Name: methods for rearing the parasitoid ganaspis brasiliensis, a promising biological control agent for the invasive drosophila suzukii
Uploaded: 2022-06-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Methods for Rearing the Parasitoid Ganaspis brasiliensis, a Promising Biological Control Agent for the Invasive Drosophila suzukii at JoVE.com

ويشكر المؤلفان لوكاس سيهاوزن ومارك كينيس (كابي، سويسرا) على تفضلهما بتقديم G1 G. brasiliensis. تم توفير التمويل في إيطاليا من قبل مقاطعة Autonoma di Trento ، ترينتو ، إيطاليا ، وفي الولايات المتحدة من قبل المعهد الوطني للأغذية والزراعة ، وجائزة مبادرة أبحاث المحاصيل المتخصصة التابعة لوزارة الزراعة الأمريكية (# 2020-5118-32140) ، وخدمة فحص صحة الحيوان والنبات التابعة لوزارة الزراعة الأمريكية (مشروع قانون المزرعة ، الصندوق 14-8130-0463) ، والأموال الأساسية ل USDA ARS CRIS (المشروع 8010-22000-033-00D). وزارة الزراعة الأمريكية هي مزود تكافؤ الفرص وصاحب العمل ولا تؤيد المنتجات المذكورة في هذا المنشور.

1. طرق التربية المختبرية الصغيرة النطاق ل G3 Ganaspis brasiliensis
<ol><li>إعداد النظام الغذائي المضيف.<ol>
<li>أضف 600 مل من الماء المقطر إلى وعاء زجاجي سعة 1500 مل ، وقم بتسخين الماء على صفيحة ساخنة.</li>
		<li>أضف 88.6 جم من النظام الغذائي الجاف المتاح تجاريا (المصنوع من الأجار وخميرة البيرة ووجبة الذ?...

