Name: preparation of rat sciatic nerve for ex vivo neurophysiology
Uploaded: 2022-07-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Rat Sciatic Nerve for Ex Vivo Neurophysiology at JoVE.com

Yazarlar, GlaxoSmithKline Pharmaceuticals, Prusya Kralı, PA, ABD ve Galvani Bioelectronics'ten (Stevenage, İngiltere) Dr. Gerald Hunsberger'e orijinal sinir hazırlama tekniklerini bizimle paylaştıkları için teşekkür eder. Yazarlar, Çift Odacıklı sinir banyosu tasarımı için Robert Toth'u kabul ediyor. Yazarlar, Mühendislik ve Fiziksel Bilimler Araştırma Konseyi'nin (EPSRC) Sağlık Teknolojileri Mücadelesi Ödülleri (HTCA) hibesinden gelen finansmanı kabul etmektedir. Yazarlar, Adrien Rapeaux'yu (EP / L016796 / 1) finanse etmek için Imperial College London'ın Yüksek Performanslı Gömülü ve Dağıtılmış Sistemler Doktora Eğitimi Merkezi'ni (HiPEDS CDT) kabul etmektedir. Adrien Rapeaux şu anda İngiltere Demans Araştırma Enstitüsü, Bakım Araştırma ve Teknoloji Merkezi tarafından finanse edilmektedir. Yazarlar, JoVE video makalesinin üretimi sırasında deneyler ve hayvan dokularına erişim konusunda yardım için Imperial College'dan Zack Bailey'e Biyomühendislik Bölümü'nden minnetle teşekkür ediyor.

Tüm hayvan bakımı ve prosedürleri, İngiltere İçişleri Bakanlığı tarafından Hayvanlar (Bilimsel Prosedürler) Yasası (1986) uyarınca verilen uygun lisanslar altında gerçekleştirildi ve Imperial College London'ın Hayvan Refahı ve Etik İnceleme Kurulu tarafından onaylandı.
1. Tamponların hazırlanması
NOT: Protokolün bu kısmı, 1x konsantrasyonda modifiye Krebs-Henseleit Tamponunun (mKHB) hazırlanmasını içeren son adımlar h...

