Name: induction and diverse assessment indicators of experimental autoimmune encephalomyelitis
Uploaded: 2022-09-09T12:30:00
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저자는 중국 국립 자연 과학 재단 (32070768, 31871404, 31900658, 32270754)과 국가 약물 연구 핵심 연구소의 지원을 인정합니다.

동지 대학의 동물 관리위원회는 현재의 작업을 승인했으며 모든 동물 관리 지침을 따랐습니다. 8-12주령의 수컷 또는 암컷 C57BL/6J 마우스를 실험에 사용하였다. 실험 그룹에서 나이와 성별이 동일하다는 것이 보장되었습니다. 그렇지 않으면 질병에 대한 감수성이 영향을 받았습니다. 마우스는 일정한 조건 (실온 23 ± 1 ° C, 습도 50 % ± 10 %)에서 12 시간의 밝고 어두운 사이클을 번갈아 가며 마우스 음...

MS는 CNS의 탈수초성 염증성 질환이며 젊은 사람들에게 만성 장애를 유발하는 가장 흔한 신경 질환 중 하나이며가족과 사회에 큰 부담을 줍니다3,4. MS는 항상 기관-특이적 T 세포-매개 자가면역 질환으로 분류되어, 자가면역계가 CNS를 천천히 침식하도록 유도하며, 이는 몸 전체에 걸쳐 다수의 시스템을 수반할 것이다27. 전형적인 임상 증...