<ol>
	<li>Asplen, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invasion+biology+of+spotted+wing+drosophila+(Drosophila+suzukii):+a+global+perspective+and+future+priorities.">Invasion biology of spotted wing drosophila (Drosophila suzukii): a global perspective and future priorities.</a> Journal of Pest Science. 88 (3), 469-494 (2015).</li><li>Tait, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+suzukii+(Diptera:+Drosophilidae):+A+decade+of+research+towards+a+sustainable+integrated+pest+management+program.">Drosophila suzukii (Diptera: Drosophilidae): A decade of research towards a sustainable integrated pest management program.</a> Journal of Economic Entomology. 114 (5), 1950-1974 (2021).</li><li>Kirschbaum, D. S., Funes, C. F., Buonocore-Biancheri, M. J., Su&#225;rez, L., Ovruski, S. M., Garcia, F. R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biology+and+ecology+of+Drosophila+suzukii+(Diptera:+Drosophilidae).">The biology and ecology of Drosophila suzukii (Diptera: Drosophilidae).</a> Drosophila suzukii management. , 41-92 (2020).</li><li>Wang, X. G., Lee, J. C., Daane, K. M., Buffington, M. L., Hoelmer, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+control+of+Drosophila+suzukii.">Biological control of Drosophila suzukii.</a> CAB Reviews. 15, 054 (2020).</li><li>Lee, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+control+of+spotted-wing+drosophila+(Diptera:+Drosophilidae):+Current+and+pending+tactics.">Biological control of spotted-wing drosophila (Diptera: Drosophilidae): Current and pending tactics.</a> Journal of Integreated Pest Management. 10 (1), 13 (2019).</li><li>Wang, X. G., Lee, J. C., Daane, K. M., Hoelmer, K. A., Garcia, F. R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+control+of+spotted-wing+drosophila:+An+update+on+promising+agents.">Biological control of spotted-wing drosophila: An update on promising agents.</a> Drosophilia suzukii management. , 143-167 (2020).</li><li>Daane, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+exploration+of+parasitoids+of+Drosophila+suzukii+in+South+Korea+as+potential+classical+biological+agents.">First exploration of parasitoids of Drosophila suzukii in South Korea as potential classical biological agents.</a> Journal of Pest Science. 89 (3), 823-835 (2016).</li><li>Giorgini, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploration+for+native+parasitoids+of+Drosophila+suzukii+in+China+reveals+a+diversity+of+parasitoid+species+and+narrow+host+range+of+the+dominant+parasitoid.">Exploration for native parasitoids of Drosophila suzukii in China reveals a diversity of parasitoid species and narrow host range of the dominant parasitoid.</a> Journal of Pest Science. 92 (2), 509-522 (2019).</li><li>Girod, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+parasitoid+complex+of+D.+suzukii+and+other+fruit+feeding+Drosophila+species+in+Asia.">The parasitoid complex of D. suzukii and other fruit feeding Drosophila species in Asia.</a> Scientific Reports. 8 (1), 11839 (2018).</li><li>Kacsoh, B. Z., Schlenke, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+hemocyte+load+is+associated+with+increased+resistance+against+parasitoids+in+Drosophila+suzukii,+a+relative+of+D.+melanogaster.">High hemocyte load is associated with increased resistance against parasitoids in Drosophila suzukii, a relative of D. melanogaster.</a> PLoS ONE. 7 (4), 34721 (2012).</li><li>Buffington, M. L., Forshage, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Redescription+of+Ganaspis+brasiliensis+(Ihering,+1905),+new+combination+(Hymenoptera:+Figitidae),+a+natural+enemy+of+the+invasive+Drosophila+suzukii+(Matsumura,+1931)(Diptera:+Drosophilidae).">Redescription of Ganaspis brasiliensis (Ihering, 1905), new combination (Hymenoptera: Figitidae), a natural enemy of the invasive Drosophila suzukii (Matsumura, 1931)(Diptera: Drosophilidae).</a> Procedings of the Entomoogical Society of Washington. 118 (1), 1-13 (2016).</li><li>Biondi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+olfactory+responses+of+Asobara+japonica+(Hymenoptera:+Braconidae)towards+fruits+infested+by+the+invasive+spotted+wing+drosophila.">Innate olfactory responses of Asobara japonica (Hymenoptera: Braconidae)towards fruits infested by the invasive spotted wing drosophila.</a> Journal of Insect Behavior. 30 (5), 495-506 (2017).</li><li>Biondi, A., Wang, X. G., Daane, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+preference+of+three+Asian+larval+parasitoids+to+closely+related+Drosophila+species:+implications+for+biological+control+of+Drosophila+suzukii.">Host preference of three Asian larval parasitoids to closely related Drosophila species: implications for biological control of Drosophila suzukii.</a> Journal of Pest Science. 94 (2), 273-283 (2021).</li><li>Girod, P., Rossignaud, L., Haye, T., Turlings, T. C. J., Kenis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+Asian+parasitoids+in+larvae+of+Drosophila+suzukii+feeding+on+blueberry+and+artificial+diet.">Development of Asian parasitoids in larvae of Drosophila suzukii feeding on blueberry and artificial diet.</a> Journal of Applied Entomology. 142 (5), 483-494 (2018).