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•
09:45 min
June 2nd, 2022
DOI :
10.3791/63828-v
Chapters
0:04
Introduction
1:18
Animal Surgery
3:26
Hepatocyte Isolation
4:54
Electroporation and Cell Culture
7:46
Results: Generating Electroporation-Assisted CRISPR-Cas9 Edits in Freshly Isolated Mouse Hepatocytes
9:06
Conclusion
Transcript
私たちの技術の主な利点は、in vitroおよびin vivo疾患モデルを生成する方法として、初代マウス肝細胞の遺伝子を編集するための簡単、迅速、かつ再現性のあるアプローチであることです。私たちの技術を使用すると、単離された肝細胞で標的遺伝子をノックダウンしてから患者に移植し、罹患細胞を遺伝子編集肝細胞に置き換えることができるかもしれません。 経験の浅い研究者は、カニューレ挿入と灌流中のカテーテルの安定性の維持に苦労する可能性があります。ユーザーは、開始する前に、手順とトラブルシューティン
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Summary
このプロトコルは、初代マウス肝細胞を肝臓から単離し、CRISPR-Cas9をリボヌクレオタンパク質およびmRNAとしてエレクトロポレーションして、肝臓の遺伝性代謝疾患に関連する治療標的遺伝子を破壊する技術について記載している。記載された方法は、エレクトロポレーション後に高い生存率および高レベルの遺伝子改変をもたらす。
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