Name: establishment and evaluation of a porcine vein graft disease model
Uploaded: 2022-07-25T14:00:00
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Os autores agradecem ao Instituto de Monitoramento de Animais de Laboratório de Guangdong pelo apoio técnico, cuidados com animais e coleta de amostras. Eles também agradecem Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd, para o apoio técnico no exame ultra-sônico. Este trabalho foi apoiado pelo Programa de Ciência e Tecnologia de Guangdong, China, e pelo Projeto de Despesas Empresariais de Pesquisa Científica Básica das Universidades Científicas da Universidade de Jinan (2017A020215076, 2008A08003 e 21621409).

Os procedimentos para o cuidado e uso de animais de laboratório foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais do Instituto de Monitoramento de Animais de Laboratório de Guangdong. Todos os experimentos foram conduzidos de acordo com o Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (8th Ed., 2011, National Research Council, EUA). O procedimento cirúrgico é apresentado na Figura 1.
1. Preparação pré-operatória dos animais</s...

<ol>
	<li>Lloyd-Jones, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Executive+summary:+Heart+disease+and+stroke+statistics--2010+update:+A+report+from+the+American+Heart+Association.">Executive summary: Heart disease and stroke statistics--2010 update: A report from the American Heart Association.</a> Circulation. 121 (7), 948-954 (2010).</li><li>Taggart, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contemporary+coronary+artery+bypass+grafting.">Contemporary coronary artery bypass grafting.</a> Frontiers of Medicine. 8, 395-398 (2014).</li><li>Wolny, R., Mintz, G. 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E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+injury+to+the+media+after+saphenous+vein+grafting.">Early injury to the media after saphenous vein grafting.</a> The Annals of Thoracic Surgery. 65 (5), 1273-1278 (1998).</li><li>Zou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+venous+bypass+graft+arteriosclerosis.">Mouse model of venous bypass graft arteriosclerosis.</a> The American Journal of Pathology. 153 (4), 1301-1310 (1998).</li><li>Klyachkin, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postoperative+reduction+of+high+serum+cholesterol+concentrations+and+experimental+vein+bypass+grafts.+Effect+on+the+development+of+intimal+hyperplasia+and+abnormal+vasomotor+function.">Postoperative reduction of high serum cholesterol concentrations and experimental vein bypass grafts. Effect on the development of intimal hyperplasia and abnormal vasomotor function.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 108 (3), 556-566 (1994).</li><li>Tan, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+porcine+model+of+heart+failure+with+preserved+ejection+fraction+induced+by+chronic+pressure+overload+characterized+by+cardiac+fibrosis+and+remodeling.">A porcine model of heart failure with preserved ejection fraction induced by chronic pressure overload characterized by cardiac fibrosis and remodeling.</a> Frontiers in Cardiovascular Medicine. 8, 677727 (2021).</li><li>Hocum Stone, ., L, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnetic+resonance+imaging+assessment+of+cardiac+function+in+a+swine+model+of+hibernating+myocardium+3+months+following+bypass+surgery.">Magnetic resonance imaging assessment of cardiac function in a swine model of hibernating myocardium 3 months following bypass surgery.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 153 (3), 582-590 (2017).</li><li>Gedik, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomics/phosphoproteomics+of+left+ventricular+biopsies+from+patients+with+surgical+coronary+revascularization+and+pigs+with+coronary+occlusion/reperfusion:+Remote+ischemic+preconditioning.">Proteomics/phosphoproteomics of left ventricular biopsies from patients with surgical coronary revascularization and pigs with coronary occlusion/reperfusion: Remote ischemic preconditioning.</a> Scientific Reports. 7 (1), 7629 (2017).</li><li>Tsirikos Karapanos, ., N, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+competitive+flow+on+distal+coronary+flow+and+on+graft+flow+during+coronary+artery+bypass+surgery.">The impact of competitive flow on distal coronary flow and on graft flow during coronary artery bypass surgery.