Name: experimental viral infection in adult mosquitoes by oral feeding and microinjection
Uploaded: 2022-07-28T14:00:00
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इस काम को वुहान विज्ञान और प्रौद्योगिकी योजना परियोजना (2018201261638501) द्वारा समर्थित किया गया था।

1. वायरस और मच्छरों की तैयारी
<ol><li>वायरस की तैयारी नोट: सभी प्रक्रियाओं को एक जैव सुरक्षा स्तर 2 (बीएसएल -2) प्रयोगशाला में किया गया था। उपयोग किए जाने वाले जैव सुरक्षा नियंत्रण का स्तर रोगज़नक़ के ज?...

<ol>
	<li>Yu, X., Zhu, Y., Xiao, X., Wang, P., Cheng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+towards+Understanding+the+Mosquito-Borne+Virus+Life+Cycle.">Progress towards Understanding the Mosquito-Borne Virus Life Cycle.</a> Trends in Parasitology. 35 (12), 1009-1017 (2019).</li><li>Sukhralia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+dengue+to+Zika:+the+wide+spread+of+mosquito-borne+arboviruses.">From dengue to Zika: the wide spread of mosquito-borne arboviruses.</a> European Journal of Clinical Microbiology &amp; Infectious Diseases. 38 (1), 3-14 (2019).</li><li>Kuhn, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taxonomic+update+of+phylum+Negarnaviricota+(Riboviria:+Orthornavirae),+including+the+large+orders+Bunyavirales+and+Mononegavirales.">Taxonomic update of phylum Negarnaviricota (Riboviria: Orthornavirae), including the large orders Bunyavirales and Mononegavirales.</a> Archives of Virology. 166 (12), 3513-3566 (2021).</li><li>Bhatt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+distribution+and+burden+of+dengue.">The global distribution and burden of dengue.</a> Nature. 496 (7446), 504-507 (2013).</li><li>Kindhauser, M. K., Allen, T., Frank, V., Santhana, R. 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F., Kittayapong, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vector+Competence+for+Dengue-2+Viruses+Isolated+from+Patients+with+Different+Disease+Severity.">Vector Competence for Dengue-2 Viruses Isolated from Patients with Different Disease Severity.</a> Pathogens. 9 (10), (2020).</li><li>Naslund, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+Mosquito-Borne+Viruses+Linked+to+Aedes+aegypti+and+Aedes+albopictus:+Global+Status+and+Preventive+Strategies.">Emerging Mosquito-Borne Viruses Linked to Aedes aegypti and Aedes albopictus: Global Status and Preventive Strategies.</a> Vector-Borne and Zoonotic Diseases. 21 (10), 731-746 (2021).</li><li>Lwande, O. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Globe-Trotting+Aedes+aegypti+and+Aedes+albopictus:+Risk+Factors+for+Arbovirus+Pandemics.">Globe-Trotting Aedes aegypti and Aedes albopictus: Risk Factors for Arbovirus Pandemics.</a> Vector-Borne and Zoonotic Diseases. 20 (2), 71-81 (2020).</li><li>Liu-Helmersson, J., Brannstrom, A., Sewe, M. O., Semenza, J. C., Rocklov, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimating+Past,+Present,+and+Future+Trends+in+the+Global+Distribution+and+Abundance+of+the+Arbovirus+Vector+Aedes+aegypti+Under+Climate+Change+Scenarios.">Estimating Past, Present, and Future Trends in the Global Distribution and Abundance of the Arbovirus Vector Aedes aegypti Under Climate Change Scenarios.</a> Fronters in Public Health. 7, 148 (2019).