Name: intravitreal injections in the ovine eye
Uploaded: 2022-07-05T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intravitreal Injections in the Ovine Eye at JoVE.com

يود المؤلفون أن يشكروا الدكتور ستيف هيب (BVSc ، CertVOphthal) لمساعدته في إنشاء هذا البروتوكول وإجراء الحقن التي وصفها موراي وآخرون 15. يقر المؤلفون أيضا بالتمويل من CureKids New Zealand ، ومؤسسة كانتربري للأبحاث الطبية ، وشركة Neurogene Inc ، وجمعية دعم وأبحاث مرض باتن.

تمت الموافقة على جميع البروتوكولات التجريبية من قبل لجنة أخلاقيات الحيوان بجامعة لينكولن وتتماشى مع إرشادات المعاهد الوطنية الأمريكية للصحة لرعاية الحيوانات واستخدامها في الأبحاث وقانون رعاية الحيوان النيوزيلندي (1999). تم تشخيص أغنام بوردرديل عند الولادة14 وتم الاحتفاظ بها ...

<ol>
	<li>Himawan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+delivery+to+retinal+photoreceptors.">Drug delivery to retinal photoreceptors.</a> Drug Discovery Today. 24 (8), 1637-1643 (2019).</li><li>Murray, S. J., Mitchell, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+therapies+for+neuronal+ceroid+lipofuscinoses:+More+than+meets+the+eye.">Ocular therapies for neuronal ceroid lipofuscinoses: More than meets the eye.</a> Neural Regeneration Research. 17 (8), 1755-1756 (2022).</li><li>Bishop, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+macromolecules+and+supramolecular+organisation+of+the+vitreous+gel.">Structural macromolecules and supramolecular organisation of the vitreous gel.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 19 (3), 323-344 (2000).</li><li>Grzybowski, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=update+on+intravitreal+injections:+Euretina+expert+consensus+recommendations.">update on intravitreal injections: Euretina expert consensus recommendations.</a> Ophthalmologica. 239 (4), 181-193 (2018).</li><li>Pavlou, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+AAV+capsids+for+intravitreal+gene+therapy+of+photoreceptor+disorders.">Novel AAV capsids for intravitreal gene therapy of photoreceptor disorders.</a> EMBO Molecular Medicine. 13 (4), 13392 (2021).</li><li>Kousi, M., Lehesjoki, A. -. E., Mole, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+of+the+mutation+spectrum+and+clinical+correlations+of+over+360+mutations+in+eight+genes+that+underlie+the+neuronal+ceroid+lipofuscinoses.">Update of the mutation spectrum and clinical correlations of over 360 mutations in eight genes that underlie the neuronal ceroid lipofuscinoses.</a> Human Mutation. 33 (1), 42-63 (2012).</li><li>Wibbeler, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerliponase+alfa+for+the+treatment+of+atypical+phenotypes+of+CLN2+disease:+A+retrospective+case+series.">Cerliponase alfa for the treatment of atypical phenotypes of CLN2 disease: A retrospective case series.</a> Journal of Child Neurology. 36 (6), 468-474 (2021).</li><li>Schulz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+intraventricular+cerliponase+alfa+for+CLN2+disease.">Study of intraventricular cerliponase alfa for CLN2 disease.</a> The New England Journal of Medicine. 378 (20), 1898-1907 (2018).</li><li>Mitchell, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+in+vivo+monitoring+of+the+CNS+demonstrates+the+efficacy+of+gene+therapy+in+a+sheep+model+of+CLN5+Batten+disease.">Longitudinal in vivo monitoring of the CNS demonstrates the efficacy of gene therapy in a sheep model of CLN5 Batten disease.</a> Molecular Therapy. 26 (10), 2366-2378 (2018).</li><li>Murray, S. J., Mitchell, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+history+of+retinal+degeneration+in+ovine+models+of+CLN5+and+CLN6+neuronal+ceroid+lipofuscinoses.">Natural history of retinal degeneration in ovine models of CLN5 and CLN6 neuronal ceroid lipofuscinoses.</a> Scientific Reports. 12 (1), 3670 (2022).</li><li>Russell, K. N., Mitchell, N. L., Wellby, M. P., Barrell, G. K., Palmer, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroretinography+data+from+ovine+models+of+CLN5+and+CLN6+neuronal+ceroid+lipofuscinoses.">Electroretinography data from ovine models of CLN5 and CLN6 neuronal ceroid lipofuscinoses.