<ol>
	<li>McIntyre, C. C., Richardson, A. G., Grill, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+the+excitability+of+mammalian+nerve+fibers:+Influence+of+afterpotentials+on+the+recovery+cycle.">Modeling the excitability of mammalian nerve fibers: Influence of afterpotentials on the recovery cycle.</a> Journal of Neurophysiology. 87 (2), 995-1006 (2002).</li><li>Pelot, N. A., Grill, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+quantification+of+excitation+and+kilohertz+frequency+block+of+the+rat+vagus+nerve.">In vivo quantification of excitation and kilohertz frequency block of the rat vagus nerve.</a> Journal of Neural Engineering. 17 (2), 026005 (2020).</li><li>Patel, Y. A., Kim, B. S., Rountree, W. S., Butera, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kilohertz+electrical+stimulation+nerve+conduction+block:+Effects+of+electrode+surface+area.">Kilohertz electrical stimulation nerve conduction block: Effects of electrode surface area.</a> IEEE Transactions on Neural Systems and Rehabilitation Engineering. 25 (10), 1906-1916 (2017).</li><li>Kortelainen, J., Al-Nashash, H., Vipin, A., Thow, X. Y., All, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+anaesthesia+on+somatosensory+evoked+potential+measurement+in+a+rat+model.">The effect of anaesthesia on somatosensory evoked potential measurement in a rat model.</a> Laboratory Animals. 50 (1), 63-66 (2016).</li><li>Oh, S. S., Hayes, J. M., Sims-Robinson, C., Sullivan, K. A., Feldman, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+anesthesia+on+measures+of+nerve+conduction+velocity+in+male+C57Bl6/J+mice.">The effects of anesthesia on measures of nerve conduction velocity in male C57Bl6/J mice.</a> Neuroscience Letters. 483 (2), 127-131 (2010).</li><li>Kuffler, S. W., Williams, E. M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small-nerve+junctional+potentials.+The+distribution+of+small+motor+nerves+to+frog+skeletal+muscle,+and+the+membrane+characteristics+of+the+fibres+they+innervate.">Small-nerve junctional potentials. The distribution of small motor nerves to frog skeletal muscle, and the membrane characteristics of the fibres they innervate.</a> The Journal of Physiology. 121 (2), 289-317 (1953).</li><li>Brunton, E., Blau, C. W., Nazarpour, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separability+of+neural+responses+to+standardised+mechanical+stimulation+of+limbs.">Separability of neural responses to standardised mechanical stimulation of limbs.</a> Scientific Reports. 7 (1), 11138 (2017).</li><li>Schmalbruch, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiber+composition+of+the+rat+sciatic+nerve.">Fiber composition of the rat sciatic nerve.</a> The Anatomical Record. 215 (1), 71-81 (1986).</li><li>Kagiava, A., Theophilidis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+the+permeability+of+the+rat+sciatic+nerve+epineural+sheath+against+compounds+with+local+anesthetic+activity:+an+ex+vivo+electrophysiological+study.">Assessing the permeability of the rat sciatic nerve epineural sheath against compounds with local anesthetic activity: an ex vivo electrophysiological study.</a> Toxicology Mechanisms and Methods. 23 (8), 634-640 (2013).</li><li>Motori, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+metabolic+rewiring+promotes+resilience+to+neurodegeneration+caused+by+mitochondrial+dysfunction.">Neuronal metabolic rewiring promotes resilience to neurodegeneration caused by mitochondrial dysfunction.</a> Science Advances. 6 (35), 8271 (2020).</li><li>Schwarz, J. R., Eikhof, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Na+currents+and+action+potentials+in+rat+myelinated+nerve+fibres+at+20+and+37&#176;+C.">Na currents and action potentials in rat myelinated nerve fibres at 20 and 37&#176; C.</a> Pfl&#252;gers Archiv. 409 (6), 569-577 (1987).</li><li>Cranefield, P. F., Brink, F., Bronk, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+oxygen+uptake+of+the+peripheral+nerve+of+the+rat.">The oxygen uptake of the peripheral nerve of the rat.</a> Journal of Neurochemistry. 1 (3), 245-249 (1957).</li><li>Lehmann, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+changes+in+pH+on+the+action+of+mammalian+A+nerve+fibers.">The effect of changes in pH on the action of mammalian A nerve fibers.</a> American Journal of Physiology-Legacy Content. 118 (3), 600-612 (1937).</li><li>Hamm, L. L., Nakhoul, N., Hering-Smith, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acid-base+homeostasis.">Acid-base homeostasis.</a> Clinical Journal of the American Society of Nephrology: CJASN. 10 (12), 2232-2242 (2015).</li><li>Minasian, S. M., Galagudza, M. M., Dmitriev, Y. V., Kurapeev, D. I., Vlasov, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+protection+against+global+ischemia+with+Krebs-Henseleit+buffer-based+cardioplegic+solution.">Myocardial protection against global ischemia with Krebs-Henseleit buffer-based cardioplegic solution.</a> Journal of Cardiothoracic Surgery. 8, 60 (2013).</li><li>Bailey, L. E., Ong, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Krebs-Henseleit+solution+as+a+physiological+buffer+in+perfused+and+superfused+preparations.">Krebs-Henseleit solution as a physiological buffer in perfused and superfused preparations.</a> Journal of Pharmacological Methods. 1 (2), 171-175 (1978).</li><li>Miller, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sydney+Ringer:+physiological+saline,+calcium+and+the+contraction+of+the+heart.">Sydney Ringer: physiological saline, calcium and the contraction of the heart.</a> The Journal of Physiology. 555, 585-587 (2004).</li><li>Yamamoto, D., Suzuki, N., Miledi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blockage+of+chloride+channels+by+HEPES+buffer).">Blockage of chloride channels by HEPES buffer).</a> Proceedings of the Royal Society of London. Series B. Biological Sciences. 230 (1258), 93-100 (1987).</li><li>Janz, G. J., Taniguchi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+silver-silver+halide+electrodes.+Preparation,+stability,+and+standard+potentials+in+aqueous+and+non-aqueous+media.">The silver-silver halide electrodes. Preparation, stability, and standard potentials in aqueous and non-aqueous media.</a> Chemical Reviews. 53 (3), 397-437 (1953).</li><li>Rapeaux, A., Constandinou, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+HFAC+block-capable+and+module-extendable+4-channel+stimulator+for+acute+neurophysiology.">An HFAC block-capable and module-extendable 4-channel stimulator for acute neurophysiology.</a> Journal of Neural Engineering. 17 (4), 046013 (2020).</li><li>Next-Generation-Neural-Interfaces/HFAC_Stimulator_4ch. Next Generation Neural Interfaces Available from: <a target="_blank" href="https://github.com/Next-Generation-Neural-Interfaces/HFAC_Stimulator_4ch&gt">https://github.com/Next-Generation-Neural-Interfaces/HFAC_Stimulator_4ch&gt</a> (2021)</li><li>Cuttaz, E. A., Chapman, C. A. R., Syed, O., Goding, J. A., Stretchable Green, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=fully+polymeric+electrode+arrays+for+peripheral+nerve+stimulation.">fully polymeric electrode arrays for peripheral nerve stimulation.</a> Advanced Science. 8 (8), 2004033 (2021).</li><li>Lossi, L., Merighi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+ex+vivo+rodent+platforms+in+neuroscience+translational+research+with+attention+to+the+3Rs+philosophy.">The use of ex vivo rodent platforms in neuroscience translational research with attention to the 3Rs philosophy.</a> Frontiers in Veterinary Science. 5, 164 (2018).</li></ol>

Bu çalışmada, sıçan siyatik sinirlerini ex vivo nörofizyolojiye hazırlamak için bir protokol tanımladık. Doku ekstraksiyonu, hayvan taşıma, anestezi, itlaf ve diseksiyon dahil olmak üzere yaklaşık 30 dakika sürerken, sinir temizliği, banyoya yerleştirme ve elektrot implantasyonu, kayda başlamadan önce 30 dakika daha gerektirmelidir. Tampon hazırlığı 30 dakika içinde gerçekleştirilebilir, ancak bu deneyin geri kalanından önce yapılabilir. Bu tür bir hazırlık ve deney, benzer tampo...