</li><li>Cai, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+2021+China+report+of+the+Lancet+Countdown+on+health+and+climate+change:+seizing+the+window+of+opportunity.">The 2021 China report of the Lancet Countdown on health and climate change: seizing the window of opportunity.</a> Lancet Public Health. 6 (12), 932-947 (2021).</li><li>Chan, K. K., Auguste, A. J., Brewster, C. C., Paulson, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vector+competence+of+Virginia+mosquitoes+for+Zika+and+Cache+Valley+viruses.">Vector competence of Virginia mosquitoes for Zika and Cache Valley viruses.</a> Parasites &amp; Vectors. 13 (1), 188 (2020).</li><li>Kumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosquito+Innate+Immunity.">Mosquito Innate Immunity.</a> Insects. 9 (3), (2018).</li><li>Franz, A. W., Kantor, A. M., Passarelli, A. L., Clem, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+Barriers+to+Arbovirus+Infection+in+Mosquitoes.">Tissue Barriers to Arbovirus Infection in Mosquitoes.</a> Viruses. 7 (7), 3741-3767 (2015).</li><li>Xia, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Ebinur+Lake+Virus+and+Its+Human+Seroprevalence+at+the+China-Kazakhstan+Border.">Characterization of Ebinur Lake Virus and Its Human Seroprevalence at the China-Kazakhstan Border.</a> Frontiers in Microbiology. 10, (2020).</li><li>Baer, A., Kehn-Hall, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viral+Concentration+Determination+Through+Plaque+Assays:+Using+Traditional+and+Novel+Overlay+Systems.">Viral Concentration Determination Through Plaque Assays: Using Traditional and Novel Overlay Systems.</a> Jove-Journal of Visualized Experiments. (93), e52065 (2014).</li><li>Xu, M. Y., Liu, S. Q., Deng, C. L., Zhang, Q. Y., Zhang, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+Zika+virus+by+SYBR+green+one-step+real-time+RT-PCR.">Detection of Zika virus by SYBR green one-step real-time RT-PCR.</a> Journal of Virological Methods. 236, 93-97 (2016).</li><li>Yang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vector+competence+and+transcriptional+response+of+Aedes+aegypti+for+Ebinur+Lake+virus,+a+newly+mosquito-borne+orthobunyavirus.">Vector competence and transcriptional response of Aedes aegypti for Ebinur Lake virus, a newly mosquito-borne orthobunyavirus.</a> bioRxiv. , (2022).</li><li>Britton, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory-acquired+dengue+virus+infection--a+case+report.">Laboratory-acquired dengue virus infection--a case report.</a> PLOS Neglected Tropical Diseases. 5 (11), 1324 (2011).</li><li>Weger-Lucarelli, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vector+Competence+of+American+Mosquitoes+for+Three+Strains+of+Zika+Virus.">Vector Competence of American Mosquitoes for Three Strains of Zika Virus.</a> PLOS Neglected Tropical Diseases. 10 (10), 0005101 (2016).</li><li>Elizondo-Quiroga, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vector+competence+of+Aedes+aegypti+and+Culex+quinquefasciatus+from+the+metropolitan+area+of+Guadalajara,+Jalisco,+Mexico+for+Zika+virus.">Vector competence of Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus from the metropolitan area of Guadalajara, Jalisco, Mexico for Zika virus.</a> Scientific reports. 9 (1), 16955 (2019).</li></ol>