</a> Interactive Cardiovascular and Thoracic Surgery. 12 (6), 993-997 (2011).</li><li>Meng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Competitive+flow+arising+from+varying+degrees+of+coronary+artery+stenosis+affects+the+blood+flow+and+the+production+of+nitric+oxide+and+endothelin+in+the+internal+mammary+artery+graft.">Competitive flow arising from varying degrees of coronary artery stenosis affects the blood flow and the production of nitric oxide and endothelin in the internal mammary artery graft.</a> European Journal of Cardio-thoracic Surgery: Official Journal of the. 43 (5), 1022-1027 (2013).</li><li>Thankam, F. 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V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+myointimal+hyperplasia+and+cytokine+production+in+experimental+vein+grafts.">Formation of myointimal hyperplasia and cytokine production in experimental vein grafts.</a> Surgery. 123 (4), 461-469 (1998).</li><li>Shannon, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Porcine+model+of+infrarenal+abdominal+aortic+aneurysm.">Porcine model of infrarenal abdominal aortic aneurysm.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. 153 (153), (2019).</li><li>Langille, B. L., O'Donnell, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reductions+in+arterial+diameter+produced+by+chronic+decreases+in+blood+flow+are+endothelium-dependent.">Reductions in arterial diameter produced by chronic decreases in blood flow are endothelium-dependent.</a> Science. 231 (4736), 405-407 (1986).</li><li>Zwolak, R. M., Adams, M. C., Clowes, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+vein+graft+hyperplasia:+Association+with+tangential+stress.">Kinetics of vein graft hyperplasia: Association with tangential stress.</a> Journal of Vascular Surgery. 5 (1), 126-136 (1987).</li><li>Kotani, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+subacute+hypoxic+model+using+a+pig.">A subacute hypoxic model using a pig.</a> Surgery Today. 35 (11), 951-954 (2005).</li><li>Liu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+ketamine-pentobarbital+anesthesia+and+fentanyl-pentobarbital+anesthesia+for+open-heart+surgery+in+minipigs.">Comparison of ketamine-pentobarbital anesthesia and fentanyl-pentobarbital anesthesia for open-heart surgery in minipigs.</a> Lab Animal. 38 (7), 234-240 (2009).</li><li>Geovanini, G. R., Pinna, F. R., Prado, F. A., Tamaki, W. T., Marques, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardization+of+anesthesia+in+swine+for+experimental+cardiovascular+surgeries.">Standardization of anesthesia in swine for experimental cardiovascular surgeries.</a> Revista Brasileira de Anestesiologia. 58 (4), 363-370 (2008).</li><li>Alhomary, M., Ramadan, E., Curran, E., Walsh, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Videolaryngoscopy+vs.+fibreoptic+bronchoscopy+for+awake+tracheal+intubation:+A+systematic+review+and+meta-analysis.">Videolaryngoscopy vs. fibreoptic bronchoscopy for awake tracheal intubation: A systematic review and meta-analysis.</a> Anaesthesia. 73 (9), 1151-1161 (2018).</li><li>Parang, P., Arora, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+vein+graft+disease:+Pathogenesis+and+prevention.">Coronary vein graft disease: Pathogenesis and prevention.</a> Canadian Journal of Cardiology. 25 (2), e57-e62 (2009).</li><li>Egan, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fentanyl+pharmacokinetics+in+hemorrhagic+shock:+a+porcine+model.">Fentanyl pharmacokinetics in hemorrhagic shock: a porcine model.</a> Anesthesiology. 91 (1), 156-166 (1999).</li></ol>

Neste estudo, descrevemos detalhadamente o protocolo de seleção de animais, preparo de instrumentos, procedimentos cirúrgicos e avaliação pós-operatória ao desenvolver um modelo de DVG induzida por CRM. Realizamos exame ultrassônico do enxerto venoso antes e após a cirurgia de revascularização miocárdica e exame histológico do enxerto 30 dias após a cirurgia. O fluxo sanguíneo na veia mamária interna foi normal antes da cirurgia de revascularização miocárdica, enquanto o fluxo retrógrado foi observado...