</a> Data in Brief. 37, 107188 (2021).</li><li>Shafiee, A., McIntire, G. L., Sidebotham, L. C., Ward, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+determination+and+allometric+prediction+of+vitreous+volume,+and+retina+and+lens+weights+in+G&#246;ttingen+minipigs.">Experimental determination and allometric prediction of vitreous volume, and retina and lens weights in G&#246;ttingen minipigs.</a> Veterinary Ophthalmology. 11 (3), 193-196 (2008).</li><li>Shinozaki, A., Hosaka, Y., Imagawa, T., Uehara, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topography+of+ganglion+cells+and+photoreceptors+in+the+sheep+retina.">Topography of ganglion cells and photoreceptors in the sheep retina.</a> The Journal of Comparative Neurology. 518 (12), 2305-2315 (2010).</li><li>Frugier, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+large+animal+model+of+CLN5+neuronal+ceroid+lipofuscinosis+in+Borderdale+sheep+is+caused+by+a+nucleotide+substitution+at+a+consensus+splice+site+(c.571+1G&gt;A)+leading+to+excision+of+exon+3.">A new large animal model of CLN5 neuronal ceroid lipofuscinosis in Borderdale sheep is caused by a nucleotide substitution at a consensus splice site (c.571+1G&gt;A) leading to excision of exon 3.</a> Neurobiology of Disease. 29 (2), 306-315 (2008).</li><li>Murray, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravitreal+gene+therapy+protects+against+retinal+dysfunction+and+degeneration+in+sheep+with+CLN5+Batten+disease.">Intravitreal gene therapy protects against retinal dysfunction and degeneration in sheep with CLN5 Batten disease.</a> Experimental Eye Research. 207, 108600 (2021).</li><li>Ross, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Outer+retinal+transduction+by+AAV2-7m8+following+intravitreal+injection+in+a+sheep+model+of+CNGA3+achromatopsia.">Outer retinal transduction by AAV2-7m8 following intravitreal injection in a sheep model of CNGA3 achromatopsia.</a> Gene Therapy. , (2021).</li><li>Boyd, R. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoreceptor-targeted+gene+delivery+using+intravitreally+administered+AAV+vectors+in+dogs.">Photoreceptor-targeted gene delivery using intravitreally administered AAV vectors in dogs.</a> Gene Therapy. 23 (2), 223-230 (2016).</li><li>Dalkara, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo-directed+evolution+of+a+new+adeno-associated+virus+for+therapeutic+outer+retinal+gene+delivery+from+the+vitreous.">In vivo-directed evolution of a new adeno-associated virus for therapeutic outer retinal gene delivery from the vitreous.</a> Science Translational Medicine. 5 (189), (2013).</li><li>Gearhart, P. M., Gearhart, C., Thompson, D. A., Petersen-Jones, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvement+of+visual+performance+with+intravitreal+administration+of+9-cis-retinal+in+Rpe65-mutant+dogs.">Improvement of visual performance with intravitreal administration of 9-cis-retinal in Rpe65-mutant dogs.</a> Archives of Ophthalmology. 128 (11), 1442-1448 (2010).</li><li>Ross, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+photoreceptor+transduction+efficacy+of+capsid-modified+adeno-associated+viral+vectors+following+intravitreal+and+subretinal+delivery+in+sheep.">Evaluation of photoreceptor transduction efficacy of capsid-modified adeno-associated viral vectors following intravitreal and subretinal delivery in sheep.</a> Human Gene Therapy. 31 (13-14), 719-729 (2020).</li><li>Kotterman, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody+neutralization+poses+a+barrier+to+intravitreal+adeno-associated+viral+vector+gene+delivery+to+non-human+primates.">Antibody neutralization poses a barrier to intravitreal adeno-associated viral vector gene delivery to non-human primates.</a> Gene Therapy. 22 (2), 116-126 (2015).</li><li>Whitehead, M., Osborne, A., Yu-Wai-Man, P., Martin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humoral+immune+responses+to+AAV+gene+therapy+in+the+ocular+compartment.">Humoral immune responses to AAV gene therapy in the ocular compartment.