자가면역질환은 자체 항원에 대한 면역계의 면역 반응으로 인해 조직 손상 또는 기능 장애를 초래하는 다양한 장애입니다1. 다발성 경화증 (MS)은 염증성 침윤, 탈수 초화 및 신경 축삭 변성 2,3을 특징으로하는 중추 신경계 (CNS)의 다발성 신경 병증의 만성자가 면역 질환입니다. 현재 MS는 전 세계적으로 250 만 명의 사람들에게 영향을 미쳤으며, 대부분 가족과 사회의 중추 인 20-40 세의 젊은 및 중년의 사람들입니다. 이것은 가족과 사회에 상당한 영향과 해를 끼쳤습니다 2,4.
MS는 다양하고 복잡한 임상 증상을 가진 다 인성 질환입니다. 염증성 침윤 및 탈수초화를 특징으로 하는 고전적인 신경 장애 외에도 MS는 종종 시각 장애, 사지 운동 이상증, 인지 및 정서 장애 5,6,7을 보여줍니다. MS 환자가 적절하고 올바른 치료를받지 못하면 절반은 20 년 후에 휠체어에서 살게되고 거의 절반이 우울 및 불안 증상을 경험하여 일반 인구보다 훨씬 높은 수준의 자살 충동을 느끼게됩니다 8,9.
오랜 연구 기간에도 불구하고 MS의 병인은 여전히 파악하기 어렵고 MS의 발병 기전은 아직 밝혀지지 않았습니다. MS의 동물 모델은 설치류와 인간 면역계의 중요한 차이에도 불구하고 질병 개발 및 새로운 치료법을 탐구하는 동시에 몇 가지 기본 원칙을 공유하는 테스트 도구 역할을 허용했습니다. 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE)은 현재 MS 연구를 위한 이상적인 동물 모델로, 미엘린 단백질의 자가항원 면역을 사용하여 감수성 마우스에서 CNS 성분에 대한 자가면역을 유도하고 체액성 면역 반응을 향상시키기 위해 완전한 프로인트 보조제(CFA) 및 백일해 독소(PTX)를 추가합니다. 유전적 배경 및 면역 항원에 따라, MS10,11,12의 다양한 임상 형태를 모방하기 위해 급성, 재발-완화 또는 만성을 포함한 다양한 질병 과정이 얻어진다. EAE 모델의 구축에 일반적으로 사용되는 관련 면역원은 자가 CNS 단백질, 예컨대 미엘린 염기성 단백질 (MBP), 프로테오리피드 단백질 (PLP), 또는 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질 (MOG)으로부터 유래한다. MBP- 또는 PLP-면역화된 SJL/L 마우스는 재발-완화 과정을 개발하고, MOG는 C57BL/6 마우스11,12,13에서 만성 진행성 EAE를 유발한다.
질병 수정 요법 (DMT)의 주요 목적은 질병 증상을 최소화하고 기능을 개선하는 것입니다6. MS를 완화하기 위해 여러 약물이 임상적으로 사용되지만 아직 완전히 치료하는 데 사용되는 약물은 없으므로 시너지 치료의 필요성이 드러납니다. C57BL/6 마우스는 현재 트랜스제닉 마우스를 구축하는데 가장 통상적으로 사용되며, 이 작업에서, 5점 척도를 갖는 C57BL/6J 마우스에서 MOG35-55 에 의해 유도된 EAE 모델을 사용하여 질환 진행을 모니터링하였다. EAE 모델은 또한 불안-유사 기분 및 골 손실, 및 널리 공지된 탈수초성 병변을 앓고 있다. 여기서, 개방 필드 테스트 및 마이크로 컴퓨터 단층 촬영 (Micro-CT) 분석을 사용하여 여러 관점에서 EAE의 증상을 평가하는 방법이 또한 설명된다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL syringe(with 26 G needle)</td>
			<td>Shanghai Kindly Medical Instruments Co., Ltd</td>
			<td>60017031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mL microcentrifuge tube</td>
			<td>HAIKELASI</td>
			<td>KY-LXG2A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22 G needle</td>
			<td>Shanghai Kindly Medical Instruments Co., Ltd</td>
			<td>60017208</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete Freund&#8217;s Adjuvant</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F5881</td>
			<td>Stored at 4 &#176;C, 1 mg of heat-inactivated MTB (H37Ra) per mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conditioned place preference system</td>
			<td>Shanghai Jiliang Software Technology Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Animal behavior</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd</td>
			<td>10009218</td>
			<td>Stored at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Locomotion activity (open field) video analysis system</td>
			<td>Shanghai Jiliang Software Technology Co., Ltd</td>
			<td>DigBehv-002</td>
			<td>Animal behavior</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MOG35-55 peptide</td>
			<td>Gill Biochemical Co., Ltd</td>
			<td>GLS-Y-M-03590</td>
			<td>Stored at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mycobacterium tuberculosis H37Ra</td>
			<td>BD</td>
			<td>231141</td>
			<td>Stored at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Open field reaction chamber</td>
			<td>Shanghai Jiliang Software Technology Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Animal behavior</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pertussis toxin</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>516560</td>
			<td>Stored at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Made in our laboratory</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissor</td>
			<td>Shanghai Medical Instrument (group) Co., Ltd</td>
			<td>J21010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sealing film</td>
			<td>Heathrow Scientific</td>
			<td>HS 234526B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorvall Legend Micro 21R Microcentrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>75002447</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steel ball</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>69975</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TissueLyser II</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>85300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezer</td>
			<td>Shanghai Medical Instrument (group) Co., Ltd</td>
			<td>JD1060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#956;CT 35 desktop microCT scanner</td>
			<td>Scanco Medical AG, Bassersdorf, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction and diverse assessment indicators of experimental autoimmune encephalomyelitis

다발성 경화증 (MS)은 염증성 침윤, 탈수초화 및 축삭 손상을 특징으로 하는 중추신경계(CNS)의 전형적인 자가면역 질환이다. 현재 MS를 완전히 치료할 수있는 조치는 없지만 질병 진행을 제어하고 완화하기 위해 여러 질병 수정 요법 (DMT)을 사용할 수 있습니다. 실험적 자가면역 뇌척수염 (EAE)과 MS 환자의 CNS 병리학적 특징 사이에는 상당한 유사성이 있다. EAE는 MS 약물의 효능을 결정하고 MS 질환에 대한 새로운 치료법 개발을 모색하는 대표적인 모델로 널리 사용되었습니다. 마우스에서 EAE의 활성 유도는 안정하고 재현 가능한 효과를 가지며,자가 면역 신경 염증에 대한 약물 또는 유전자의 효과를 연구하는데 특히 적합하다. C57BL/6J 마우스를 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질(MOG35-55)로 면역화하는 방법과 임상 점수 시스템을 사용하여 질병 증상의 일일 평가가 주로 공유됩니다. 다양한 임상 증상을 가진 MS의 복잡한 병인을 감안할 때 기존 임상 점수 시스템은 질병 치료 평가를 만족시킬 수 없습니다. 단일 개입의 단점을 피하기 위해 MS 환자에서 불안과 유사한 기분 및 골다공증의 임상 증상을 기반으로 EAE를 평가하는 새로운 지표를 만들어 MS 치료에 대한보다 포괄적 인 평가를 제공합니다.