</li><li>Wang, X. G., Nance, A. H., Jones, J. M. L., Hoelmer, K. A., Daane, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aspects+of+the+biology+and+reproductive+strategy+of+two+Asian+larval+parasitoids+evaluated+for+classical+biological+control+of+Drosophila+suzukii.">Aspects of the biology and reproductive strategy of two Asian larval parasitoids evaluated for classical biological control of Drosophila suzukii.</a> Biological Control. 121, 58-65 (2018).</li><li>Wang, X. G., Biondi, A., Daane, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+responses+of+three+candidate+Asian+larval+parasitoids+evaluated+for+classical+biological+control+of+Drosophila+suzukii.">Functional responses of three candidate Asian larval parasitoids evaluated for classical biological control of Drosophila suzukii.</a> Journal of Economic Entomology. 113 (1), 73-80 (2020).</li><li>Wang, X. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+Asobara+japonica+as+a+potential+biological+control+agent+for+the+spotted+wing+drosophila,+Drosophila+suzukii.">Assessment of Asobara japonica as a potential biological control agent for the spotted wing drosophila, Drosophila suzukii.</a> Entomologia Generalis. 41, 1-12 (2021).</li><li>Hougardy, E., Hogg, B. N., Wang, X. G., Daane, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+thermal+performances+of+two+Asian+larval+parasitoids+of+Drosophila+suzukii.">Comparison of thermal performances of two Asian larval parasitoids of Drosophila suzukii.</a> Biological Control. 136, 104000 (2019).</li><li>Wang, X. G., Hogg, B. N., Hougardy, E., Nance, A. H., Daane, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+competitive+outcomes+among+three+solitary+larval+endoparasitoids+as+candidate+agents+for+classical+biological+control+of+Drosophila+suzukii.">Potential competitive outcomes among three solitary larval endoparasitoids as candidate agents for classical biological control of Drosophila suzukii.</a> Biological Control. 130, 18-26 (2019).</li><li>Daane, K. M., Biondi, A., Wang, X. G., Hogg, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+host+ranges+of+three+Asian+larval+parasitoids+of+Drosophila+suzukii.">Potential host ranges of three Asian larval parasitoids of Drosophila suzukii.</a> Journal of Pest Science. 94 (4), 1171-1182 (2021).</li><li>Girod, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+specificity+of+Asian+parasitoids+for+potential+classical+biological+control+of+Drosophila+suzukii.">Host specificity of Asian parasitoids for potential classical biological control of Drosophila suzukii.</a> Journal of Pest Science. 91 (4), 1241-1250 (2018).</li><li>Seehausen, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+a+cryptic+parasitoid+species+reveals+its+suitability+as+a+biological+control+agent.">Evidence for a cryptic parasitoid species reveals its suitability as a biological control agent.</a> Scientific Reports. 10 (1), 19096 (2020).</li><li>Nomano, F. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+differentiation+of+Ganaspis+brasiliensis+(Hymenoptera:+Figitidae)+from+East+and+Southeast+Asia.">Genetic differentiation of Ganaspis brasiliensis (Hymenoptera: Figitidae) from East and Southeast Asia.</a> Applied Entomology and Zoology. 52 (3), 429-437 (2017).</li><li>Kasuya, N., Mitsui, H., Ideo, S., Watada, M., Kimura, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecological,+morphological+and+molecular+studies+on+Ganaspis+individuals+(Hymenoptera:+Figitidae)+attacking+Drosophila+suzukii+(Diptera:+Drosophilidae).">Ecological, morphological and molecular studies on Ganaspis individuals (Hymenoptera: Figitidae) attacking Drosophila suzukii (Diptera: Drosophilidae).</a> Applied Entomology and Zoology. 48 (1), 87-92 (2013).</li><li>Matsuura, A., Mitsui, H., Kimura, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+preliminary+study+on+distributions+and+oviposition+sites+of+Drosophila+suzukii+(Diptera:+Drosophilidae)+and+its+parasitoids+on+wild+cherry+tree+in+Tokyo,+central+Japan.">A preliminary study on distributions and oviposition sites of Drosophila suzukii (Diptera: Drosophilidae) and its parasitoids on wild cherry tree in Tokyo, central Japan.</a> Applied Entomology and Zoology. 53 (1), 47-53 (2018).</li><li>Abram, P. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+records+of+Leptopilina,+Ganaspis,+and+Asobara+species+associated+with+Drosophila+suzukii+in+North+America,+including+detections+of+L.+japonica+and+G.+brasiliensis.">New records of Leptopilina, Ganaspis, and Asobara species associated with Drosophila suzukii in North America, including detections of L. japonica and G. brasiliensis.</a> Journal of Hymenoptera Research. 78, 1-17 (2020).</li><li>Puppato, S., Grassi, A., Pedrazzoli, F., De Cristofaro, A., Ioriatti, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+report+of+Leptopilina+japonica+in+Europe.">First report of Leptopilina japonica in Europe.</a> Insects. 11 (9), 611 (2020).</li><li>Dalton, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+survival+of+Drosophila+suzukii+under+simulated+winter+conditions+of+the+Pacific+Northwest+and+seasonal+field+trapping+in+five+primary+regions+of+small+and+stone+fruit+production+in+the+United+States.">Laboratory survival of Drosophila suzukii under simulated winter conditions of the Pacific Northwest and seasonal field trapping in five primary regions of small and stone fruit production in the United States.</a> Pest Managagement Science. 67 (11), 1368-1374 (2011).</li></ol>