Embora a mortalidade por doença coronariana tenha diminuído significativamente nos últimos anos, metade dos adultos de meia-idade nos Estados Unidos desenvolve sintomas isquêmicos relacionados ao coração a cada ano, e um terço dos idosos morre de doença coronariana1. A revascularização miocárdica (CRM) é uma modalidade cirúrgica eficaz para melhorar a isquemia miocárdica e, mais importante, é uma modalidade cirúrgica insubstituível para o tratamento da doença arterial coronariana multiarterial2. Com o tempo, no entanto, os enxertos vasculares desenvolvem inflamação, hiperplasia intimal e aterosclerose progressiva, que é conhecida por levar à falência do enxerto venoso ou doença do enxerto venoso (VGD)3. Em pacientes após revascularização miocárdica, se ocorrer reestenose, apenas o vaso sanguíneo doente pode ser substituído em alguns casos2. Pacientes mais velhos e comorbidades adicionais tornam o refazer a revascularização do miocárdio bastante desafiador. Atrasar ou controlar os problemas patológicos associados aos vasos sanguíneos enxertados é um problema urgente a ser resolvido. Grandes modelos animais de CRM-VGD são necessários para a investigação dos mecanismos da doença e o desenvolvimento de estratégias terapêuticas. Pesquisadores estabeleceram com sucesso modelos animais de VGD em animais pequenos e grandes, como camundongos4, ratos5, coelhos6 e porcos7. Em comparação com os pequenos animais, os animais de grande porte, como os suínos, apresentam estruturas anatômicas e características fisiológicas semelhantes aos humanos e maior expectativa de vida 8,9. Assim, animais de grande porte são mais adequados para explorar alterações patológicas de longo prazo na doença do enxerto venoso e para testes pré-clínicos de medicamentos ou dispositivos. Nós e nossa equipe colaboradora aplicamos com sucesso técnicas cirúrgicas para estabelecer um modelo de insuficiência cardíaca suína e descrevemos as alterações patológicas cardíacas nesse modelo10.
A cirurgia de revascularização miocárdica tem sido padronizada na prática clínica, mas quando aplicada ao estabelecimento de modelos animais VGD, as diferenças entre espécies, a aquisição de equipamentos e instalações animais, operações cirúrgicas em animais e alimentação e enfermagem animal são enormes desafios para os pesquisadores. Assim como na prática clínica, as abordagens para a cirurgia de revascularização miocárdica utilizadas para estabelecer modelos animais de DVG incluem esternotomia de linha média11 e toracotomia lateral esquerda12. A esternotomia da linha média é mais comumente utilizada13,14. No entanto, essa abordagem tem altos riscos para humanos e animais. No estudo relatado por Thankam et al., dois dos seis porcos utilizados para modelagem morreram durante a cirurgia15. A alta mortalidade do modelo aumenta os custos do estudo e afeta a precisão dos resultados. Um estudo mostrou anteriormente que uma incisão na parede torácica esquerda era viável para estabelecer a DVG induzida por CRM em suínos11. Aqui, este estudo tem como objetivo descrever um protocolo passo-a-passo para estabelecer uma cirurgia reprodutível para um modelo de DVG induzida por CRM em minipigs e avaliar o fenótipo desse modelo. O protocolo experimental foi elaborado em conjunto pelas equipes de cirurgia cardíaca e anestesia. A abordagem cirúrgica para o terceiro espaço intercostal esquerdo foi determinada de acordo com os cadáveres de outros minipigs no laboratório antes da cirurgia, e o método anestésico foi realizado de acordo com o método utilizado no centro16. Exames bioquímicos sanguíneos, exames ultrassônicos e histológicos foram realizados para avaliar modelos animais.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Aortic Punch</td>
			<td>Medtronic Inc. , America</td>
			<td>3.0mm, 3.5mm, 4.0mm</td>
			<td>Used for proximal coronary bridge anastomosis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic biochemical analyzer</td>
			<td>IDEXX Laboratories, Inc. America</td>
			<td>Catalyst One</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cardiac coronary artery bypass grafting instrument kit</td>
			<td>LANDANGER, France</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cardiogram monitor</td>
			<td>Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co, Ltd</td>
			<td>MEC-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coronary Shunt</td>
			<td>AXIUS&#160;</td>
			<td>OF-1500, OF-2500, OF-3000</td>
			<td>The product temporarily blocks the coronary artery during arteriotomy to reduce the amount of bleeding in the surgical field and provide blood flow to the distal end during anastomosis.&#160; The Axius shunt plug is not an implant and should be removed prior to completion of the anastomosis.&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Defibrillator</td>
			<td>MEDIANA</td>
			<td>Mediana D500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diazepam</td>
			<td>Nanguo pharmaceutical Co. LTD, Guangdong, China</td>
			<td>H37023039&#160;</td>
			<td>Narcotic inducer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable manual electric knife</td>
			<td>Covidien, America</td>
			<td>E2516H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric negative pressure suction machine</td>
			<td>Shanghai Baojia Medical Instrument Co, Ltd</td>
			<td>YX932D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Esmolol</td>
			<td>Guangzhou Wanzheng Pharmaceutical Co. LTD</td>
			<td>H20055990</td>
			<td>Emergency drugs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice machine&#160;</td>
			<td>Local suppliers, Guangzhou, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine&#160;</td>
			<td>Chengdu First Pharmaceutical Co. LTD</td>
			<td>H51021662</td>
			<td>Emergency drugs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luxtec headlight system</td>
			<td>Luxtec, America</td>
			<td>AX-1375-BIF</td>
			<td>Used for lighting fine parts during operation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical operation magnifier (glasses)</td>
			<td>Germany Lista co, LTD</td>
			<td>SuperVu Galilean 3.5&#215;</td>
			<td>Used for fine site operation during operation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-function high-frequency electrotome</td>
			<td>Shanghai Hutong Electronics Co, Ltd</td>
			<td>GD350-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrogen canister</td>
			<td>Local suppliers, Guangzhou, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nonabsorbable surgical suture (polypropylene suture)</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson, America</td>
			<td>6-0, 7-0</td>
			<td>Used to suture blood vessels.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nonabsorbable suture (cotton thread)</td>
			<td>Covidien, America</td>
			<td>1-0</td>
			<td>Used for skin and muscle tissue tugging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Open heart surgery instrument kit</td>
			<td>Shanghai Medical Instrument (Group) Co., LTD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propofol injection</td>
			<td>Xi &#39;an Libang Pharmaceutical Co. LTD</td>
			<td>H19990282</td>
			<td>Anesthetic sedative</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerator</td>
			<td>Local suppliers, Guangzhou, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Respiratory anesthesia machine for animal</td>
			<td>Shenzhen Reward Life Technology Co, Ltd, China</td>
			<td>R620-S1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semi-occlusion clamp</td>
			<td>Xinhua Surgical Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>ZL1701RB</td>
			<td>Temporarily cut off the aortic flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vecuronium bromide</td>
			<td>Richter, Hungary&#160;</td>
			<td>JX20090127</td>
			<td>Muscle relaxant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veterinary ultrasound system&#160;</td>
			<td>Royal Philips, Netherlands</td>
			<td>CX50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zoletil</td>
			<td>Virbac, France</td>
			<td>Zoletil 50&#160;</td>
			<td>Animal narcotic</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment and evaluation of a porcine vein graft disease model