</a> Biological Reviews. 96 (4), 1616-1644 (2021).</li><li>Yun, C., Oh, J., Hwang, S. -. Y., Kim, S. -. W., Huh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subconjunctival+hemorrhage+after+intravitreal+injection+of+anti-vascular+endothelial+growth+factor.">Subconjunctival hemorrhage after intravitreal injection of anti-vascular endothelial growth factor.</a> Graefe's Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 253 (9), 1465-1470 (2015).</li><li>Christensen, L., Cerda, A., Olson, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+measurement+of+needle+forces+and+acute+pressure+changes+during+intravitreal+injections.">Real-time measurement of needle forces and acute pressure changes during intravitreal injections.</a> Clinical &amp; Experimental Ophthalmology. 45 (8), 820-827 (2017).</li><li>Allmendinger, A., Butt, Y. L., Mueller, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraocular+pressure+and+injection+forces+during+intravitreal+injection+into+enucleated+porcine+eyes.">Intraocular pressure and injection forces during intravitreal injection into enucleated porcine eyes.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 166, 87-93 (2021).</li><li>Ross, M., Ofri, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+future+of+retinal+gene+therapy:+Evolving+from+subretinal+to+intravitreal+vector+delivery.">The future of retinal gene therapy: Evolving from subretinal to intravitreal vector delivery.</a> Neural Regeneration Research. 16 (9), 1751-1759 (2021).</li><li>Henein, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrodynamics+of+intravitreal+injections+into+liquid+vitreous+substitutes.">Hydrodynamics of intravitreal injections into liquid vitreous substitutes.</a> Pharmaceutics. 11 (8), 371 (2019).</li><li>Park, I., Park, H. S., Kim, H. K., Chung, W. K., Kim, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+measurement+of+intraocular+pressure+variation+during+automatic+intravitreal+injections:+An+ex-vivo+experimental+study+using+porcine+eyes.">Real-time measurement of intraocular pressure variation during automatic intravitreal injections: An ex-vivo experimental study using porcine eyes.</a> PloS One. 16 (8), 0256344 (2021).</li><li>Willekens, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravitreally+injected+fluid+dispersion:+Importance+of+injection+technique.">Intravitreally injected fluid dispersion: Importance of injection technique.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 58 (3), 1434-1441 (2017).</li><li>Peynshaert, K., Devoldere, J., De Smedt, S. C., Remaut, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+ex+vivo+models+to+study+drug+delivery+barriers+in+the+posterior+segment+of+the+eye.">In vitro and ex vivo models to study drug delivery barriers in the posterior segment of the eye.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 126, 44-57 (2018).</li><li>Kiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vector+Considerations+for+Ocular+Gene+Therapy.+Adeno-associated+virus+vectors+offer+a+safe+and+effective+tool+for+gene+delivery.">Vector Considerations for Ocular Gene Therapy. Adeno-associated virus vectors offer a safe and effective tool for gene delivery.</a> Retinal Physician. 17, 40-45 (2020).</li><li>Kleine Holthaus, S. -. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+therapy+targeting+the+inner+retina+rescues+the+retinal+phenotype+in+a+mouse+model+of+CLN3+Batten+disease.">Gene therapy targeting the inner retina rescues the retinal phenotype in a mouse model of CLN3 Batten disease.</a> Human Gene Therapy. 31 (13-14), 709-718 (2020).</li><li>Kleine Holthaus, S. -. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+brain-directed+gene+therapy+rescues+a+mouse+model+of+neurodegenerative+CLN6+Batten+disease.">Neonatal brain-directed gene therapy rescues a mouse model of neurodegenerative CLN6 Batten disease.</a> Human Molecular Genetics. 28 (23), 3867-3879 (2019).</li></ol>

