Name: methods for rearing the parasitoid ganaspis brasiliensis, a promising biological control agent for the invasive drosophila suzukii
Uploaded: 2022-06-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Methods for Rearing the Parasitoid Ganaspis brasiliensis, a Promising Biological Control Agent for the Invasive Drosophila suzukii at JoVE.com

Los autores agradecen a Lukas Seehausen y Marc Kenis (CABI, Suiza) por proporcionar amablemente G1 G. brasiliensis. El financiamiento en Italia fue proporcionado por la Provincia Autonoma di Trento, Trento, Italia, y en los Estados Unidos por el Instituto Nacional de Alimentos y Agricultura, el premio de la Iniciativa de Investigación de Cultivos Especializados del USDA (# 2020-5118-32140), el Servicio de Inspección de Sanidad Animal y Vegetal del USDA (Farm Bill, fondo 14-8130-0463) y los fondos base del ARS CRIS del USDA (proyecto 8010-22000-033-00D). El USDA es un proveedor y empleador de igualdad de oportunidades y no respalda los productos mencionados en esta publicación.

1. Métodos para la cría en laboratorio a pequeña escala de G3 Ganaspis brasiliensis
<ol><li>Prepare la dieta del anfitrión.<ol>
<li>Agregue 600 ml de agua destilada a un recipiente de vidrio de 1,500 ml y caliente el agua en una placa caliente.</li>
		<li>Añadir 88,6 g de dieta seca disponible comercialmente (a base de agar, levadura de cerveza, harina de maíz, metilparabeno y sacarosa) o preparar la dieta utilizando la fórmula publicada por Dalton et al.28 (véa...