A doença do enxerto venoso (DPV) é a principal causa de insuficiência da revascularização miocárdica (CRM). Grandes modelos animais de CRM-VGD são necessários para a investigação dos mecanismos da doença e o desenvolvimento de estratégias terapêuticas. 
Para realizar a cirurgia, entramos na câmara cardíaca através do terceiro espaço intercostal e dissecamos cuidadosamente a veia mamária interna e a mergulhamos em solução salina normal. A artéria coronária principal direita é então tratada para isquemia. O vaso-alvo é incisado, um tampão de derivação é colocado e a extremidade distal da veia do enxerto é anastomosada. A aorta ascendente é parcialmente bloqueada e a extremidade proximal da veia do enxerto é anastomosada após a perfuração. A veia do enxerto é verificada quanto à perviedade e a artéria coronária direita proximal é ligada. 
A cirurgia de revascularização miocárdica é realizada em minipigas para colher a veia mamária interna esquerda para seu uso como enxerto vascular. Testes bioquímicos séricos são utilizados para avaliar o estado fisiológico dos animais após a cirurgia. O exame ultrassonográfico mostra que a extremidade proximal, média e distal do vaso do enxerto está desobstruída. No modelo cirúrgico, observa-se fluxo sanguíneo turbulento no enxerto ao exame histológico após a cirurgia de revascularização miocárdica, e estenose do enxerto venoso associada à hiperplasia intimal no enxerto. O estudo aqui fornece procedimentos cirúrgicos detalhados para o estabelecimento de um modelo de DVG induzida por CRM repetível.

