Name: intravitreal injections in the ovine eye
Uploaded: 2022-07-05T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intravitreal Injections in the Ovine Eye at JoVE.com

स्टीव हीप (बीवीएससी, सर्टवीओफ्थल) को इस प्रोटोकॉल को स्थापित करने और मरे एट अल.15 द्वारा वर्णित इंजेक्शन का प्रदर्शन करने में उनकी सहायता के लिए स्वीकार करना चाहते हैं। लेखक क्योरकिड्स न्यूजीलैंड, कैंटरबरी मेडिकल रिसर्च फाउंडेशन, न्यूरोजीन इंक और बैटन डिजीज सपोर्ट एंड रिसर्च एसोसिएशन से वित्त पोषण को भी स्वीकार करते हैं।

सभी प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल लिंकन विश्वविद्यालय पशु नैतिकता समिति द्वारा अनुमोदित किए गए थे और अनुसंधान में जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए यूएस नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ हेल्थ दिशानिर्देशों और न्यूजी?...

<ol>
	<li>Himawan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+delivery+to+retinal+photoreceptors.">Drug delivery to retinal photoreceptors.</a> Drug Discovery Today. 24 (8), 1637-1643 (2019).</li><li>Murray, S. J., Mitchell, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+therapies+for+neuronal+ceroid+lipofuscinoses:+More+than+meets+the+eye.">Ocular therapies for neuronal ceroid lipofuscinoses: More than meets the eye.</a> Neural Regeneration Research. 17 (8), 1755-1756 (2022).</li><li>Bishop, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+macromolecules+and+supramolecular+organisation+of+the+vitreous+gel.">Structural macromolecules and supramolecular organisation of the vitreous gel.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 19 (3), 323-344 (2000).</li><li>Grzybowski, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=update+on+intravitreal+injections:+Euretina+expert+consensus+recommendations.">update on intravitreal injections: Euretina expert consensus recommendations.</a> Ophthalmologica. 239 (4), 181-193 (2018).</li><li>Pavlou, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+AAV+capsids+for+intravitreal+gene+therapy+of+photoreceptor+disorders.">Novel AAV capsids for intravitreal gene therapy of photoreceptor disorders.</a> EMBO Molecular Medicine. 13 (4), 13392 (2021).</li><li>Kousi, M., Lehesjoki, A. -. E., Mole, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+of+the+mutation+spectrum+and+clinical+correlations+of+over+360+mutations+in+eight+genes+that+underlie+the+neuronal+ceroid+lipofuscinoses.">Update of the mutation spectrum and clinical correlations of over 360 mutations in eight genes that underlie the neuronal ceroid lipofuscinoses.</a> Human Mutation. 33 (1), 42-63 (2012).</li><li>Wibbeler, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerliponase+alfa+for+the+treatment+of+atypical+phenotypes+of+CLN2+disease:+A+retrospective+case+series.">Cerliponase alfa for the treatment of atypical phenotypes of CLN2 disease: A retrospective case series.</a> Journal of Child Neurology. 36 (6), 468-474 (2021).</li><li>Schulz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+intraventricular+cerliponase+alfa+for+CLN2+disease.">Study of intraventricular cerliponase alfa for CLN2 disease.</a> The New England Journal of Medicine. 378 (20), 1898-1907 (2018).</li><li>Mitchell, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+in+vivo+monitoring+of+the+CNS+demonstrates+the+efficacy+of+gene+therapy+in+a+sheep+model+of+CLN5+Batten+disease.">Longitudinal in vivo monitoring of the CNS demonstrates the efficacy of gene therapy in a sheep model of CLN5 Batten disease.</a> Molecular Therapy. 26 (10), 2366-2378 (2018).</li><li>Murray, S. J., Mitchell, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+history+of+retinal+degeneration+in+ovine+models+of+CLN5+and+CLN6+neuronal+ceroid+lipofuscinoses.">Natural history of retinal degeneration in ovine models of CLN5 and CLN6 neuronal ceroid lipofuscinoses.</a> Scientific Reports. 12 (1), 3670 (2022).</li><li>Russell, K. N., Mitchell, N. L., Wellby, M. P., Barrell, G. K., Palmer, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroretinography+data+from+ovine+models+of+CLN5+and+CLN6+neuronal+ceroid+lipofuscinoses.">Electroretinography data from ovine models of CLN5 and CLN6 neuronal ceroid lipofuscinoses.