الحقن داخل الجسم الزجاجي هي واحدة من أكثر العمليات الجراحية شيوعا في طب العيون البشري وقد أثبتت فعاليتها في تقديم العلاجات الجينية بوساطة AAV إلى شبكية الأغنام. لقد أثبتنا سابقا فعالية AAV9. قدم العلاج الجيني CLN5 داخل الجسم الزجاجي في تخفيف ضعف الشبكية وانحطاطها في الأغنام باستخدام CLN5 NCL<sup class...

يمكن استخدام عدة طرق لتوصيل العوامل العلاجية إلى شبكية العين ، بما في ذلك داخل الجسم الزجاجي (IVT) ، أو تحت الشبكية ، أو فوق المشيمية ، أو حول العين ، أو الموضعية. يتضمن كل طريق من طرق الإدارة التغلب على الحواجز مثل حاجز الدم والشبكية أو الأغشية الداخلية والخارجية المحددة وله معدلات متفاوتة من الفعالية اعتمادا على الدواء الذي يتم تسليمه وهدف الشبكية المحدد 1,2.
يتضمن توصيل الدواء IVT حقنا في الخلط الزجاجي للعين ، وهي مادة هلامية تحتل الغرفة الخلفية للعين. تتمثل الوظيفة الأساسية لخلط الجسم الزجاجي في الحفاظ على شكل كرة العين والحفاظ على أنسجة العين ، مثل العدسة والشبكية ، في مكانها. يتكون الخلط الزجاجي إلى حد كبير من الماء ، مع كميات صغيرة من الكولاجين وحمض الهيالورونيك والبروتينات غير الكولاجينية الأخرى3. حقن IVT هو إجراء بسيط وشائع يستخدم بشكل روتيني لعلاج مجموعة واسعة من حالات العين ، بما في ذلك التنكس البقعي المرتبط بالعمر ، والوذمة البقعية السكرية ، واعتلال الشبكية السكري ، وانسداد الوريد الشبكي ، والعديد من ضمور الشبكية الموروث 4,5.
ليبوفوسينوس سيرويد عصبي (NCL; مرض باتن) هي مجموعة من أمراض التخزين الليزوزومية القاتلة التي تسبب تنكسا شديدا في الدماغ والشبكية. يوجد حاليا 13 متغيرا معروفا من NCL ناتجة عن طفرات في جينات مختلفة (CLN1-8 ، CLN10-14) تؤثر في الغالب على الأطفال ولكن لها أعمار متفاوتة من البداية وشدة المرض6. تشترك NCLs في الأعراض التقدمية الشائعة ، بما في ذلك التدهور المعرفي والحركي والنوبات وفقدان الرؤية. لا يوجد علاج ل NCL. ومع ذلك ، فإن العلاج ببدائل الإنزيم الموجه للدماغ يخضع حاليا للتجارب السريرية لمرض CLN27,8 ، وقد أظهر العلاج الجيني بوساطة AAV وعدا كبيرا في الدراسات قبل السريرية ، مع تجربة سريرية للعلاج الجيني CLN5 من المتوقع أن تبدأ في عام 2022 9,10.
تطور العديد من الأنواع الأخرى أشكالا طبيعية من NCL ، بما في ذلك القطط والكلاب والأغنام والأبقار. يخضع حاليا نموذجان من الأغنام من NCL للدراسة النشطة في نيوزيلندا: نموذج مرض CLN5 في أغنام بوردرديل ونموذج مرض CLN6 في أغنام جنوب هامبشاير. تظهر الأغنام المصابة العديد من السمات السريرية والمرضية للمرض البشري ، بما في ذلك ضمور الشبكية وفقدان الرؤية10,11. على الرغم من أن العلاج الجيني CLN5 الموجه للدماغ في الأغنام المصابة بمرض CLN5 يمكن أن يمنع أو يوقف ضمور الدماغ والتدهور السريري ، إلا أن الأغنام المعالجة لا تزال تفقد رؤيتها9. وقد سلط ذلك الضوء على الحاجة إلى علاج شبكية العين للحفاظ على الرؤية والحفاظ على نوعية حياة أفضل ، مما أدى إلى إنشاء بروتوكول للعلاج الجيني للعين في الأغنام.
تمثل عين الأغنام نموذجا جيدا للعين البشرية نظرا لتشابهها في أبعاد كرة العين وحجم الجسم الزجاجي وبنية الشبكية10،12،13. تفصل هذه الورقة البروتوكول الجراحي لتوصيل IVT بحجم صغير (≤100 ميكرولتر) من الناقل الفيروسي العلاجي إلى عين الأغنام.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL low dead-space safety syringe with permanently attached 0.5 inch needle</td>
			<td>Fisher Scientific, Auckland, New Zealand</td>
			<td>05-561-28</td>
			<td>Covidien Monoject Tuberculin Safety syringe or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL microcentrifuge tube</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>HS4323</td>
			<td>Autoclave tubes to sterilise prior to use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia machine with gas bench and monitor&#160;</td>
			<td>Hyvet Anesthesia, Christchurch, New Zealand</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic eye drops&#160;</td>
			<td>Teva Pharma Ltd, Auckland, New Zealand</td>
			<td></td>
			<td>Commercial name: Chlorafast (0.5% chloramphenicol)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BrightMount plus anti-fade mounting medium</td>
			<td>Abcam, Cambridge, United Kingdom</td>
			<td>ab103748</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI (4&#8242; ,6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride)</td>
			<td>Sigma Aldrich, St. Louis, Missouri, United States</td>
			<td>10236276001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diazepam sedative</td>
			<td>Ilium, Troy Laboratories Pty Ltd, Tauranga, New Zealand</td>
			<td></td>
			<td>5 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endotracheal tubes</td>
			<td>Flexicare Medical Ltd, Mountain Ash, United Kingdom</td>
			<td></td>
			<td>Standard, cuffed. Sizes 7, 7.5, or 8 depending on sheep size</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye speculum</td>