Siliko modellenmiş olarak temel sinir fonksiyonunun mevcut anlayışı, özellikle soma, akson ve dendritlerin dışındaki sinir dokusu bölümlenmesinin etkileri ile ilgili olarak, birçok açıdan eksiktir. Akson-miyelin etkileşimleri, geleneksel elektriksel stimülasyon yanıtını yeterince yakalayan MRG1 (memeli sinirleri için) gibi ayrıntılı hesaplamalı sinir modellerinin bile, yüksek frekanslı blok taşıma2 veya ikincil başlangıçlı yanıt3 gibi deneysel olarak gözlemlenen diğer davranışları yakalamadığı gerçeğiyle kanıtlandığı gibi hala tam olarak anlaşılamamıştır.
Bu protokol, siniri izole etmek, çevresini kontrol etmek ve in vivo bağlamdan ex vivo bir bağlama çıkarmak için standartlaştırılmış bir hazırlık protokolü kullanarak, akut küçük bir laboratuvar hayvanı modelinde sinir düzeyinde nörofizyolojik süreçleri verimli bir şekilde araştırmak için bir yöntem sağlar. Bu, in vivo sinir stimülasyon protokolleri tarafından kullanılan diğer vücut süreçlerini veya anesteziklerin sinir davranışını değiştirmesini ve ölçülen sonuçları veya bunların yorumlanmasını karıştırmasını önleyecektir 4,5. Bu, yalnızca az anlaşılmış sinir dokularına özgü etkilere odaklanan daha gerçekçi modellerin geliştirilmesini sağlar. Bu protokol aynı zamanda yeni sinir stimülasyonu ve elektrot materyallerinin ve geometrilerinin yanı sıra yüksek frekanslı blok 2,3 gibi yeni stimülasyon paradigmaları için bir test yatağı olarak da yararlıdır. Bu tekniğin varyasyonları daha önce sıkı kontrol edilen koşullarda sinir fizyolojisini incelemek için kullanılmıştır6, örneğin, iyon kanalı dinamiklerini ve özelliklerini veya lokal anesteziklerin etkilerini ölçmekiçin 7.
Bu teknik, akut in vivo küçük hayvan deneyleri8 gibi alternatiflere kıyasla çeşitli avantajlar sağlar. Teknik, doku vücuttan çıkarıldığı için anestezi derinliğini koruma ihtiyacını ortadan kaldırır ve anestezik difüzör, oksijen konsantratör ve ısıtma yastığı gibi gerekli ekipman miktarını azaltır. Bu, deneysel protokolü basitleştirerek hata riskini azaltır. Anestezikler potansiyel olarak sinir fonksiyonunudeğiştirebildiğinden 4, bu teknik, önlemlerin bu anestezik bileşiklerin yan etkileriyle karıştırılmamasını sağlar. Son olarak, bu teknik, anestezi uygulanmış bir hayvanı felç yoluyla öldürecek olan tetrodotoksin gibi nörotoksik bileşiklerin etkilerini incelerken akut in vivo deneylerden daha uygundur.
Periferik sinir kesitleri benzersiz bir ex vivo sistemdir, çünkü kaydedilen nöral sinyallerden sorumlu liflerin herhangi bir soma içermeme olasılığı yüksektir. Bunlar normalde motor nöronlar için, omurgada ve omurganın yanındaki dorsal kök gangliyonlarındaki duyusal nöronlar için yerleştirileceği için, memeli sinirinin bir bölümünün hazırlanması, kabaca, her iki ucunda da açık olan iyon kanallarına sahip boru şeklindeki zarların bir koleksiyonu olarak modellenebilir9. Metabolizma, doku diseksiyonu10 sırasında aksonda bulunan mitokondri tarafından korunur. Aksolemmanın açık uçlarının dikilmesi, ekstraksiyondan sonra onları kapatmak için teşvik edilir ve böylece normal sinir fonksiyonu için gerekli olan membran boyunca mevcut iyonik gradyanların korunmasına yardımcı olur.
Doku homeostazını vücudun dışında tutmak için, çeşitli çevresel değişkenler sıkı bir şekilde kontrol edilmelidir. Bunlar sıcaklık11, oksijenasyon 12, ozmolarite, pH13,14 ve metabolizmayı korumak için glikoza erişimdir. Bu protokol için yaklaşım, oksijen ve karbondioksit karışımı ile sürekli olarak havalandırılan modifiye edilmiş bir Krebs-Henseleit tamponu 15,16 (mKHB) kullanmaktır. mKHB, örneğin ex vivo deneylerde, vücut dışındaki disseke dokuları korumak için kullanılan kardiyoplejik tamponlar 6,17 ailesindedir. Bu tamponlar herhangi bir hemoglobin, antibiyotik veya antifungal içermez ve bu nedenle yalnızca sınırlı bir süre için az miktarda doku içeren preparatlar için uygundur. pH kontrolü, pH dengesini korumak için tamponun karbondioksit ile sürekli havalandırılmasını gerektiren karbonat ve karbondioksit redoks çifti ile sağlanmıştır. Bu, sinir hücresi fonksiyonunu değiştirebilen HEPES gibi diğer yaygın tamponlama ajanlarını kullanmaktan kaçınmaktır18. Tamponu oksijenlendirmek ve pH kontrolünü sağlamak için, karbojen adı verilen oksijende% 5 karbondioksit karışımı (% 95 O 2,% 5 CO2) kullanılmıştır. Bir tampon kabının sıcaklık kontrolü için bir ısıtma karıştırıcısı kullanıldı ve tampon bir sinir banyosundan geçirildi ve daha sonra başlangıç kabına yeniden dolaştırıldı. Tipik bir deney, sinir canlılığını kaybetmeden ve artık sağlıklı dokuyu temsil edecek önlemler için stimülasyona yeterince yanıt vermeden önce 6-8 saat sürecektir.
Sinyal-gürültü oranını optimize etmek için, daha önce açıklanan yöntemlere göre hazırlanan kayıt için gümüş-klorür elektrotları kullanılmıştır19. Stimülasyon için, ticari kullanıma hazır platin manşet elektrotları ve özel yapım iletken polimer manşet elektrotlarının bir kombinasyonu kullanılabilir. İletken polimer manşet elektrotları, yüksek genlikli dalga formları20 kullanarak siniri uyarırken yararlı olan özellikle daha yüksek şarj kapasitelerine sahiptir.
Bu protokolde kullanılan uyarıcı daha önce20 olarak tanımlanmıştır. Kullanılacak belgeler, tasarım dosyaları ve yazılım komut dosyaları herkese açıktır21. Bu protokolü yürütmek için diğer uyarıcılar kullanılabilir; Bununla birlikte, özel stimülatör aynı zamanda daha geniş bir nörofizyoloji deneyi yelpazesine olanak tanıyan yüksek frekanslı alternatif akım (HFAC) blok 2,20 yeteneğine de sahiptir. HFAC bloğunu kullanmak için, sinirin zarar görmesini önlemek için iletken elastomer manşetler önerilir. İletken elastomer sinir manşetleri, iletken bileşen olarak iletken elastomerlerden ve yalıtım olarak polidimetilsiloksandan üretilen yumuşak ve tamamen polimerik elektrot dizileridir22. Cihazlar, geleneksel lazer mikrofabrikasyon teknikleri kullanılarak bipolar konfigürasyonda üretildi.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 L Glass bottle</td>
			<td>VWR International Ltd</td>
			<td>215-1595</td>
			<td>Borosilicate glass</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 L Glass graduated flask</td>
			<td>VWR International Ltd</td>
			<td>612-3626</td>
			<td>Borosilicate glass</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 L Glass bottle</td>
			<td>VWR International Ltd</td>
			<td>215-1596</td>
			<td>Borosilicate glass</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 L Glass graduated flask</td>
			<td>VWR International Ltd</td>
			<td>BRND937254</td>
			<td>Borosilicate glass</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adaptor, pneumatic, 8 mm to 1/4 NPT</td>
			<td>RS UK</td>
			<td>536-2599</td>
			<td>push-to-fit straight adaptor between oxygen hose and gas dispersion tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alkoxy conformal coating</td>
			<td>Farnell</td>
			<td>1971829</td>
			<td>ACC15 Alkoxy conformal coating for dissection petri dish preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthetic</td>
			<td>Chanelle</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Isoflurane inhalation anesthetic, 250 mL bottle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beaker, 2 L</td>
			<td>VWR International Ltd</td>
			<td>213-0469</td>
			<td>Borosilicate glass</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bipolar nerve cuff</td>
			<td>Cortec GMBH</td>
			<td>N/A</td>
			<td>800 micron inner diameter, perpendicular lead out, no connector termination</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bossheads</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Standard wet laboratory bossheads for attaching grippers to rods</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride dihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C7902-500g</td>
			<td>500 g in plastic bottle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbogen canister</td>
			<td>BOC</td>
			<td>N/A</td>
			<td>F-size canister</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge Tubes, 15 mL volume</td>
			<td>VWR International Ltd</td>
			<td>734-0451</td>
			<td>Falcon tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conductive elastomer nerve cuff</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>high charge capacity nerve cuff for stimulation, see protocol for fabrication reference</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Connector, Termimate</td>