</a> Data in Brief. 37, 107188 (2021).</li><li>Shafiee, A., McIntire, G. L., Sidebotham, L. C., Ward, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+determination+and+allometric+prediction+of+vitreous+volume,+and+retina+and+lens+weights+in+G&#246;ttingen+minipigs.">Experimental determination and allometric prediction of vitreous volume, and retina and lens weights in G&#246;ttingen minipigs.</a> Veterinary Ophthalmology. 11 (3), 193-196 (2008).</li><li>Shinozaki, A., Hosaka, Y., Imagawa, T., Uehara, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topography+of+ganglion+cells+and+photoreceptors+in+the+sheep+retina.">Topography of ganglion cells and photoreceptors in the sheep retina.</a> The Journal of Comparative Neurology. 518 (12), 2305-2315 (2010).</li><li>Frugier, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+large+animal+model+of+CLN5+neuronal+ceroid+lipofuscinosis+in+Borderdale+sheep+is+caused+by+a+nucleotide+substitution+at+a+consensus+splice+site+(c.571+1G&gt;A)+leading+to+excision+of+exon+3.">A new large animal model of CLN5 neuronal ceroid lipofuscinosis in Borderdale sheep is caused by a nucleotide substitution at a consensus splice site (c.571+1G&gt;A) leading to excision of exon 3.</a> Neurobiology of Disease. 29 (2), 306-315 (2008).</li><li>Murray, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravitreal+gene+therapy+protects+against+retinal+dysfunction+and+degeneration+in+sheep+with+CLN5+Batten+disease.">Intravitreal gene therapy protects against retinal dysfunction and degeneration in sheep with CLN5 Batten disease.</a> Experimental Eye Research. 207, 108600 (2021).</li><li>Ross, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Outer+retinal+transduction+by+AAV2-7m8+following+intravitreal+injection+in+a+sheep+model+of+CNGA3+achromatopsia.">Outer retinal transduction by AAV2-7m8 following intravitreal injection in a sheep model of CNGA3 achromatopsia.</a> Gene Therapy. , (2021).</li><li>Boyd, R. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoreceptor-targeted+gene+delivery+using+intravitreally+administered+AAV+vectors+in+dogs.">Photoreceptor-targeted gene delivery using intravitreally administered AAV vectors in dogs.</a> Gene Therapy. 23 (2), 223-230 (2016).</li><li>Dalkara, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo-directed+evolution+of+a+new+adeno-associated+virus+for+therapeutic+outer+retinal+gene+delivery+from+the+vitreous.">In vivo-directed evolution of a new adeno-associated virus for therapeutic outer retinal gene delivery from the vitreous.</a> Science Translational Medicine. 5 (189), (2013).</li><li>Gearhart, P. M., Gearhart, C., Thompson, D. A., Petersen-Jones, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvement+of+visual+performance+with+intravitreal+administration+of+9-cis-retinal+in+Rpe65-mutant+dogs.">Improvement of visual performance with intravitreal administration of 9-cis-retinal in Rpe65-mutant dogs.</a> Archives of Ophthalmology. 128 (11), 1442-1448 (2010).</li><li>Ross, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+photoreceptor+transduction+efficacy+of+capsid-modified+adeno-associated+viral+vectors+following+intravitreal+and+subretinal+delivery+in+sheep.">Evaluation of photoreceptor transduction efficacy of capsid-modified adeno-associated viral vectors following intravitreal and subretinal delivery in sheep.</a> Human Gene Therapy. 31 (13-14), 719-729 (2020).</li><li>Kotterman, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody+neutralization+poses+a+barrier+to+intravitreal+adeno-associated+viral+vector+gene+delivery+to+non-human+primates.">Antibody neutralization poses a barrier to intravitreal adeno-associated viral vector gene delivery to non-human primates.</a> Gene Therapy. 22 (2), 116-126 (2015).</li><li>Whitehead, M., Osborne, A., Yu-Wai-Man, P., Martin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humoral+immune+responses+to+AAV+gene+therapy+in+the+ocular+compartment.">Humoral immune responses to AAV gene therapy in the ocular compartment.