마우스의 면역화 후, 마우스의 체중을 매일 기록하고, 이들의 임상 증상을 상기 기재된 프로토콜에 따라 평가한다 (단계 4). MOG 펩타이드로 면역화 된 C57BL / 6J 마우스에서 병변의 위치는 주로 척수에 국한되어 있기 때문에 EAE 마우스의 병인은 꼬리 끝에서 머리로 퍼집니다. 질병의 시작 부분에서 EAE 마우스는 꼬리의 약점과 처짐을 나타내며 뒷다리의 약점, 조정되지 않은 움직임 및 마비가 뒤 따른?...

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Induction and Diverse Assessment Indicators of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

본 프로토콜은 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질을 사용하는 마우스 모델에서 실험적 자가면역 뇌척수염의 유도 및 임상 스코어링 시스템을 사용하여 질환 과정을 모니터링하는 것을 설명한다. 실험적 자가면역 뇌척수염 관련 증상은 마우스 대퇴골 마이크로 컴퓨터 단층 촬영 분석 및 오픈 필드 테스트를 사용하여 분석되어 질병 과정을 종합적으로 평가합니다.

실험적 자가면역 뇌척수염의 유도 및 다양한 평가 지표

Multiple sclerosis (MS) is a typical autoimmune disease of the central nervous system (CNS) characterized by inflammatory infiltration, demyelination, and ...

