Name: induction and diverse assessment indicators of experimental autoimmune encephalomyelitis
Uploaded: 2022-09-09T12:30:00
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作者感谢中国国家自然科学基金（32070768，31871404，31900658，32270754）和药物研究国家重点实验室的支持。

同济大学动物护理委员会批准了目前的工作，并遵循了所有动物护理指南。使用8-12周龄的雄性或雌性C57BL / 6J小鼠进行实验。确保实验组的年龄和性别相同;否则，对该疾病的易感性受到影响。将小鼠饲养在特定的无病原体环境中，在恒定条件下（室温23±1°C，湿度50%±10%）交替进行12小时的光照和黑暗循环，并自由获取小鼠食物和水。
1.MOG35-55 乳液的制备...

MS是中枢神经系统的脱髓鞘炎症性疾病，是导致年轻人慢性残疾的最常见神经系统疾病之一，给家庭和社会带来巨大负担3，4。MS一直被归类为器官特异性T细胞介导的自身免疫性疾病，诱导自身免疫系统缓慢侵蚀CNS，这将涉及全身的多个系统27。典型的临床症状包括视力障碍、运动障碍、认知和情绪障碍等6，<s...

自身免疫性疾病是由免疫系统对其自身抗原的免疫反应引起的一系列疾病，导致组织损伤或功能障碍1。多发性硬化症（MS）是中枢神经系统（CNS）多发性神经病的慢性自身免疫性疾病，其特征是炎症浸润，脱髓鞘和神经元轴突变性2，3。目前，MS已影响全球多达250万人，其中大多数是20-40岁的年轻人和中年人，他们往往是家庭和社会的支柱。这对家庭和社会造成了相当大的影响和伤害2，4。
MS是一种多因素疾病，临床表现多样且复杂。除了以炎症浸润和脱髓鞘为特征的经典神经系统疾病外，MS还经常表现出视力障碍，肢体运动障碍以及认知和情绪障碍5，6，7。如果MS患者没有得到适当和正确的治疗，其中一半将在20年后生活在轮椅上，其中近一半会出现抑郁和焦虑症状，导致自杀意念水平比一般人群高得多8，9。
尽管研究时间较长，但MS的病因仍然难以捉摸，MS的发病机制尚未阐明。尽管啮齿动物和人类免疫系统之间存在显着差异，但MS的动物模型允许作为探索疾病发展和新治疗方法的测试工具，同时共享一些基本原理。实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）是目前研究MS的理想动物模型，利用髓鞘蛋白自身抗原免疫诱导易感小鼠对CNS成分的自身免疫，并加入完全弗氏佐剂（CFA）和百日咳毒素（PTX）增强体液免疫应答。根据遗传背景和免疫抗原，获得不同的疾病过程，包括急性、复发缓解或慢性，以模拟各种临床形式的 MS 10，11，12。构建EAE模型常用的相关免疫原来自自身CNS蛋白，如髓鞘碱性蛋白（MBP）、蛋白脂蛋白（PLP）或髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG）。MBP或PLP免疫的SJL / L小鼠发展复发 - 缓解过程，MOG触发C57BL / 6小鼠的慢性进行性EAE11，12，13。
疾病修正疗法（DMT）的主要目的是尽量减少疾病症状并改善功能6。临床上有几种药物用于缓解MS，但尚未使用任何药物来完全治愈它，这表明协同治疗的必要性。C57BL/6小鼠是目前最常用于构建转基因小鼠的方法，本工作采用MOG35-55 诱导的5点量表C57BL/6J小鼠EAE模型监测疾病进展。EAE模型还患有焦虑样情绪和骨质流失，以及广为人知的脱髓鞘病变。在这里，还描述了使用开放现场测试和显微计算机断层扫描（Micro-CT）分析从多个角度评估EAE症状的方法。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL syringe(with 26 G needle)</td>
			<td>Shanghai Kindly Medical Instruments Co., Ltd</td>
			<td>60017031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mL microcentrifuge tube</td>
			<td>HAIKELASI</td>
			<td>KY-LXG2A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22 G needle</td>
			<td>Shanghai Kindly Medical Instruments Co., Ltd</td>
			<td>60017208</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete Freund&#8217;s Adjuvant</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F5881</td>
			<td>Stored at 4 &#176;C, 1 mg of heat-inactivated MTB (H37Ra) per mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conditioned place preference system</td>
			<td>Shanghai Jiliang Software Technology Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Animal behavior</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd</td>
			<td>10009218</td>
			<td>Stored at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Locomotion activity (open field) video analysis system</td>
			<td>Shanghai Jiliang Software Technology Co., Ltd</td>
			<td>DigBehv-002</td>
			<td>Animal behavior</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MOG35-55 peptide</td>
			<td>Gill Biochemical Co., Ltd</td>
			<td>GLS-Y-M-03590</td>
			<td>Stored at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mycobacterium tuberculosis H37Ra</td>
			<td>BD</td>
			<td>231141</td>
			<td>Stored at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Open field reaction chamber</td>
			<td>Shanghai Jiliang Software Technology Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Animal behavior</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pertussis toxin</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>516560</td>
			<td>Stored at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Made in our laboratory</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissor</td>
			<td>Shanghai Medical Instrument (group) Co., Ltd</td>
			<td>J21010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sealing film</td>
			<td>Heathrow Scientific</td>
			<td>HS 234526B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorvall Legend Micro 21R Microcentrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>75002447</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steel ball</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>69975</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TissueLyser II</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>85300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezer</td>
			<td>Shanghai Medical Instrument (group) Co., Ltd</td>
			<td>JD1060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#956;CT 35 desktop microCT scanner</td>
			<td>Scanco Medical AG, Bassersdorf, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction and diverse assessment indicators of experimental autoimmune encephalomyelitis