</a> Biological Reviews. 96 (4), 1616-1644 (2021).</li><li>Yun, C., Oh, J., Hwang, S. -. Y., Kim, S. -. W., Huh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subconjunctival+hemorrhage+after+intravitreal+injection+of+anti-vascular+endothelial+growth+factor.">Subconjunctival hemorrhage after intravitreal injection of anti-vascular endothelial growth factor.</a> Graefe's Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 253 (9), 1465-1470 (2015).</li><li>Christensen, L., Cerda, A., Olson, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+measurement+of+needle+forces+and+acute+pressure+changes+during+intravitreal+injections.">Real-time measurement of needle forces and acute pressure changes during intravitreal injections.</a> Clinical &amp; Experimental Ophthalmology. 45 (8), 820-827 (2017).</li><li>Allmendinger, A., Butt, Y. L., Mueller, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraocular+pressure+and+injection+forces+during+intravitreal+injection+into+enucleated+porcine+eyes.">Intraocular pressure and injection forces during intravitreal injection into enucleated porcine eyes.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 166, 87-93 (2021).</li><li>Ross, M., Ofri, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+future+of+retinal+gene+therapy:+Evolving+from+subretinal+to+intravitreal+vector+delivery.">The future of retinal gene therapy: Evolving from subretinal to intravitreal vector delivery.</a> Neural Regeneration Research. 16 (9), 1751-1759 (2021).</li><li>Henein, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrodynamics+of+intravitreal+injections+into+liquid+vitreous+substitutes.">Hydrodynamics of intravitreal injections into liquid vitreous substitutes.</a> Pharmaceutics. 11 (8), 371 (2019).</li><li>Park, I., Park, H. S., Kim, H. K., Chung, W. K., Kim, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+measurement+of+intraocular+pressure+variation+during+automatic+intravitreal+injections:+An+ex-vivo+experimental+study+using+porcine+eyes.">Real-time measurement of intraocular pressure variation during automatic intravitreal injections: An ex-vivo experimental study using porcine eyes.</a> PloS One. 16 (8), 0256344 (2021).</li><li>Willekens, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravitreally+injected+fluid+dispersion:+Importance+of+injection+technique.">Intravitreally injected fluid dispersion: Importance of injection technique.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 58 (3), 1434-1441 (2017).</li><li>Peynshaert, K., Devoldere, J., De Smedt, S. C., Remaut, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+ex+vivo+models+to+study+drug+delivery+barriers+in+the+posterior+segment+of+the+eye.">In vitro and ex vivo models to study drug delivery barriers in the posterior segment of the eye.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 126, 44-57 (2018).</li><li>Kiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vector+Considerations+for+Ocular+Gene+Therapy.+Adeno-associated+virus+vectors+offer+a+safe+and+effective+tool+for+gene+delivery.">Vector Considerations for Ocular Gene Therapy. Adeno-associated virus vectors offer a safe and effective tool for gene delivery.</a> Retinal Physician. 17, 40-45 (2020).</li><li>Kleine Holthaus, S. -. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+therapy+targeting+the+inner+retina+rescues+the+retinal+phenotype+in+a+mouse+model+of+CLN3+Batten+disease.">Gene therapy targeting the inner retina rescues the retinal phenotype in a mouse model of CLN3 Batten disease.</a> Human Gene Therapy. 31 (13-14), 709-718 (2020).</li><li>Kleine Holthaus, S. -. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+brain-directed+gene+therapy+rescues+a+mouse+model+of+neurodegenerative+CLN6+Batten+disease.">Neonatal brain-directed gene therapy rescues a mouse model of neurodegenerative CLN6 Batten disease.</a> Human Molecular Genetics. 28 (23), 3867-3879 (2019).</li></ol>

