Name: mosquito-associated virus isolation from field-collected mosquitoes
Uploaded: 2022-08-31T13:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mosquito-Associated Virus Isolation from Field-Collected Mosquitoes at JoVE.com

Detta arbete stöddes av Wuhan Science and Technology Plan Project (2018201261638501).

1. Provtagning och sortering av myggor
<ol><li>Fånga de vuxna myggorna genom ljusfångarna MXA-02 eller koldioxidmyggfällor i fältet.</li>
	<li>Döda de uppsamlade myggorna genom att doppa i flytande kväve10,11. Transportera dem till laboratoriet med kylkedjelogistiksystemet12. OBS: Torris användes främst i kylkedjelogistiksystemet.</li>
	<li>(Valfritt) Om provplatserna var nära laboratoriet, skicka direkt de l...

<ol>
	<li>Xia, H., Wang, Y., Atoni, E., Zhang, B., Yuan, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosquito-associated+viruses+in+China.">Mosquito-associated viruses in China.</a> Virologica Sinica. 33 (1), 5-20 (2018).</li><li>Atoni, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dataset+of+distribution+and+diversity+of+mosquito-associated+viruses+and+their+mosquito+vectors+in+China.">A dataset of distribution and diversity of mosquito-associated viruses and their mosquito vectors in China.</a> Scientific Data. 7 (1), 342 (2020).</li><li>Atoni, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+discovery+and+global+distribution+of+novel+mosquito-associated+viruses+in+the+last+decade+(2007-2017).">The discovery and global distribution of novel mosquito-associated viruses in the last decade (2007-2017).</a> Reviews in Medical Virology. 29 (6), 2079 (2019).</li><li>Xia, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+metagenomic+profiling+of+viromes+associated+with+four+common+mosquito+species+in+China.">Comparative metagenomic profiling of viromes associated with four common mosquito species in China.</a> Virologica Sinica. 33 (1), 59-66 (2018).</li><li>Ong, O. T. W., Skinner, E. B., Johnson, B. J., Old, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosquito-borne+viruses+and+non-human+vertebrates+in+Australia:+A+review.">Mosquito-borne viruses and non-human vertebrates in Australia: A review.</a> Viruses. 13 (2), 265 (2021).</li><li>Agboli, E., Leggewie, M., Altinli, M., Schnettler, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosquito-specific+viruses-transmission+and+interaction.">Mosquito-specific viruses-transmission and interaction.</a> Viruses. 11 (9), 873 (2019).</li><li>Halbach, R., Junglen, S., van Rij, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosquito-specific+and+mosquito-borne+viruses:+evolution,+infection,+and+host+defense.">Mosquito-specific and mosquito-borne viruses: evolution, infection, and host defense.</a> Current Opinion in Insect Science. 22, 16-27 (2017).</li><li>Bolling, B. G., Olea-Popelka, F. J., Eisen, L., Moore, C. G., Blair, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmission+dynamics+of+an+insect-specific+flavivirus+in+a+naturally+infected+Culex+pipiens+laboratory+colony+and+effects+of+co-infection+on+vector+competence+for+West+Nile+virus.">Transmission dynamics of an insect-specific flavivirus in a naturally infected Culex pipiens laboratory colony and effects of co-infection on vector competence for West Nile virus.</a> Virology. 427 (2), 90-97 (2012).</li><li>Baidaliuk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-fusing+agent+virus+reduces+arbovirus+dissemination+in+Aedes+aegypti+mosquitoes+in+vivo.">Cell-fusing agent virus reduces arbovirus dissemination in Aedes aegypti mosquitoes in vivo.</a> Journal of Virology. 93 (18), 00715-00719 (2019).</li><li>Atoni, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metagenomic+virome+analysis+of+Culex+mosquitoes+from+Kenya+and+China.">Metagenomic virome analysis of Culex mosquitoes from Kenya and China.</a> Viruses. 10 (1), 30 (2018).</li><li>Xia, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+isolation+and+characterization+of+a+group+C+Banna+virus+(BAV)+from+Anopheles+sinensis+mosquitoes+in+Hubei,+China.">First isolation and characterization of a group C Banna virus (BAV) from Anopheles sinensis mosquitoes in Hubei, China.</a> Viruses. 10 (10), 555 (2018).</li><li>Shi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stability+of+the+virome+in+lab-+and+field-collected+Aedes+albopictus+mosquitoes+across+different+developmental+stages+and+possible+core+viruses+in+the+publicly+available+virome+data+of+Aedes+mosquitoes.">Stability of the virome in lab- and field-collected Aedes albopictus mosquitoes across different developmental stages and possible core viruses in the publicly available virome data of Aedes mosquitoes.</a> mSystems. 5 (5), 00640 (2020).</li><li>Zhou, M., Chu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook for Classification and Identification of Main Vectors. , (2019).</li><li>Wang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+the+main+mosquito+species+in+China+based+on+DNA+barcoding.">Identifying the main mosquito species in China based on DNA barcoding.</a> Plos One. 7 (10), (2012).</li><li>Ratnasingham, S., Hebert, P. D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bold:+The+Barcode+of+Life+Data+System+(www.barcodinglife.org).">Bold: The Barcode of Life Data System (www.barcodinglife.org).</a> Molecular Ecology Notes. 7 (3), 355-364 (2007).</li><li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+in+vivo+characterization+of+a+new+strain+of+mosquito+Flavivirus+derived+from+Culicoides.">In vitro and in vivo characterization of a new strain of mosquito Flavivirus derived from Culicoides.</a> Viruses. 14 (6), 1298 (2022).</li><li>Zhao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+novel+Tanay+virus+isolated+from+Anopheles+sinensis+mosquitoes+in+Yunnan,+China.">Characterization of a novel Tanay virus isolated from Anopheles sinensis mosquitoes in Yunnan, China.</a> Frontiers in Microbiology. 10, 1963 (1963).</li><li>Ren, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+novel+reassortment+Tibet+orbivirus+isolated+from+Culicoides+spp.+in+Yunnan,+PR+China.">Characterization of a novel reassortment Tibet orbivirus isolated from Culicoides spp. in Yunnan, PR China.</a> Journal of General Virology. 102 (9), 001645 (2021).</li></ol>