현재 다발성 경화증에 대한 완전한 치료법은 없습니다. 우리의 프로토콜은 다발성 경화증 질환 치료법을 탐색하는 데 도움이 되는 실험적 자가면역 뇌척수염 모델의 효과적인 구축을 허용합니다. 우리 프로토콜의 가장 큰 장점은 여러 관점에서 실험적 자가면역 뇌척수염 치료에 대한 보다 포괄적인 평가입니다.먼저 pH 7.4에서 칼슘 및 마그네슘 이온이 없는 동결건조된 펩타이드와 멸균 예냉된 PBS를 용해시켜 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질 펩타이드 에멀젼을 제조합니다. 멸균 된 5mm 스틸 볼 하나를 깨끗한 2 밀리리터 마이크로 원심 분리기 튜브에 추가하십시오. 그런 다음 동결 건조 된 미생물 결핵 밀리리터 당 5 밀리그램과 미엘린 희소 돌기 아교 세포 당 단백질 펩타이드 에멀젼 500 마이크로 리터를 포함하는 500 마이크로 리터의 완전한 프로이트 보조제를 튜브에 첨가하십시오.이제 조직 용해기에서 튜브를 10 분 동안 진동시킵니다. 그런 다음 튜브를 얼음 위에서 10 분 동안 식히십시오. 흰색 점성 용액이 형성 될 때까지 과정을 4 번 반복하십시오.다음으로, 백일해 독소 줄기 용액을 칼슘 및 마그네슘 이온이 없는 pH 7.4의 멸균 PBS에서 50배 희석하여 100 마이크로리터당 200 나노그램의 최종 농도를 달성한다. 초기에 준비된 모든 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질 펩타이드 에멀젼을 튜브 바닥에 침전시키려면 장비의 펄스 버튼을 눌러 섭씨 4도에서 2-3초 동안 튜브를 원심분리합니다. 22 게이지 바늘이 장착 된 1 밀리리터 주사기로 미엘린 희소 돌기 아교 세포 당 단백질 펩타이드 에멀젼을 흡인하고 에멀젼을 새로운 1 밀리리터 주사기 배럴로 옮깁니다.26 게이지 바늘을 배럴에 부착하고 밀봉 필름으로 연결을 고정합니다. 100 마이크로 리터의 미엘린 희소 돌기 아교 세포 당 단백질 펩타이드 에멀젼을 마우스의 등쪽 척추의 양쪽에 피하 주사합니다. 주사 후 피부와 등쪽 아래에 구근 덩어리가 자동으로 형성되는 것을 관찰하십시오.그런 다음 복강 내로 100 마이크로 리터의 백일해 독소를 동일한 마우스에 주사하십시오. 오픈 필드 반응 챔버를 준비하고 마우스 이동을 기록하기위한 비디오 분석 시스템을 설정합니다. 실험 전에 반응 챔버를 청소하려면 전체 영역에 70 % 에탄올을 뿌리고 깨끗한 종이 타월로 닦으십시오.다음으로 반응 챔버의 구석에 마우스를 놓습니다. 촬영을 시작하려면 비디오 녹화 시스템의 메뉴 표시 줄에서 캡처 시작 버튼을 클릭하고 시간을 기록하십시오. 테스트 룸에서 침묵을 유지하면서 마우스를 5 분 동안 자유롭게 움직입니다.그런 다음 녹화를 중지하고 비디오를 저장하십시오. 마우스를 케이지에 다시 넣으십시오. 그런 다음 70 % 에탄올로 테스트 영역을 청소하고 다음 마우스로 진행하십시오.안락사 된 마우스를 해부 트레이에 평평하게 유지하고 사지를 고정하십시오. 집게로 마우스의 뒷다리 피부를 잡고 가위로 피부와 근육을여십시오. 다음으로, 가위를 조심스럽게 사용하여 경골과 엉덩이 뼈에서 대퇴골을 분리하십시오.가위로 대퇴골에 부착 된 근육을 제거하십시오. 그런 다음 대퇴골을 실온에서 70 % 에탄올에 놓습니다. 본 연구에서, EAE를 유도하는 미엘린 희소돌기아교세포 유래 펩티드의 능력을 평가하였다.펩티드를 주입한 마우스는 점진적인 체중 감소를 경험하였다. 주사 6-9 일 후, 그들은 14-16 일 후에 최고조에 달하는 EAE 증상을 나타 냈습니다. 오픈 필드 테스트의 트랙 플롯은 EAE가 마우스의 정상적인 탐색 행동을 변경한다는 것을 보여주었습니다.정상 마우스와 비교하여 EAE를 가진 마우스는 초기 발병, 피크 및 관해 단계에서 훨씬 적은 거리를 이동했습니다. EAE를 가진 마우스는 또한 질병의 피크 및 관해 단계에서 활동 지속 시간이 현저히 감소했습니다. 더욱이, 3 단계 모두에서 EAE 마우스는 이동 거리와 중심에서 보낸 시간이 현저히 적었다.EAE 마우스의 대퇴골에 대한 마이크로 컴퓨터 단층 촬영 스캔은 정상 마우스와 다른 섬유주 구조를 나타 냈습니다. EAE 마우스의 대퇴골은 정상 마우스의 골밀도와 뼈 부피 대 조직 부피 비율이 현저히 낮았습니다. 더욱이, EAE를 가진 마우스의 대퇴골은 정상 마우스의 것보다 섬유주 연결 밀도, 섬유주 수 및 섬유주 두께가 적었다.정상 마우스와 비교하여, 섬유주 간격이 향상되었고, EAE 마우스에서 피질골 두께가 감소되었다. 우리는 또한 질병의 절정에서 EAE 마우스의 뇌와 척수 코드를 분리하고 독감 세포 측정법에 의해 면역 세포 및 사이토 카인의 생성을 분석 할 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Biology

Induction and Clinical Scoring of Chronic-Relapsing Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

유도 및 만성 - 원래대로 돌아가는 실험 면역 Encephalomyelitis 임상 채점

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS) that commonly affects young adults. It is characterized by ...

연구

생물학

Loading Drosophila Nerve Terminals with Calcium Indicators

칼슘 지표로 로딩 Drosophila 신경 터미널

Calcium plays many roles in the nervous system but none more impressive than as the trigger for neurotransmitter release, and none more profound than as ...

Experimental Approaches to Tissue Engineering

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