			<td>Mouser UK</td>
			<td>538-505073-1100-LP</td>
			<td>These should be soldered to wire terminated with crocodile clips (see entry 11)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crocodile clip connectors</td>
			<td>RS UK</td>
			<td>212-1203</td>
			<td>These should be soldered to wire terminated with TermiMate connectors (see entry 10)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deionized Water</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Obtained from deionized water dispenser</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps angled 45 degrees</td>
			<td>InterFocus Ltd</td>
			<td>91110-10</td>
			<td>Fine forceps, student range</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps standard Dumont #7</td>
			<td>InterFocus Ltd</td>
			<td>91197-00</td>
			<td>Student range forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas Disperson Tube, Porosity 3</td>
			<td>Merck</td>
			<td>12547866</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose anhydrous, powder</td>
			<td>VWR International Ltd</td>
			<td>101174Y</td>
			<td>500 g in plastic bottle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grippers</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Standard wet laboratory rod-mounted grippers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Stirrer</td>
			<td>RS UK</td>
			<td>768-9672</td>
			<td>Stuart US152</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostats</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Any hemostat &#62;12 cm in length is suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insect Pins, stainless steel, size 2</td>
			<td>InterFocus Ltd</td>
			<td>26001-45</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laptop computer</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Any laboratory-safe portable computer with at least 2 unused USB ports is suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Line Noise Filter</td>
			<td>Digitimer</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Humbug noise eliminator (50 Hz line noise filter)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low-Noise Preamplifier, SR560</td>
			<td>Stanford Research Systems</td>
			<td>SR560</td>
			<td>Low-noise voltage preamplifier</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulphate salt</td>
			<td>VWR International Ltd</td>
			<td>291184P</td>
			<td>500g in plastic bottle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB scripts</td>
			<td>Github</td>
			<td>https://github.com/Next-Generation-Neural-Interfaces/HFAC_Stimulator_4ch</td>
			<td>Initialization, calibration and stimulation scripts for the custom stimulator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB software</td>
			<td>Mathworks</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Standard package</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Light, PL-2000</td>
			<td>Photonic</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Light source with swan necks. Product may be obtained from third party supplier</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope, SMZ 745</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SM745</td>
			<td>Stereoscopic Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil, non-toxic</td>
			<td>VWR International Ltd</td>
			<td>31911.A1</td>
			<td>Oil for nerve bath</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nerve Bath</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Plexiglas machined nerve bath, see protocol for details.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oscilloscope</td>
			<td>LeCroy</td>
			<td>N/A</td>
			<td>434 Wavesurfer. Product may be obtained from 3rd party suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen Hose, 1 meter</td>
			<td>BOC</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1/4&#34; NPT terminations</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen Regulator</td>
			<td>BOC</td>
			<td>C106X/2B:3.5BAR-BS3-1/4&#34;NPTF 230Bar</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic Pump P-1</td>
			<td>Pharmacia Biotech</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Product may be obtained from third party supplier</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dish, Glass</td>
			<td>VWR International Ltd</td>
			<td>391-0580&#160;</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride salt</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5405-250g</td>
			<td>250 g in plastic bottle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Dihydrogen Sulphate salt</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.04873.0250</td>
			<td>250 g in plastic bottle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat</td>
			<td>Charles River Laboratories</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Sprague Dawley, 250-330 grams, female</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reference electrode, ET072</td>
			<td>eDaQ (Australia)</td>
			<td>ET072-1</td>
			<td>Silver silver-chloride reference electrode</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rod</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Standard wet laboratory rods with fittings for stands</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scale</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>N/A</td>
			<td>M-Power scale, for weighing powders. Product may be obtained from third-party suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors straight 12 cm edge</td>
			<td>InterFocus Ltd</td>
			<td>91400-12</td>
			<td>blunt-blunt termination, student range</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Signal Acquisition Device</td>
			<td>Cambridge Electronic Design</td>
			<td>Micro3-1401</td>
			<td>Micro3-1401 Multichannel ADC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone grease, non-toxic</td>
			<td>Farnell</td>
			<td>3821559</td>
			<td>for sealing of bath partition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone tubing, 2 mm inner diameter</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone tubing, 5 mm inner diameter</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver wire</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>41390</td>
			<td>0.5 mm, annealed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate salt</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S5761-500g</td>
			<td>500 g in plastic bottle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride salt</td>
			<td>VWR International Ltd</td>
			<td>27810.295</td>
			<td>1 kg in plastic bottle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring scissors angled 2 mm edge</td>
			<td>InterFocus Ltd</td>
			<td>15010-09</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stand</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Standard wet laboratory stands with sockets for rods</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stimulator</td>
			<td>Digitimer</td>
			<td>DS3</td>
			<td>DS3 or Custom Stimulator (see references)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stirring flea</td>
			<td>VWR International Ltd</td>
			<td>442-0270</td>
			<td>For use with the heating stirrer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe tip, blunt, 1 mm diameter</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe tip, blunt, 2 mm diameter</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, plastic, 10 mL volume</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>syringe should have luer lock fitting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape, water-resistant</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For securing tubing and wiring to workbench</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermometer</td>
			<td>VWR International Ltd</td>
			<td>620-0806</td>
			<td>glass thermometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>USB Power Bank</td>
			<td>RS UK</td>
			<td>135-1000</td>
			<td>Custom Stimulator power supply, fully charge before experiment. Not needed if using DS3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Valve, Leuer Lock, 3-Way</td>
			<td>VWR International Ltd</td>
			<td>229-7440</td>
			<td>For attaching syringe to bath feed tube and priming siphon</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of rat sciatic nerve for ex vivo neurophysiology

