdually wrapped</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356543</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steriflip, 0.22 &#181;m, PES</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>SCGP00525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Microcentrifuge tubes</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td>1138W14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75cm2 cell culture flask with vent cap</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430641U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture-treated 12 well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture-treated 6 well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum modulator and perstaltic pump (Zoe Culture Module)</td>
			<td>Emulate</td>
			<td>ZOE-CM1</td>
			<td>Organ Chip Bioreactor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VE-Cadherin CD144 anti-human antibody - APC conjugated</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-126-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wide-beveled cell lifter</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD144 MicroBeads, human</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-097-857</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD31 MicroBead Kit, human</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-091-935</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LS columns</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-042-401</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isogenic kidney glomerulus chip engineered from human induced pluripotent stem cells

Хроническая болезнь почек (ХБП) поражает 15% взрослого населения США, но создание таргетной терапии было ограничено отсутствием функциональных моделей, которые могут точно предсказать биологические реакции человека и нефротоксичность. Достижения в области прецизионной медицины почек могут помочь преодолеть эти ограничения. Однако ранее установленные in vitro модели клубочка почек человека — первичного участка фильтрации крови и ключевой мишени многих заболеваний и токсичности лекарств — обычно используют гетерогенные клеточные популяции с ограниченными функциональными характеристиками и непревзойденным генетическим фоном. Эти характеристики значительно ограничивают их применение для моделирования конкретных заболеваний пациента и терапевтического открытия. 
В этой статье представлен протокол, который интегрирует индуцированный человеком плюрипотентный стволовый (iPS) клеточный клубочковый эпителий (подоциты) и эндотелий сосудов от одного пациента для разработки изогенного и васкуляризированного микрофлюидного чипа почечного клубочка. Полученный чип клубочка состоит из эндотелиальных и эпителиальных клеточных слоев, полученных из стволовых клеток, которые экспрессируют специфические для линии маркеры, продуцируют белки базальной мембраны и образуют интерфейс ткань-ткань, напоминающий клубочковый фильтрационный барьер почки. Спроектированный чип клубочка избирательно фильтрует молекулы и рекапитулирует лекарственное повреждение почек. Способность восстанавливать структуру и функцию почечного клубочка с использованием изогенных типов клеток создает возможность моделировать заболевание почек со специфичностью пациента и продвигать полезность органов на чипах для прецизионной медицины почек и связанных с ней применений.

Здесь мы показываем, что функциональная 3D-модель клубочка in vitro может быть васкуляризирована и эпителизирована из изогенного источника человеческих iPS-клеток. В частности, этот протокол предоставляет инструкции о том, как применять технологию iPS-клеток человека, в частности, их спо...

Watch this Scientific Journal Video about Isogenic Kidney Glomerulus Chip Engineered from Human Induced Pluripotent Stem Cells at JoVE.com

Isogenic Kidney Glomerulus Chip Engineered from Human Induced Pluripotent Stem Cells

Здесь представлен протокол для разработки персонализированной системы «орган на чипе», которая рекапитулирует структуру и функцию клубочкового фильтрационного барьера почек путем интеграции генетически согласованных эпителиальных и сосудистых эндотелиальных клеток, дифференцированных от индуцированных человеком плюрипотентных стволовых клеток. Эта биоинженерная система может продвигать прецизионную медицину почек и связанные с ней приложения.

Изогенный чип почечного клубочка, разработанный из индуцированных человеком плюрипотентных стволовых клеток

Chronic kidney disease (CKD) affects 15% of the U.S. adult population, but the establishment of targeted therapies has been limited by the lack of ...