इंट्राविट्रल इंजेक्शन मानव नेत्र विज्ञान में सबसे आम शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं में से एक है और भेड़ के रेटिना में एएवी-मध्यस्थता जीन थेरेपी देने में प्रभावी साबित हुआ है। हमने पहले एएवी 9 की प्रभावका?...

रेटिना में चिकित्सीय एजेंटों को वितरित करने के लिए कई तरीकों का उपयोग किया जा सकता है, जिसमें इंट्राविट्रल (आईवीटी), सबरेटिनल, सुप्राकोरॉइडल, पेरिओकुलर या सामयिक प्रशासन शामिल हैं। प्रशासन के प्रत्येक मार्ग में रक्त-रेटिना बाधा या आंतरिक और बाहरी सीमित झिल्ली जैसी बाधाओं पर काबू पाना शामिल है और वितरित की जा रही दवा और विशिष्ट रेटिना लक्ष्य 1,2 के आधार पर प्रभावकारिता की अलग-अलग दर है।
आईवीटी दवा वितरण में आंख के विट्रियस ह्यूमर में एक इंजेक्शन शामिल है, एक जिलेटिनस पदार्थ जो आंख के पीछे के कक्ष पर कब्जा कर लेता है। विट्रियस हास्य का प्राथमिक कार्य आंखों के ग्लोब के आकार को बनाए रखना और ओकुलर ऊतकों, जैसे लेंस और रेटिना को जगह में रखना है। विट्रियस हास्य काफी हद तक पानी से बना होता है, जिसमें कोलेजन, हाइलूरोनिक एसिड और अन्य नॉनकोलेजेनस प्रोटीनकी थोड़ी मात्रा होती है। आईवीटी इंजेक्शन एक सरल और सामान्य प्रक्रिया है जिसका उपयोग नियमित रूप से नेत्र संबंधी स्थितियों की एक विस्तृत श्रृंखला के इलाज के लिए किया जाता है, जिसमें उम्र से संबंधित मैकुलर अपघटन, मधुमेह मैकुलर एडिमा, मधुमेह रेटिनोपैथी, रेटिना नस रोड़ा और कई विरासत में मिली रेटिना डिस्ट्रोफी 4,5 शामिल हैं।
न्यूरोनल सेरॉइड लिपोफसिनोस (एनसीएल; बैटन रोग) घातक लाइसोसोमल भंडारण रोगों का एक समूह है जो मस्तिष्क और रेटिना के गंभीर अध: पतन का कारण बनता है। वर्तमान में एनसीएल के 13 ज्ञात रूप हैं जो विभिन्न जीनों (सीएलएन 1-8, सीएलएन 10-14) में उत्परिवर्तन के परिणामस्वरूप हैं जो मुख्य रूप से बच्चों को प्रभावित करते हैं लेकिन शुरुआत और रोग की गंभीरता की अलग-अलग उम्र होतीहै। एनसीएल सामान्य प्रगतिशील लक्षण साझा करते हैं, जिसमें संज्ञानात्मक और मोटर गिरावट, दौरे और दृष्टि की हानि शामिल है। एनसीएल के लिए कोई इलाज नहीं है; हालांकि, मस्तिष्क-निर्देशित एंजाइम-प्रतिस्थापन चिकित्सा वर्तमान में सीएलएन 2 रोग 7,8 के लिए नैदानिक परीक्षणों में है, और एएवी-मध्यस्थता जीन थेरेपी ने प्रीक्लिनिकल अध्ययनों में बहुत वादा दिखाया है, जिसमें सीएलएन 5 जीन थेरेपी के लिए नैदानिक परीक्षण 2022 9,10 में शुरू होने की उम्मीद है।
कई अन्य प्रजातियां एनसीएल के स्वाभाविक रूप से पाए जाने वाले रूपों को विकसित करती हैं, जिनमें बिल्लियां, कुत्ते, भेड़ और गाय शामिल हैं। एनसीएल के दो ओविन मॉडल वर्तमान में न्यूजीलैंड में सक्रिय अध्ययन के अधीन हैं: बॉर्डरडेल भेड़ में एक सीएलएन 5 रोग मॉडल और दक्षिण हैम्पशायर भेड़ में एक सीएलएन 6 रोग मॉडल। प्रभावित भेड़ मानव रोग की कई नैदानिक और रोग संबंधी विशेषताओं का प्रदर्शन करती हैं, जिसमें रेटिना शोष और दृष्टि का नुकसान10,11 शामिल है। यद्यपि सीएलएन 5 रोग के साथ भेड़ में मस्तिष्क-निर्देशित सीएलएन 5 जीन थेरेपी मस्तिष्क शोष और नैदानिक गिरावट को रोक या रोक सकती है, फिर भी इलाज की गई भेड़ अपनीदृष्टि खो देती है। इसने दृष्टि को संरक्षित करने और जीवन की बेहतर गुणवत्ता बनाए रखने के लिए रेटिना का इलाज करने की आवश्यकता पर प्रकाश डाला, जिससे भेड़ में ओकुलर जीन थेरेपी के लिए एक प्रोटोकॉल की स्थापना हुई।
भेड़ की आंख मानव आंख के एक अच्छे मॉडल का प्रतिनिधित्व करती है क्योंकि आंख ग्लोब आयामों, विट्रियस वॉल्यूम और रेटिना संरचना 10,12,13 में इसकी समानता है। यह पेपर ओविन आंख को चिकित्सीय वायरल वेक्टर की एक छोटी मात्रा (≤100 μL) के आईवीटी वितरण के लिए सर्जिकल प्रोटोकॉल का विवरण देता है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL low dead-space safety syringe with permanently attached 0.5 inch needle</td>
			<td>Fisher Scientific, Auckland, New Zealand</td>
			<td>05-561-28</td>
			<td>Covidien Monoject Tuberculin Safety syringe or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL microcentrifuge tube</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>HS4323</td>
			<td>Autoclave tubes to sterilise prior to use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia machine with gas bench and monitor&#160;</td>
			<td>Hyvet Anesthesia, Christchurch, New Zealand</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic eye drops&#160;</td>
			<td>Teva Pharma Ltd, Auckland, New Zealand</td>
			<td></td>
			<td>Commercial name: Chlorafast (0.5% chloramphenicol)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BrightMount plus anti-fade mounting medium</td>
			<td>Abcam, Cambridge, United Kingdom</td>
			<td>ab103748</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI (4&#8242; ,6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride)</td>
			<td>Sigma Aldrich, St. Louis, Missouri, United States</td>
			<td>10236276001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diazepam sedative</td>
			<td>Ilium, Troy Laboratories Pty Ltd, Tauranga, New Zealand</td>
			<td></td>
			<td>5 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endotracheal tubes</td>