Ex vivo preparatlar, lokal doku yapısını korurken vücudun geri kalanından izole olarak birçok nörofizyolojik sürecin incelenmesini sağlar. Bu çalışma, tampon preparatı, hayvan prosedürleri, ekipman kurulumu ve nörofizyolojik kayıt dahil olmak üzere ex vivo nörofizyoloji için sıçan siyatik sinirlerinin hazırlanmasını açıklamaktadır. Bu çalışma, bu yöntemle mümkün olan farklı deney türlerine genel bir bakış sunmaktadır. Özetlenen yöntem, sonuçlarda optimal tutarlılık için sıkı bir şekilde kontrol edilen koşullarda ekstrakte edilen periferik sinir dokusu üzerinde 6 saatlik stimülasyon ve kayıt sağlamayı amaçlamaktadır. Bu yöntem kullanılarak elde edilen sonuçlar, deneyin tüm süresi boyunca milivolt aralığında tepeden tepeye genliklere sahip A-fiber bileşik aksiyon potansiyelleridir (CAP). CAP genlikleri ve şekilleri tutarlı ve güvenilirdir, bu da onları yeni elektrotları mevcut modellerle veya kimyasalların kullanımı, cerrahi değişiklikler veya nöromodülatör stimülasyon teknikleri gibi müdahalelerin doku üzerindeki etkilerini test etmek ve karşılaştırmak için yararlı kılar. Hem platin-iridyum kontaktlı geleneksel manşet elektrotları hem de ısmarlama iletken elastomer elektrotlar test edilmiş ve sinir uyaranı kuvvet-süre yanıtı açısından benzer sonuçlar vermiştir.