Syftet med denna metod var att erbjuda ett praktiskt sätt att isolera myggassocierade virus med hjälp av olika cellinjer. Det är viktigt att tillsätta antibiotika-antimykotiska (penicillin-streptomycin-amfotericin) till supernatanterna i mygghomogenaten för att undvika kontaminering av bakterier eller svampar. Myggor och virussupernatanter som erhållits på fältet måste kylas vid -80 °C för att undvika upprepade frys-tö-cykler.
Ett annat kritiskt steg i protokollet var slipning. Myg...

Myggor är en grupp viktiga patogena leddjursvektorer. Det finns cirka 3 500 myggarter i familjen Culicidae 1,2. Utvecklingen av sekvenseringsteknik med hög genomströmning har lett till upptäckten av många nya, virusliknande sekvenser i myggor från olika delar av världen3. I allmänhet kan dessa myggassocierade virus klassificeras i två huvudgrupper: MBV och MSV.
MBV är en grupp olika virus som är orsakande medel för många sjukdomar hos människor eller djur, såsom gula febervirus (YFV), denguevirus (DENV), japanskt encefalitvirus (JEV), West Nile-virus (WNV) och Rift Valley febervirus (RVFV)4. De har allvarligt hotat folkhälsan genom att orsaka allvarlig sjuklighet och dödlighet hos både människor och djur över hela världen. MBV upprätthåller naturligt en livscykel mellan olika värdar genom överföring från en infekterad mygga till en naiv värd, liksom från en virusinfekterad värd och till en matande mygga5. Därför kan dessa virus infektera både myggcellinjer och ryggradsdjurcellinjer i labb1.
MSV, som inkluderar Yichang-virus (YCN), Culex flavivirus (CxFV) och Chaoyang-virus (CHAOV), är en undergrupp av insektsspecifika virus 1,6,7. Under de senaste åren har upptäckten av nya MSV ökat, och några av dessa MSV har visat sig ha en inverkan på överföringen av MBV. Till exempel kan CxFV, som kan vara en ihållande infektion i Culex pipiens, undertrycka WNV-replikering i ett tidigt skede8. Ett annat insektsspecifikt flavivirus, cellfusionsmedelvirus (CFAV), har visat sig hämma spridningen av DENV- och Zika-virus (ZIKV) i Aedes aegypti-myggor 9. Således är detta protokoll ett användbart tillvägagångssätt för att isolera myggassocierade virus och kan hjälpa till i ytterligare forskning om fördelningen av patogener relaterade till myggor och kontroll av myggburna sjukdomar.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m membrane filter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLGP033RB</td>
			<td>Polymer films with specific pore ratings.To remove cell debris and bacteria.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well plates</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>3524</td>
			<td>Containers for cell</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75 cm2 flasks</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>430641</td>
			<td>Containers for cell</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>a sterile 2 mL tube with 3 mm ceramic beads</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15240-062</td>
			<td>Antibiotic in the medium to prevent contamination from bacteria and fungi</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated nucleic acid extraction system</td>
			<td>NanoMagBio</td>
			<td>S-48</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BHK-21 cells</td>
			<td>National Virus Resource Center, Wuhan Institute of Virology</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C6/36 cells</td>
			<td>National Virus Resource Center, Wuhan Institute of Virology</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifugal machine</td>
			<td>Himac</td>
			<td>CF16RN</td>
			<td>Instrument for centrifugation of mosquito samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s minimal essential medium (DMEM)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>C11995500BT</td>
			<td>medium for vertebrate cell lines</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ebinur Lake virus</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Cu20-XJ isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Feta Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10099141C</td>
			<td> 
			 