			<td>Flexicare Medical Ltd, Mountain Ash, United Kingdom</td>
			<td></td>
			<td>Standard, cuffed. Sizes 7, 7.5, or 8 depending on sheep size</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye speculum</td>
			<td>Capes Medical Ltd, Tauranga, New Zealand</td>
			<td>KP151/14</td>
			<td>Nopa Barraquer-Colibri (10 mm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fenestrated surgical drape</td>
			<td>Amtech Medical Ltd, Whanganui, New Zealand</td>
			<td>DI583</td>
			<td>Or similar&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter Tips</td>
			<td>Interlab, Auckland, New Zealand</td>
			<td></td>
			<td>10, 200, and 1,000 &#181;L&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde solution (37%)</td>
			<td>Fisher Scientific, Auckland, New Zealand</td>
			<td>AJA809-2.5PL</td>
			<td>Make up to 10% in distilled water with 0.9% NaCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rabbit Alexa Fluor 594</td>
			<td>Invitrogen Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>&#160;A-11012</td>
			<td>Use at a dilution of 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane anesthetic</td>
			<td>Attane, Bayer Animal Health, Auckland, New Zealand</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine HCl anesthetic/analgesic</td>
			<td>PhoenixPharm Distributors Ltd, Auckland, New Zealand</td>
			<td></td>
			<td>100 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laryngoscope (veterinary)</td>
			<td>KaWe Medical, Denmark</td>
			<td></td>
			<td>Miller C blade, size 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles&#160;</td>
			<td>Capes Medical Ltd, Tauranga, New Zealand</td>
			<td>302025</td>
			<td>BD Hypodermic Needles, or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-steroidal anti-inflammatory</td>
			<td>Boehringer Ingelheim (NZ) Ltd, Auckland, New Zealand</td>
			<td>49402/008</td>
			<td>Commercial name: Metacam 20 (20 mg/mL meloxicam)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-toothed forceps</td>
			<td>Capes Medical Ltd, Tauranga, New Zealand</td>
			<td>AB864/16</td>
			<td>Or similar&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-toothed hemostat</td>
			<td>Capes Medical Ltd, Tauranga, New Zealand</td>
			<td>AA150/12</td>
			<td>Or similar&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal goat serum</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Christchurch, New Zealand</td>
			<td>16210072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen (medical)</td>
			<td>BOC Gas, Christchurch, New Zealand</td>
			<td></td>
			<td>D2 cylinder, gas code 180</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Christchurch, New Zealand</td>
			<td>10010023</td>
			<td>Sterile, filtered</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone-Iodine solution</td>
			<td>Capes Medical Ltd, Tauranga, New Zealand</td>
			<td>005835</td>
			<td>Commercial name: Betadine (10% povidone-iodine)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-cow glial fibrillary acidic protein (GFAP)</td>
			<td>Dako, Glostrup, Denmark</td>
			<td>Z0334</td>
			<td>Use at a dilution of 1:2,500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Self-complementary adeno-associated virus serotype 9, containing the chicken beta action (CBh) promoter and codon-optimized ovine CLN5</td>
			<td>University of North Carolina Vector Core, NC, USA.</td>
			<td>scAAV9/CBh-oCLN5opt</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride 0.9% IV Solution</td>
			<td>Capes Medical Ltd, Tauranga, New Zealand</td>
			<td>AHB1322</td>
			<td>Commercial name: Saline solution&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Subcutaneous antibiotics</td>
			<td>Intervet Schering Plough Animal Health Ltd, Wellington, New Zealand</td>
			<td></td>
			<td>Commercial name: Duplocillin LA (150,000 IU/mL procaine penicillin and 115,000 IU/mL benzathine penicillin)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical sharp blunt curved scissors&#160;</td>
			<td>Capes Medical Ltd, Tauranga, New Zealand</td>
			<td>SSSHBLC130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Terumo Syringe Luer Lock</td>
			<td>Amtech Medical Ltd, Whanganui, New Zealand</td>
			<td>SH159/SH160</td>
			<td>Sterile syringes; 10 mL for drawing up induction drugs, 20 mL for drawing up saline</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Virkon Disinfectant Powder</td>
			<td>EBOS Group Ltd, Christchurch, NZ</td>
			<td>28461115</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intravitreal injections in the ovine eye