وتعتمد البحوث الطويلة الأجل والإطلاقات الميدانية اللاحقة لعامل المكافحة البيولوجية على توافر تقنيات تربية فعالة واقتصادية. أثبتت الطرق الموصوفة في هذه الدراسة أنها بروتوكولات فعالة لكل من تربية Ganaspis brasiliensis على نطاق صغير وواسع النطاق. تم تطوير بروتوكول التربية على نطاق صغير على مدى...

موطنها الأصلي شرق آسيا ، ذبابة الفاكهة ذات الأجنحة المرقطة ، ذبابة الفاكهة suzukii (Matsumura) (Diptera: Drosophilidae) ، قد أنشئت على نطاق واسع في الأمريكتين وأوروبا وأجزاء من أفريقيا 1,2. الذبابة متعددة البلعوم للغاية ، كونها قادرة على استخدام مختلف الفواكه المزروعة والبرية ذات الجلود الناعمة والرقيقة في مناطقها الأصلية والغازية1،2،3. تعتمد استراتيجيات الإدارة الحالية لهذه الآفة بشكل كبير على الاستخدام المتكرر للمبيدات الحشرية التي تستهدف الذباب البالغ في حقول المحاصيل عندما تنضج الفاكهة الحساسة. غالبا ما تستخدم البخاخات المتكررة ، ربما بسبب الامتداد المستمر لمجموعات ذبابة الخزان من الموائل غير المحصولية وعدم وجود أعداء طبيعيين فعالين مقيمين في المناطق التي تم غزوها 1,4. قد تساعد المكافحة البيولوجية ، خاصة عن طريق الطفيليات المتخصصة التي تديم نفسها ، في قمع مجموعات الذباب على مستوى المناظر الطبيعية وتلعب دورا حاسما في الإدارة المستدامة على مستوى المنطقة لهذه الآفة شديدة الحركة ومتعددة البلعوم 4,5,6.
على مدى العقد الماضي ، ركز الباحثون جهودهم لاكتشاف طفيليات ذبابة الفاكهة المتطورة من ذبابة الفاكهة suzukii في النطاقات الأصلية للذبابة في شرق آسيا7،8،9 ، بالإضافة إلى طفيليات فعالة ولكنها مرتبطة حديثا في المناطق التي غزتها الذبابة في الأمريكتين وأوروبا4،5،6. في المناطق التي غزتها الذبابة حديثا ، فإن طفيليات ذبابة الفاكهة اليرقية الشائعة ، مثل Asobara c.f. tabida (Nees) (غشاء البكارة: Braconidae) ، Leptopilina boulardi (Barbotin et al.) ، و L. heterotoma (Thompson) (غشاء البكارة: Figitidae) ، غير قادرة على التطور من أو لديها مستويات منخفضة من التطفل على D. suzukii بسبب المقاومة المناعية القوية للذبابة10. فقط بعض الطفيليات العذراء العالمية والعامة مثل Pachycrepoideus vindemiae (Rondani) (غشاء البكارة: Pteromalidae) و Trichopria drosophilae (Perkins) (غشاء البكارة: Diapriidae) في أمريكا الشمالية وأوروبا ، و Trichopria anastrephae Lima في أمريكا الجنوبية يمكن أن تتطور بسهولة من هذه الذبابة4. في المقابل ، اكتشفت الاستكشافات في شرق آسيا عددا من الطفيليات اليرقية من D. suzukii 4,5,6. من بينها ، Asobara japonica Belokobylskij ، Ganaspis brasiliensis Ihering ، و Leptopilina japonica Novković & Kimura هي طفيليات اليرقات المهيمنة7،8،9،11. على وجه الخصوص ، كان الفيجيدان (L. japonica و G. brasiliensis) هما الطفيليات الرئيسية الموجودة في الغالب في الفواكه الطازجة الموبوءة ب D. suzukii و / أو غيرها من ذبابة الفاكهة ذات الصلة الوثيقة في النباتات الطبيعية 7,8,9. تم استيراد هذه الطفيليات اليرقات الآسيوية الثلاثة إلى مرافق الحجر الصحي في الولايات المتحدة الأمريكية وأوروبا ، وتم تقييمها لكفاءتها النسبية 12،13،14،15،16،17 ، والقدرة على التكيف المناخي 18 ، والتفاعلات التنافسية المحتملة بين الأنواع 19 ، والأهم من ذلك ، خصوصية المضيف8،20،21 ، 22.
أظهرت تقييمات الحجر الصحي أن Ganaspis brasiliensis كان أكثر تحديدا للمضيف ل Drosophila suzukii من طفيليات اليرقات الآسيوية الأخرى التي تم اختبارها ، على الرغم من أنه من المحتمل أن يتكون من أنماط حيوية مختلفة أو أنواع مشفرة ذات خصوصية مضيف متفاوتة 8,21,22,23,24. قام Nomano et al.22 بتجميع أفراد Ganaspis من مناطق جغرافية مختلفة في خمس مجموعات وراثية (تسمى G1-G5) استنادا إلى التحليلات الجزيئية لجزء جين أوكسيديز أوكسيديز السيتوكروم I الميتوكوندريا. ولم يبلغ عن المجموعتين G2 وG4 إلا من عدد قليل من المواقع المدارية في جنوب آسيا، وتم الإبلاغ عن مجموعة G5 من آسيا ومناطق أخرى (مثل الأرجنتين والبرازيل وهاواي والمكسيك) من مضيف (مضيفين) غير معروفين (بوفينغتون، ملاحظة شخصية). وجدت المجموعات الميدانية من الفواكه البرية الموبوءة ب D. suzukii في كوريا الجنوبية7 والصين8 واليابان 9,23,25 G1 وحدها أو مزيجا من العينات التي تمثل المجموعتين G1 و G3. يبدو أن المجموعتين متكافلتان وتتعايشان على نفس النباتات المضيفة التي يسكنها D. suzukii وغيرها من الذباب المضيف ذي الصلة الوثيقة. ومع ذلك ، فقد لوحظت بعض الاختلافات بين المجموعتين ، حيث يبدو أن G1 لديها درجة أعلى من خصوصية الموائل المضيفة أو المضيفة ل D. suzukii من G3 ، على الرغم من أن كلاهما يهاجم عددا من الأنواع ذات الصلة الوثيقة في اختبارات الحجر الصحي21,22. قد تساعد التحليلات الجزيئية التفصيلية الإضافية في تحديد حالة الأنواع ، خاصة بالنسبة للمجموعات G1 و G3. تشير هذه الدراسة إليهم باسم G1 G. brasiliensis و G3 G. brasiliensis. كما أطلقت بعض الدراسات المبكرة على G1 G. brasiliensis اسم G. راجع Brasiliensis 14,21,22. تمت الموافقة مؤخرا على G1 G. brasiliensis للإصدار الميداني ضد D. suzukii في الولايات المتحدة الأمريكية وإيطاليا (العديد من البلدان الأوروبية الأخرى تدرس حاليا إدخاله) ، في حين يمكن النظر في G3 G. brasiliensis للإطلاق الميداني في المستقبل القريب. وجدت الدراسات الاستقصائية الحديثة أيضا مجموعات سكانية مغامرة من كل من L. japonica و G1 G. brasiliensis في كولومبيا البريطانية ، كندا26 ، وولاية واشنطن ، الولايات المتحدة الأمريكية (Beers et al. ، بيانات غير منشورة) ، ومجموعات L. japonica المغامرة في مقاطعة ترينتو ، إيطاليا27.
وبالنظر إلى الاهتمام الكبير بتطوير برامج المكافحة البيولوجية لإدارة ذبابة الفاكهة السوزوكي وإمكانات المكافحة البيولوجية الكبيرة للإدخال المغامر والمتعمد ل Ganaspis brasiliensis، هناك حاجة إلى تطوير طرق تربية فعالة لهذا الطفيلي اليرقي من أجل البحوث و/أو الإطلاق الميداني في المستقبل. يصف هذا البروتوكول ومقالة الفيديو المرتبطة به مجموعتين من طرق التربية لهذا الطفيلي: (1) التربية المختبرية الصغيرة في قوارير باستخدام مزيج من الفاكهة المضيفة (التوت) والنظام الغذائي الاصطناعي لثقافة D. suzukii. تم تطوير الطرق باستخدام مواد G3 التي تم جمعها في الأصل من كونمينغ ، الصين8. (2) التربية الجماعية للإطلاق الميداني في أقفاص كبيرة باستخدام الفاكهة المضيفة (التوت) لزراعة D. suzukii. كانت المجموعة الجينية المستخدمة في التربية على نطاق واسع هي مخزون G1 الذي نشأ في طوكيو ، اليابان 9,22. كما تتم مناقشة مقاييس أخرى لطرق التربية ، مثل استخدام القوارير أو الحاويات الصغيرة لكلتا المجموعتين ، بإيجاز.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Active dry yeast</td>
			<td>Fleischmanns Yeast, Cincinatti, OH, USA</td>
			<td>None</td>
			<td>Used to cover fruit to reduce mold growth and enhance the frui attraction to the flies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacteriological agar</td>