			Provide nutrition for cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>high-speed low-temperature tissue homogenizer</td>
			<td>servicebio</td>
			<td>KZ-III-F</td>
			<td>Instrument for grinding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>incubator (28 &#176;C)</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td>MCO-18AC</td>
			<td>Instrument for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>incubator (37 &#176;C)</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td>MCO-18AC</td>
			<td>Instrument for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR tube</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>penicillin-streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15410-122</td>
			<td>Antibiotic in the medium to prevent contamination from bacteria</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin-Amphotericin B Solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15240096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerator (-80 &#176;C)</td>
			<td>sanyo</td>
			<td>MDF-U54V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roswell Park Memorial Institute&#160; medium (RPMI)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>C11875500BT</td>
			<td>medium for mosiquto cell lines</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screw cap storage tubes (2 mL)</td>
			<td>biofil</td>
			<td>&#160;FCT010005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sterile pestles</td>
			<td>Tiangen</td>
			<td>OSE-Y004</td>
			<td>Consumables&#160; for grinding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TGrinder OSE-Y30 electric tissue grinder</td>
			<td>Tiangen</td>
			<td>OSE-Y30</td>
			<td>Instrument for grinding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The dissecting microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>stemi508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>the light traps MXA-02</td>
			<td>Maxttrac</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The mosquito absorbing machine</td>
			<td>Ningbo Bangning</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The pipette tips</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>TF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The QIAamp viral RNA mini kit</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>52906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezers</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>0203-5-PO</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mosquito-associated virus isolation from field-collected mosquitoes

Med den breda tillämpningen av sekvenseringsteknik har många nya virusliknande sekvenser upptäckts hos leddjur, inklusive myggor. De två huvudkategorierna av dessa nya myggassocierade virus är "myggburna virus (MBV)" och "myggspecifika virus (MSV)". Dessa nya virus kan vara patogena för både ryggradsdjur och myggor, eller de kan bara vara symbiotiska med myggor. Enhetsvirus är viktiga för att bekräfta de biologiska egenskaperna hos dessa virus. Således har ett detaljerat protokoll beskrivits här för virusisolering och förstärkning från fältinsamlade myggor. Först framställdes myggproverna som supernatanter av mygghomogenat. Efter centrifugering två gånger inokulerades supernatanterna sedan i antingen myggcellinjen C6/36 eller ryggradsdjurcellinjen BHK-21 för virusamplifiering. Efter 7 dagar samlades supernatanterna in som P1-supernatanter och förvarades vid -80 °C. Därefter passerades P1-supernatanter två gånger till i C6/36- eller BHK-21-celler medan cellstatusen kontrollerades dagligen. När cytopatogen effekt (CPE) på cellerna upptäcktes samlades dessa supernatanter in och användes för att identifiera virus. Detta protokoll fungerar som grund för framtida forskning om myggassocierade virus, inklusive MBV och MSV.

Efter inokulering med supernatanterna hos mygghomogenaten (P0) uppvisade C6/36-cellerna ett brett intercellulärt utrymme och exfolierade celler observerades vid 120 timmar (figur 1A) jämfört med de oinokulerade cellerna (kontroll) samtidigt (figur 1B). Efter inkubation av BHK-21-cellerna med P3-supernatanterna observerades synlig CPE i BHK-21-cellerna vid 48 timmar (figur 1C) i motsats till kontrollcellerna (...