IMC e índices bioquímicos séricos O IMC entre os grupos sham e VGD não foi significativamente diferente (sham vs. VGD, 22,05 kg/cm 2 ± 0,46 kg/cm 2 vs. 21,14 kg/cm 2 ± 0,39 kg/cm 2, p = 0,46). Os resultados bioquímicos séricos estão listados na Tabela 1. Mudanças estatisticamente significativas entre os grupos foram encontradas em quatro índices bioquímicos, incluindo aspartato aminotransferase (AST, sham vs. VGD, 25,25 ...

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Establishment and Evaluation of a Porcine Vein Graft Disease Model

Neste protocolo, a nova cirurgia de revascularização do miocárdio foi realizada através de uma pequena incisão na parede torácica esquerda, sem circulação extracorpórea. Foi realizado um estudo anatomopatológico pós-operatório, que mostrou espessamento intimal.

Estabelecimento e Avaliação de um Modelo de Enxerto de Veia Suína

Venous graft disease (VGD) is the leading cause of coronary artery bypass graft (CABG) failure. Large animal models of CABG-VGD are needed for the ...

Este modelo fornece um protocolo padrão para o estabelecimento de modelos animais de doença do enxerto coronariano. O procedimento de modelo animal estabelecido por este método é padrão, e o resultado é estável. Para começar, divida os miniporcos machos de três meses de idade, pesando 30 a 35 quilos, nos grupos de doença do enxerto simulado e venoso de cinco animais cada.Após anestesiar o animal, estabeleça o acesso da orelha inserindo um cateter venoso de demora na veia marginal da orelha. Agora, transfira o porco para a mesa de operação na posição supina. Realize a intubação traqueal com um tubo de calibre francês de 7,0 a 7,5 e conecte-o ao circuito respiratório da anestesia.Imobilize os membros com ataduras e eleve a cabeça com uma cortina estéril. Depois de injetar brometo de vecurônio por via intravenosa para relaxamento muscular, monitore a frequência cardíaca, os níveis de oxigênio no sangue e a temperatura corporal usando um eletrocardiograma. Depois de barbear e esterilizar a área cirúrgica, coloque uma cortina cirúrgica estéril em torno dela.Após fazer a incisão e expor a veia mamária interna, conforme descrito no texto, localize a veia mamária interna e a artéria mamária interna esquerda no lado esquerdo do esterno e realize a dissecção contusa da veia mamária interna com pinça vascular. Realizar hemostasia por eletrocoagulação dos ramos da veia mamária interna esquerda com uma faca elétrica. Se a hemostasia estiver incompleta, usando fio de algodão, ligue e marque as duas extremidades da veia enquanto ela está sendo colhida.Uma vez que a veia é removida, injete heparina, solução salina normal na veia para pré-tratamento. Em seguida, coloque a veia na solução salina normal, mantenha-a para backup e, da mesma forma, incite a veia mamária interna do grupo simulado. Em seguida, abra o pericárdio, feche a parede torácica e use a veia mamária interna para controle patológico sem revascularização do miocárdio.Faça uma incisão de aproximadamente sete centímetros com uma faca elétrica no pericárdio para expor o tronco da artéria coronária direita. Suspenda o pericárdio e costure a pele no lado ipsilateral com suturas cirúrgicas 1-0. Agora, separe o tronco da artéria coronária direita dos tecidos circundantes.Em seguida, usando um gancho de arame, ignore a banda de bloqueio sob a extremidade proximal da artéria coronária direita isolada perto da aorta. Em seguida, trate o miocárdio com três ciclos de isquemia de dois minutos e cinco minutos de reperfusão, apertando e relaxando a banda de bloqueio. Além disso, monitore a atividade elétrica do coração com o eletrocardiograma durante o pré-condicionamento da reperfusão de isquemia.Em seguida, corte o epicárdio que cobre os vasos sanguíneos depois de apertar a banda para bloquear o fluxo sanguíneo coronário direito. Expondo a parede da artéria coronária, corte longitudinalmente com a ponta de uma lâmina cirúrgica contra o centro da parede anterior dos vasos sanguíneos. Depois de cortar o lúmen e ampliar a incisão e colocar um shunt coronário, insira uma extremidade do shunt com uma bobina na