<ol>
	<li>Asplen, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invasion+biology+of+spotted+wing+drosophila+(Drosophila+suzukii):+a+global+perspective+and+future+priorities.">Invasion biology of spotted wing drosophila (Drosophila suzukii): a global perspective and future priorities.</a> Journal of Pest Science. 88 (3), 469-494 (2015).</li><li>Tait, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+suzukii+(Diptera:+Drosophilidae):+A+decade+of+research+towards+a+sustainable+integrated+pest+management+program.">Drosophila suzukii (Diptera: Drosophilidae): A decade of research towards a sustainable integrated pest management program.</a> Journal of Economic Entomology. 114 (5), 1950-1974 (2021).</li><li>Kirschbaum, D. S., Funes, C. F., Buonocore-Biancheri, M. J., Su&#225;rez, L., Ovruski, S. M., Garcia, F. R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biology+and+ecology+of+Drosophila+suzukii+(Diptera:+Drosophilidae).">The biology and ecology of Drosophila suzukii (Diptera: Drosophilidae).</a> Drosophila suzukii management. , 41-92 (2020).</li><li>Wang, X. G., Lee, J. C., Daane, K. M., Buffington, M. L., Hoelmer, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+control+of+Drosophila+suzukii.">Biological control of Drosophila suzukii.</a> CAB Reviews. 15, 054 (2020).</li><li>Lee, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+control+of+spotted-wing+drosophila+(Diptera:+Drosophilidae):+Current+and+pending+tactics.">Biological control of spotted-wing drosophila (Diptera: Drosophilidae): Current and pending tactics.</a> Journal of Integreated Pest Management. 10 (1), 13 (2019).</li><li>Wang, X. G., Lee, J. C., Daane, K. M., Hoelmer, K. A., Garcia, F. R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+control+of+spotted-wing+drosophila:+An+update+on+promising+agents.">Biological control of spotted-wing drosophila: An update on promising agents.</a> Drosophilia suzukii management. , 143-167 (2020).</li><li>Daane, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+exploration+of+parasitoids+of+Drosophila+suzukii+in+South+Korea+as+potential+classical+biological+agents.">First exploration of parasitoids of Drosophila suzukii in South Korea as potential classical biological agents.</a> Journal of Pest Science. 89 (3), 823-835 (2016).</li><li>Giorgini, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploration+for+native+parasitoids+of+Drosophila+suzukii+in+China+reveals+a+diversity+of+parasitoid+species+and+narrow+host+range+of+the+dominant+parasitoid.">Exploration for native parasitoids of Drosophila suzukii in China reveals a diversity of parasitoid species and narrow host range of the dominant parasitoid.</a> Journal of Pest Science. 92 (2), 509-522 (2019).</li><li>Girod, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+parasitoid+complex+of+D.+suzukii+and+other+fruit+feeding+Drosophila+species+in+Asia.">The parasitoid complex of D. suzukii and other fruit feeding Drosophila species in Asia.</a> Scientific Reports. 8 (1), 11839 (2018).</li><li>Kacsoh, B. Z., Schlenke, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+hemocyte+load+is+associated+with+increased+resistance+against+parasitoids+in+Drosophila+suzukii,+a+relative+of+D.+melanogaster.">High hemocyte load is associated with increased resistance against parasitoids in Drosophila suzukii, a relative of D. melanogaster.</a> PLoS ONE. 7 (4), 34721 (2012).</li><li>Buffington, M. L., Forshage, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Redescription+of+Ganaspis+brasiliensis+(Ihering,+1905),+new+combination+(Hymenoptera:+Figitidae),+a+natural+enemy+of+the+invasive+Drosophila+suzukii+(Matsumura,+1931)(Diptera:+Drosophilidae).">Redescription of Ganaspis brasiliensis (Ihering, 1905), new combination (Hymenoptera: Figitidae), a natural enemy of the invasive Drosophila suzukii (Matsumura, 1931)(Diptera: Drosophilidae).</a> Procedings of the Entomoogical Society of Washington. 118 (1), 1-13 (2016).</li><li>Biondi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+olfactory+responses+of+Asobara+japonica+(Hymenoptera:+Braconidae)towards+fruits+infested+by+the+invasive+spotted+wing+drosophila.">Innate olfactory responses of Asobara japonica (Hymenoptera: Braconidae)towards fruits infested by the invasive spotted wing drosophila.</a> Journal of Insect Behavior. 30 (5), 495-506 (2017).</li><li>Biondi, A., Wang, X. G., Daane, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+preference+of+three+Asian+larval+parasitoids+to+closely+related+Drosophila+species:+implications+for+biological+control+of+Drosophila+suzukii.">Host preference of three Asian larval parasitoids to closely related Drosophila species: implications for biological control of Drosophila suzukii.</a> Journal of Pest Science. 94 (2), 273-283 (2021).</li><li>Girod, P., Rossignaud, L., Haye, T., Turlings, T. C. J., Kenis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+Asian+parasitoids+in+larvae+of+Drosophila+suzukii+feeding+on+blueberry+and+artificial+diet.">Development of Asian parasitoids in larvae of Drosophila suzukii feeding on blueberry and artificial diet.</a> Journal of Applied Entomology. 142 (5), 483-494 (2018).