Изогенный чип клубочка позволит моделировать конкретные заболевания пациентов и тестировать нефротоксичность, а также передовые приложения прецизионной медицины. Клубочковый эпителий и эндотелий получены из одной популяции индуцированных человеком плюрипотентных стволовых клеток, или IPSC. IPSC обладают неограниченным самообновлением и могут дифференцироваться практически в любой тип клеток.Этот метод может быть использован для оценки патологических клеточных фенотипов и заболеваний. Чип органа, специфичный для пациента, также может служить платформой для скрининга лекарств и механистических исследований. Эта модель может быть применена для разработки тела на чипе системы, персонализированной для конкретного пациента.Эта система имеет потенциал для прогнозирования специфических реакций пациента до клинического тестирования. Начните с осторожного добавления 25 микролитров раствора матрицы базальной мембраны 2 в мочевой канал и 20 микролитров в капиллярный канал чипа. Возьмите две стерильные 15-миллилитровые конические крышки трубки и заполните их 500 микролитрами стерильной дистиллированной воды.Поместите колпачок в чашку Петри, чтобы предотвратить высыхание, и поместите крышку на тарелку. Высиживайте его при температуре 37 градусов по Цельсию в течение ночи. Продолжая аспирировать среду из колб Т75, содержащих 15-дневную культуру эндотелиальных клеток сосудов при 90% слиянии.Добавьте пять миллилитров буфера отслоения клеток и инкубируйте при 37 градусах Цельсия в течение пяти-семи минут. Затем переложите ячейки в коническую трубку объемом 15 миллилитров и добавьте пять миллилитров DMEM/F-12. Центрифуга в 200 раз G в течение пяти минут.Удалите супернатант и повторно суспендируйте клетки в 300 микролитрах эндотелиальной поддерживающей среды. Подсчитайте клетки с помощью гемоцитометра, чтобы получить примерно 2 миллиона клеток. Используя барьерный наконечник P200, промывайте верхний и нижний каналы микрофлюидного чипа 200 микролитрами DMEM/F-12, одновременно аспирируя с периферии розетки.Крепко держите стружку с помощью барьерного наконечника P200, прикрепленного к аспиратору, вдали от выходного отверстия нижнего канала. Плотно вводят 20 микролитров суспензии эндотелиальных клеток сосудов в капиллярный канал чипа и осторожно аспирируют среду с периферии выхода. Проверьте под микроскопом наличие пузырьков или неравномерной плотности посева.Аккуратно инвертируйте чип, чтобы клетки могли прилипать к базальной стороне гибкой мембраны PDMS. Поместите чип в держатель картриджа и добавьте три миллилитра PBS в картридж, чтобы предотвратить высыхание мембраны. Инкубируйте чип при температуре 37 градусов Цельсия в течение трех часов.Проверьте нижний канал под микроскопом на наличие сливающегося слоя клеток, прикрепленных к гибкой мембране PDMS. Промывайте неприкрепленные клетки, добавляя 200 микролитров эндотелиальной поддерживающей среды на входе нижнего канала при аспирации с периферии выходного отверстия капиллярного канала. Поместите чип обратно в картридж держателя и высиживайте при температуре 37 градусов Цельсия в течение ночи.На следующий день аккуратно промыть капиллярный канал 200 микролитрами эндотелиальной поддерживающей среды. Промывайте мочевой канал 200 микролитрами DMEM/F-12 и опустите 50 микролитров DMEM/F-12 на входной и выходной порты. Исходя из промежуточных клеток мезодермы, заменяют промежуточную мезодермную индукционную среду из каждой лунки 12-луночной пластины одним миллилитром трипсина ЭДТА и инкубируют при 37 градусах Цельсия в течение пяти минут.Осторожно соскребайте клетки с помощью клеточного лифтера и диссоциируйте клетки с помощью пипетки. Добавьте в каждую лунку два миллилитра раствора для нейтрализации трипсина и переложите ячейки в коническую трубку объемом 50 миллилитров. Доведите объем клеточной суспензии до 50 миллилитров с помощью DMEM/F-12 и центрифуги в 200 раз больше G в течение пяти минут.Аспирировать супернатант и повторно суспендировать клетки в 500 микролитрах промежуточной мезодермной индукционной среды для получения примерно 3 миллионов клеток. Подсчитайте клетки с помощью гемоцитометра. Удерживайте чип и плотно введите 25 микролитров клеточной суспензии в мочевой канал чипа, осторожно аспирируя среду с периферии выходного отверстия.Проверьте наличие пузырьков или неравномерной плотности посева клеток. Добавьте три миллилитра PBS в картридж держателя чипа и инкубируйте при 37 градусах Цельсия в течение трех часов. После инкубации промыть оба канала 200 микролитрами соответствующей клеточной культуральной среды.