			<td>Merk Life Science S.r.l., Milan, Italy</td>
			<td>A1296 - 5KG</td>
			<td>Used to prepare the Standard Drosophila Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bleach solution</td>
			<td>Clorox Company, Oakland, CA, USA</td>
			<td>None</td>
			<td>Used to disinfect flesh fruit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blue stopper</td>
			<td>Azer Scientific, Morgantown, PA, USA</td>
			<td>ES3837</td>
			<td>Used for sealing the tube while allowing ventilation for insects</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blueberries</td>
			<td>Grocery Store, Newark, DE, USA</td>
			<td>None</td>
			<td>Provided as host fruit for the flies (various other fruit can also be used)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BugDorm insect rearing cage (W24.5 x D24.5 x H63.0 cm)</td>
			<td>Mega View Science Co. Ltd., Taichung, Taiwan</td>
			<td>4E3030</td>
			<td>Used for rearing parasitoids (parasitism cage)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BugDorm insect rearing cage (W32.5 x D32.5 x H32.5 cm)</td>
			<td>Mega View Science Co. Ltd., Taichung, Taiwan</td>
			<td>4E4590</td>
			<td>Used for rearing flies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BugDorm insect rearing cage (W32.5 x D32.5 x H32.5 cm)</td>
			<td>Mega View Science Co. Ltd., Taichung, Taiwan</td>
			<td>4E4545</td>
			<td>Used for rearing parasitoids (eclosion cage)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken wire (0.64 cm, 19 gauge)</td>
			<td>Everbilt, OH, USA</td>
			<td>308231EB</td>
			<td>Used to lift up the fruit to allow maximum parasitoid oviposition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cornmeal</td>
			<td>Grocery Store, Trento, TN, Italy</td>
			<td>None</td>
			<td>Used to prepare the Standard Drosophila Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental cotton roll (1 x 3.8 cm)</td>
			<td>Gima S.p.A., Gessate, MI, Italy</td>
			<td>35000</td>
			<td>Used for providing water to the parasitoids within the storage container</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drosophila diet</td>
			<td>Frontier Scientific, Newark, DE, USA</td>
			<td>TF1003</td>
			<td>Custom diet used to rear flies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drosophila vial narrow, Polystirene (2.5 x 9.5 cm)</td>
			<td>VWR International, LLC., Radnor, PA, US</td>
			<td>75813-160</td>
			<td>Used for providing water to the parasitoids within the cage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drosophila vial plugs, Cellulose acetate (2.5 cm)</td>
			<td>VWR International, LLC., Radnor, PA, US</td>
			<td>89168-886</td>
			<td>Used for providing water to the parasitoids within the cage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erlenmeyer flask (250 mL)</td>
			<td>Carolina Biological, Burlington, NC, USA</td>
			<td>731029</td>
			<td>Used for rearing flies and parasitoids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon-style centrifuge tube (50 mL)</td>
			<td>VWR International, LLC., Radnor, PA, US</td>
			<td>VWRI525-0611</td>
			<td>Modified to ship adult parasitoids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foam stopper</td>
			<td>Jaece Industries, North Tanawanda, NY, USA</td>
			<td>L800-C</td>
			<td>Used for sealing the flasks while allowing ventilation for insects</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Honey</td>
			<td>Grocery Store, Newark, DE, USA</td>
			<td>None</td>
			<td>Provided as food for parasitoids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Identi-Plug plastic foam stopper</td>
			<td>Fisher Scientific Company, L.L.C., Pittsburg, PA, US</td>
			<td>14-127-40E</td>
			<td>Used as feeder for parasitoids and to seal the storage container</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Industrial paper towel</td>
			<td>Grocery Store, Newark, DE, USA</td>
			<td>None</td>
			<td>Provided as a pupation substrate for pupae and mitigated moisture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micron mesh fabric (250 mL)</td>
			<td>Industrial Netting, Maple Grove, MN, USA</td>
			<td>WN0250-72</td>
			<td>Used to make ventilation lid for insects</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nutritional yeast (flakes)</td>
			<td>Grocery Store, Trento, TN, Italy</td>
			<td>None</td>
			<td>Used to prepare the Standard Drosophila Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper coaster (10.2 cm)</td>
			<td>Hoffmaster, WI, USA</td>
			<td>35NG26</td>
			<td>Porvided as pupation substrate for flies and parsitized pupae</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic cup (&#216; 13.3 cm, 800 mL)</td>
			<td>Berry Superfos, Taastrup, Denmark</td>
			<td>Unipak 5134</td>
			<td>Modified to store adult parasitoids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic lid (&#216; 13.3 cm)</td>
			<td>Berry Superfos, Taastrup, Denmark</td>
			<td>PP 2830</td>
			<td>Modified to store adult parasitoids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propionic acid</td>
			<td>Merk Life Science S.r.l., Milan, Italy</td>
			<td>P1386 - 1L</td>
			<td>Used to prepare the Standard Drosophila Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saccharose</td>
			<td>Grocery Store, Trento, TN, Italy</td>
			<td>None</td>
			<td>Used to prepare the Standard Drosophila Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soup cup with lid (475 mL)</td>
			<td>StackMan, Vietnam</td>
			<td>DC1648</td>
			<td>Used for parasitized larvae to pupate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soybean flour</td>
			<td>Grocery Store, Trento, TN, Italy</td>
			<td>None</td>
			<td>Used to prepare the Standard Drosophila Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>White felt washer (0.64 cm thick, 5 mm ID x 20 mm OD)</td>
			<td>Quiklok, Lincoln, NH, US</td>
			<td>WFW/.25 x 5 x 20 mm</td>
			<td>Used as feeding ring for parasitoids</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