</li><li>Wang, X. G., Nance, A. H., Jones, J. M. L., Hoelmer, K. A., Daane, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aspects+of+the+biology+and+reproductive+strategy+of+two+Asian+larval+parasitoids+evaluated+for+classical+biological+control+of+Drosophila+suzukii.">Aspects of the biology and reproductive strategy of two Asian larval parasitoids evaluated for classical biological control of Drosophila suzukii.</a> Biological Control. 121, 58-65 (2018).</li><li>Wang, X. G., Biondi, A., Daane, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+responses+of+three+candidate+Asian+larval+parasitoids+evaluated+for+classical+biological+control+of+Drosophila+suzukii.">Functional responses of three candidate Asian larval parasitoids evaluated for classical biological control of Drosophila suzukii.</a> Journal of Economic Entomology. 113 (1), 73-80 (2020).</li><li>Wang, X. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+Asobara+japonica+as+a+potential+biological+control+agent+for+the+spotted+wing+drosophila,+Drosophila+suzukii.">Assessment of Asobara japonica as a potential biological control agent for the spotted wing drosophila, Drosophila suzukii.</a> Entomologia Generalis. 41, 1-12 (2021).</li><li>Hougardy, E., Hogg, B. N., Wang, X. G., Daane, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+thermal+performances+of+two+Asian+larval+parasitoids+of+Drosophila+suzukii.">Comparison of thermal performances of two Asian larval parasitoids of Drosophila suzukii.</a> Biological Control. 136, 104000 (2019).</li><li>Wang, X. G., Hogg, B. N., Hougardy, E., Nance, A. H., Daane, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+competitive+outcomes+among+three+solitary+larval+endoparasitoids+as+candidate+agents+for+classical+biological+control+of+Drosophila+suzukii.">Potential competitive outcomes among three solitary larval endoparasitoids as candidate agents for classical biological control of Drosophila suzukii.</a> Biological Control. 130, 18-26 (2019).</li><li>Daane, K. M., Biondi, A., Wang, X. G., Hogg, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+host+ranges+of+three+Asian+larval+parasitoids+of+Drosophila+suzukii.">Potential host ranges of three Asian larval parasitoids of Drosophila suzukii.</a> Journal of Pest Science. 94 (4), 1171-1182 (2021).</li><li>Girod, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+specificity+of+Asian+parasitoids+for+potential+classical+biological+control+of+Drosophila+suzukii.">Host specificity of Asian parasitoids for potential classical biological control of Drosophila suzukii.</a> Journal of Pest Science. 91 (4), 1241-1250 (2018).</li><li>Seehausen, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+a+cryptic+parasitoid+species+reveals+its+suitability+as+a+biological+control+agent.">Evidence for a cryptic parasitoid species reveals its suitability as a biological control agent.</a> Scientific Reports. 10 (1), 19096 (2020).</li><li>Nomano, F. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+differentiation+of+Ganaspis+brasiliensis+(Hymenoptera:+Figitidae)+from+East+and+Southeast+Asia.">Genetic differentiation of Ganaspis brasiliensis (Hymenoptera: Figitidae) from East and Southeast Asia.</a> Applied Entomology and Zoology. 52 (3), 429-437 (2017).</li><li>Kasuya, N., Mitsui, H., Ideo, S., Watada, M., Kimura, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecological,+morphological+and+molecular+studies+on+Ganaspis+individuals+(Hymenoptera:+Figitidae)+attacking+Drosophila+suzukii+(Diptera:+Drosophilidae).">Ecological, morphological and molecular studies on Ganaspis individuals (Hymenoptera: Figitidae) attacking Drosophila suzukii (Diptera: Drosophilidae).</a> Applied Entomology and Zoology. 48 (1), 87-92 (2013).</li><li>Matsuura, A., Mitsui, H., Kimura, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+preliminary+study+on+distributions+and+oviposition+sites+of+Drosophila+suzukii+(Diptera:+Drosophilidae)+and+its+parasitoids+on+wild+cherry+tree+in+Tokyo,+central+Japan.">A preliminary study on distributions and oviposition sites of Drosophila suzukii (Diptera: Drosophilidae) and its parasitoids on wild cherry tree in Tokyo, central Japan.</a> Applied Entomology and Zoology. 53 (1), 47-53 (2018).</li><li>Abram, P. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+records+of+Leptopilina,+Ganaspis,+and+Asobara+species+associated+with+Drosophila+suzukii+in+North+America,+including+detections+of+L.+japonica+and+G.+brasiliensis.">New records of Leptopilina, Ganaspis, and Asobara species associated with Drosophila suzukii in North America, including detections of L. japonica and G. brasiliensis.</a> Journal of Hymenoptera Research. 78, 1-17 (2020).</li><li>Puppato, S., Grassi, A., Pedrazzoli, F., De Cristofaro, A., Ioriatti, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+report+of+Leptopilina+japonica+in+Europe.">First report of Leptopilina japonica in Europe.</a> Insects. 11 (9), 611 (2020).</li><li>Dalton, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+survival+of+Drosophila+suzukii+under+simulated+winter+conditions+of+the+Pacific+Northwest+and+seasonal+field+trapping+in+five+primary+regions+of+small+and+stone+fruit+production+in+the+United+States.">Laboratory survival of Drosophila suzukii under simulated winter conditions of the Pacific Northwest and seasonal field trapping in five primary regions of small and stone fruit production in the United States.</a> Pest Managagement Science. 67 (11), 1368-1374 (2011).</li></ol>