इस पद्धति का लक्ष्य मौखिक भोजन और इंट्राथोरेसिक टीकाकरण के माध्यम से वेक्टर क्षमता का मूल्यांकन करके एक मच्छर जनित वायरस का व्यापक जोखिम मूल्यांकन प्रदान करना था।
मौखिक-भोजन प्रयोग में, रे...

मच्छर-जनित वायरस (एमबीवी), आरएनए वायरस का एक विषम समूह, मच्छर वैक्टर में बना रह सकता है और बाद मेंकशेरुक मेजबानों में फैल सकता है। नैदानिक रूप से महत्वपूर्ण एमबीवी मुख्य रूप से चार वायरस परिवारों में वितरित किए जाते हैं, अर्थात् फ्लेविविरिडे, टोगाविरिडे, रिओविरिडे और पेरिबुनेविडे 2,3। हाल के दशकों में, इन वायरस को दुनिया भर में रिपोर्ट किया गया है, जिससे सार्वजनिक स्वास्थ्य के मुद्दे पैदा हुए हैं। सबसे प्रसिद्ध एमबीवी में से एक के रूप में, डेंगू वायरस (डीईएनवी) पिछले 20वर्षों के दौरान 100 से अधिक देशों में सबसे प्रचलित उभरता हुआ या फिर से उभरता हुआ अर्बोवायरस बन गया है। जीका वायरस (जेडआईकेवी) अंतर्देशीय की खोज के बाद से, महाद्वीप के लगभग सभी उष्णकटिबंधीय और उपोष्णकटिबंधीय देशों और क्षेत्रों ने मानव जेडआईकेवी संक्रमण की सूचना दीहै। वायरस संचरण के जोखिम का आकलन करने के लिए, हाल के वर्षों में कई अध्ययनों ने इन वायरस 6,7 के लिए मच्छर वेक्टर क्षमता पर ध्यान केंद्रित किया है। नतीजतन, वेक्टर जनित रोगों को प्रभावी ढंग से रोकना और नियंत्रित करना महत्वपूर्ण है।
प्रयोगशाला में सबसे आसानी से पाले जाने वाले मच्छरों में से एक एडीज एजिप्टी (एई एजिप्टी) डीईएनवी, जेडआईकेवी, चिकनगुनिया वायरस (चिक्व), और पीले बुखार वायरस (वाईएफवी) 8 का एक महत्वपूर्ण वेक्टर है। लंबे समय तक, एई एजिप्टी केवल अफ्रीकी महाद्वीप और दक्षिण पूर्व एशिया में पाया जाता था, लेकिन हाल के वर्षों में इसने लगभग सभी महाद्वीपोंको उपनिवेश ति किया है। इसके अलावा, एई एजिप्टी की वैश्विक बहुतायत लगातार बढ़ रही है, सदी 10 के अंत तक अनुमानित20% की वृद्धि के साथ। चीन में 2004 से 2009 तक, उच्च दिन-प्रतिदिनके तापमान के कारण डीईएनवी के लिए एई एजिप्टी वेक्टर क्षमता में स्पष्ट वृद्धि हुई थी। रोगजनक वेक्टर के रूप में एई एजिप्टी की स्थिति चीन में काफी बढ़ गई है। नतीजतन, इन चुनौतियों का समाधान करने के लिए, वायरस को प्रसारित करने के लिए एई एजिप्टी की वेक्टर क्षमता की जांच करना आवश्यक है।
हेमेटोफैगस आर्थ्रोपोड के रूप में, मादा मच्छर एक कशेरुक मेजबान की त्वचा को छेदती है और रक्त पर फ़ीड करती है। मच्छर कभी-कभी वायरस से संक्रमित मेजबानों से वायरस प्राप्त करते हैं और फिर वायरस को एक नए मेजबान में स्थानांतरित करते हैं। जैसे, वेक्टर क्षमता निर्धारित करने के लिए, मच्छरों को प्रयोगशाला सेटिंग12 में एक फीडिंग सिस्टम के माध्यम से आर्बोवायरस युक्त कृत्रिम ब्लडमील खिलाया जाता है। संक्रमण के कई दिनों बाद व्यक्तिगत मच्छरों को सिर, शरीर और लार के स्राव में अलग किया जाता है। वायरस संक्रमण, प्रसार और संचरण दर को मापने के लिए, वायरस टिटर्स का पता मात्रात्मक रिवर्स-ट्रांसक्रिप्शन पीसीआर (क्यूआरटी-पीसीआर) या पट्टिका परख द्वारा लगाया गया है। हालांकि, सभी मच्छर मिडगट संक्रमण विकसित नहीं करते हैं और रक्त खिलाने के बाद वायरस को अगले मेजबान में स्थानांतरित करने की क्षमता रखते हैं। यह मच्छरों की शारीरिक बाधाओं से जुड़ा हुआ है, जो रोगजनकों को शरीर में प्रवेश करने से रोकते हैं और उनकी जन्मजात प्रतिरक्षामें महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। मिडगट बैरियर, विशेष रूप से मिडगट संक्रमण बाधा (एमआईबी) और मिडगट एस्केप बैरियर (एमईबी), प्रभावित करते हैं कि क्या वायरस वेक्टर को व्यवस्थित रूप से संक्रमित कर सकता है और जिस दक्षता के साथ यह फैलता है। यह अन्य ऊतकों के संक्रमण के विश्लेषण में बाधा डालता है, जैसे लार ग्रंथियां जो लार ग्रंथि संक्रमण भी प्रदर्शित करती हैं और बाधाओं से बचती हैं13,14. वेक्टर में मिडगट्स और लार ग्रंथियों के संक्रमण को बेहतर ढंग से चिह्नित करने के लिए, एई एजिप्टी में अर्बोवायरस के मौखिक भोजन और इंट्राथोरेसिक टीकाकरण के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल यहां प्रस्तुत किया गया है। यह प्रोटोकॉल विभिन्न प्रकार के मच्छर वैक्टर में अतिरिक्त अर्बोवायरस संक्रमण पर लागू किया जा सकता है, जैसे कि एडीज एसपीपी में डीईएनवी और जेडआईकेवी संक्रमण, और एक व्यावहारिक प्रक्रिया साबित हो सकती है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Aedes aegypti&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Rockefeller strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated nucleic acid extraction system&#160;</td>
			<td>NanoMagBio</td>
			<td>S-48</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BHK-21 cells</td>
			<td>National Virus Resource Center, Wuhan Institute of Virology</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buckets</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C6/36 cells&#160;</td>
			<td>National Virus Resource Center, Wuhan Institute of Virology</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon dioxide spray gun&#160;</td>
			<td>wuhan Yihong</td>