methods for rearing the parasitoid ganaspis brasiliensis, a promising biological control agent for the invasive drosophila suzukii

موطنها الأصلي شرق آسيا ، ذبابة الفاكهة ذات الأجنحة المرقطة ، ذبابة الفاكهة suzukii (Matsumura) (Diptera: Drosophilidae) ، قد نشأت على نطاق واسع في الأمريكتين وأوروبا وأجزاء من أفريقيا على مدى العقد الماضي ، لتصبح آفة مدمرة لمختلف الفواكه ذات البشرة الناعمة في مناطقها التي تم غزوها. ومن المتوقع أن تكون المكافحة البيولوجية، ولا سيما عن طريق الطفيليات المتخصصة والدائمة ذاتيا، خيارا قابلا للتطبيق من أجل الإدارة المستدامة لهذه الآفة الشديدة الحركة ومتعددة البلعوم على نطاق المنطقة. Ganaspis brasiliensis Ihering (غشاء البكارة: Figitidae) هو طفيلي يرقات يتم توزيعه على نطاق واسع في شرق آسيا ، وقد وجد أنه واحد من أكثر الطفيليات فعالية في D. suzukii.
وبعد إجراء تقييمات دقيقة قبل إدخاله لفعاليته ومخاطره المحتملة غير المستهدفة، تمت الموافقة مؤخرا على واحدة من المجموعات الجينية الأكثر تحديدا للمضيف من هذا النوع (G1 G. brasiliensis) لإدخالها وإطلاقها ميدانيا في الولايات المتحدة وإيطاليا. ويمكن النظر في إدخال مجموعة وراثية أخرى (G3 G. brasiliensis)، والتي وجد أيضا أنها تهاجم D. suzukii في شرق آسيا، في المستقبل القريب. هناك حاليا اهتمام هائل بتربية G. brasiliensis للبحث أو في الإنتاج الضخم للإطلاق الميداني ضد D. suzukii. يصف هذا البروتوكول ومقالة الفيديو المرتبطة به طرق التربية الفعالة لهذا الطفيلي ، سواء على نطاق صغير للبحث أو على نطاق واسع للإنتاج الضخم والإطلاق الميداني. قد تفيد هذه الطرق في إجراء مزيد من الأبحاث طويلة الأجل واستخدام هذا الطفيلي الآسيوي الأصلي كعامل مكافحة بيولوجي واعد لهذه الآفة الغازية العالمية.

ويبين الشكل 4 النتائج التمثيلية للتربية المختبرية الصغيرة النطاق ل G3 Ganaspis brasiliensis باستخدام كثافتين طفيليتين مختلفتين (ستة أو 10 أزواج) ووقتين مختلفين للتعرض (5 أو 10 أيام) في مرفق الحجر الصحي التابع لوحدة إدخال الحشرات المفيدة التابعة لوزارة الزراعة الأمريكية (نيوارك، دي...

Watch this Scientific Journal Video about Methods for Rearing the Parasitoid Ganaspis brasiliensis, a Promising Biological Control Agent for the Invasive Drosophila suzukii at JoVE.com

Methods for Rearing the Parasitoid Ganaspis brasiliensis, a Promising Biological Control Agent for the Invasive Drosophila suzukii

وقد تمت الموافقة على Ganaspis brasiliensis - وهو طفيلي يرقي من ذبابة الفاكهة suzukii (آفة عالمية غازية لمحاصيل الفاكهة) - أو ينظر في إدخاله إلى أوروبا والولايات المتحدة من أجل المكافحة البيولوجية لهذه الآفة. توفر هذه المقالة بروتوكولات لكل من تربية هذا الطفيلي على نطاق صغير وواسع النطاق.

طرق لتربية الطفيلي Ganaspis brasiliensis ، وهو عامل مكافحة بيولوجية واعد لذبابة الفاكهة الغازية suzukii

Native to East Asia, the spotted-wing drosophila, Drosophila suzukii (Matsumura) (Diptera: Drosophilidae), has established widely in the Americas, Europe, ...