La investigación a largo plazo y las posteriores liberaciones de campo de un agente de control biológico dependen de la disponibilidad de técnicas de cría eficaces y económicas. Los métodos descritos en este estudio han demostrado ser protocolos eficientes para la cría a pequeña y gran escala de Ganaspis brasiliensis. El protocolo de cría a pequeña escala se ha desarrollado durante varios años para optimizar la cantidad de mano de obra y reducir el equipo especializado necesario para mantener las colo...

Originaria del este de Asia, la drosophila de alas manchadas, Drosophila suzukii (Matsumura) (Diptera: Drosophilidae), se ha establecido ampliamente en las Américas, Europa y partes de África 1,2. La mosca es extremadamente polífaga, siendo capaz de utilizar diversos frutos cultivados y silvestres con pieles suaves y finas en sus regiones nativas e invadidas 1,2,3. Las estrategias actuales de manejo de esta plaga dependen en gran medida del uso frecuente de insecticidas que se dirigen a las moscas adultas en los campos de cultivo cuando la fruta susceptible está madurando. A menudo se utilizan pulverizaciones repetidas, posiblemente debido al derrame constante de las poblaciones de moscas de los embalses de hábitats no agrícolas y la falta de enemigos naturales efectivos residentes en las regiones invadidas 1,4. El control biológico, especialmente mediante parasitoides especializados autoperpetuantes, puede ayudar a suprimir las poblaciones de moscas a nivel de paisaje y desempeñar un papel fundamental para la gestión sostenible en toda el área de esta plaga altamente móvil y polífaga 4,5,6.
Durante la última década, los investigadores han centrado sus esfuerzos en descubrir parasitoides coevolucionados de Drosophila suzukii en los rangos nativos de la mosca en el este de Asia 7,8,9, así como parasitoides efectivos pero recientemente asociados en las regiones invadidas de la mosca en las Américas y Europa 4,5,6. En las regiones recién invadidas de la mosca, los parasitoides larvales de Drosophila que ocurren comúnmente, como Asobara c.f. tabida (Nees) (Hymenoptera: Braconidae), Leptopilina boulardi (Barbotin et al.) y L. heterotoma (Thompson) (Hymenoptera: Figitidae), no pueden desarrollarse o tener niveles bajos de parasitismo en D. suzukii debido a la fuerte resistencia inmune de la mosca10. Solo algunos parasitoides pupales cosmopolitas y generalistas como Pachycrepoideus vindemiae (Rondani) (Hymenoptera: Pteromalidae) y Trichopria drosophilae (Perkins) (Hymenoptera: Diapriidae) en América del Norte y Europa, y Trichopria anastrephae Lima en América del Sur pueden desarrollarse fácilmente a partir de esta mosca4. En contraste, las exploraciones en el este de Asia han descubierto una serie de parasitoides larvales de D. suzukii 4,5,6. Entre ellos, Asobara japonica Belokobylskij, Ganaspis brasiliensis Ihering y Leptopilina japonica Novković & Kimura son los parasitoides larvales dominantes 7,8,9,11. En particular, los dos figitíidos (L. japonica y G. brasiliensis) fueron los principales parasitoides que se encuentran predominantemente en frutas frescas infestadas por D. suzukii y / u otros drosófilos estrechamente relacionados en la vegetación natural 7,8,9. Estos tres parasitoides larvales asiáticos fueron importados a instalaciones de cuarentena en los Estados Unidos y Europa, y evaluados por su eficiencia relativa 12,13,14,15,16,17, adaptabilidad climática18, posibles interacciones competitivas interespecíficas19 y, lo más importante, especificidad del huésped 8,20,21 ,22.
Las evaluaciones de cuarentena mostraron que Ganaspis brasiliensis era más específico del huésped de Drosophila suzukii que otros parasitoides larvales asiáticos probados, aunque probablemente consiste en diferentes biotipos o especies crípticas con especificidad variable del huésped 8,21,22,23,24. Nomano et al.22 agruparon individuos de Ganaspis de diferentes regiones geográficas en cinco grupos genéticos (denominados G1-G5) basados en análisis moleculares del fragmento del gen de la citocromo oxidasa I mitocondrial. Los grupos G2 y G4 se informan solo en unos pocos lugares tropicales del sur de Asia, y el grupo G5 se informó desde Asia y otras regiones (por ejemplo, Argentina, Brasil, Hawai y México) desde huéspedes desconocidos (Buffington, observación personal). Las colecciones de campo de frutas silvestres infestadas por D. suzukii en Corea del Sur7, China8 y Japón 9,23,25 encontraron G1 solo o una mezcla de especímenes que representan los grupos G1 y G3. Los dos grupos parecen ser simpátricos y coexisten en las mismas plantas huésped habitadas por D. suzukii y otras moscas huésped estrechamente relacionadas. No obstante, se han observado algunas diferencias entre los dos grupos, con G1 aparentemente teniendo un mayor grado de especificidad del hábitat del huésped o huésped a D. suzukii que G3, aunque ambos atacan a varias especies estrechamente relacionadas en las pruebas de cuarentena21,22. Los análisis moleculares más detallados pueden ayudar a determinar el estado de la especie, especialmente para los grupos G1 y G3. Este estudio se refiere a ellos como G1 G. brasiliensis y G3 G. brasiliensis. Algunos estudios tempranos también nombraron al G1 G. brasiliensis como G. cf. brasiliensis 14,21,22. El G1 G. brasiliensis ha sido aprobado recientemente para su liberación en campo contra D. suzukii en los Estados Unidos e Italia (varios otros países europeos también están considerando actualmente su introducción), mientras que el G3 G. brasiliensis puede ser considerado para su liberación en campo en un futuro próximo. Encuestas recientes también encontraron poblaciones adventivas de L. japonica y G1 G. brasiliensis en Columbia Británica, Canadá26, y el estado de Washington, EE.UU. (Beers et al., datos no publicados), y poblaciones adventivas de L. japonica en la provincia de Trento, Italia27.
Dado el interés significativo en el desarrollo de programas de control biológico para el manejo de Drosophila suzukii y el potencial sustancial de control biológico de las introducciones adventivas y deliberadas de Ganaspis brasiliensis, existe la necesidad de desarrollar métodos de cría eficientes para este parasitoide larvario para futuras investigaciones a largo plazo y / o liberación de campo. Este protocolo y el artículo de video asociado describen dos conjuntos de métodos de cría para este parasitoide: (1) cría de laboratorio a pequeña escala en frascos utilizando una mezcla de fruta huésped (arándano) y dieta artificial para el cultivo de D. suzukii. Los métodos se desarrollaron utilizando material G3 recolectado originalmente de Kunming, China8. (2) Cría en masa para la liberación en campo en jaulas grandes utilizando fruta huésped (arándano) para el cultivo de D. suzukii. El grupo genético utilizado para la cría a gran escala fue el stock G1 originario de Tokio, Japón 9,22. También se discuten brevemente otras escalas de métodos de cría, como el uso de viales o recipientes pequeños para ambos grupos.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Active dry yeast</td>