artéria coronária distal através da lágrima.Agora, derive o sangue nas artérias coronárias para o shunt coronário oco para garantir um campo operatório claro e realize uma sutura contínua de ponta a ponta entre a veia mamária interna e a parede aórtica com a sutura de polipropileno 6-0. No meio da aorta ascendente, ocluir a parede anterolateral esquerda da aorta ascendente com uma braçadeira de semi-oclusão. Depois de fazer uma pequena incisão com a lâmina cirúrgica na parede da aorta onde a adventícia foi cortada, insira a extremidade da cabeça do eixo deslizante na extremidade da cabeça do punch na cavidade aórtica através desta incisão.Em seguida, contraia o eixo deslizante para fora e a faca circular corta um pedaço da parede arterial. Uma vez que o shunt é puxado para fora, execute uma sutura contínua de ponta a ponta entre a veia mamária interna e a artéria coronária direita com a sutura de polipropileno 6-0. Após a abertura da braçadeira de semi-oclusão, registre o fluxo de revascularização miocárdica do tronco da artéria coronária direita proximal ao local da anastomose por meio de ultrassonografia.Prepare o animal para a cirurgia, conforme demonstrado anteriormente. E com uma faca elétrica, faça uma incisão esternal mediana de 10 centímetros para dividir o esterno e colher a veia 30 dias após a cirurgia. Durante a separação, evite os principais vasos sanguíneos, coração e separe os vasos sanguíneos enxertados camada por camada.Corte rapidamente os grandes vasos sanguíneos que se conectam ao coração e coloque o coração e a aorta ascendente em lascas de gelo. Uma vez que a ponte vascular do enxerto, a aorta conectada e a artéria coronária direita são removidas, lave todas as amostras com solução salina normal a quatro graus Celsius. Depois de pegar todo o vaso do enxerto de cerca de três a quatro centímetros e dividi-lo em quatro a cinco partes iguais, transfira-o para o CryoTubes para congelar rapidamente em nitrogênio líquido.Para análise, fixe o enxerto gelado e enxaguado com solução salina em solução de paraformaldeído a 4%. Após 12 horas de fixação tecidual, core as seções em 50 mililitros de uma solução aquosa de hematoxilina por três minutos. Em seguida, separe as seções lavando com 50 mililitros de ácido clorídrico-etanol a 0,5% e água de amônia a 0,2% por 10 segundos cada.Uma vez que as seções são enxaguadas por uma hora com água corrente, limpe-as mergulhando-as em água destilada por três minutos. Depois de desidratar as seções em etanol a 70% e 90% por 10 minutos, coloque-as em 50 mililitros de solução de coloração de eosina a 0,5% de álcool por dois a três minutos. Uma vez que as seções coradas estejam desidratadas em etanol puro, mergulhe as amostras em xileno puro por 10 minutos para torná-las transparentes.Finalmente, goteje as seções transparentes com cola neutra antes de cobri-las com um deslizamento de cobertura. Observe seções patológicas sob um microscópio de luz com 40 vezes a ampliação. O exame ultra-sônico mostrou que a direção geral do fluxo sanguíneo era normal na extremidade proximal, na cavidade vascular e na extremidade distal do vaso do enxerto.No entanto, as extremidades proximal e distal do vaso do enxerto apresentaram algum fluxo retrógrado de sangue. A análise histológica da veia mamária interna revelou que no grupo sham a túnica íntima, a túnica média e a parede venosa do enxerto venoso pareciam normais. No entanto, 30 dias após o transplante de artéria coronária, a íntima do vaso foi espessada e o lúmen foi estreitado.Entre os grupos de doença do enxerto simulado e venoso, quatro índices bioquímicos, aspartato aminotransferase, bilirrubina sérica, bilirrubina total e creatinina, apresentaram alterações estatisticamente significativas. O cirurgião deve expor completamente a veia mamária interna e certificar-se de que ela não está ligada ao tecido circundante. A técnica fornece um processo de modelagem padronizado para o estudo de doenças venosas do enxerto em modelos animais.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Multicenter MRI Protocol for the Evaluation and Quantification of Deep Vein Thrombosis