يعتمد البحث طويل الأجل واستخدام عامل المكافحة الحيوية على توافر تقنيات تربية فعالة واقتصادية ، وقد أثبت هذا البروتوكول أنه فعال لتربية هذا الطفيلي. هناك حاليا اهتمام هائل بتربية هذا الطفيلي للبحث أو الإطلاق الميداني ، وسيفيد البروتوكول البحث المستقبلي طويل الأجل واستخدام عامل المكافحة الحيوية الواعد هذا. قد يحتاج المستخدمون الأوائل إلى فهم بعض البيولوجيا الأساسية للحشرات المعنية من خلال قراءة المراجع ذات الصلة الواردة في المقالة وبعض ممارسات الأساليب.لجعل النظام الغذائي المضيف ، أولا ، قم بإعداد الجزء السائل من النظام الغذائي كما هو موضح في المخطوطة. بعد ذلك ، أضف 25 إلى 30 جراما من التوت الأزرق المهروس إلى قارورة فارغة سعة 250 ملليلتر. ثم ، صب السائل في القارورة مع السائل الذي يغطي فقط الجزء العلوي من التوت الأزرق المهروس.بعد ذلك ، لتربية المضيف ذبابة الفاكهة سوزوكي ، قم أولا بقطع قطعة من منشفة ورقية ماصة ولفها في المركز. ثم ، ضع القسم الأوسط الملتوي من المنشفة الورقية في قارورة النظام الغذائي. للاحتفاظ بالرطوبة ، استخدم الماء المقطر لترطيب المنشفة الورقية والنظام الغذائي.ثم ، لنقل الذباب البالغ الناضج جنسيا ، قم بإزالة سدادة قارورة مستعمرة الذباب بعناية وقلبها في قارورة النظام الغذائي. بعد أسبوع من هذا التعرض ، احتفظ بالذباب في غرفة بيئية لمدة ثلاثة أسابيع لظهور الذباب. لتعريض اليرقة المضيفة للطفيليات ، قم أولا بإزالة الذباب البالغ والمنشفة الورقية من القارورة ، تاركا بيض الذبابة ويرقاتها.لتكون بمثابة ركيزة جرو لليرقات ، قم بطي منشفة ورقية ماصة جديدة وأدخلها في القارورة. ثم قم بشفط ستة أزواج من الإناث والذكور من الطفيلي G3 Ganaspis brasiliensis في القارورة وخط طبقة رقيقة من العسل في الجزء السفلي من سدادة الرغوة. لجمع وتخزين الطفيليات ، قم بإزالة البالغين بعد خمسة أيام.ثم قم بتخزين القارورة في الغرفة البيئية لمدة 35 يوما في ظل الشروط المذكورة سابقا. مع ظهور الدبابير البالغة ، قم بشفطها ثلاث مرات في الأسبوع. لحمل الدبابير ، ضع أولا منشفة ورقية مبللة ولكن غير مشبعة بالماء المقطر في الجزء السفلي من قارورة ذبابة الفاكهة 2.5 × 9.5 سم مربع.ثم ، انقل حوالي 60 دبورا إلى القارورة وحدد تاريخ الظهور. تخزين القارورة في الغرفة البيئية. مرتين في الأسبوع ، قم بخط طبقة رقيقة من العسل في الجزء السفلي من سدادة الرغوة للقوارير.أولا ، قم بترتيب تربية ذبابة الفاكهة سوزوكي على نطاق واسع عن طريق وضع 1،500 إلى 2،000 ذباب بالغ ناضج جنسيا بنسبة 50: 50 من الجنس في قفص كبير ، محبوك ، مغطى بشبكة. ثم ، ضع طبقا مع القطن المنقوع في الماء وأربعة إلى ستة أطباق بتري مع وسيط ذبابة الفاكهة القياسي في القفص. مرتين كل أسبوع ، استبدل أطباق بتري المكشوفة بأطباق طازجة.ضع كل طبق بتري موبوء بدون غطاء في كوب بلاستيكي سعة 800 ملليلتر وقم بتغطية الكوب بشبكة دقيقة. ثم ، احتضن الكؤوس عند 23 درجة مئوية ورطوبة نسبية 75٪ لمدة 12 إلى 15 يوما. بعد الحضانة ، انقل ذبابة الفاكهة البالغة التي تم فقسها حديثا سوزوكي إلى قفص تربية.بعد ذلك ، ابدأ في تحضير يرقات المضيف عن طريق شطف التوت الأزرق بالماء البارد لمدة دقيقة واحدة ونقع الثمار في حوض مملوء بمحلول تبييض ، مخفف إلى 5٪ لمدة ثلاث دقائق. ثم املأ أطباق بتري التي يبلغ طولها تسعة سنتيمترات بالتوت الأزرق المغسول. في ساعات ما بعد الظهر المتأخرة ، ضع أطباق بتري في قفص التربية واتركها طوال الليل.في صباح اليوم التالي ، اضغط بلطف على أطباق بتري لإزاحة الذباب من الثمار وإزالة الثمار من قفص التربية. وفي الوقت نفسه ، قم بإعداد قفص التطفل وقفص ظهور للطفيلي G1 Ganaspis brasiliensis. يجب أن يكون لكل من الأقفاص خيط رفيع أسفل السقف لتعليق واحد أو أكثر من المغذيات.في كل قفص ، قم بتعليق قارورة ذبابة الفاكهة التي تحتوي على الماء وختم بقابس خلات السليلوز رأسا على عقب من السقف كل خمسة إلى سبعة أيام ، اعتمادا على الرطوبة النسبية. مباشرة بعد إخراج التوت الأزرق الموبوء من قفص ذبابة الفاكهة سوزوكي ، ضعها في قفص التطفل مع 1،500 إلى 2،000 دبابير Ganaspis brasiliensis لمدة يومين إلى ثلاثة أيام. بعد ذلك ، اجمع الثمار في كوب بلاستيكي سعة 800 ملليلتر مع ورق ماصة في الأسفل.احتضان الكوب المفتوح في قفص الظهور أو الإغلاق عند 21 درجة مئوية ورطوبة نسبية 65٪ لمدة 28 يوما على الأقل. خلال الأسبوعين الثاني والثالث من الحضانة ، تحقق من القفص أسبوعيا بحثا عن إكلوسيون المضيف المبكر. لتسهيل جمع الطفيليات المتتالية ، قم بإزالة الذباب البالغ.في نهاية الأسبوع الرابع من الحضانة ، قم بتوفير وحدة تغذية ومصدر مياه للقفص. جمع حوالي 10 إلى 15 ٪ من الدبابير البالغة ونقلها إلى قفص التطفل لتحل محل الدبابير القديمة وغير المنتجة. من الدبابير المتبقية من قفص eclosion ، قم بتخزين ما يصل إلى 700 شخص بالغ بنسبة 50:50 من الجنس مع كوب بلاستيكي سعة 800 ملليلتر يحتوي على أنبوب سعة ملليلتر مملوء بالماء ومختوم بلفة قطن الأسنان في الجزء السفلي من الكوب.قم بتخزين الكوب بحالة ظهور ملحوظة في غرفة بيئية لمدة تصل إلى شهر واحد. لشحن الطفيليات ، ضع حوالي 200 شخص بالغ في أنبوب مخروطي 50 ملليلتر. ثم ، ضع جميع الأنابيب في حاوية شحن عازلة مع أكياس الثلج.أدى هذا البروتوكول إلى تربية ناجحة على نطاق صغير من G3 Ganaspis brasiliensis ، وهو عامل طفيلي ، ضد الآفة الزراعية ذبابة الفاكهة سوزوكي في المختبر. وظل إنتاج النسل غير متأثر بالاختلافات في كثافة الطفيليات ووقت التعرض. يمكن أيضا تحقيق جيل واسع النطاق من G1 Ganaspis brasiliensis ، مع بدء الإنتاج بعد خمسة أسابيع من التعرض الأولي للمضيف ذبابة الفاكهة سوزوكي.من الأسبوع 8 إلى الأسبوع 22 ، أصبح إنتاج الطفيليات متناسبا مع كمية الفاكهة المعرضة لها. من المهم للغاية الحفاظ على درجة حرارة تربية مناسبة ، والتحكم في الرطوبة ، وتوفير الطعام دائما للحشرات البالغة. ويمكن زيادة تحسين هذه الأساليب عن طريق تحسين كثافات تربية المضيف والطفيلي لتحقيق أقصى قدر من تكاثر الدبابير واستكشاف إمكانية تربية هذا الطفيلي على مضيفين بديلين.