			<td>Fleischmanns Yeast, Cincinatti, OH, USA</td>
			<td>None</td>
			<td>Used to cover fruit to reduce mold growth and enhance the frui attraction to the flies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacteriological agar</td>
			<td>Merk Life Science S.r.l., Milan, Italy</td>
			<td>A1296 - 5KG</td>
			<td>Used to prepare the Standard Drosophila Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bleach solution</td>
			<td>Clorox Company, Oakland, CA, USA</td>
			<td>None</td>
			<td>Used to disinfect flesh fruit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blue stopper</td>
			<td>Azer Scientific, Morgantown, PA, USA</td>
			<td>ES3837</td>
			<td>Used for sealing the tube while allowing ventilation for insects</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blueberries</td>
			<td>Grocery Store, Newark, DE, USA</td>
			<td>None</td>
			<td>Provided as host fruit for the flies (various other fruit can also be used)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BugDorm insect rearing cage (W24.5 x D24.5 x H63.0 cm)</td>
			<td>Mega View Science Co. Ltd., Taichung, Taiwan</td>
			<td>4E3030</td>
			<td>Used for rearing parasitoids (parasitism cage)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BugDorm insect rearing cage (W32.5 x D32.5 x H32.5 cm)</td>
			<td>Mega View Science Co. Ltd., Taichung, Taiwan</td>
			<td>4E4590</td>
			<td>Used for rearing flies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BugDorm insect rearing cage (W32.5 x D32.5 x H32.5 cm)</td>
			<td>Mega View Science Co. Ltd., Taichung, Taiwan</td>
			<td>4E4545</td>
			<td>Used for rearing parasitoids (eclosion cage)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken wire (0.64 cm, 19 gauge)</td>
			<td>Everbilt, OH, USA</td>
			<td>308231EB</td>
			<td>Used to lift up the fruit to allow maximum parasitoid oviposition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cornmeal</td>
			<td>Grocery Store, Trento, TN, Italy</td>
			<td>None</td>
			<td>Used to prepare the Standard Drosophila Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental cotton roll (1 x 3.8 cm)</td>
			<td>Gima S.p.A., Gessate, MI, Italy</td>
			<td>35000</td>
			<td>Used for providing water to the parasitoids within the storage container</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drosophila diet</td>
			<td>Frontier Scientific, Newark, DE, USA</td>
			<td>TF1003</td>
			<td>Custom diet used to rear flies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drosophila vial narrow, Polystirene (2.5 x 9.5 cm)</td>
			<td>VWR International, LLC., Radnor, PA, US</td>
			<td>75813-160</td>
			<td>Used for providing water to the parasitoids within the cage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drosophila vial plugs, Cellulose acetate (2.5 cm)</td>
			<td>VWR International, LLC., Radnor, PA, US</td>
			<td>89168-886</td>
			<td>Used for providing water to the parasitoids within the cage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erlenmeyer flask (250 mL)</td>
			<td>Carolina Biological, Burlington, NC, USA</td>
			<td>731029</td>
			<td>Used for rearing flies and parasitoids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon-style centrifuge tube (50 mL)</td>
			<td>VWR International, LLC., Radnor, PA, US</td>
			<td>VWRI525-0611</td>
			<td>Modified to ship adult parasitoids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foam stopper</td>
			<td>Jaece Industries, North Tanawanda, NY, USA</td>
			<td>L800-C</td>
			<td>Used for sealing the flasks while allowing ventilation for insects</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Honey</td>
			<td>Grocery Store, Newark, DE, USA</td>
			<td>None</td>
			<td>Provided as food for parasitoids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Identi-Plug plastic foam stopper</td>
			<td>Fisher Scientific Company, L.L.C., Pittsburg, PA, US</td>
			<td>14-127-40E</td>
			<td>Used as feeder for parasitoids and to seal the storage container</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Industrial paper towel</td>
			<td>Grocery Store, Newark, DE, USA</td>
			<td>None</td>
			<td>Provided as a pupation substrate for pupae and mitigated moisture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micron mesh fabric (250 mL)</td>
			<td>Industrial Netting, Maple Grove, MN, USA</td>
			<td>WN0250-72</td>
			<td>Used to make ventilation lid for insects</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nutritional yeast (flakes)</td>
			<td>Grocery Store, Trento, TN, Italy</td>
			<td>None</td>
			<td>Used to prepare the Standard Drosophila Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper coaster (10.2 cm)</td>
			<td>Hoffmaster, WI, USA</td>
			<td>35NG26</td>
			<td>Porvided as pupation substrate for flies and parsitized pupae</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic cup (&#216; 13.3 cm, 800 mL)</td>
			<td>Berry Superfos, Taastrup, Denmark</td>
			<td>Unipak 5134</td>
			<td>Modified to store adult parasitoids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic lid (&#216; 13.3 cm)</td>
			<td>Berry Superfos, Taastrup, Denmark</td>
			<td>PP 2830</td>
			<td>Modified to store adult parasitoids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propionic acid</td>
			<td>Merk Life Science S.r.l., Milan, Italy</td>
			<td>P1386 - 1L</td>
			<td>Used to prepare the Standard Drosophila Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saccharose</td>
			<td>Grocery Store, Trento, TN, Italy</td>
			<td>None</td>
			<td>Used to prepare the Standard Drosophila Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soup cup with lid (475 mL)</td>
			<td>StackMan, Vietnam</td>
			<td>DC1648</td>
			<td>Used for parasitized larvae to pupate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soybean flour</td>
			<td>Grocery Store, Trento, TN, Italy</td>
			<td>None</td>
			<td>Used to prepare the Standard Drosophila Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>White felt washer (0.64 cm thick, 5 mm ID x 20 mm OD)</td>
			<td>Quiklok, Lincoln, NH, US</td>
			<td>WFW/.25 x 5 x 20 mm</td>
			<td>Used as feeding ring for parasitoids</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