			<td>YHDFPCO2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifugal machine</td>
			<td>Himac&#160;</td>
			<td>CF16RN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CFX96 Touch Real-Time PCR Detection System&#160;</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>CFX96 Touch</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ebinur Lake virus</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Cu20-XJ isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde&#160;</td>
			<td>Wuhan Baiqiandu</td>
			<td>B0003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glove box&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Hushi</td>
			<td>10010518</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immersion oil&#160;</td>
			<td>Cargille</td>
			<td>16908-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insect incubator</td>
			<td>Memmert</td>
			<td>HPP750T7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low Temperature Tissue Homogenizer Grinding Machine&#160;</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>KZ-III-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic Virus Genome Extraction Kit</td>
			<td>NanoMagBio</td>
			<td>NMG0966-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mesh cages (30 x 30 x 30 cm)</td>
			<td>Huayu</td>
			<td>HY-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>methylcellulose</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>17851</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mice feedstuff powder&#160;</td>
			<td>BESSN</td>
			<td>BS018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode Puller</td>
			<td>WPI</td>
			<td>PUL-1000</td>
			<td>PUL-1000&#160;is a microprocessor controlled horizontal puller for making glass micropipettes or microelectrodes used in intracellular recording, patch clamp studies, microperfusion or microinjection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mosquito net meshes&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanoject III Programmable Nanoliter Injector</td>
			<td>Drummond</td>
			<td>3-000-207</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>One Step TB Green PrimeScript PLUS RT-PCR Kit&#160;</td>
			<td>Takara</td>
			<td>RR096A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS, pH 7.4</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>C10010500BT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>151140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic cupes (7 oz)&#160;</td>
			<td>Hubei Duoanduo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic cups (24 oz)&#160;</td>
			<td>Anhui shangji</td>
			<td>PET32-Tub-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic disposable droppers</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BS-XG-O3L-NS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerator (-80 &#176;C)</td>
			<td>sanyo</td>
			<td>MDF-U54V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Replacement Glass Capillaries</td>
			<td>Drummond</td>
			<td>3-000-203-G/X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI medium 1640&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>C11875500BT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screw cap storage tubes (2 mL )</td>
			<td>biofil</td>
			<td>&#160;FCT010005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shallow dishes&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sponge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile defibrillated horse blood</td>
			<td>Wuhan Purity Biotechnology</td>
			<td>CDHXB413</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 culture flask</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The artificial mosquito feeding system&#160;</td>
			<td>Hemotek</td>
			<td>Hemotek PS6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The dissecting microscope&#160;</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>&#160;stemi508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The ice plates</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The mosquito absorbing machine&#160;</td>
			<td>Ningbo Bangning</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The pipette tips&#160;</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>TF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA (0.25%)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezers</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>0203-5-PO</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