रेटिना में चिकित्सीय एजेंटों के वितरण के लिए कई तरीके हैं, जिनमें इंट्राविट्रल (आईवीटी), सबरेटिनल, सुप्राकोरॉइडल, पेरिओकुलर या सामयिक प्रशासन शामिल हैं। आईवीटी दवा वितरण में आंख के विट्रियस ह्यूमर में एक इंजेक्शन शामिल है, एक जिलेटिनस पदार्थ जो आंख के पीछे के कक्ष को भरता है और आंखों के ग्लोब के आकार को बनाए रखता है। यद्यपि आईवीटी मार्ग उप-प्रसव की तुलना में कम विशेष रूप से लक्षित है, यह बहुत कम आक्रामक है और नेत्र रोगों की एक श्रृंखला के लिए नैदानिक सेटिंग्स में व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। 
हमने पहले एडेनो-संबद्ध वायरस (एएवी) -मध्यस्थता जीन थेरेपी उत्पाद (एएवी 9) के इंट्राविट्रल डिलीवरी की प्रभावकारिता का प्रदर्शन किया था। सीएलएन 5) भेड़ में स्वाभाविक रूप से होने वाले सीएलएन 5 रूप के न्यूरोनल सेरोइड लिपोफसिनोसिस (एनसीएल)। प्रभावित भेड़ों को एक आंख में आईवीटी जीन थेरेपी मिली, दूसरी अनुपचारित आंख आंतरिक नियंत्रण के रूप में काम करती है। उपचार के 15 महीने बाद तक इलाज की गई आंखों में रेटिना संरचना और कार्य बनाए रखा गया था, जबकि अनुपचारित आंख ने पोस्टमॉर्टम परीक्षा के दौरान उत्तरोत्तर घटते कार्य और गंभीर शोष को प्रदर्शित किया। भेड़ के अध्ययन के आधार पर, सीएलएन 5 जीन थेरेपी उत्पाद को सितंबर 2021 में संयुक्त राज्य खाद्य और औषधि प्रशासन द्वारा एक उम्मीदवार जांच नई दवा (आईएनडी) के रूप में मंजूरी दी गई थी। यह पेपर ओविन आंख को एक चिकित्सीय वायरल वेक्टर के आईवीटी वितरण के लिए सर्जिकल प्रोटोकॉल का विवरण देता है।