Bu protokol ile elde edilebilecek temsili sonuçlar, siyatik sinir içindeki A-tipi sinir liflerinden tutarlı bileşik aksiyon potansiyelleridir. Bu aksiyon potansiyelleri tipik olarak elektrotta yaklaşık 1 mV'luk bir tepeden tepeye genliğe sahiptir ve bu nedenle bir kez yükseltildiğinde 100 mV'dur (Şekil 2). Benzer stimülasyon genlikleri ve darbe genişlikleri benzer CAP genlikleri vermelidir. İletken elastomer manşet elektrotları, ticari olarak temin edilebilen platin manşet el...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Rat Sciatic Nerve for Ex Vivo Neurophysiology at JoVE.com

Preparation of Rat Sciatic Nerve for Ex Vivo Neurophysiology

Bu protokol, sıçan tüm siyatik sinir dokusunun ex vivo elektrofizyolojik stimülasyon için hazırlanmasını ve çevresel olarak düzenlenmiş, iki bölmeli, perfüze edilmiş bir salin banyosunda kaydedilmesini açıklar.

Ex Vivo Nörofizyoloji için Sıçan Siyatik Sinirinin Hazırlanması

Ex vivo preparations enable the study of many neurophysiological processes in isolation from the rest of the body while preserving local tissue structure. ...

