Name: induction and diverse assessment indicators of experimental autoimmune encephalomyelitis
Uploaded: 2022-09-09T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Induction and Diverse Assessment Indicators of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis at JoVE.com

Yazarlar, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı'nın (32070768, 31871404, 31900658, 32270754) ve Devlet Anahtar İlaç Araştırmaları Laboratuvarı'nın desteğini kabul etmektedir.

Tongji Üniversitesi Hayvan Bakım Komitesi mevcut çalışmayı onayladı ve tüm hayvan bakım kurallarına uyuldu. Deneyler için 8-12 haftalık erkek veya dişi C57BL/6J fareler kullanıldı. Deney gruplarında yaş ve cinsiyetin aynı olması sağlanmış; aksi takdirde, hastalığa duyarlılık etkilendi. Fareler, sabit koşullar altında (oda sıcaklığı 23 ± 1 ° C, nem% 50 ±% 10) alternatif 12 saat açık ve karanlık döngülere sahip patojensiz belirli bir ortamda barındırıldı.
<p class="jove_title...

MS, MSS'nin demiyelinizan inflamatuar bir hastalığıdır ve gençlerde kronik sakatlığa neden olan en yaygın nörolojik bozukluklardan biridir ve ailelere ve topluma büyük bir yük getirmektedir 3,4. MS her zaman organa özgü bir T hücresi aracılı otoimmün hastalık olarak sınıflandırılmıştır ve otoimmün sistemi CNS'yi yavaşça aşındırmaya teşvik eder, bu da vücutta birden fazla sistemi içerecektir27. Tipik klini...