सीएलएन 5 एनसीएल के साथ भेड़ में रेटिना डिसफंक्शन और अपघटन को कम करने में सीएलएन 5 जीन थेरेपी वेक्टर के आईवीटी वितरण की प्रभावकारिता पहले इस शोध समूह15 द्वारा प्रदर्शित की गई है। प्रभावित भेड़ों ...

Watch this Scientific Journal Video about Intravitreal Injections in the Ovine Eye at JoVE.com

Intravitreal Injections in the Ovine Eye

रेटिना में वायरल-मध्यस्थता जीन थेरेपी देने के उद्देश्य से भेड़ की आंख में इंट्राविट्रल इंजेक्शन किए गए थे।

ओविन आई में इंट्राविट्रल इंजेक्शन

There are several methods for the delivery of therapeutic agents to the retina, including intravitreal (IVT), subretinal, suprachoroidal, periocular, or ...

रेटिना में चिकित्सीय एजेंटों को वितरित करने के लिए इंट्राविट्रल इंजेक्शन का उपयोग किया जा सकता है। मानव आंख के एक मॉडल के रूप में भेड़ की आंख में इंट्राविट्रल इंजेक्शन के लिए एक प्रोटोकॉल यहां प्रस्तुत किया गया है। इंट्राविट्रल इंजेक्शन अन्य ओकुलर इंजेक्शन की तुलना में बहुत कम आक्रामक होते हैं।इंट्राविट्रल इंजेक्शन का उपयोग जीन थेरेपी उत्पाद देने और प्राकृतिक रूप से होने वाले न्यूरोनल सेरोइड लिपोफसिनोस के साथ भेड़ में रेटिना अपघटन का इलाज करने के लिए सफलतापूर्वक किया जा सकता है। एक बार भेड़ को एनेस्थेटाइज करने के बाद, 20-मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग करके 1 से 5% पोविडोन आयोडीन समाधान के साथ सिंचाई करके इंजेक्शन लगाने के लिए आंख को सड़न से कीटाणुरहित करना शुरू करें। फिर, आंख के ऊपर एक बाँझ, फेनेस्टेड सर्जिकल ड्रेप रखें।आंख खुली रखने के लिए पलकों पर एक आंख स्पेकुलम फिट करें। आंख के पृष्ठीय पार्श्व पहलू पर बुलबार नेत्रश्लेष्मला को बल के साथ पकड़ें और आंखों के ग्लोब को वेंट्रोमेडियल रूप से घुमाएं। सुई को आंख के पार्श्व पहलू पर श्वेतपटल के लगभग सात मिलीमीटर पीछे डालें, और लेंस से बचने के लिए पीछे की ओर कोण करें।रेटिना सतह को परेशान किए बिना, जितना संभव हो सके रेटिना के करीब, बोलस के रूप में 100 माइक्रोलीटर के एकल इंजेक्शन का प्रबंधन करें। स्पेकुलम और ड्रेप को हटाने से पहले, 1 से 5% पोविडोन आयोडीन घोल के लगभग 10 से 15 मिलीलीटर के साथ आंख को धोएं। इलेक्ट्रोरेटिनोग्राफी विश्लेषण ने इलाज की गई आंखों में संरक्षित रेटिना फ़ंक्शन का प्रदर्शन किया, जबकि अनुपचारित आंख में सीएलएन 5 प्रभावित जानवरों के समान तरीके से गिरावट आई।रेटिना हिस्टोलॉजी केंद्रीय रेटिना में स्वस्थ नियंत्रण जानवरों के बराबर कुल रेटिना मोटाई के साथ इलाज की गई आंखों में सामान्यीकृत थी। इसके विपरीत, अनुपचारित रेटिना की मोटाई सीएलएन 5 प्रभावित जानवरों के बराबर थी। ग्लियल फाइब्रिलरी अम्लीय प्रोटीन, या जीएफएपी, रेटिना तनाव और एस्ट्रोग्लिया का एक मार्कर, अनुपचारित आंखों की तुलना में इलाज की गई आंखों में कम था, यह दर्शाता है कि उपचार के बाद रोग से संबंधित सूजन क्षीण हो गई थी।भेड़ की आंखों में इंट्राविट्रल इंजेक्शन के लिए एक प्रोटोकॉल की स्थापना के साथ, भेड़ का उपयोग अब कई इंट्राविट्रल-वितरित चिकित्सीय एजेंटों की सुरक्षा और प्रभावकारिता का परीक्षण करने के लिए किया जा सकता है।