Watch this Scientific Journal Video about Mosquito-Associated Virus Isolation from Field-Collected Mosquitoes at JoVE.com

Mosquito-Associated Virus Isolation from Field-Collected Mosquitoes

Många nya virusliknande sekvenser har hittats i myggor på grund av den omfattande användningen av sekvenseringsteknik. Vi tillhandahåller ett effektivt förfarande för att isolera och förstärka virus med hjälp av ryggradsdjur och myggcellinjer, vilket kan tjäna som grund för framtida studier på myggassocierade virus, inklusive myggburna och myggspecifika virus.

Myggassocierad virusisolering från fältsamlade myggor

With the broad application of sequencing technologies, many novel virus-like sequences have been discovered in arthropods, including mosquitoes. The two ...

Detta protokoll är ett användbart tillvägagångssätt för att isolera myggassocierade virus och kan hjälpa till i ytterligare forskning om fördelningen av patogener relaterade till myggor och kontroll av myggburna sjukdomar. Att använda tunna linjer för att isolera virus i Biosafety nivå 2-laboratoriet är säkrare och effektivare. Till skillnad från andra virusisoleringsförfaranden, såsom cykling röd inokulering med varierande vätska, kräver denna teknik inte djurförsök eller etisk bedömning.Föroreningen från prover och cellerna som ritar under inkubationen kan leda till att experimentet misslyckas. Därför är det nödvändigt att tillsätta 2% Penicillin-Streptomycin-Amfotericin i mediet för att förhindra kontaminering. Börja med tillsats av tre millimeter keramiska pärlor, 1,5 ml RPMI-medium kompletterat med 2% Penicillin-Streptomycin-Amphotericin B-lösning i ett två-milliliter sterilt rör placerat på is och överför sedan 50 myggor i den.Homogenisera sedan myggorna med en lågtemperaturvävnadshomogenisator genom slipning i 30 sekunder vid 70 hertz och 4 grader Celsius i 3 cykler. Centrifugera homogenatet vid 15 000 G i 30 minuter vid 4 grader Celsius och överför supernatanterna till de nya rören. För att avlägsna myggskräpet helt, centrifugera supernatanten igen vid 15 000 G i 10 minuter vid 4 grader Celsius.Alikvotera de 200 mikroliter supernatant P0 i ett två-milliliter skruvlocksförvaringsrör och förvara det vid minus 80 grader Celsius. För virusförstärkning, använd Aedes albopictus RNAi-bristande myggcellinje C6/36 och en ryggradsdjurcellinje, baby hamsternjure eller BHK-21 från en 75-centimeter fyrkantig kolv och frö dem i 24 brunnsplattor separat. Placera den sådda 24-brunnsplattan över natten vid 28 eller 37 grader Celsius.Nästa dag, observera cellerna under mikroskopet för att bekräfta 80 till 90% sammanflöde i varje brunn. Förbered 500 ml av cellodlingsunderhållsmediet kompletterat med antibiotika. Ta bort cellodlingsmediet från de 24 brunnsplattorna och tillsätt 100 mikroliter av cellodlingsunderhållsmediet till varje brunn.Inokulera sedan cellerna med 100 mikroliter av supernatanten i mygghomogenatet eller P0. Inkubera plattorna vid 28 eller 37 grader Celsius i 60 minuter och skaka försiktigt plattorna efter var 15: e minut för att förhindra torkning av cellerna. När du är klar, ta bort supernatanten och skölj varje brunn med 600 mikroliter cellodlingsunderhållsmedium för att ta bort skräpet helt. Tillsätt sedan 800 mikroliter cellodlingsunderhållsmedium till varje brunn innan plattorna placeras i en 5% koldioxidfuktad inkubator vid 28 eller 37 grader Celsius i 7 dagar.Dagligen övervaka tillståndet för cellerna i varje brunn under mikroskopet. På den sjunde dagen, samla supernatanten av celler som kallas P1 och förvara den vid minus 80 grader Celsius. Upprepa proceduren för att samla P2 och P3 virala supernatanter.På grund av den cytopatogena effekten, eller CPE, dör celler från några av brunnarna och lossnar från ytan. För att kraftigt förstärka virusen: Samla 300 till 400 mikroliter av supernatanten från brunnar som visar CPE-effekten och överför den till en ny sexbrunnsplatta med 80 till 90% cellsammanflöde av odlingsceller. Slutligen samla och överför 500 mikroliter av supernatanten från brunnarna på sexbrunnsplattan till två milliliter skruvlocksförvaringsrör innan de förvaras vid minus 80 grader Celsius.Inokuleringen av C6/36-celler med mygghomogenaten P0 uppvisade ett brett intercellulärt utrymme i exfolierade celler vid 120 timmar efter infektionsperioden jämfört med de oinokulerade cellerna eller kontrollcellerna. Inkubation av BHK21-celler med P3-virala supernatanter visade en synlig CPE 48 timmar efter infektion, vilket visade cellens död och frigöring från ytan i motsats till kontrollcellerna. Kommersiellt tillgängliga universella primrar eller Flavivirus, Alphavirus och Bunyavirus användes för att generera PCR-produkterna för viral supernatant.En PCR-produkt för Bunyaviruset, Ebinur Lake-viruset, sattes som en positiv kontroll. PCR-amplifieringsförbuden i banor som tillhör Bunyavirus och den positiva kontrollen belyste möjligheten av förekomst av Bunyavirus i supernatanterna. För att förbättra framgångsgraden för virusisolering, håll en låg temperatur under provtransport, isolering och slipning.Tillsätt antibiotika vid homogenisering av myggorna och själva kulturen. Och hantera kulturen snabbt under inkubation och avlägsnande av odlingsmediet. Förutom denna procedur kan sliplösningen injiceras i en cyklande råtta eller kycklingembryo.Bekräftelseförfarandet kommer dock att ge upphov till etiska problem och öka kostnaden för experimentet.