Otoimmün hastalıklar, bağışıklık sisteminin kendi antijenlerine karşı bağışıklık tepkisinin neden olduğu, doku hasarı veya işlev bozukluğu ile sonuçlanan bir bozukluk spektrumudur1. Multipl skleroz (MS), santral sinir sisteminde (SSS) polinöropatinin kronik otoimmün bir hastalığı olup, inflamatuar infiltrasyon, demiyelinizasyon ve nöronal aksonal dejenerasyon ilekarakterizedir 2,3. Şu anda, MS dünya çapında 2,5 milyon kadar insanı, çoğunlukla ailelerinin ve toplumun bel kemiği olan 20-40 yaş arası genç ve orta yaşlı insanları etkilemiştir. Bu durum aileler ve toplum üzerinde önemli etki ve zararlara yol açmıştır 2,4.
MS, çeşitli ve kompleks klinik bulguları olan multifaktöriyel bir hastalıktır. İnflamatuar infiltrasyon ve demiyelinizasyon ile karakterize klasik nörolojik bozukluklara ek olarak, MS sıklıkla görme bozukluğu, ekstremite diskinezisi ve bilişsel ve duygusal bozukluklar gösterir 5,6,7. MS hastaları doğru ve doğru tedaviyi alamazlarsa, yarısı 20 yıl sonra tekerlekli sandalyede yaşayacak ve neredeyse yarısı depresif ve anksiyete belirtileri yaşayacak ve bu da genel popülasyondan çok daha yüksek intihar düşüncesine yol açacaktır 8,9.
Uzun bir araştırma süresine rağmen, MS'in etiyolojisi belirsizliğini korumaktadır ve MS'in patogenezi henüz aydınlatılamamıştır. MS'in hayvan modelleri, kemirgen ve insan bağışıklık sistemleri arasındaki önemli farklılıklara rağmen, aynı zamanda bazı temel ilkeleri paylaşırken, hastalık gelişimini ve yeni terapötik yaklaşımları keşfetmek için test araçları olarak hizmet etmeye izin vermiştir. Deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) şu anda, duyarlı farelerde CNS bileşenlerine otoimmüniteyi indüklemek için miyelin proteinlerinden otoantijen bağışıklığı kullanan MS'i incelemek için ideal bir hayvan modelidir ve humoral immün yanıtı arttırmak için tam Freund adjuvanı (CFA) ve boğmaca toksini (PTX) ilavesi ile birlikte. Genetik arka plana ve immün antijenlere bağlı olarak, MS10,11,12'nin çeşitli klinik formlarını taklit etmek için akut, relapsing-remitting veya kronik dahil olmak üzere farklı hastalık süreçleri elde edilir. EAE modellerinin yapımında yaygın olarak kullanılan ilgili immünojenler, miyelin bazik proteini (MBP), proteolipid proteini (PLP) veya miyelin oligodendrosit glikoproteini (MOG) gibi kendinden CNS proteinlerinden gelir. MBP veya PLP ile aşılanmış SJL / L fareleri relapsing-remitting bir seyir geliştirir ve MOG, C57BL / 6 farelerde11,12,13'te kronik ilerleyici EAE'yi tetikler.
Hastalık modifiye edici tedavinin (DMT) temel amacı, hastalık semptomlarını en aza indirmek ve fonksiyon6'yı iyileştirmektir. MS'i hafifletmek için klinik olarak çeşitli ilaçlar kullanılmaktadır, ancak henüz tamamen tedavi etmek için hiçbir ilaç kullanılmamıştır, bu da sinerjik tedavinin gerekliliğini ortaya koymaktadır. C57BL / 6 fareleri şu anda transgenik fareleri oluşturmak için en yaygın kullanılanlardır ve bu çalışmada, hastalığın ilerlemesini izlemek için C57BL / 6J farelerde MOG35-55 tarafından indüklenen 5 noktalı bir EAE modeli kullanılmıştır. EAE modelleri ayrıca anksiyete benzeri ruh halleri ve kemik kaybı ve yaygın olarak bilinen demiyelinizan lezyonlardan muzdariptir. Burada, EAE semptomlarını açık alan testi ve mikro-bilgisayarlı tomografi (Mikro-BT) analizi kullanarak çoklu perspektiflerden değerlendirme yöntemi de açıklanmaktadır.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL syringe(with 26 G needle)</td>
			<td>Shanghai Kindly Medical Instruments Co., Ltd</td>
			<td>60017031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mL microcentrifuge tube</td>
			<td>HAIKELASI</td>
			<td>KY-LXG2A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22 G needle</td>
			<td>Shanghai Kindly Medical Instruments Co., Ltd</td>
			<td>60017208</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete Freund&#8217;s Adjuvant</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F5881</td>
			<td>Stored at 4 &#176;C, 1 mg of heat-inactivated MTB (H37Ra) per mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conditioned place preference system</td>
			<td>Shanghai Jiliang Software Technology Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Animal behavior</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd</td>
			<td>10009218</td>
			<td>Stored at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Locomotion activity (open field) video analysis system</td>
			<td>Shanghai Jiliang Software Technology Co., Ltd</td>
			<td>DigBehv-002</td>
			<td>Animal behavior</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MOG35-55 peptide</td>
			<td>Gill Biochemical Co., Ltd</td>
			<td>GLS-Y-M-03590</td>
			<td>Stored at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mycobacterium tuberculosis H37Ra</td>
			<td>BD</td>
			<td>231141</td>
			<td>Stored at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Open field reaction chamber</td>
			<td>Shanghai Jiliang Software Technology Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Animal behavior</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pertussis toxin</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>516560</td>
			<td>Stored at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Made in our laboratory</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissor</td>
			<td>Shanghai Medical Instrument (group) Co., Ltd</td>
			<td>J21010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sealing film</td>
			<td>Heathrow Scientific</td>
			<td>HS 234526B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorvall Legend Micro 21R Microcentrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>75002447</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steel ball</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>69975</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TissueLyser II</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>85300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezer</td>
			<td>Shanghai Medical Instrument (group) Co., Ltd</td>
			<td>JD1060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#956;CT 35 desktop microCT scanner</td>
			<td>Scanco Medical AG, Bassersdorf, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction and diverse assessment indicators of experimental autoimmune encephalomyelitis

