Name: establishment and evaluation of a porcine vein graft disease model
Uploaded: 2022-07-25T14:00:00
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Gli autori ringraziano il Guangdong Laboratory Animals Monitoring Institute per il supporto tecnico, la cura degli animali e la raccolta di campioni. Si ringrazia inoltre Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd, per il supporto tecnico nell'esame ecografico. Questo lavoro è stato supportato dal Guangdong Science and Technology Program, Cina, e dal Jinan University Central Universities Basic Scientific Research Business Expense Project (2017A020215076, 2008A08003 e 21621409).

Le procedure per la cura e l'uso degli animali da laboratorio sono state approvate dal Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali da laboratorio dell'Istituto di monitoraggio degli animali da laboratorio del Guangdong. Tutti gli esperimenti sono stati condotti in conformità con la Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio (8th Ed., 2011, National Research Council, USA). La procedura chirurgica è mostrata nella Figura 1.
1. Prepar...

<ol>
	<li>Lloyd-Jones, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Executive+summary:+Heart+disease+and+stroke+statistics--2010+update:+A+report+from+the+American+Heart+Association.">Executive summary: Heart disease and stroke statistics--2010 update: A report from the American Heart Association.</a> Circulation. 121 (7), 948-954 (2010).</li><li>Taggart, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contemporary+coronary+artery+bypass+grafting.">Contemporary coronary artery bypass grafting.</a> Frontiers of Medicine. 8, 395-398 (2014).</li><li>Wolny, R., Mintz, G. 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E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+injury+to+the+media+after+saphenous+vein+grafting.">Early injury to the media after saphenous vein grafting.</a> The Annals of Thoracic Surgery. 65 (5), 1273-1278 (1998).</li><li>Zou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+venous+bypass+graft+arteriosclerosis.">Mouse model of venous bypass graft arteriosclerosis.</a> The American Journal of Pathology. 153 (4), 1301-1310 (1998).</li><li>Klyachkin, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postoperative+reduction+of+high+serum+cholesterol+concentrations+and+experimental+vein+bypass+grafts.+Effect+on+the+development+of+intimal+hyperplasia+and+abnormal+vasomotor+function.">Postoperative reduction of high serum cholesterol concentrations and experimental vein bypass grafts. Effect on the development of intimal hyperplasia and abnormal vasomotor function.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 108 (3), 556-566 (1994).</li><li>Tan, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+porcine+model+of+heart+failure+with+preserved+ejection+fraction+induced+by+chronic+pressure+overload+characterized+by+cardiac+fibrosis+and+remodeling.">A porcine model of heart failure with preserved ejection fraction induced by chronic pressure overload characterized by cardiac fibrosis and remodeling.</a> Frontiers in Cardiovascular Medicine. 8, 677727 (2021).</li><li>Hocum Stone, ., L, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnetic+resonance+imaging+assessment+of+cardiac+function+in+a+swine+model+of+hibernating+myocardium+3+months+following+bypass+surgery.">Magnetic resonance imaging assessment of cardiac function in a swine model of hibernating myocardium 3 months following bypass surgery.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 153 (3), 582-590 (2017).</li><li>Gedik, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomics/phosphoproteomics+of+left+ventricular+biopsies+from+patients+with+surgical+coronary+revascularization+and+pigs+with+coronary+occlusion/reperfusion:+Remote+ischemic+preconditioning.">Proteomics/phosphoproteomics of left ventricular biopsies from patients with surgical coronary revascularization and pigs with coronary occlusion/reperfusion: Remote ischemic preconditioning.</a> Scientific Reports. 7 (1), 7629 (2017).</li><li>Tsirikos Karapanos, ., N, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+competitive+flow+on+distal+coronary+flow+and+on+graft+flow+during+coronary+artery+bypass+surgery.">The impact of competitive flow on distal coronary flow and on graft flow during coronary artery bypass surgery.</a> Interactive Cardiovascular and Thoracic Surgery. 12 (6), 993-997 (2011).</li><li>Meng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Competitive+flow+arising+from+varying+degrees+of+coronary+artery+stenosis+affects+the+blood+flow+and+the+production+of+nitric+oxide+and+endothelin+in+the+internal+mammary+artery+graft.">Competitive flow arising from varying degrees of coronary artery stenosis affects the blood flow and the production of nitric oxide and endothelin in the internal mammary artery graft.</a> European Journal of Cardio-thoracic Surgery: Official Journal of the. 43 (5), 1022-1027 (2013).</li><li>Thankam, F. 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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+value+of+coronary+arteriography.">Prognostic value of coronary arteriography.</a> Cardiovascular Clinics. 12 (2), 1-8 (1981).</li><li>Clark, R. 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V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+myointimal+hyperplasia+and+cytokine+production+in+experimental+vein+grafts.">Formation of myointimal hyperplasia and cytokine production in experimental vein grafts.</a> Surgery. 123 (4), 461-469 (1998).</li><li>Shannon, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Porcine+model+of+infrarenal+abdominal+aortic+aneurysm.">Porcine model of infrarenal abdominal aortic aneurysm.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. 153 (153), (2019).</li><li>Langille, B. L., O'Donnell, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reductions+in+arterial+diameter+produced+by+chronic+decreases+in+blood+flow+are+endothelium-dependent.">Reductions in arterial diameter produced by chronic decreases in blood flow are endothelium-dependent.</a> Science. 231 (4736), 405-407 (1986).</li><li>Zwolak, R. M., Adams, M. C., Clowes, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+vein+graft+hyperplasia:+Association+with+tangential+stress.">Kinetics of vein graft hyperplasia: Association with tangential stress.</a> Journal of Vascular Surgery. 5 (1), 126-136 (1987).</li><li>Kotani, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+subacute+hypoxic+model+using+a+pig.">A subacute hypoxic model using a pig.</a> Surgery Today. 35 (11), 951-954 (2005).</li><li>Liu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+ketamine-pentobarbital+anesthesia+and+fentanyl-pentobarbital+anesthesia+for+open-heart+surgery+in+minipigs.">Comparison of ketamine-pentobarbital anesthesia and fentanyl-pentobarbital anesthesia for open-heart surgery in minipigs.</a> Lab Animal. 38 (7), 234-240 (2009).</li><li>Geovanini, G. 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R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Videolaryngoscopy+vs.+fibreoptic+bronchoscopy+for+awake+tracheal+intubation:+A+systematic+review+and+meta-analysis.">Videolaryngoscopy vs. fibreoptic bronchoscopy for awake tracheal intubation: A systematic review and meta-analysis.</a> Anaesthesia. 73 (9), 1151-1161 (2018).</li><li>Parang, P., Arora, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+vein+graft+disease:+Pathogenesis+and+prevention.">Coronary vein graft disease: Pathogenesis and prevention.</a> Canadian Journal of Cardiology. 25 (2), e57-e62 (2009).</li><li>Egan, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fentanyl+pharmacokinetics+in+hemorrhagic+shock:+a+porcine+model.">Fentanyl pharmacokinetics in hemorrhagic shock: a porcine model.</a> Anesthesiology. 91 (1), 156-166 (1999).</li></ol>