Research

JoVE Journal

Biology

Dissection of Midgut and Salivary Glands from Ae. aegypti Mosquitoes

Dissekering av midgut och spottkörtlar från AE. aegypti Myggor

The mosquito midgut and salivary glands are key entry and exit points for pathogens such as Plasmodium parasites and Dengue viruses. This video protocol ...

Isolation of Genomic DNA from Mouse Tails

Isolering av genomisk DNA från mus Tails

Mitochondrial Isolation from Skeletal Muscle

Mitokondriell Isolering från skelettmuskulatur

Mitochondria are organelles controlling the life and death of the cell. They participate in key metabolic reactions, synthesize most of the ATP, and ...

Isolation of Immune Cells from Primary Tumors

Isolering av immunceller från primära tumörer

Tumors create a unique immunosuppressive microenvironment (tumor microenvironment, TME) whereby leukocytes are recruited into the tumor by various ...

The MultiBac Protein Complex Production Platform at the EMBL

Den MultiBac Protein Complex Production Platform vid EMBL

Proteomics  research revealed the impressive complexity of eukaryotic proteomes in  unprecedented detail. It is now a commonly accepted notion that ...

Isolation of Myofibroblasts from Mouse and Human Esophagus

Isolering av Myofibroblaster från mus och Human matstrupen

Murine and human esophageal myofibroblasts are generated via enzymatic digestion. Neonate (8-12 day old) murine esophagus is harvested, minced, washed, ...

A Multi-detection Assay for Malaria Transmitting Mosquitoes

En Multi-detektion analys för Malaria Överföring Myggor

The Anopheles gambiae species complex includes the major malaria transmitting mosquitoes in Africa. Because these species are of such medical importance, ...

Protocols for Testing the Toxicity of Novel Insecticidal Chemistries to Mosquitoes

Protokoll för testning av romanen insektsbekämpning kemier mygg toxicitet

New classes of insecticides with novel modes of action are needed to control insecticide resistant populations of mosquitoes that transmit diseases such ...

Forced Salivation As a Method to Analyze Vector Competence of Mosquitoes

Tvingade salivering som en metod att analysera vektor kompetens av myggor

Vector competence is defined as the potential of a mosquito species to transmit a mosquito-borne virus (mobovirus) to a vertebrate host. Viable virus ...

Isolation of High Quality Murine Atrial and Ventricular Myocytes for Simultaneous Measurements of Ca2+ Transients and L-Type Calcium Current

Isolation of High Quality Murine Atrial and Ventricular Myocytes for Simultaneous Measurements of Ca2+ Transients and L-Type Calcium Current

Isolering av högkvalitativa murina förmaks- och ventrikulära myocyter för samtidiga mätningar av Ca2+ transienter och kalciumström av L-typ

Mouse models play a crucial role in arrhythmia research and allow studying key mechanisms of arrhythmogenesis including altered ion channel function and ...