多发性硬化症 （MS） 是一种典型的中枢神经系统 （CNS） 自身免疫性疾病，其特征是炎症浸润、脱髓鞘和轴索损伤。目前，没有完全治愈MS的措施，但有多种疾病改善疗法（DMT）可用于控制和减轻疾病进展。实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）和MS患者的CNS病理特征有显着相似之处。EAE已被广泛用作确定MS药物疗效和探索MS疾病新疗法开发的代表性模型。在小鼠中主动诱导EAE具有稳定且可重复的作用，特别适用于研究药物或基因对自身免疫性神经炎症的影响。主要分享用髓磷脂少突胶质细胞糖蛋白（MOG35-55）免疫C57BL / 6J小鼠的方法和使用临床评分系统的疾病症状的日常评估。鉴于MS病因复杂，临床表现多样，现有的临床评分体系无法满足疾病治疗的评估。为了避免单一干预的缺点，创建了基于MS患者焦虑样情绪和骨质疏松症的临床表现来评估EAE的新指标，以提供更全面的MS治疗评估。

小鼠免疫后，每天记录小鼠的体重，并根据上述方案评估其临床症状（步骤4）。在免疫MOG肽的C57BL/6J小鼠中，由于病变的位置主要局限于脊髓，EAE小鼠的发病机制从尾端扩散到头部。在疾病开始时，EAE小鼠表现出尾巴无力和下垂，随后是后肢无力，运动不协调和瘫痪。随着病情的恶化，逐渐发展为前肢无力，瘫痪，严重时导致小鼠移动困难，甚至濒临死亡。如图 1A所示，具?...

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Induction and Diverse Assessment Indicators of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

本协议描述了使用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白在小鼠模型中诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎，并使用临床评分系统监测疾病过程。采用小鼠股骨显微计算机断层扫描分析和开放现场试验分析实验性自身免疫性脑脊髓炎相关症状，全面评估疾病过程。

实验性自身免疫性脑脊髓炎的诱导及多样评价指标

Multiple sclerosis (MS) is a typical autoimmune disease of the central nervous system (CNS) characterized by inflammatory infiltration, demyelination, and ...