Research

JoVE Journal

Biology

Methods for Rearing the Parasitoid Ganaspis brasiliensis, a Promising Biological Control Agent for the Invasive Drosophila suzukii

Protocol for Mosquito Rearing (A. gambiae)

Protocol for Mosquito Rearing A. gambiae

بروتوكول للتربية البعوض (A. الغامبية)

This protocol describes mosquito rearing in the insectary. The insectary rooms are maintained at 28&deg;C and ~80% humidity, with a 12 hr. day/night ...

Labeling hESCs and hMSCs with Iron Oxide Nanoparticles for Non-Invasive in vivo Tracking with MR Imaging

ووضع العلامات hESCs hMSCs مع أوكسيد الحديد النانوية لعدم الغازية في تعقب المجراة مع التصوير بالرنين المغناطيسي

In recent years, stem cell research has led to a better understanding of developmental biology, various diseases and its potential impact on regenerative ...

Labeling Stem Cells with Fluorescent Dyes for non-invasive Detection with Optical Imaging

وسم الخلايا الجذعية مع الأصباغ نيون للمنظمات غير الغازية مع الكشف عن التصوير الضوئي

Optical imaging (OI) is an easy, fast and inexpensive tool for in vivo monitoring of new stem cell based therapies. The technique is based on ex vivo ...

Electrophysiological Methods for Recording Synaptic Potentials from the NMJ of Drosophila Larvae

الكهربية طرق تسجيل الإمكانيات متشابك من يرقات ذبابة الفاكهة من NMJ

In this video, we describe the electrophysiological methods for recording synaptic transmission at the neuromuscular junction (NMJ) of Drosophila larva. ...

Electrophysiological Recording in the Drosophila Embryo

Electrophysiological Recording in the Drosophila Embryo

الكهربية في تسجيل ذبابة الفاكهة الأجنة

Drosophila is a premier genetic model for the study of both embryonic development and functional neuroscience. Traditionally, these fields are quite ...

Visualizing the Beating Heart in Drosophila

Visualizing the Beating Heart in Drosophila

تصور القلب النابض في ذبابة الفاكهة</em

The Drosophila heart has recently emerged as a good model system for examining the genetic, cellular, and molecular mechanisms underlying function in ...

Methods for the Study of the Zebrafish Maxillary Barbel

طرق لدراسة بربل الفكين اسماك الزرد

Barbels are skin sensory appendages found in fishes, reptiles and amphibians.  The zebrafish, Danio rerio, develops two pairs of barbels- a short nasal ...

An Optimized Protocol for Rearing Fopius arisanus, a Parasitoid of Tephritid Fruit Flies

An Optimized Protocol for Rearing Fopius arisanus, a Parasitoid of Tephritid Fruit Flies

بروتوكول الأمثل لتربية Fopius arisanus ، وهو الطفيل من الفاكهة Tephritid الذباب

Fopius arisanus (Sonan) is an important parasitoid of Tephritid fruit flies for at least two reasons. First, it is the one of only three opiine ...

Blastomere Explants to Test for Cell Fate Commitment During Embryonic Development

إإكسبلنتس قسيم أرومي لاختبار الالتزام مصير الخلايا أثناء التطور الجنيني

Fate maps, constructed from lineage tracing all of the cells of an embryo, reveal  which tissues descend from each cell of the embryo.  Although fate maps ...

Autonomously Bioluminescent Mammalian Cells for Continuous and Real-time Monitoring of Cytotoxicity

خلايا الثدييات إضاءة الحيوية مستقل للمراقبة المستمرة وريال مدريد في الوقت السمسة

Mammalian  cell-based in vitro assays have been  widely employed as alternatives to animal testing for toxicological studies but  have been limited due to ...