In questo studio, abbiamo descritto in dettaglio il protocollo per la selezione degli animali, la preparazione degli strumenti, le procedure chirurgiche e la valutazione post-operatoria durante lo sviluppo di un modello VGD indotto da CABG. Abbiamo eseguito l'esame ecografico dell'innesto venoso prima e dopo l'intervento chirurgico CABG e l'esame istologico dell'innesto 30 giorni dopo l'intervento. Il flusso sanguigno nella vena mammaria interna era normale prima dell'intervento chirurgico CABG, mentre il flusso retrogra...

Sebbene la mortalità per malattia coronarica sia diminuita significativamente negli ultimi anni, la metà degli adulti di mezza età negli Stati Uniti sviluppa sintomi ischemici legati al cuore ogni anno e un terzo degli anziani muore di malattia coronarica1. L'innesto di bypass coronarico (CABG) è una modalità chirurgica efficace per migliorare l'ischemia miocardica e, cosa più importante, è una modalità chirurgica insostituibile per il trattamento della malattia coronarica multivasale2. Nel corso del tempo, tuttavia, gli innesti vascolari sviluppano infiammazione, iperplasia intimale e aterosclerosi progressiva, che è nota per portare a insufficienza dell'innesto venoso o malattia dell'innesto venoso (VGD)3. Nei pazienti dopo CABG, se si verifica restenosi, solo il vaso sanguigno malato può essere sostituito in alcuni casi2. I pazienti più anziani e le comorbidità aggiunte rendono il rifacimento dell'innesto di bypass coronarico piuttosto impegnativo. Ritardare o controllare i problemi patologici associati ai vasi sanguigni trapiantati è un problema urgente da risolvere. Sono necessari grandi modelli animali di CABG-VGD per lo studio dei meccanismi della malattia e lo sviluppo di strategie terapeutiche. I ricercatori hanno stabilito con successo modelli VGD animali in animali piccoli e grandi come topi4, ratti5, conigli6 e maiali7. Rispetto ai piccoli animali, gli animali di grandi dimensioni come i maiali hanno strutture anatomiche e caratteristiche fisiologiche simili all'uomo e hanno una durata di vita più lunga 8,9. Pertanto, gli animali di grandi dimensioni sono più adatti per esplorare i cambiamenti patologici a lungo termine nella malattia venosa del trapianto e per i test preclinici di farmaci o dispositivi. Noi e il nostro team di collaboratori abbiamo applicato con successo tecniche chirurgiche per stabilire un modello di insufficienza cardiaca suina e descritto i cambiamenti patologici cardiaci in questo modello10.
La chirurgia CABG è stata standardizzata nella pratica clinica, ma quando viene applicata alla creazione di modelli animali VGD, le differenze tra le specie, l'acquisizione di attrezzature e strutture per animali, le operazioni chirurgiche per animali e l'alimentazione e l'allattamento degli animali sono enormi sfide per i ricercatori. Come nella pratica clinica, gli approcci per la chirurgia CABG utilizzati per stabilire modelli animali VGD includono la sternotomia11 della linea mediana e la toracotomia laterale sinistra12. La sternotomia della linea mediana è più comunemente usata13,14. Tuttavia, questo approccio presenta rischi elevati sia per gli esseri umani che per gli animali. Nello studio riportato da Thankam et al., due dei sei maiali utilizzati per la modellazione sono morti durante l'intervento chirurgico15. L'elevata mortalità del modello aumenta i costi di studio e influisce sull'accuratezza dei risultati. Uno studio ha dimostrato in precedenza che un'incisione della parete toracica sinistra era fattibile per stabilire VGD indotta da CABG nei suini11. Qui, questo studio mira a descrivere un protocollo passo-passo per stabilire un intervento chirurgico riproducibile per un modello VGD indotto da CABG in maialini e per valutare il fenotipo di questo modello. Il protocollo sperimentale è stato progettato congiuntamente dai team di cardiochirurgia e anestesia. L'approccio chirurgico per il terzo spazio intercostale sinistro è stato determinato in base ai cadaveri di altri maialini in laboratorio prima dell'intervento chirurgico e il metodo di anestesia è stato eseguito secondo il metodo utilizzato al centro16. Sono stati condotti test biochimici del sangue, esame ecografico e esame istologico per valutare i modelli animali.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Aortic Punch</td>
			<td>Medtronic Inc. , America</td>
			<td>3.0mm, 3.5mm, 4.0mm</td>