Multipl skleroz (MS), inflamatuar infiltrasyon, demiyelinizasyon ve aksonal hasar ile karakterize tipik bir santral sinir sistemi (SSS) otoimmün hastalığıdır. Şu anda, MS'i tamamen tedavi etmek için herhangi bir önlem yoktur, ancak hastalığın ilerlemesini kontrol etmek ve hafifletmek için çoklu hastalık modifiye edici tedaviler (DMT) mevcuttur. Deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) ile MS hastalarının SSS patolojik özellikleri arasında anlamlı benzerlikler vardır. EAE, MS ilaçlarının etkinliğini belirlemek ve MS hastalığı için yeni tedavilerin geliştirilmesini araştırmak için temsili bir model olarak yaygın olarak kullanılmaktadır. Farelerde EAE'nin aktif indüksiyonu stabil ve tekrarlanabilir bir etkiye sahiptir ve özellikle ilaçların veya genlerin otoimmün nöroinflamasyon üzerindeki etkilerini incelemek için uygundur. C57BL/6J farelerin miyelin oligodendrosit glikoprotein (MOG35-55) ile bağışıklanması yöntemi ve klinik skorlama sistemi kullanılarak hastalık semptomlarının günlük değerlendirilmesi esas olarak paylaşılmaktadır. MS'in çeşitli klinik bulgularla karmaşık etiyolojisi göz önüne alındığında, mevcut klinik skorlama sistemi hastalık tedavisinin değerlendirilmesini karşılayamamaktadır. Tek bir müdahalenin eksikliklerini önlemek için, MS hastalarında anksiyete benzeri ruh hallerinin ve osteoporozun klinik belirtilerine dayanarak EAE'yi değerlendirmek için yeni göstergeler, MS tedavisinin daha kapsamlı bir değerlendirmesini sağlamak için oluşturulmuştur.

Farelerin bağışıklanmasından sonra, farelerin vücut ağırlığı günlük olarak kaydedilir ve klinik semptomları yukarıda açıklanan protokole göre değerlendirilir (adım 4). MOG peptidi ile aşılanmış C57BL / 6J farelerde, lezyonun yeri esas olarak omurilikle sınırlı olduğundan, EAE farelerinin patogenezi kuyruk ucundan başa doğru yayılır. Hastalığın başlangıcında, EAE fareleri kuyruğun zayıflığı ve sarkması, ardından arka bacakların zayıflığı, koordinasyonsuz hareket ve felç s...

Watch this Scientific Journal Video about Induction and Diverse Assessment Indicators of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis at JoVE.com

Induction and Diverse Assessment Indicators of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Bu protokol, miyelin oligodendrosit glikoprotein kullanılarak bir fare modelinde deneysel otoimmün ensefalomiyelitin indüklenmesini ve klinik bir skorlama sistemi kullanılarak hastalık sürecinin izlenmesini açıklamaktadır. Deneysel otoimmün ensefalomiyelit ile ilişkili semptomlar, hastalık sürecini kapsamlı bir şekilde değerlendirmek için fare femur mikro-bilgisayarlı tomografi analizi ve açık alan testi kullanılarak analiz edilir.

Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelitin İndüksiyonu ve Çeşitli Değerlendirme Göstergeleri

Multiple sclerosis (MS) is a typical autoimmune disease of the central nervous system (CNS) characterized by inflammatory infiltration, demyelination, and ...