A Multicenter MRI Protocolo para a Avaliação e Quantificação de Trombose Venosa Profunda

We evaluated a magnetic resonance venography (MRV) approach with gadofosveset to quantify total thrombus volume changes as the principal criterion for ...

Medicina

Establishment and Characterization of UTI and CAUTI in a Mouse Model

Criação e Caracterização da UTI e CAUTI em um modelo de rato

Urinary tract infections (UTI) are highly prevalent, a significant cause of morbidity and are increasingly resistant to treatment with antibiotics. ...

Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency

Veia Interposição Modelo: Um modelo adequado para estudar Bypass Graft Perviedade

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Medição de contratilidade isométrica da artéria mesentérica Mouse usando fio miografia

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Establishment of a Mouse Severe Acute Pancreatitis Model using Retrograde Injection of Sodium Taurocholate into the Biliopancreatic Duct

Estabelecimento de um modelo de pancreatite aguda grave do rato usando injeção retrógrada de taurocholate de sódio no ducto biliopancreático

The prevalence of acute pancreatitis (AP), especially severe acute pancreatitis (SAP), is increasing in younger age groups annually. However, there is a ...

Repetitive Blood Sampling from the Subclavian Vein of Conscious Rat

Amostragem Repetitiva de Sangue da Veia Subclávia de Rato Consciente

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to ...

Modified Arteriovenous Fistula Surgery to Establish the RV Volume Overload Mouse Model

Establishment and Confirmation of a Postnatal Right Ventricular Volume Overload Mouse Model

Establishment and Confirmation of a Postnatal Right Ventricular Volume Overload Mouse Model (Video) | JoVE 

Estabelecimento e Confirmação de um Modelo de Sobrecarga de Volume do Ventrículo Direito Pós-Natal em Camundongos

Right ventricular (RV) volume overload (VO) is common in children with congenital heart disease. In view of distinct developmental stages,the RV ...

Comparative Study of Blood Collection Techniques in Rats

Modified Tail Vein and Penile Vein Puncture for Blood Sampling in the Rat Model

Context Dependent Blood Collection Methods in Rats (Video) | JoVE

Veia Caudal e Punção Peniana Modificadas para Coleta de Sangue no Modelo de Rato

Blood samples are required in most experimental animal designs to assess various hematological parameters. This paper presents two procedures for blood ...

Adjunctive Exosome Therapy: Enhancing Myocardial Recovery Post-CABG Surgery

Surgical Porcine Model of Chronic Myocardial Ischemia Treated by Exosome-laden Collagen Patch and Off-pump Coronary Artery Bypass Graft

Author Spotlight: Enhancing Coronary Artery Revascularization

Chronic myocardial ischemia resulting from progressive coronary artery stenosis leads to hibernating myocardium (HIB), defined as myocardium that adapts ...

Development of an Effective Mice Model for Studying Oronasal Fistulas

Establishment of an Oronasal Fistula Mice Model

Investigating Wound Healing in Mice Models of Oronasal Fistulas (Video) | JoVE

Estabelecimento de um modelo de fístula oronasal em camundongos

This study presents a method utilizing heated ophthalmologic cautery to develop a viable model for investigating oronasal fistulas. C57BL/6 mice were used ...