experimental viral infection in adult mosquitoes by oral feeding and microinjection

मच्छर जनित वायरस (एमबीवी), जो कशेरुक के लिए संक्रामक रोगजनक हैं, कई मच्छर प्रजातियों द्वारा फैलते हैं, जो सार्वजनिक स्वास्थ्य के लिए गंभीर खतरा पैदा करते हैं। एक बार निगलने के बाद, वायरस को हेमोलिम्फ तक पहुंचने के लिए मच्छर के मिडगट बैरियर को पार करना होगा, जहां से वे संभावित रूप से लार ग्रंथियों में फैल सकते हैं। जब एक मच्छर काटता है, तो ये वायरस नए कशेरुक मेजबानों में फैल जाते हैं। इसी तरह, मच्छर विभिन्न वायरस उठा सकता है। सामान्य तौर पर, वायरस का केवल एक छोटा सा हिस्सा आंत के माध्यम से लार ग्रंथियों में प्रवेश कर सकता है। ग्रंथियों में इन वायरस की संचरण दक्षता विभिन्न मच्छर प्रजातियों में पाए जाने वाले दो भौतिक अवरोधों से प्रभावित होती है: मिडगट बाधाएं और लार ग्रंथियां बाधाएं। यह प्रोटोकॉल मौखिक भोजन और इंट्राथोरेसिक इंजेक्शन संक्रमण के बाद एडीज एजिप्टी की लार ग्रंथियों में वायरस का पता लगाने के लिए एक विधि प्रस्तुत करता है। इसके अलावा, यह निर्धारित करना कि क्या आंत और / या लार ग्रंथियां वायरल प्रसार में बाधा डालती हैं, एडीज एजिप्टी द्वारा प्रेषित एमबीवी के जोखिम आकलन में सहायता कर सकती हैं।

कृत्रिम रक्त आहार (वायरल अंतिम टिटर 6.4 x 106 पीएफयू / एमएल) और इंट्राथोरेसिक इंजेक्शन (वायरल खुराक 340 पीएफयू था) के माध्यम से संक्रमित मच्छरों में ईबीआईवी वितरण की जांच करने के लिए, संक्रमण (डीपीआई) के 10...

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Experimental Viral Infection in Adult Mosquitoes by Oral Feeding and Microinjection

यह पद्धति, जिसमें मौखिक भोजन और इंट्राथोरेसिक इंजेक्शन संक्रमण शामिल था, आर्बोवायरस संक्रमण पर मिडगट और / या लार ग्रंथि बाधाओं के प्रभाव का प्रभावी ढंग से आकलन कर सकता है।

मौखिक भोजन और माइक्रोइंजेक्शन द्वारा वयस्क मच्छरों में प्रायोगिक वायरल संक्रमण

Mosquito-borne viruses (MBVs), which are infectious pathogens to vertebrates, are spread by many mosquito species, posing a severe threat to public ...