Şu anda multipl skleroz için tam bir tedavi yoktur. Protokolümüz, multipl skleroz hastalığı tedavilerinin araştırılmasına yardımcı olmak için deneysel otoimmün ensefalomiyelit modelinin etkili bir şekilde oluşturulmasına izin verir. Protokolümüzün temel avantajı, deneysel otoimmün ensefalomiyelit tedavisinin çoklu perspektiflerden daha kapsamlı bir değerlendirmesidir.İlk önce liyofilize peptidi ve steril önceden soğutulmuş PBS'yi kalsiyum ve magnezyum iyonları olmadan pH 7.4'te çözerek miyelin oligodendrosit glikoprotein peptid emülsiyonunu hazırlayın. Temiz iki mililitrelik mikro santrifüj tüpüne sterilize edilmiş beş milimetrelik bir çelik bilye ekleyin. Daha sonra, mililitre liyofilize mikrobakteri tüberkülozu başına beş miligram ve tüpe 500 mikrolitre miyelin oligodendrosit glikoprotein peptid emülsiyonu içeren 500 mikrolitre tam Freuds adjuvanını ekleyin.Şimdi tüpü 10 dakika boyunca bir doku lizörü üzerinde salın. Daha sonra tüpleri buz üzerinde 10 dakika soğutun. Beyaz viskoz bir çözelti oluşana kadar işlemi dört kez tekrarlayın.Daha sonra, boğmaca toksin sapı çözeltisini, 100 mikrolitre başına 200 nanogramlık bir nihai konsantrasyon elde etmek için kalsiyum ve magnezyum iyonları olmadan pH 7.4'ün steril PBS'sinde 50 kez seyreltin. Başlangıçta hazırlanan tüm miyelin oligodendrosit glikoprotein peptid emülsiyonunu tüpün dibinde çökeltmek için, ekipman üzerindeki nabız düğmesine basarak tüpü iki ila üç saniye boyunca dört santigrat derecede santrifüj edin. Miyelin oligodendrosit glikoprotein peptid emülsiyonunu, 22 gauge iğne ile donatılmış bir mililitrelik bir şırınga ile aspire edin ve emülsiyonu yeni bir 1 mililitrelik şırınga variline aktarın.Namluya 26 gauge'lik bir iğne takın ve bağlantıyı bir sızdırmazlık filmi ile sabitleyin. Bir farenin dorsal omurgasının her iki tarafına deri altından 100 mikrolitre miyelin oligodendrosit glikoprotein peptid emülsiyonu enjekte edin. Enjeksiyondan sonra, cilt ve dorsum altındaki soğanlı kütlelerin otomatik oluşumunu gözlemleyin.Daha sonra intraperitoneal olarak, aynı fareye 100 mikrolitre boğmaca toksini enjekte edin. Bir açık alan reaksiyon odası hazırlayın ve fare hareketini kaydetmek için bir video analiz sistemi kurun. Deneyden önce reaksiyon odasını temizlemek için, tüm alana% 70 etanol püskürtün ve temiz bir kağıt havluyla silin.Daha sonra bir reaksiyon odasının köşesine bir fare yerleştirin. Çekime başlamak için, video kayıt sisteminin menü çubuğundaki yakalamayı başlat düğmesine tıklayın ve zamanı kaydedin. Test odasında sessizliği koruyarak, farenin beş dakika boyunca serbestçe hareket etmesine izin verin.Ardından kaydı durdurun ve videoyu kaydedin. Fareyi tekrar kafesine koyun. Ardından test alanını% 70 etanol ile temizleyin ve bir sonraki fareye geçin.Ötani faresini diseksiyon tepsisinde düz tutun ve ekstremiteleri sabitleyin. Arka ekstremite cildini forseps ile farede tutun ve cildi ve kasları makasla açın. Daha sonra, makası dikkatlice kullanarak femuru tibia ve kalça kemiğinden ayırın.Femura yapışan kasları makasla çıkarın. Daha sonra femuru oda sıcaklığında% 70 etanol içine yerleştirin. Bu çalışmada, miyelin oligodendrosit glikoprotein kaynaklı peptidin EAE'yi indükleme yeteneği değerlendirilmiştir.Peptit enjekte edilen fareler ilerleyici kilo kaybı yaşadı. Altı ila dokuz günlük enjeksiyondan sonra, 14 ila 16 gün sonra zirveye ulaşan EAE semptomları geliştirdiler. Açık alan testinden elde edilen iz grafikleri, EAE'nin farelerin normal keşif davranışını değiştirdiğini göstermiştir.Normal farelerle karşılaştırıldığında, EAE'li fareler erken başlangıç, zirve ve remisyon aşamalarında önemli ölçüde daha az mesafe kat ettiler. EAE'li fareler ayrıca hastalığın tepe ve remisyon aşamalarında aktivite süresini önemli ölçüde azaltmıştır. Dahası, her üç aşamada da EAE fareleri, merkezde harcanan seyahat mesafesi ve zaman açısından önemli ölçüde daha azdı.EAE farelerinden elde edilen femurların mikrobilgisayarlı tomografi taramaları, normal farelerden farklı bir trabeküler mimari ortaya çıkardı. EAE farelerinden elde edilen femurlar, normal farelerden önemli ölçüde daha az kemik mineral yoğunluğuna ve kemik hacmine doku hacmine oranına sahipti. Dahası, EAE'li farelerden elde edilen femurlar, normal farelerden daha az trabeküler bağlantı yoğunluğuna, trabeküler sayıya ve trabeküler kalınlığa sahipti.Normal farelerle karşılaştırıldığında, EAE farelerde trabeküler aralık arttırıldı ve kortikal kemik kalınlığı azaltıldı. Ayrıca EAE farelerinin beynini ve omurga kodunu hastalığın zirvesinde izole edebilir ve grip sitometrisi ile bağışıklık hücrelerinin ve sitokinlerin üretimini analiz edebiliriz.