			<td>Used for proximal coronary bridge anastomosis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic biochemical analyzer</td>
			<td>IDEXX Laboratories, Inc. America</td>
			<td>Catalyst One</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cardiac coronary artery bypass grafting instrument kit</td>
			<td>LANDANGER, France</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cardiogram monitor</td>
			<td>Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co, Ltd</td>
			<td>MEC-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coronary Shunt</td>
			<td>AXIUS&#160;</td>
			<td>OF-1500, OF-2500, OF-3000</td>
			<td>The product temporarily blocks the coronary artery during arteriotomy to reduce the amount of bleeding in the surgical field and provide blood flow to the distal end during anastomosis.&#160; The Axius shunt plug is not an implant and should be removed prior to completion of the anastomosis.&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Defibrillator</td>
			<td>MEDIANA</td>
			<td>Mediana D500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diazepam</td>
			<td>Nanguo pharmaceutical Co. LTD, Guangdong, China</td>
			<td>H37023039&#160;</td>
			<td>Narcotic inducer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable manual electric knife</td>
			<td>Covidien, America</td>
			<td>E2516H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric negative pressure suction machine</td>
			<td>Shanghai Baojia Medical Instrument Co, Ltd</td>
			<td>YX932D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Esmolol</td>
			<td>Guangzhou Wanzheng Pharmaceutical Co. LTD</td>
			<td>H20055990</td>
			<td>Emergency drugs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice machine&#160;</td>
			<td>Local suppliers, Guangzhou, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine&#160;</td>
			<td>Chengdu First Pharmaceutical Co. LTD</td>
			<td>H51021662</td>
			<td>Emergency drugs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luxtec headlight system</td>
			<td>Luxtec, America</td>
			<td>AX-1375-BIF</td>
			<td>Used for lighting fine parts during operation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical operation magnifier (glasses)</td>
			<td>Germany Lista co, LTD</td>
			<td>SuperVu Galilean 3.5&#215;</td>
			<td>Used for fine site operation during operation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-function high-frequency electrotome</td>
			<td>Shanghai Hutong Electronics Co, Ltd</td>
			<td>GD350-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrogen canister</td>
			<td>Local suppliers, Guangzhou, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nonabsorbable surgical suture (polypropylene suture)</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson, America</td>
			<td>6-0, 7-0</td>
			<td>Used to suture blood vessels.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nonabsorbable suture (cotton thread)</td>
			<td>Covidien, America</td>
			<td>1-0</td>
			<td>Used for skin and muscle tissue tugging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Open heart surgery instrument kit</td>
			<td>Shanghai Medical Instrument (Group) Co., LTD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propofol injection</td>
			<td>Xi &#39;an Libang Pharmaceutical Co. LTD</td>
			<td>H19990282</td>
			<td>Anesthetic sedative</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerator</td>
			<td>Local suppliers, Guangzhou, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Respiratory anesthesia machine for animal</td>
			<td>Shenzhen Reward Life Technology Co, Ltd, China</td>
			<td>R620-S1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semi-occlusion clamp</td>
			<td>Xinhua Surgical Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>ZL1701RB</td>
			<td>Temporarily cut off the aortic flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vecuronium bromide</td>
			<td>Richter, Hungary&#160;</td>
			<td>JX20090127</td>
			<td>Muscle relaxant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veterinary ultrasound system&#160;</td>
			<td>Royal Philips, Netherlands</td>
			<td>CX50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zoletil</td>
			<td>Virbac, France</td>
			<td>Zoletil 50&#160;</td>
			<td>Animal narcotic</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment and evaluation of a porcine vein graft disease model