Research

JoVE Journal

Medicine

A Mouse Model of the Cornea Pocket Assay for Angiogenesis Study

Angiogenesis अध्ययन के लिए कॉर्निया पॉकेट परख की एक माउस मॉडल

A normal cornea is clear of vascular tissues. However, blood vessels can be induced to grow and survive in the cornea when potent angiogenic factors are ...

Development of an Audio-based Virtual Gaming Environment to Assist with Navigation Skills in the Blind

एक ऑडियो आधारित वर्चुअल गेमिंग पर्यावरण के विकास नेविगेशन कौशल के साथ ब्लाइंड में सहायता करने के लिए

Audio-based Environment Simulator (AbES) is virtual environment software designed to improve real world navigation skills in the blind. Using only audio ...

Heterotopic Mucosal Engrafting Procedure for Direct Drug Delivery to the Brain in Mice

चूहों में मस्तिष्क के लिए सीधी दवा वितरण के लिए Heterotopic Mucosal Engrafting प्रक्रिया

Delivery of therapeutics into the brain is impeded by the presence of the blood-brain barrier (BBB) which restricts the passage of polar and high ...

Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

निलंबन में रेटिना वर्णक उपकला कोशिकाओं उद्धार करने के लिए कृन्तकों में subretinal इंजेक्शन प्रदर्शन

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

Trabecular Meshwork Response to Pressure Elevation in the Living Human Eye

जीवित मानव आंखों पर दबाव ऊंचाई को घरनदार meshwork रिस्पांस

The mechanical characteristics of the trabecular meshwork (TM) are linked to outflow resistance and intraocular pressure (IOP) regulation. The rationale ...

Fluorescent Dye Labeling of Erythrocytes and Leukocytes for Studying the Flow Dynamics in Mouse Retinal Circulation

माउस रेटिना संचलन में फ्लो डायनेमिक्स के अध्ययन के लिए एरिथ्रोसाइट्स और ल्यूकोसाइट्स के फ्लोरोसेंट डाई लेबलिंग

The retinal and choroidal blood flow dynamics may provide insight into the pathophysiology and sequelae of various ocular diseases, such as glaucoma, ...

Transvaginal Mesh Insertion in the Ovine Model

ओवइन मॉडल में ट्रांस्वाजिनल मेस्ड इन्सर्टेशन

This protocol describes mesh insertion into the rectovaginal septum in sheep using a single vaginal incision technique, with and without the trocar-guided ...

Ovine Lumbar Intervertebral Disc Degeneration Model Utilizing a Lateral Retroperitoneal Drill Bit Injury

ओवेन लूम्बर इंटरवरटेब्रल डिस्क डिगेंरनेशन मॉडल एक पार्श्व Retroperitoneal ड्रिल बिट चोट का उपयोग

Intervertebral disc degeneration is a significant contributor to the development of back pain and the leading cause of disability worldwide. Numerous ...

Ultrahigh Resolution Mouse Optical Coherence Tomography to Aid Intraocular Injection in Retinal Gene Therapy Research

Ultrahigh संकल्प माउस ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफी रेटिना जीन थेरेपी अनुसंधान में Intraocular इंजेक्शन सहायता करने के लिए

HR-SD-OCT is utilized to monitor the progression of photoreceptor degeneration in live mouse models, assess the delivery of therapeutic agents into the ...