यह प्रोटोकॉल यह निर्धारित कर सकता है कि क्या आंत और थायरॉयड ग्रंथियां वायरल प्रसार में बाधा डालती हैं और एडीज एजिप्टी द्वारा प्रेषित मच्छर जनित वायरस के जोखिम आकलन में सहायता कर सकती हैं। हमारे प्रोटोकॉल में दो संक्रमण विधियां, मौखिक भोजन और इंट्राथोरेसिक इंजेक्शन शामिल थे, जो प्रभावी रूप से अर्बोवायरस की वेक्टर क्षमता का आकलन कर सकते थे। यह प्रोटोकॉल विभिन्न प्रकार के मच्छर वैक्टर, जैसे कि डेंगू वायरस और एडीज में जीका वायरस संक्रमण में अतिरिक्त अर्बोवायरस संक्रमण पर लागू किया जा सकता है, और यह एक व्यावहारिक प्रक्रिया साबित हो सकती है।प्रक्रिया का प्रदर्शन मेरी प्रयोगशाला से एक शोध सहायक फेई वांग होगा। कृत्रिम मच्छर आहार प्रणाली का उपयोग करके कृत्रिम भोजन करने के लिए, कोलेजन झिल्ली को उचित आकार में काटें, और उन्हें ओ-रिंग्स के साथ जलाशयों में सुरक्षित करें। जलाशयों में वायरस-रक्त मिश्रण के तीन मिलीलीटर जोड़ें, और रिसाव को रोकने के लिए प्लास्टिक प्लग का उपयोग करके जलाशयों को सील करें।मच्छरों वाले प्लास्टिक के कप को दस्ताने के बॉक्स में डालें। सील किए गए जलाशयों को एफयू 1 फीडर में पेंच करें, और एक कप पर एक जलाशय डालें। बिजली इकाई चालू करें, और मच्छरों को एक घंटे के लिए खिलाएं।खिलाने के बाद, मच्छरों को कई सेकंड के लिए बर्फ के साथ एनेस्थेटाइज करें जब तक कि वे बेहोश न हो जाएं। एनेस्थेटाइज्ड मच्छरों को बर्फ पर रखे पेट्री डिश में डालें, और ढक्कन को जल्दी से कवर करें। मादा मच्छरों को फोर्सप्स के साथ चुनें, और उन्हें प्रति कप 50 मादा मच्छरों पर नए प्लास्टिक के कप में स्थानांतरित करें।कप को एक कटे हुए मच्छरदानी जाल के साथ लपेटें, और इसे बीच में एक छेद के साथ ढक्कन के साथ कवर करें। स्पंज को छोटे टुकड़ों में काटें, और उन्हें कप पर रखें। प्लास्टिक डिस्पोजेबल ड्रॉपर का उपयोग करके स्पंज पर 8% ग्लूकोज समाधान जोड़ें।मादा मच्छरों वाले कप को 10 दिनों के लिए 80% आर्द्रता पर 27 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेटर में रखें। हर 72 घंटे में एक नया ग्लूकोज-संतृप्त स्पंज बदलें। इंट्राथोरेसिक टीकाकरण के लिए, पाठ पांडुलिपि में वर्णित के रूप में मादा मच्छर तैयार करें।संक्रामक वायरस को कमजोर करने की तैयारी के लिए, 80 डिग्री सेल्सियस फ्रीजर से वायरस स्टॉक को हटा दें, और उन्हें बर्फ पर पिघलाएं। 100-नैनोलीटर वायरस कमजोर पड़ने पर वायरस स्टॉक को पतला करें जिसमें आरपीएमआई 1640 माध्यम के साथ 100 से 500 प्लाक बनाने वाले यूनिट वायरस होते हैं जिसमें 10% एफबीएस और 1% पेनिसिलिन-स्ट्रेप्टोमाइसिन होता है। वायरस को बर्फ पर कमजोर करने के लिए रखें।इसके बाद, सुई पुलर प्रोग्राम में मापदंडों के साथ पुलर 1000 का उपयोग करके माइक्रोइंजेक्शन सुइयों को तैयार करें, जिसमें गर्मी सूचकांक 450, जी से 110 में बल, मिलीमीटर से एक में दूरी, और सेकंड में शून्य तक देरी के रूप में सेट किया गया है। 16x आवर्धन पर एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के नीचे चिमटी के साथ खींची गई सुई की नोक को काटें। एक डिस्पोजेबल बाँझ सिरिंज के माध्यम से खनिज तेल के साथ सुई को बैकफिल करें।मशीन पर दिए गए निर्देशों का पालन करते हुए इंजेक्टर में सुई संलग्न करें। सुई को सावधानी से एक ट्यूब में डालें जिसमें एक संक्रामक वायरस कमजोर पड़ता है। फिर, सुई में लगभग चार माइक्रोलीटर वायरस कमजोर पड़ने को भरने के लिए फिल बटन दबाएं।