			<td>Capes Medical Ltd, Tauranga, New Zealand</td>
			<td>KP151/14</td>
			<td>Nopa Barraquer-Colibri (10 mm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fenestrated surgical drape</td>
			<td>Amtech Medical Ltd, Whanganui, New Zealand</td>
			<td>DI583</td>
			<td>Or similar&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter Tips</td>
			<td>Interlab, Auckland, New Zealand</td>
			<td></td>
			<td>10, 200, and 1,000 &#181;L&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde solution (37%)</td>
			<td>Fisher Scientific, Auckland, New Zealand</td>
			<td>AJA809-2.5PL</td>
			<td>Make up to 10% in distilled water with 0.9% NaCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rabbit Alexa Fluor 594</td>
			<td>Invitrogen Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>&#160;A-11012</td>
			<td>Use at a dilution of 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane anesthetic</td>
			<td>Attane, Bayer Animal Health, Auckland, New Zealand</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine HCl anesthetic/analgesic</td>
			<td>PhoenixPharm Distributors Ltd, Auckland, New Zealand</td>
			<td></td>
			<td>100 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laryngoscope (veterinary)</td>
			<td>KaWe Medical, Denmark</td>
			<td></td>
			<td>Miller C blade, size 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles&#160;</td>
			<td>Capes Medical Ltd, Tauranga, New Zealand</td>
			<td>302025</td>
			<td>BD Hypodermic Needles, or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-steroidal anti-inflammatory</td>
			<td>Boehringer Ingelheim (NZ) Ltd, Auckland, New Zealand</td>
			<td>49402/008</td>
			<td>Commercial name: Metacam 20 (20 mg/mL meloxicam)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-toothed forceps</td>
			<td>Capes Medical Ltd, Tauranga, New Zealand</td>
			<td>AB864/16</td>
			<td>Or similar&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-toothed hemostat</td>
			<td>Capes Medical Ltd, Tauranga, New Zealand</td>
			<td>AA150/12</td>
			<td>Or similar&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal goat serum</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Christchurch, New Zealand</td>
			<td>16210072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen (medical)</td>
			<td>BOC Gas, Christchurch, New Zealand</td>
			<td></td>
			<td>D2 cylinder, gas code 180</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Christchurch, New Zealand</td>
			<td>10010023</td>
			<td>Sterile, filtered</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone-Iodine solution</td>
			<td>Capes Medical Ltd, Tauranga, New Zealand</td>
			<td>005835</td>
			<td>Commercial name: Betadine (10% povidone-iodine)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-cow glial fibrillary acidic protein (GFAP)</td>
			<td>Dako, Glostrup, Denmark</td>
			<td>Z0334</td>
			<td>Use at a dilution of 1:2,500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Self-complementary adeno-associated virus serotype 9, containing the chicken beta action (CBh) promoter and codon-optimized ovine CLN5</td>
			<td>University of North Carolina Vector Core, NC, USA.</td>
			<td>scAAV9/CBh-oCLN5opt</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride 0.9% IV Solution</td>
			<td>Capes Medical Ltd, Tauranga, New Zealand</td>
			<td>AHB1322</td>
			<td>Commercial name: Saline solution&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Subcutaneous antibiotics</td>
			<td>Intervet Schering Plough Animal Health Ltd, Wellington, New Zealand</td>
			<td></td>
			<td>Commercial name: Duplocillin LA (150,000 IU/mL procaine penicillin and 115,000 IU/mL benzathine penicillin)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical sharp blunt curved scissors&#160;</td>
			<td>Capes Medical Ltd, Tauranga, New Zealand</td>
			<td>SSSHBLC130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Terumo Syringe Luer Lock</td>
			<td>Amtech Medical Ltd, Whanganui, New Zealand</td>
			<td>SH159/SH160</td>
			<td>Sterile syringes; 10 mL for drawing up induction drugs, 20 mL for drawing up saline</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Virkon Disinfectant Powder</td>
			<td>EBOS Group Ltd, Christchurch, NZ</td>
			<td>28461115</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intravitreal injections in the ovine eye