Bu protokol, yüksek frekanslı / yüksek genlikli akım enjeksiyonundan sonra sinir bloğu taşınması gibi iyi anlaşılmamış birçok nörofizyolojik fenomenin gözlemlenmesini sağlarken, canlı bir vücuttaki diğer süreçlerden kaynaklanan parazitleri önler. Bu teknik oldukça tekrarlanabilir, sağlam sonuçlar verir ve in vivo elektrofizyolojiden daha pratiktir, çünkü anestezi derinliği gibi karmaşık değişkenlerin kontrol edilmesi gerekmez ve bu nedenle ölçümleri etkileyemez. Anestezi altında bir ötenazi prosedüründen sonra, diseksiyon masasına dişi bir sıçan yerleştirin, ayak bileğini başparmak, işaret parmağı ve orta parmak arasında sıkıca tutun ve 12 santimetrelik düz künt makas kullanarak kalkaneal tendonu kesin.İnce forseps ve makas kullanarak, siyatik sinir açığa çıkana kadar bacağın arkasının ortasına yakın kas katmanlarından dikkatli kesikler yapın. Sinir görünür olduğunda, sinirin kurumasını önlemek için buz gibi soğuk modifiye Krebs-Henseleit tamponu veya MKHB kullanarak boşluğu nemlendirin. Hemostatları kullanarak, her iki taraftaki cilt kapaklarını çekin ve daha ince diseksiyon için insizyonu açık tutun.Kalkaneal tendon insizyon lokalizasyonundan başlayarak, ince makas kullanarak, siniri serbest bırakmak için bacağın medial tarafındaki kası kesin. Buz gibi soğuk MKHB ile bölgedeki nem seviyelerini korumaya devam edin. Bacak yukarı doğru hareket ederken sinir açığa çıktığından, üstteki kas dokusunu disseke edin.Omurgaya yakın olan siniri, omurga yarığına ulaşana kadar bağ dokularından serbest bırakın, bu noktada sinirde bir bükülme vardır. Siniri henüz temizlemeyin, çünkü bu aşamada hız esastır. Diseksiyonu kolaylaştırmak için, forseps kullanarak, sinirin ucunu ayak bileğinin yanına yavaşça çekin.Daha sonra, ince makas kullanarak, omurgaya yakın siniri şiddetlendirin. Disseke edilmiş siniri MKHB ile doldurulmuş 15 mililitrelik bir santrifüj tüpüne yerleştirin ve temizleme prosedürünün başlamasına kadar tüpü tekrar buzun üzerine yerleştirin. Kaplanmış Petri kabını yarıya kadar soğutulmuş oksijenli MKHB ile doldurun, ardından bir disseke siyatik siniri tabağa yerleştirin ve sinirin her iki ucunu da sinirin bükülme, burulma veya bükülme olmadan düz olacak şekilde tabağa sabitleyin.6-0 ipek dikiş veya ince iplik kullanarak, tampona sitosol sızıntısını önlemek için sinirin her iki ucuna çift düğüm bağlayın. Düğümleri, sinir dokusundan tampona sızmasını önlemek için sinirin merkezine daha yakın olan taraftaki böcek pimlerinin hemen yanına yerleştirin. Mikroskop altında, iki milimetrelik açılı yay makası ve ince forseps kullanarak, sinirden yağ, kan damarları ve kas dokusunu çıkarın.Stimülasyon ve kayıtta kullanılmayacak sinir dallarını budayın. Her beş dakikalık temizlikten sonra, tamponu taze, soğutulmuş, oksijenli MKHB ile değiştirin. Temizledikten sonra, siniri tamponla doldurulmuş taşıma tüpüne geri yerleştirin ve tüpü buz üzerinde dinlendirin.Temiz, çift odacıklı bir sinir banyosu hazırlayın. Standart laboratuvar patron kafalarını ve tutucularını kullanarak, sinir banyosunu ısıtma karıştırıcısına yerleştirilen iki litrelik şişenin seviyesinin altına yerleştirin. Banyonun tahliyesini peristaltik pompa girişine bağlayın.Peristaltik pompanın çıkışını tampon şişesine geri giden bir tüpe bağlayın. Banyo girişini ayarlanabilir bir akış valfi ile bir tüpe bağlayın ve tüpü şişenin içine yerleştirin. Yerçekimi destekli tampon girişi için tüpün sifon olarak astarlanmasına yardımcı olması için orta çıkışa bağlı bir şırıngaya sahip üç bir valf kullanın.Şırıngayı tampon içine akana kadar çekerek sifonu astarlayın. Valfi, banyoya tampon akış hızı dakikada beş ila altı milimetre olacak şekilde yapılandırın. Akış hızı başlangıçta banyoyu doldurmak için arttırılabilir.Banyo tamponu seviyesi drenaja ulaştığında, sinirleri banyoya yerleştirin. Bir böcek pimi kullanarak, sinirin ucunu tampon dolu banyo odasının köşesine sabitleyin. 45 derecelik açılı ince forseps kullanarak ve siniri sadece uçlarından sıkıştırarak, iki banyo odası arasındaki bölmedeki delikten uyarılmak üzere siniri dikkatlice geçirin.Bir böcek pimi kullanarak, sinirin diğer ucunu banyonun yağ odasına sabitleyin, sinirin gerilmeden düz olmasını ve bükülme ve bükülmelerden arındırılmış olmasını sağlayın. Silikon gres kullanarak, tampon odasından yağ odasına tampon sızıntısını önlemek için bir conta yapın Yağ odasını silikon veya mineral yağ ile doldurun. Gümüş/gümüş klorür kayıt elektrot kancalarını yağ banyosu odasına yerleştirin ve patron kafaları ve tutucular kullanarak sabitleyin.Daha sonra, sinirin yağ banyosundaki kısmını, siniri gerginleştirmeden kancaların üzerine örtün. Siniri hareket ettirdikten sonra herhangi bir sızıntı gözlenirse silikon gres contasını ayarlayın veya onarın. Referans gümüş/gümüş klorür elektrodunu amplifikatör zeminine bağlayın ve elektrodu bir laboratuvar tutucusu kullanarak sabitleyerek tampon dolu banyo odasına yerleştirin.Stimülasyon için temiz bir sinir manşet elektrodu hazırladıktan sonra, elektrodu tampon dolu banyo odasına yerleştirin. Forseps veya künt veya açılı uçlu ince cımbız kullanarak, manşetin içini ıslatmak için banyodaki elektrodu açın. Kabarcıklar kalırsa, banyodan tampon çekmek için ince bir şırınga kullanın ve kabarcıkları manşetten dışarı çıkmaya zorlayın.Bir cımbız kullanarak, manşeti yavaşça açın ve sinirin altına kaydırın. Sinirin etrafındaki manşeti kapatın, sinirin bükülmesini veya bükülmesini önleyin. Stimülasyon elektrodunu ve akım dönüş elektrodunu stimülatöre bağlayın.Akım dönüş elektrodu olarak kare platin bir tabaka kullanıyorsanız, tabakayı banyodaki sinirden uzağa yerleştirin. Her iki elektrot kablosunu da bantla sabitleyin. Stimülatör TTL sinyal çıkışını osiloskopun dördüncü kanalına bağlayın.Osiloskop ekranında, Tetikleyici kanal sekmesine basın ve tetikleyici kanal olarak dördüncü kanalı belirtin. Seviye düğmesini kullanarak tetik seviyesini bir volta ayarlayın. Osiloskopta, zaman çözünürlüğünü bölüm başına bir milisaniyeye ve voltaj çözünürlüğünü bölüm başına 10 milivolta ayarlayın.Tetik referansını zamanında ortalayın ve tetik seviyesini bir volta ayarlayın. Stimülatörünü bilgisayara bağladıktan sonra, pil güç kaynağını güç girişine bağlayarak uyarıcıyı açın. Ardından, bilgisayarda MATLAB yazılımını başlatın.Özel MATLAB komut dosyasını yürütün. Ardından, belirtilen MATLAB komut dosyasını açın. Komut dosyasını düzenleyin ve uyarıcı darbe genliği parametrelerini eksi 300 mikroamper, uyarıcı darbe genişliği 300 mikrosaniye, uyarıcı darbe sayısı 10 ve darbeler arasındaki uyarıcı süresi bir saniye olarak ayarlayın.Yazılımda Çalıştır'a tıklayarak stimülasyon protokolünü başlatın. Bileşik aksiyon potansiyeli veya CAP, elektrotta bir milivolt ve yükseltildiğinde 100 milivoltluk bir tepeden tepeye genliğe sahipti. Standart platin sinir manşetleri ve ısmarlama iletken elastomer sinir manşetleri için tipik sinir uyarılabilirliği burada gösterilmiştir.Her iki siyatik siniri kullanarak bir günlük deney boyunca ex vivo elde edilen CAP burada gösterilmiştir. Sağ siyatik sinir ile minimal CAP genlik azalması gözlendi. Buna karşılık, yaklaşık üç milivolttaki sol siyatik sinir CAP genliği, sinir ekstraksiyonundan altı saatten fazla bir süre sonra deneyin başlangıcındaki sağ siyatik sinirinkine benzerdi.Diseksiyon, temizlik ve uygulama tekniğinde hassasiyeti ve tekrarlanabilirliği vurgulayın. Banyoda neler olup bittiğine dikkat edin. Sinir sinyali kaybolursa, elektrotların iyi temas halinde olmaması veya banyo yağı bölümünde salin bulunması ve sinirin ölmesi olmayabilir.İlk kez kullananlar, özellikle diseksiyon aşamasında, acele etmeye cazip gelebilir. Bu muhtemelen hatalara yol açacak ve sinire zarar verecektir. Hassasiyet ve tutarlılık burada anahtardır ve daha kaliteli sonuçlara yol açacaktır.Tampon hazırlamada tutarlılığa da özel dikkat gösterilmelidir.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Rat Sciatic Nerve for Ex Vivo Neurophysiology