Прикрепите пустые барьерные наконечники P200 в оба выхода мочевого и капиллярного каналов. Пипетка 200 микролитров эндотелиальной поддерживающей среды и вводят половину ее во входное отверстие капиллярного канала. Отпустите наконечник пипетки внутрь входного отверстия таким образом, чтобы и входное, и выходное отверстие канала были прикреплены к наконечникам пипетки, заполненным средой.Повторите эту процедуру для входа в мочевой канал с 200 микролитрами промежуточной поддерживающей среды мезодермы. Инкубируйте чипсы с наконечниками, встроенными при 37 градусах Цельсия в течение ночи. Чтобы подключить чипы к биореактору чипа органа, сначала удалите наконечники P200 из каналов.Добавьте капли соответствующих сред на вход и выход мочевого и капиллярного каналов, чтобы предотвратить высыхание. Добавьте три миллилитра теплой среды индукции подоцитов к резервуару на входе в мочевыводящем отверстии и три миллилитра теплой эндотелиальной поддерживающей среды к капиллярному входному резервуару. Добавьте 300 микролитров соответствующей среды в резервуары для выпускных отверстий непосредственно над выходным портом.Поместите стручки на лоток и в биореактор органного чипа. Используйте поворотный циферблат для выбора и запуска основного цикла в течение двух минут. Визуально осмотрите нижнюю сторону капсулы на наличие мелких капель во всех четырех жидкостных портах.Чтобы обеспечить контакт между жидкостью и жидкостью между нижней стороной капсулы и микрофлюидными портами чипа, осторожно вставьте держатель чипа в капсулу. Осторожно нажмите на выступ держателя чипа внутрь и вверх. Аспирируйте избыточную среду с поверхности чипа.Установите скорость потока биореактора микрореактора органа на уровне 60 микролитров в час. Установите циклическую деформацию на 10% при 0,4 герц. Используйте поворотный циферблат на биореакторе чипа органа, чтобы выбрать цикл регулирования и работать в течение двух часов.Визуально осмотрите выпускные резервуары на предмет повышения уровня среды. Используйте поворотный циферблат на биореакторе чипа органа для выбора цикла регулирования. После 17-го дня посева ежедневно аспирируйте среду из выходных резервуаров мочевого канала по диагонали от порта, но держите некоторую среду в резервуаре.Пополняйте входной резервуар мочевого канала до трех миллилитров среды индукции подоцитов каждые два дня в течение пяти дней. Через пять дней аспирируйте среду из мочевого канала, но держите некоторую среду в резервуаре. Ежедневно пополняйте входной резервуар мочевого канала тремя миллилитрами поддерживающей среды подоцитов.Аналогично аспирировать среду из выхода капиллярного канала и ежедневно пополнять впускные резервуары эндотелиальной поддерживающей средой. Используя этот протокол, индуцированные человеком плюрипотентные стволовые клетки были использованы для разработки функциональной модели in vitro клубочка путем распространения сосудистых эндотелиальных клеток и подоцитов. На 21-й день после индукции подоцитов и распространения эндотелия сосудов клетки в чипах экспрессировали маркеры идентификации линии, такие как подоцин и нефрин для подоцитов, VE Cadherin и PECAM-1 для сосудистых эндотелиальных клеток.Как у подоцитов, так и в слоях эндотелиальных клеток сосудов экспрессировался коллаген IV, который является наиболее распространенным белком GBM в почечном клубочке. Клубочковые чипы избирательно фильтровали небольшие молекулы, такие как инулин, из капилляра в мочевой канал, предотвращая при этом крупные белки, такие как альбумин, от выхода из капиллярного канала, демонстрируя селективную функцию молекулярной фильтрации. Во время эндотелиальной индукции на четвертый-седьмой день увеличение количества клеток может привести к образованию вторичного слоя клеток, но чрезмерное посево может вызвать агрегацию, которая может препятствовать дифференцировке.Неожиданный поперечный поток жидкости между мочевым и капиллярным каналами может наблюдаться в случае недостаточной связи компонентов чипа PDMS, закупорки пути потока жидкости или нарушения фильтрационного барьера. При посеве эндотелия и эпителия и поддержании стружки с 15-го дня и далее важно визуально проверять наличие пузырьков воздуха в каналах на каждом шагу. В изогенном чипе клубочков можно вводить клинически значимые препараты-кандидаты для проверки их терапевтического потенциала или уровней токсичности.Этот метод теперь открывает возможности для понимания генетической основы заболевания почек человека и разработки персонализированных терапевтических средств.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Development, Expansion, and In vivo Monitoring of Human NK Cells from Human Embryonic Stem Cells (hESCs) and Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs)