methods for rearing the parasitoid ganaspis brasiliensis, a promising biological control agent for the invasive drosophila suzukii

Originaria del este de Asia, la drosophila de alas manchadas, Drosophila suzukii (Matsumura) (Diptera: Drosophilidae), se ha establecido ampliamente en las Américas, Europa y partes de África durante la última década, convirtiéndose en una plaga devastadora de varias frutas de piel blanda en sus regiones invadidas. Se espera que el control biológico, especialmente por medio de parasitoides especializados y autoperpetuantes, sea una opción viable para el manejo sostenible en toda el área de esta plaga altamente móvil y polífaga. Ganaspis brasiliensis Hymenoptera: Figitidae es un parasitoide larvario que se distribuye ampliamente en el este de Asia, y se ha encontrado que es uno de los parasitoides más efectivos de D. suzukii.
Después de rigurosas evaluaciones previas a la introducción de su eficacia y posibles riesgos no objetivo, uno de los grupos genéticos más específicos del huésped de esta especie (G1 G. brasiliensis) ha sido aprobado recientemente para su introducción y liberación en el campo en los Estados Unidos e Italia. Otro grupo genético (G3 G. brasiliensis), que también se encontró comúnmente para atacar a D. suzukii en el este de Asia, puede ser considerado para su introducción en el futuro cercano. Actualmente existe un enorme interés en la cría de G. brasiliensis para la investigación o en la producción en masa para la liberación en campo contra D. suzukii. Este protocolo y el artículo de video asociado describen métodos de cría efectivos para este parasitoide, tanto a pequeña escala para la investigación como a gran escala para la producción en masa y la liberación en el campo. Estos métodos pueden beneficiar una mayor investigación y uso a largo plazo de este parasitoide nativo de Asia como un agente de control biológico prometedor para esta plaga invasora global.

La Figura 4 muestra resultados representativos de la cría en laboratorio a pequeña escala de G3 Ganaspis brasiliensis utilizando dos densidades parasitoides diferentes (seis o 10 pares) y dos tiempos de exposición diferentes (5 o 10 días) en la instalación de cuarentena de la Unidad de Introducción de Insectos Beneficiosos del USDA-ARS (Newark, Delaware). Hubo 14 réplicas para cada combinación de densidad parasitoide y tiempo de exposición. En total, los 64 matraces produje...

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Methods for Rearing the Parasitoid Ganaspis brasiliensis, a Promising Biological Control Agent for the Invasive Drosophila suzukii

Ganaspis brasiliensis, un parasitoide larvario de Drosophila suzukii (una plaga mundial de cultivos frutales invasores), ha sido aprobado o se considera para su introducción en Europa y los Estados Unidos para el control biológico de esta plaga. Este artículo proporciona protocolos para la cría a pequeña y gran escala de este parasitoide.

Métodos para la cría del parasitoide Ganaspis brasiliensis, un prometedor agente de control biológico para la Drosophila suzukii invasora

Native to East Asia, the spotted-wing drosophila, Drosophila suzukii (Matsumura) (Diptera: Drosophilidae), has established widely in the Americas, Europe, ...