هناك عدة طرق لتوصيل العوامل العلاجية إلى شبكية العين ، بما في ذلك داخل الجسم الزجاجي (IVT) ، تحت الشبكية ، فوق المشيمية ، حول العين ، أو الإدارة الموضعية. يتضمن توصيل الدواء IVT حقنا في الخلط الزجاجي للعين ، وهي مادة هلامية تملأ الغرفة الخلفية للعين وتحافظ على شكل كرة العين. على الرغم من أن طريق IVT أقل استهدافا بشكل محدد من الولادة تحت الشبكية ، إلا أنه أقل توغلا ويستخدم على نطاق واسع في الإعدادات السريرية لمجموعة من أمراض العين. 
لقد أثبتنا سابقا فعالية التوصيل داخل الجسم الزجاجي لمنتج العلاج الجيني بوساطة الفيروس الغدي (AAV9). CLN5) في الأغنام مع شكل CLN5 يحدث بشكل طبيعي من داء الشحمي العصبي السيرويد (NCL). تلقت الأغنام المصابة العلاج الجيني IVT في عين واحدة ، مع العين الأخرى غير المعالجة بمثابة عنصر تحكم داخلي. تم الحفاظ على بنية الشبكية ووظيفتها في العين المعالجة لمدة تصل إلى 15 شهرا بعد العلاج ، في حين أظهرت العين غير المعالجة انخفاضا تدريجيا في الوظيفة وضمورا شديدا أثناء فحص ما بعد الوفاة. بناء على دراسات الأغنام ، تم مسح منتج العلاج الجيني CLN5 كدواء جديد تجريبي مرشح (IND) من قبل إدارة الغذاء والدواء الأمريكية في سبتمبر 2021. توضح هذه الورقة بالتفصيل البروتوكول الجراحي لتوصيل IVT لناقل فيروسي علاجي إلى عين الأغنام.