目前尚无完全治愈多发性硬化症的方法。我们的协议允许有效构建实验性自身免疫性脑脊髓炎模型，以帮助探索多发性硬化症疾病的治疗方法。我们方案的主要优点是从多个角度更全面地评估实验性自身免疫性脑脊髓炎的治疗。首先通过在pH 7.4下溶解冻干肽和无菌预冷的不含钙和镁离子的PBS来制备髓鞘少突胶质细胞糖蛋白肽乳液。将一个灭菌的五毫米钢球加入干净的两毫升微量离心管中。然后将500微升含有每毫升冻干结核微杆菌5毫克和髓鞘少突胶质细胞糖蛋白肽肽乳液的500微升完全弗洛伊德佐剂加入管中。现在将管在组织裂解器上振荡 10 分钟。然后将试管在冰上冷却 10 分钟。重复该过程四次，直到形成白色粘性溶液。接下来，将百日咳毒素茎溶液在pH 7.4的无菌PBS中稀释50倍，不含钙和镁离子，以达到每100微升200纳克的最终浓度。为了在管底部沉淀所有最初制备的髓磷脂少突胶质细胞糖蛋白肽乳液，通过按下设备上的脉冲按钮，将管在四摄氏度下离心两到三秒钟。用装有22号针头的1毫升注射器吸出髓磷脂少突胶质细胞糖蛋白肽乳液，并将乳液转移到新的1毫升注射器桶中。将 26 号针连接到枪管上，并用密封膜固定连接。在小鼠背脊的每一侧皮下注射100微升髓鞘少突胶质细胞糖蛋白肽乳剂。注射后，观察皮肤和背部下球状肿块的自动形成。然后腹腔内，将100微升百日咳毒素注射到同一只小鼠中。准备一个开放场反应室，并设置一个视频分析系统来记录鼠标运动。为了在实验前清洁反应室，在整个区域喷洒70%乙醇并用干净的纸巾擦拭。接下来，将鼠标放在反应室的角落里。要开始拍摄，请单击视频录制系统菜单栏中的开始捕获按钮并记录时间。在考场内保持安静，让鼠标自由移动五分钟。然后停止录制并保存视频。将鼠标放回笼子里。然后用70%乙醇清洁测试区域并继续下一个鼠标。将安乐死小鼠平放在解剖托盘上并固定四肢。用镊子握住小鼠的后肢皮肤，用剪刀打开皮肤和肌肉。接下来，小心地使用剪刀将股骨与胫骨和髋骨分开。用剪刀去除粘附在股骨上的肌肉。然后将股骨在室温下放入70%乙醇中。在这项研究中，评估了髓磷脂少突胶质细胞糖蛋白衍生肽诱导EAE的能力。注射肽的小鼠经历了逐渐的体重减轻。注射六到九天后，他们出现了EAE症状，在14到16天后达到顶峰。来自露天测试的跟踪图表明，EAE改变了小鼠的正常探索行为。与正常小鼠相比，EAE小鼠在早发期，高峰期和缓解期的行进距离明显更短。EAE小鼠在疾病的高峰期和缓解期的活动持续时间也显着减少。此外，在所有三个阶段，EAE小鼠的行进距离和在中心花费的时间显着减少。EAE小鼠股骨的显微计算机断层扫描显示与正常小鼠不同的小梁结构。EAE小鼠股骨的骨密度和骨体积与组织体积比明显低于正常小鼠。此外，EAE小鼠股骨的小梁连接密度、小梁数和小梁厚度均低于正常小鼠。与正常小鼠相比，EAE小鼠的小梁间距增强，皮质骨厚度减小。我们还可以在疾病高峰期分离EAE小鼠的大脑和脊柱密码，并通过流感细胞术分析免疫细胞和细胞因子的产生。

Research

JoVE Journal

Biology

Induction and Clinical Scoring of Chronic-Relapsing Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

归纳和慢性复发性实验性自身免疫性脑脊髓炎的临床评分

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS) that commonly affects young adults. It is characterized by ...

科研

生物学

Loading Drosophila Nerve Terminals with Calcium Indicators

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Calcium plays many roles in the nervous system but none more impressive than as the trigger for neurotransmitter release, and none more profound than as ...

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对于波长和红/近红外光治疗对氧化应激强度的范围影响的评估方法<em&gt;在体外</em

Red/near-infrared light therapy (R/NIR-LT), delivered by laser or light emitting diode (LED), improves functional and morphological outcomes in a range of ...