एक बार सुई भर जाने के बाद, सुई को स्पर्श या नुकसान न पहुंचाएं। चिमटी के साथ लगभग 50 मादा एनेस्थेटाइज्ड मच्छरों को चुनें, और उन्हें बर्फ की प्लेट पर रखें। इंजेक्टर के नीचे प्लेट रखें, और सुई को एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत मच्छर के वक्ष गुहा में डालें।इंजेक्शन की मात्रा 100 नैनोलीटर और दर 50 नैनोलीटर प्रति सेकंड पर सेट करें। वायरस के घोल को मच्छर में प्रवाहित करने के लिए इंजेक्शन बटन दबाएं। सफल इंजेक्शन पर, पेट में थोड़ा उभार होता है।संक्रमित मच्छर को बर्फ पर रखे एक नए प्लास्टिक के कप में डालें। जब संक्रमित मच्छरों की संख्या पर्याप्त हो जाए, तो कप को कटे हुए मच्छरदानी जाल से लपेटें और इसे ढक्कन से ढक दें। संक्रमित मादा मच्छरों से लार इकट्ठा करने के लिए, एनेस्थेटाइज्ड मच्छरों को बर्फ पर रखी पेट्री डिश में डालें, और ढक्कन को जल्दी से बंद करें।रबर कीचड़ पर विसर्जन तेल से भरे 10-माइक्रोलीटर पिपेट टिप्स को साथ-साथ रखें। चिमटी के साथ मादा मच्छरों को चुनें, और उन्हें बर्फ की प्लेट पर रखें। चिमटी से उनके पैर और पंख हटा दें।कमरे के तापमान पर मच्छरों द्वारा तेल में स्रावित लार को इकट्ठा करने के लिए प्रत्येक पिपेट टिप पर एक मच्छर के मुंह के हिस्से को रखें। 45 से 60 मिनट के बाद, पिपेट टिप्स को 1.5-मिलीलीटर ट्यूबों में रखें जिसमें 200 माइक्रोलीटर वायरस डिल्यूनेट माध्यम होता है। ट्यूबों में लार को बाहर निकालने के लिए चार डिग्री सेल्सियस पर पांच मिनट के लिए 5,000 ग्राम पर सेंट्रीफ्यूज करें।संचरण दर के बाद के निर्धारण के लिए लार युक्त ट्यूबों को 80 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें। लार संग्रह के बाद, संक्रमित मादा मच्छरों का विच्छेदन करें। चिमटी का उपयोग करके, मच्छरों के सिर को काट लें, और प्रत्येक सिर को एक व्यक्तिगत ट्यूब में रखें जिसमें आरपीएमआई 1640 माध्यम के 200 माइक्रोलीटर हों।एक चिमटी के साथ वक्ष पकड़ो। फिर, एक और चिमटी के साथ पेट के अंतिम भाग को पकड़ें, और आंत को बाहर खींचें। किसी भी आवारा ऊतक और अंगों के लिए आंत को साफ करें।पीबीएस के साथ आंत धोएं, और प्रत्येक आंत को एक व्यक्तिगत ट्यूब में रखें जिसमें आरपीएमआई 1640 माध्यम के 200 माइक्रोलीटर हों। वायरस प्रसार और संक्रमण दर के बाद के निर्धारण के लिए इन ट्यूबों को 80 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें। इस प्रतिनिधि विश्लेषण में, संक्रमण के 10 दिनों के बाद मादा मच्छरों की आंत, सिर और लार में वायरल आरएनए निर्धारित किए गए थे।इंट्राथोरैसिक रूप से टीका लगाए गए मच्छरों की आंत, सिर और लार में एबिनुर लेक वायरस का वायरस टिटर मौखिक रूप से संक्रमित मच्छरों की तुलना में अधिक था। इंट्राथोरैसिक रूप से टीका लगाए गए मच्छरों के लिए संक्रमण और प्रसार दर 100% थी और मौखिक रूप से संक्रमित मच्छरों के लिए क्रमशः 70% और 38.1% पाई गई। इंट्राथोरैसिक रूप से टीका लगाए गए मच्छरों के लिए संचरण दर 90% तक पहुंच गई, लेकिन मौखिक रूप से संक्रमित मच्छरों के लिए केवल 4.8% थी, मादा मच्छरों को स्थिरता बनाए रखने के लिए चुना गया था, क्योंकि भोजन की मात्रा वायरल सामग्री को प्रभावित करती है।