تم إثبات فعالية توصيل IVT لناقل العلاج الجيني CLN5 في تخفيف ضعف الشبكية وانحطاطها في الأغنام باستخدام CLN5 NCL من قبل مجموعة البحث15 هذه. تلقت الأغنام المصابة حقنة IVT واحدة 100 ميكرولتر من CLN5 معبأة في ناقل AAV من النمط المصلي 9 (AAV9) (AAV9. CLN5) في عين واحدة ، مع العين المقابلة بمثابة عنصر تحكم د?...

Watch this Scientific Journal Video about Intravitreal Injections in the Ovine Eye at JoVE.com

Intravitreal Injections in the Ovine Eye

تم إجراء الحقن داخل الجسم الزجاجي في عين الأغنام بهدف تقديم العلاج الجيني بوساطة فيروسية إلى شبكية العين.

الحقن داخل الجسم الزجاجي في عين الأغنام

There are several methods for the delivery of therapeutic agents to the retina, including intravitreal (IVT), subretinal, suprachoroidal, periocular, or ...

يمكن استخدام الحقن داخل الجسم الزجاجي لتوصيل العوامل العلاجية إلى شبكية العين. يتم تقديم بروتوكول للحقن داخل الجسم الزجاجي في عين الأغنام ، كنموذج للعين البشرية ، هنا. الحقن داخل الجسم الزجاجي أقل توغلا بكثير من الحقن العينية الأخرى.يمكن استخدام الحقن داخل الجسم الزجاجي بنجاح لتقديم منتج علاج جيني وعلاج تنكس الشبكية في الأغنام باستخدام ليبوفوسينوز سيرويد عصبي طبيعي. بمجرد تخدير الأغنام ، ابدأ في تطهير العين المراد حقنها عن طريق ريها بمحلول اليود البوفيدون بنسبة 1 إلى 5٪ باستخدام حقنة سعة 20 ملليلتر. ثم ضع ستارة جراحية معقمة ومغطاة على العين.ضع منظار العين على الجفون لإبقاء العين مفتوحة. أمسك الملتحمة البصلية على الجانب الجانبي الظهري للعين بالملقط وقم بتدوير كرة العين بطنيا. أدخل الإبرة حوالي سبعة ملليمترات خلف الصلبة على الجانب الجانبي للعين ، وزاوية خلفية لتجنب العدسة.تطبيق حقنة واحدة من 100 ميكرولتر كبلعة، بالقرب من شبكية العين قدر الإمكان، دون الإخلال بسطح الشبكية. شطف العين مع ما يقرب من 10 إلى 15 ملليلتر من 1 إلى 5٪ محلول اليود بوفيدون تليها 10 ملليلتر من المياه المالحة، قبل إزالة المنظار والستارة. أظهر تحليل تخطيط كهربية الشبكية الحفاظ على وظيفة الشبكية في العين المعالجة بينما انخفضت العين غير المعالجة بطريقة مماثلة للحيوانات المصابة ب CLN5.كانت أنسجة الشبكية شبه طبيعية في العين المعالجة بسمك شبكي إجمالي يمكن مقارنته بالحيوانات الضابطة السليمة في الشبكية المركزية. في المقابل ، كان سمك شبكية العين غير المعالجة مشابها للحيوانات المصابة ب CLN5. كان التعبير عن البروتين الحمضي الليفي الدبقي ، أو GFAP ، وهو علامة على إجهاد الشبكية والخلايا النجمية ، أقل في العيون المعالجة من العيون غير المعالجة ، مما يشير إلى أن الالتهاب المرتبط بالمرض قد تم تخفيفه بعد العلاج.مع وضع بروتوكول للحقن داخل الجسم الزجاجي في عين الأغنام ، يمكن الآن استخدام الأغنام لاختبار سلامة وفعالية العديد من العوامل العلاجية التي يتم توصيلها داخل الجسم الزجاجي.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Mouse Model of the Cornea Pocket Assay for Angiogenesis Study