La investigación a largo plazo y el uso de un agente de biocontrol dependen de la disponibilidad de técnicas de cría efectivas y económicas, y este protocolo ha demostrado ser eficiente para la cría de este parasitoide. Actualmente existe un enorme interés en la cría de este parasitoide para investigación o liberación en campo, y el protocolo beneficiará la investigación futura a largo plazo y el uso de este prometedor agente de biocontrol. Los primeros usuarios pueden necesitar comprender algo de biología básica de los insectos involucrados a través de la lectura de las referencias relevantes proporcionadas en el artículo y algunas prácticas de los métodos.Para hacer la dieta del huésped, primero, prepare la porción líquida de la dieta como se describe en el manuscrito. A continuación, agregue de 25 a 30 gramos de puré de arándanos a un matraz vacío de 250 mililitros. Luego, vierta el líquido en el matraz con el líquido simplemente cubriendo la parte superior del puré de arándanos.A continuación, para criar al anfitrión Drosophila suzuki, primero corte un trozo de toalla de papel absorbente y gírelo en el centro. Luego, coloque la sección central retorcida de la toalla de papel en el matraz de dieta. Para retener la humedad, use agua destilada para mojar la toalla de papel y la dieta.Luego, para transferir moscas adultas sexualmente maduras, retire cuidadosamente el tapón de un matraz de colonia de moscas e invierta en el matraz de dieta. Después de una semana de esta exposición, mantenga las moscas en una cámara ambiental durante tres semanas para la emergencia de moscas. Para exponer la larva huésped a los parasitoides, primero retire las moscas adultas y la toalla de papel del matraz, dejando los huevos y larvas de mosca.Para servir como sustrato de pupación para las larvas, doble una nueva toalla de papel absorbente e insértela en el matraz. Luego aspire seis pares femeninos y masculinos del parasitoide G3 Ganaspis brasiliensis en el matraz y raye una fina capa de miel en la parte inferior del tapón de espuma. Para recolectar y almacenar los parasitoides, retire a los adultos después de cinco días.Luego guarde el matraz en la cámara ambiental durante 35 días en las condiciones mencionadas anteriormente. Con la aparición de avispas adultas, aspirarlas tres veces por semana. Para sostener las avispas, primero coloque una toalla de papel humedecida pero no saturada con agua destilada en el fondo de un vial de Drosophila de 2.5 por 9.5 centímetros cuadrados.Luego, transfiera alrededor de 60 avispas al vial y marque la fecha de emergencia. Guarde el vial en la cámara ambiental. Dos veces por semana, cubra una capa delgada de miel en la parte inferior del tapón de espuma de los viales.Primero, organice la cría a gran escala de Drosophila suzuki colocando de 1, 500 a 2, 000 moscas adultas sexualmente maduras en una proporción de sexos de 50:50 en una jaula grande, tejida y cubierta de malla. Luego, coloque un plato con algodón empapado en agua y de cuatro a seis placas de Petri con el medio Drosophila estándar en la jaula. Dos veces por semana, reemplace las placas de Petri expuestas por otras frescas.Coloque cada placa de Petri infestada sin la tapa en un vaso de plástico de 800 mililitros y cubra la taza con una malla fina. Luego, incuba las tazas a 23 grados centígrados y 75% de humedad relativa durante 12 a 15 días. Después de la incubación, transfiera el adulto Drosophila suzuki recién nacido a una jaula de cría.A continuación, comience a preparar las larvas del huésped enjuagando los arándanos en agua fría durante un minuto y remoje las frutas en un recipiente lleno de una solución de lejía, diluida al 5% durante tres minutos. Luego, llene las placas de Petri de nueve centímetros con los arándanos lavados. En las últimas horas de la tarde, coloque las placas de Petri en la jaula de cría y déjelas durante la noche.A la mañana siguiente, toque suavemente las placas de Petri para desalojar las moscas de las frutas y retire las frutas de la jaula de cría. Mientras tanto, prepare una jaula de parasitismo y una jaula de emergencia de avispa para el parasitoide G1 Ganaspis brasiliensis. Ambas jaulas deben tener una cuerda delgada debajo del techo para suspender uno o más comederos.En cada jaula, suspenda un vial de Drosophila que contenga agua y selle con un tapón de acetato de celulosa boca abajo desde el techo cada cinco a siete días, dependiendo de la humedad relativa. Inmediatamente después de sacar los arándanos infestados de la jaula de Drosophila suzuki, colóquelos en la jaula de parasitismo con 1, 500 a 2, 000 avispas Ganaspis brasiliensis durante dos o tres días. A continuación, recoja las frutas en un vaso de plástico de 800 mililitros con papel absorbente en la parte inferior.Incubar la copa abierta en la jaula de emergencia o eclosión a 21 grados centígrados y 65% de humedad relativa durante al menos 28 días. Durante la segunda y tercera semana de incubación, revise la jaula semanalmente para detectar la eclosión temprana del huésped. Para facilitar la recolección sucesiva de parasitoides, retire las moscas adultas.Al final de la cuarta semana de incubación, proporcione un comedero y una fuente de agua a la jaula. Recolecte alrededor del 10 al 15% de las avispas adultas y transfiéralas a la jaula de parasitismo para reemplazar a las avispas viejas e improductivas. De las avispas restantes de la jaula de eclosión, almacene hasta 700 adultos en una proporción de sexos de 50:50 con un vaso de plástico de 800 mililitros que contenga un tubo de dos mililitros lleno de agua y sellado con un rollo de algodón dental en la parte inferior de la taza.Guarde la taza con un marcado estado de emergencia en una cámara ambiental durante un máximo de un mes. Para el envío de parasitoides, coloque a unos 200 adultos en un tubo cónico de 50 mililitros. Luego, coloque todos los tubos en un contenedor de envío aislante junto con bolsas de hielo.Este protocolo resultó en una cría exitosa a pequeña escala de G3 Ganaspis brasiliensis, un agente parasitoide, contra la plaga agrícola Drosophila suzuki en el laboratorio. La producción de descendencia no se vio afectada por las diferencias en la densidad de parasitoides y el tiempo de exposición. También se podría lograr la generación a gran escala de G1 Ganaspis brasiliensis, con la producción comenzando cinco semanas después de la exposición inicial al huésped Drosophila suzuki.Desde la semana 8 hasta la semana 22, la producción de parasitoides se hizo proporcional a la cantidad de fruta expuesta a ellos. Es de vital importancia mantener una temperatura de cría adecuada, controlar la humedad y siempre proporcionar alimento para los insectos adultos. Los métodos podrían mejorarse aún más optimizando las densidades de cría del huésped y el parasitoide para maximizar la reproducción de las avispas y explorando la posibilidad de criar este parasitoide en huéspedes alternativos.