La malattia da trapianto venoso (VGD) è la principale causa di fallimento dell'innesto di bypass coronarico (CABG). Sono necessari grandi modelli animali di CABG-VGD per lo studio dei meccanismi della malattia e lo sviluppo di strategie terapeutiche. 
Per eseguire l'intervento chirurgico, entriamo nella camera cardiaca attraverso il terzo spazio intercostale e sezioniamo attentamente la vena mammaria interna e la immergiamo nella normale soluzione salina. L'arteria coronaria principale destra viene quindi trattata per l'ischemia. La nave bersaglio viene incisa, viene posizionato un tappo di derivazione e l'estremità distale della vena dell'innesto viene anastomizzato. L'aorta ascendente è parzialmente bloccata e l'estremità prossimale della vena dell'innesto viene anastomizzata dopo la perforazione. La vena dell'innesto viene controllata per la pervietà e l'arteria coronaria destra prossimale è legata. 
La chirurgia CABG viene eseguita in maialini per raccogliere la vena mammaria interna sinistra per il suo uso come innesto vascolare. I test biochimici del siero vengono utilizzati per valutare lo stato fisiologico degli animali dopo l'intervento chirurgico. L'esame ecografico mostra che l'estremità prossimale, media e distale del vaso di innesto non è ostruita. Nel modello chirurgico, il flusso sanguigno turbolento nell'innesto viene osservato all'esame istologico dopo l'intervento chirurgico CABG e la stenosi venosa dell'innesto associata a iperplasia intimale è osservata nell'innesto. Lo studio fornisce procedure chirurgiche dettagliate per la creazione di un modello VGD indotto da CABG ripetibile.