Axoplasm Isolation from Rat Sciatic Nerve

Sıçan Siyatik Sinir Axoplasm İzolasyon

Isolation of pure axonal cytoplasm (axoplasm) from peripheral nerve is crucial for biochemical studies of many biological processes. In this article, we ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

Tüm Dağı Muscle Analizi ile tekrarlanabilir Fare Siyatik Sinir Ezilme ve Rejenerasyon daha sonraki Değerlendirme

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

In Vivo Electrophysiological Measurements on Mouse Sciatic Nerves

In Vivo Electrophysiological Measurements on Mouse Sciatic Nerves

Fare Siyatik Sinir Vivo elektrofizyolojik ölçümlerde

Electrophysiological studies allow a rational classification of various neuromuscular diseases and are of help, together with neuropathological ...

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

Elektroporasyon tarafından Kemirgen Siyatik Sinir Schwann Hücreleri için Vivo Gen Transferi

The formation of the myelin sheath by Schwann cells (SCs) is essential for rapid conduction of nerve impulses along axons in the peripheral nervous ...

In Vivo Electrophysiological Measurement of the Rat Ulnar Nerve with Axonal Excitability Testing

In Vivo Electrophysiological Measurement of the Rat Ulnar Nerve with Axonal Excitability Testing

Vivo Aksonal uyarılabilirlik test ile sıçan Ulnar sinirin Elektrofizyolojik ölçüm

Electrophysiology enables the objective assessment of peripheral nerve function in vivo. Traditional nerve conduction measures such as amplitude and ...

Use of In Vivo Single-fiber Recording and Intact Dorsal Root Ganglion with Attached Sciatic Nerve to Examine the Mechanism of Conduction Failure

İletim Yetmezliği Mekanizmasını İncelemek Için Bağlı Siyatik Sinir ile In Vivo Tek Lifli Kayıt ve Bozulmamış Dorsal Kök Ganglion Kullanımı

Single-fiber recording has been a classical and effective electrophysiological technique over the last few decades because of its specific application for ...

Preparation of Newborn Rat Brain Tissue for Ultrastructural Morphometric Analysis of Synaptic Vesicle Distribution at Nerve Terminals

Sinir terminallerinde sinaptik vezikül dağıtımının Ultrastrik morfometrik analizi için yenidoğan Rat beyin dokusunun hazırlanması

Our laboratory and many others have exploited the high resolving power of transmission electron microscopy to study the morphology and spatial ...

Ex Vivo Oculomotor Slice Culture from Embryonic GFP-Expressing Mice for Time-Lapse Imaging of Oculomotor Nerve Outgrowth

Olomotor sinir gelişimi için zaman aşımı görüntüleme için embriyonik GFP-Ifade fareler dan ex vivo okülomotor dilim kültürü

Accurate eye movements are crucial for vision, but the development of the ocular motor system, especially the molecular pathways controlling axon ...

3D Kinematic Analysis for the Functional Evaluation in the Rat Model of Sciatic Nerve Crush Injury

Siyatik Sinir Ezilme Hasarının Sıçan Modelinde Fonksiyonel Değerlendirme için 3D Kinematik Analiz

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of ...

Ex Vivo Pressurized Hippocampal Capillary-Parenchymal Arteriole Preparation for Functional Study

Fonksiyonel Çalışma için Ex Vivo Basınçlı Hipokampal Kapiller-Parenkimal Arteriyol Hazırlığı

From subtle behavioral alterations to late-stage dementia, vascular cognitive impairment typically develops following cerebral ischemia. Stroke and ...