نموذج الفأر من القرنية الفحص جيب للدراسة الأوعية الدموية

A normal cornea is clear of vascular tissues. However, blood vessels can be induced to grow and survive in the cornea when potent angiogenic factors are ...

Development of an Audio-based Virtual Gaming Environment to Assist with Navigation Skills in the Blind

تطوير بيئة المستندة إلى الصوت الألعاب الافتراضية للمساعدة في مهارات التنقل في مكفوفين

Audio-based Environment Simulator (AbES) is virtual environment software designed to improve real world navigation skills in the blind. Using only audio ...

Heterotopic Mucosal Engrafting Procedure for Direct Drug Delivery to the Brain in Mice

منتبذ المخاطي Engrafting إجراءات تسليم المخدرات مباشرة الى المخ في الفئران

Delivery of therapeutics into the brain is impeded by the presence of the blood-brain barrier (BBB) which restricts the passage of polar and high ...

Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

أداء تحت الشبكية الحقن في القوارض لتسليم خلايا الظهارة الصبغية الشبكية في تعليق

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

Trabecular Meshwork Response to Pressure Elevation in the Living Human Eye

استجابة الشبكة التربيقية إلى الارتفاع الضغط في العين البشرية المعيشة

The mechanical characteristics of the trabecular meshwork (TM) are linked to outflow resistance and intraocular pressure (IOP) regulation. The rationale ...

Fluorescent Dye Labeling of Erythrocytes and Leukocytes for Studying the Flow Dynamics in Mouse Retinal Circulation

صبغة الفلورسنت وصفها من كرات الدم الحمراء والكريات البيض لدراسة ديناميات التدفق في الماوس دوران الشبكية

The retinal and choroidal blood flow dynamics may provide insight into the pathophysiology and sequelae of various ocular diseases, such as glaucoma, ...

Transvaginal Mesh Insertion in the Ovine Model

ترانزفاجينال شبكة الإدراج في نموذج أوفين

This protocol describes mesh insertion into the rectovaginal septum in sheep using a single vaginal incision technique, with and without the trocar-guided ...

Ovine Lumbar Intervertebral Disc Degeneration Model Utilizing a Lateral Retroperitoneal Drill Bit Injury

أوفين القطني الفقرية نموذج التنكس القرص الاستفادة من الجانبي خلف الصفاق مثقاب إصابة

Intervertebral disc degeneration is a significant contributor to the development of back pain and the leading cause of disability worldwide. Numerous ...

Ultrahigh Resolution Mouse Optical Coherence Tomography to Aid Intraocular Injection in Retinal Gene Therapy Research

القرار أولتراهيغ الماوس الضوئية التماسك التصوير المقطعي لمساعدة الحقن داخل مقلة العين في أبحاث العلاج الجيني الشبكية

HR-SD-OCT is utilized to monitor the progression of photoreceptor degeneration in live mouse models, assess the delivery of therapeutic agents into the ...