BMI e indici biochimici sierici Il BMI tra i gruppi sham e VGD non era significativamente diverso (sham vs. VGD, 22,05 kg/cm 2 ± 0,46 kg/cm 2 vs. 21,14 kg/cm 2 ± 0,39 kg/cm 2, p = 0,46). I risultati biochimici del siero sono elencati nella Tabella 1. Cambiamenti statisticamente significativi tra i gruppi sono stati trovati in quattro indici biochimici, tra cui aspartato aminotransferasi (AST, sham vs. VGD, 25,25 UI/L ± 1,88 UI/L ...

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Establishment and Evaluation of a Porcine Vein Graft Disease Model

In questo protocollo, il nuovo innesto di bypass venoso del maiale è stato eseguito attraverso una piccola incisione nella parete toracica sinistra senza bypass cardiopolmonare. È stato condotto uno studio di patologia postoperatoria, che ha mostrato ispessimento intimale.

Istituzione e valutazione di un modello di malattia da trapianto di vena suina

Venous graft disease (VGD) is the leading cause of coronary artery bypass graft (CABG) failure. Large animal models of CABG-VGD are needed for the ...

Questo modello fornisce un protocollo standard per stabilire modelli animali di malattia coronarica. La procedura del modello animale stabilita da questo metodo è standard e il risultato è stabile. Per iniziare, dividere i maialini maschi di tre mesi del peso di 30-35 chilogrammi nei gruppi di malattia da trapianto fittizia e venosa di cinque animali ciascuno.Dopo aver anestetizzato l'animale, stabilire l'accesso all'orecchio inserendo un catetere venoso permanente nella vena dell'orecchio marginale. Ora, trasferire il maiale sul tavolo operatorio in posizione supina. Eseguire l'intubazione tracheale con un tubo di calibro francese da 7,0 a 7,5 e collegarlo al circuito respiratorio dell'anestesia.Immobilizzare gli arti con bende ed elevare la testa con un drappo sterile. Dopo aver iniettato bromuro di vecuronio per via endovenosa per il rilassamento muscolare, monitorare la frequenza cardiaca, i livelli di ossigeno nel sangue e la temperatura corporea utilizzando un elettrocardiogramma. Dopo aver rasato e sterilizzato l'area chirurgica, posizionare un drappo chirurgico sterile attorno ad esso.Dopo aver effettuato l'incisione ed esposto la vena mammaria interna come descritto nel testo, individuare la vena mammaria interna e l'arteria mammaria interna sinistra sul lato sinistro dello sterno ed eseguire la dissezione smussata della vena mammaria interna con una pinza vascolare. Eseguire l'emostasi mediante elettrocoagulazione dei rami della vena mammaria interna sinistra con un coltello elettrico. Se l'emostasi è incompleta, usando filo di cotone, legare e segnare le due estremità della vena mentre viene raccolta.Una volta rimossa la vena, iniettare eparina, soluzione salina normale nella vena per il pre-trattamento. Quindi, inserire la vena nella normale soluzione salina, tenerla per il backup e incidere allo stesso modo la vena mammaria interna del gruppo fittizio. Quindi, aprire il pericardio, chiudere la parete toracica e utilizzare la vena mammaria interna per il controllo patologico senza innesto di bypass coronarico.Fare un'incisione di circa sette centimetri con un coltello elettrico sul pericardio per esporre il tronco coronarico destro. Sospendi il pericardio e cuci la pelle sul lato omolaterale con suture chirurgiche 1-0. Ora, separare il tronco dell'arteria coronaria destra dai tessuti circostanti.Successivamente, utilizzando un gancio metallico, bypassare la banda di blocco sotto l'estremità prossimale dell'arteria coronaria destra isolata vicino all'aorta. Quindi, trattare il miocardio con tre cicli di ischemia di due minuti e cinque minuti di riperfusione stringendo e rilassando la fascia bloccante. Inoltre, monitorare l'attività elettrica del cuore con l'elettrocardiogramma durante il pre-condizionamento della riperfusione dell'ischemia.Quindi, tagliare l'epicardio che copre i vasi sanguigni dopo aver stretto la fascia per bloccare il flusso sanguigno coronarico destro. Esporre la parete dell'arteria coronaria, tagliata longitudinalmente con la punta di una lama chirurgica contro il centro della parete anteriore dei vasi sanguigni. Dopo aver tagliato il lume e allargato l'incisione e posizionato uno shunt coronarico, inserire