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

An Analytical Tool-box for Comprehensive Biochemical, Structural and Transcriptome Evaluation of Oral Biofilms Mediated by Mutans Streptococci

मौखिक Biofilms की व्यापक बायोकेमिकल, स्ट्रक्चरल और transcriptome मूल्यांकन के लिए एक विश्लेषणात्मक उपकरण बॉक्स अपरिवर्तक Streptococci द्वारा मध्यस्थता

Biofilms are highly dynamic, organized and structured communities of microbial cells enmeshed in an extracellular matrix of variable density and ...

Detection of Infectious Virus from Field-collected Mosquitoes by Vero Cell Culture Assay

संक्रामक वायरस के फील्ड एकत्र मच्छरों से वेरो सेल संस्कृति परख द्वारा जांच

Mosquitoes transmit a number of distinct viruses including important human pathogens such as West Nile virus, dengue virus, and chickungunya virus. Many ...

Culturing Microglia from the Neonatal and Adult Central Nervous System

नवजात और वयस्क केन्द्रीय तंत्रिका तंत्र से संवर्धन Microglia

Microglia are the resident macrophage-like cells of the central nervous system (CNS) and, as such, have critically important roles in physiological and ...

2D and 3D Chromosome Painting in Malaria Mosquitoes

मलेरिया मच्छरों में 2डी और 3डी गुणसूत्र पेंटिंग

Fluorescent in situ hybridization (FISH) of whole arm chromosome probes is a robust technique for mapping genomic regions of interest, detecting ...

The Development of Lyophilized Loop-mediated Isothermal Amplification Reagents for the Detection of Coxiella burnetii

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की जांच के लिए Lyophilized लूप की मध्यस्थता इज़ोटेर्माल प्रवर्धन अभिकर्मकों का विकास<em&gt; Coxiella burnetii</em

Coxiella burnetii, the agent causing Q fever, is an obligate intracellular bacterium. PCR based diagnostic assays have been developed for detecting C. ...

Measuring Influenza Neuraminidase Inhibition Antibody Titers by Enzyme-linked Lectin Assay

मापने एंजाइम से जुड़ी Lectin परख द्वारा इन्फ्लुएंजा neuraminidase निषेध एंटीबॉडी titers

Antibodies to neuraminidase (NA), the second most abundant surface protein on influenza virus, contribute toward protection against influenza. Traditional ...

Detection of Low Copy Number Integrated Viral DNA Formed by In Vitro Hepatitis B Infection

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कम कॉपी नंबर का पता लगाने एकीकृत वायरल डीएनए में द्वारा गठित इन विट्रो हेपेटाइटिस बी संक्रमण

Hepatitis B Virus (HBV) is a common blood-borne pathogen causing liver cancer and liver cirrhosis resulting from chronic infection. The virus generally ...

Modeling Tuberculosis in Mycobacterium marinum Infected Adult Zebrafish

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मॉडलिंग तपेदिक में माइकोबैक्टीरियम marinum संक्रमित वयस्क Zebrafish

Mycobacterium tuberculosis is currently the deadliest human pathogen causing 1.7 million deaths and 10.4 million infections every year. Exposure to this ...