Development, Expansion, and In vivo Monitoring of Human NK Cells from Human Embryonic Stem Cells hESCs and Induced Pluripotent Stem Cells iPSCs

Развитие, расширение и<em&gt; В естественных условиях</em&gt; Контроль за соблюдением NK-клетки из человеческих эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) и и индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК)

We present a method for deriving natural killer (NK) cells from undifferentiated hESCs and iPSCs using a feeder-free approach. This method gives rise to ...

Transplantation of Induced Pluripotent Stem Cell-derived Mesoangioblast-like Myogenic Progenitors in Mouse Models of Muscle Regeneration

Трансплантация индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, полученных Мезоангиобласт-как миогенные прогениторы в мышиных моделях мышечной регенерации

Patient-derived iPSCs could be an invaluable source of cells for future autologous cell therapy protocols. iPSC-derived myogenic stem/progenitor cells ...

Isolation of Mesenchymal Stem Cells from Human Alveolar Periosteum and Effects of Vitamin D on Osteogenic Activity of Periosteum-derived Cells

Изоляция мезенхимальных стволовых клеток человека надкостницей альвеолярного и эффекты витамина d на Остеогенные активность клеток, надкостницы, полученных

Mesenchymal stem cells (MSCs) are present in a variety of tissues and can be differentiated into numerous cell types, including osteoblasts. Among the ...

Isolation of Adult Human Dermal Fibroblasts from Abdominal Skin and Generation of Induced Pluripotent Stem Cells Using a Non-Integrating Method

Изоляция взрослых человека дермальных фибробластов от кожи брюшной полости и поколение индуцированных плюрипотентных стволовых клеток с использованием неинтегрирующего метода

Induced pluripotent stem cells (iPSCs) could be considered, to date, a promising source of pluripotent cells for the management of currently untreatable ...

Scalable Generation of Mature Cerebellar Organoids from Human Pluripotent Stem Cells and Characterization by Immunostaining

Масштабируемое поколение зрелых мозжечковых органоидов из плюрипотентных стволовых клеток человека и характеристика иммуностимулированием

The cerebellum plays a critical role in the maintenance of balance and motor coordination, and a functional defect in different cerebellar neurons can ...

Preparation of Mesh-Shaped Engineered Cardiac Tissues Derived from Human iPS Cells for In Vivo Myocardial Repair

Подготовка сетчатой формы инженерных сердечных тканей, полученных из человеческих клеток iPS для ремонта миокарда In Vivo

The current protocol describes methods to generate scalable, mesh-shaped engineered cardiac tissues (ECTs) composed of cardiovascular cells derived from ...

Guided Differentiation of Mature Kidney Podocytes from Human Induced Pluripotent Stem Cells Under Chemically Defined Conditions

Управляемая дифференцировка зрелых почечных подоцитов из индуцированных человеком плюрипотентных стволовых клеток в химически определенных условиях

Kidney disease affects more than 10% of the global population and costs billions of dollars in federal expenditures. The most severe forms of kidney ...

Single-Cell Optical Action Potential Measurement in Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes

Измерение потенциала оптического действия одной клетки в кардиомиоцитах, полученных из человеческих плюрипотентных стволовых клеток

Conventional intracellular microelectrode techniques to quantify cardiomyocyte electrophysiology are extremely complex, labor intensive, and typically ...

Fibroblast Derived Human Engineered Connective Tissue for Screening Applications

Фибробласт, полученный из искусственной соединительной ткани человека для скрининга

Fibroblasts are phenotypically highly dynamic cells, which quickly transdifferentiate into myofibroblasts in response to biochemical and biomechanical ...

Generation of Human Blood Vessel Organoids from Pluripotent Stem Cells

Генерация органоидов кровеносных сосудов человека из плюрипотентных стволовых клеток

An organoid is defined as an engineered multicellular in vitro tissue that mimics its corresponding in vivo organ such that it can be used to study ...