un'estremità dello shunt con una bobina nell'arteria coronaria distale attraverso la lacrima.Ora, deviare il sangue nelle arterie coronarie nello shunt coronarico cavo per garantire un campo operativo chiaro ed eseguire una sutura continua end-to-side tra la vena mammaria interna e la parete aortica con la sutura in polipropilene 6-0. Nel mezzo dell'aorta ascendente, occludere la parete anterolaterale sinistra dell'aorta ascendente con un morsetto semi-occlusivo. Dopo aver praticato una piccola incisione con la lama chirurgica nella parete aortica in cui è stata tagliata l'avventizia, inserire l'estremità della testa dell'albero scorrevole all'estremità della testa del punzone nella cavità aortica attraverso questa incisione.Quindi, contrai l'albero di scorrimento verso l'esterno e il coltello circolare taglia un pezzo della parete arteriosa. Una volta estratto lo shunt, eseguire una sutura continua end-to-side tra la vena mammaria interna e l'arteria coronaria destra con la sutura in polipropilene 6-0. Dopo aver aperto il morsetto semi-occlusione, registrare il flusso di bypass del tronco coronarico destro prossimale al sito di anastomosi utilizzando gli ultrasuoni.Preparare l'animale per l'intervento chirurgico come dimostrato in precedenza. E con un coltello elettrico, fai un'incisione sternale mediana di 10 centimetri per dividere lo sterno e raccogliere la vena 30 giorni dopo l'intervento. Durante la separazione, evitare i principali vasi sanguigni, il cuore e separare i vasi sanguigni innestati strato per strato.Tagliare rapidamente i grandi vasi sanguigni che si collegano al cuore e posizionare il cuore e l'aorta ascendente su trucioli di ghiaccio. Una volta rimosso il ponte vascolare dell'innesto, l'aorta collegata e l'arteria coronaria destra, sciacquare tutti i campioni con soluzione salina normale a quattro gradi Celsius. Dopo aver preso l'intero recipiente di innesto di circa tre o quattro centimetri e averlo diviso in quattro o cinque parti uguali, trasferirlo a CryoTubes per congelare rapidamente l'azoto liquido.Per l'analisi, fissare l'innesto ghiacciato e risciacquato con soluzione salina in soluzione di paraformaldeide al 4%. Dopo 12 ore di fissazione del tessuto, macchiare le sezioni in 50 millilitri di una soluzione acquosa di ematossilina per tre minuti. Quindi, separare le sezioni lavando con 50 millilitri di acido cloridrico-etanolo allo 0,5% e acqua ammoniacale allo 0,2% per 10 secondi ciascuna.Una volta che le sezioni sono state risciacquate per un'ora con acqua corrente, pulirle immergendole in acqua distillata per tre minuti. Dopo aver disidratato le sezioni in etanolo al 70% e al 90% per 10 minuti, metterle in 50 millilitri di soluzione colorante di eosina alcolica allo 0,5% per due o tre minuti. Una volta che le sezioni colorate sono disidratate in etanolo puro, immergere i campioni in xilene puro per 10 minuti per renderli trasparenti.Infine, gocciolare le sezioni trasparenti con colla neutra prima di coprirle con un vetrino di copertura. Osservare sezioni patologiche al microscopio ottico con un ingrandimento di 40 volte. L'esame ecografico ha mostrato che la direzione complessiva del flusso sanguigno era normale nell'estremità prossimale, nella cavità vascolare e nell'estremità distale del vaso dell'innesto.Tuttavia, le estremità prossimali e distali del vaso dell'innesto hanno mostrato un flusso retrogrado di sangue. L'analisi istologica della vena mammaria interna ha rivelato che nel gruppo sham la tunica intima, la tunica media e la parete venosa dell'innesto venoso apparivano normali. Tuttavia, 30 giorni dopo il trapianto di arteria coronaria, l'intima della nave è stata ispessita e il lume è stato ristretto.Tra i gruppi di malattia da trapianto sham e venoso, quattro indici biochimici, aspartato aminotransferasi, bilirubina sierica, bilirubina totale e creatinina, hanno mostrato cambiamenti statisticamente significativi. Il chirurgo deve esporre completamente la vena mammaria interna e assicurarsi che non sia attaccata al tessuto circostante. La tecnica fornisce un processo di modellazione standardizzato per lo studio delle malattie del trapianto venoso in modelli animali.

Research

JoVE Journal

Medicine

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