Research

JoVE Journal

Biology

Induction and Clinical Scoring of Chronic-Relapsing Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

İndüksiyon ve Kronik Relaps Deneysel Otoimmün Encephalomyelitis Klinik Puanlama

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS) that commonly affects young adults. It is characterized by ...

Loading Drosophila Nerve Terminals with Calcium Indicators

Kalsiyum Göstergeleri ile yükleme Drosophila Sinir Terminalleri

Calcium plays many roles in the nervous system but none more impressive than as the trigger for neurotransmitter release, and none more profound than as ...

Experimental Approaches to Tissue Engineering

Doku Mühendisliği Deneysel Yaklaşımlar

Induction and Monitoring of Adoptive Delayed-Type Hypersensitivity in Rats

Sıçanlarda Kabul edilmiş Gecikmeli-Tipi aşırı duyarlılık indüksiyonu ve İzleme

Delayed type hypersensitivity (DTH) is an inflammatory reaction mediated by CCR7- effector memory T lymphocytes that infiltrate the site of injection of ...

Assay for Neural Induction in the Chick Embryo

Civciv Embriyo Sinir İndüksiyon için Testi

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Induction and Testing of Hypoxia in Cell Culture

Hücre Kültürü ve Hipoksi Test İndüksiyon

Hypoxia is defined as the reduction or lack of oxygen in organs, tissues, or cells.  This decrease of oxygen tension can be due to a reduced supply in ...

Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

Radyoaktif In situ</emDoku Çeşitli Gen Patterns Saptayan> Hibridizasyon

Knowing the timing, level, cellular localization, and cell type that a gene is expressed in contributes to our understanding of the function of the gene. ...

A Novel Bayesian Change-point Algorithm for Genome-wide Analysis of Diverse ChIPseq Data Types

Çeşitli ChIPseq Veri Türleri Genom çapında Analizi İçin Yeni Bir Bayesian değiştir nokta Algoritması

ChIPseq is a widely used technique for investigating protein-DNA interactions. Read density profiles are generated by using next-sequencing of ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Mezenkimal Geçiş indüksiyon ve Epitel Analizi

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

Dalga boyundaki ve Oksidatif Stres Kırmızı / yakın-kızılötesi ışık Terapisi şiddetler bir Range Etkilerinin Değerlendirilmesi için Yöntemi<em&gt; İn Vitro</em

Red/near-infrared light therapy (R/NIR-LT), delivered by laser or light emitting diode (LED), improves functional and morphological outcomes in a range of ...