Research

JoVE Journal

Biology

Methods for Rearing the Parasitoid Ganaspis brasiliensis, a Promising Biological Control Agent for the Invasive Drosophila suzukii

Protocol for Mosquito Rearing (A. gambiae)

Protocol for Mosquito Rearing A. gambiae

Protocolo para la cría de los mosquitos (A. gambiae)

This protocol describes mosquito rearing in the insectary. The insectary rooms are maintained at 28&deg;C and ~80% humidity, with a 12 hr. day/night ...

Investigación

Biología

Labeling hESCs and hMSCs with Iron Oxide Nanoparticles for Non-Invasive in vivo Tracking with MR Imaging

Etiquetado y hESCs hMSCs con nanopartículas de óxido de hierro para no invasivo en el seguimiento in vivo mediante RM

In recent years, stem cell research has led to a better understanding of developmental biology, various diseases and its potential impact on regenerative ...

Labeling Stem Cells with Fluorescent Dyes for non-invasive Detection with Optical Imaging

Etiquetado de las células madre con tintes fluorescentes para la detección no invasiva con imágenes ópticas

Optical imaging (OI) is an easy, fast and inexpensive tool for in vivo monitoring of new stem cell based therapies. The technique is based on ex vivo ...

Electrophysiological Methods for Recording Synaptic Potentials from the NMJ of Drosophila Larvae

Los métodos electrofisiológicos para la grabación de los potenciales sinápticos de la UNM de larvas de Drosophila

In this video, we describe the electrophysiological methods for recording synaptic transmission at the neuromuscular junction (NMJ) of Drosophila larva. ...

Electrophysiological Recording in the Drosophila Embryo

Electrophysiological Recording in the Drosophila Embryo

Registro electrofisiológico en el Drosophila Embrión

Drosophila is a premier genetic model for the study of both embryonic development and functional neuroscience. Traditionally, these fields are quite ...

Visualizing the Beating Heart in Drosophila

Visualizing the Beating Heart in Drosophila

Visualizar el corazón latiendo en Drosophila</em

The Drosophila heart has recently emerged as a good model system for examining the genetic, cellular, and molecular mechanisms underlying function in ...

Methods for the Study of the Zebrafish Maxillary Barbel

Métodos para el Estudio de la barbo pez cebra maxilar

Barbels are skin sensory appendages found in fishes, reptiles and amphibians.  The zebrafish, Danio rerio, develops two pairs of barbels- a short nasal ...

An Optimized Protocol for Rearing Fopius arisanus, a Parasitoid of Tephritid Fruit Flies

An Optimized Protocol for Rearing Fopius arisanus, a Parasitoid of Tephritid Fruit Flies

Un protocolo optimizado para cría Fopius arisanus, Un parasitoide de moscas de fruta tefrítidas

Fopius arisanus (Sonan) is an important parasitoid of Tephritid fruit flies for at least two reasons. First, it is the one of only three opiine ...

Blastomere Explants to Test for Cell Fate Commitment During Embryonic Development

Los explantes blastómeras para la Prueba de Compromiso destino celular durante el desarrollo embrionario

Fate maps, constructed from lineage tracing all of the cells of an embryo, reveal  which tissues descend from each cell of the embryo.  Although fate maps ...

Autonomously Bioluminescent Mammalian Cells for Continuous and Real-time Monitoring of Cytotoxicity

Las células de mamíferos bioluminiscentes manera autónoma para la monitorización continua y en tiempo real de citotoxicidad

Mammalian  cell-based in vitro assays have been  widely employed as alternatives to animal testing for toxicological studies but  have been limited due to ...