Name: methods for rearing the parasitoid ganaspis brasiliensis, a promising biological control agent for the invasive drosophila suzukii
Uploaded: 2022-06-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Methods for Rearing the Parasitoid Ganaspis brasiliensis, a Promising Biological Control Agent for the Invasive Drosophila suzukii at JoVE.com

Författarna tackar Lukas Seehausen och Marc Kenis (CABI, Schweiz) för att de vänligen tillhandahöll G1 G. brasiliensis. Finansiering i Italien tillhandahölls av Provincia Autonoma di Trento, Trento, Italien, och i USA av National Institute of Food and Agriculture, USDA Specialty Crops Research Initiative award (#2020-5118-32140), USDA Animal and Plant Health Inspection Service (Farm Bill, fond 14-8130-0463) och USDA ARS CRIS basfonder (projekt 8010-22000-033-00D). USDA är en leverantör av lika möjligheter och arbetsgivare och stöder inte produkter som nämns i denna publikation.

1. Metoder för småskalig laboratorieuppfödning av G3 Ganaspis brasiliensis
<ol><li>Förbered värddiet.<ol>
<li>Tillsätt 600 ml destillerat vatten i en 1 500 ml glasbehållare och värm vattnet på en kokplatta.</li>
		<li>Tillsätt 88,6 g kommersiellt tillgänglig torr kost (gjord av agar, bryggerjäst, majsmjöl, metylparaben och sackaros) eller förbered diet med den formel som publicerats av Dalton et al.28 (se steg 2.1.2).</li>
		<li>Tillsätt 300 ml destillera...

<ol>
	<li>Asplen, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invasion+biology+of+spotted+wing+drosophila+(Drosophila+suzukii):+a+global+perspective+and+future+priorities.">Invasion biology of spotted wing drosophila (Drosophila suzukii): a global perspective and future priorities.</a> Journal of Pest Science. 88 (3), 469-494 (2015).</li><li>Tait, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+suzukii+(Diptera:+Drosophilidae):+A+decade+of+research+towards+a+sustainable+integrated+pest+management+program.">Drosophila suzukii (Diptera: Drosophilidae): A decade of research towards a sustainable integrated pest management program.</a> Journal of Economic Entomology. 114 (5), 1950-1974 (2021).</li><li>Kirschbaum, D. S., Funes, C. F., Buonocore-Biancheri, M. J., Su&#225;rez, L., Ovruski, S. M., Garcia, F. R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biology+and+ecology+of+Drosophila+suzukii+(Diptera:+Drosophilidae).">The biology and ecology of Drosophila suzukii (Diptera: Drosophilidae).</a> Drosophila suzukii management. , 41-92 (2020).</li><li>Wang, X. G., Lee, J. C., Daane, K. M., Buffington, M. L., Hoelmer, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+control+of+Drosophila+suzukii.">Biological control of Drosophila suzukii.</a> CAB Reviews. 15, 054 (2020).</li><li>Lee, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+control+of+spotted-wing+drosophila+(Diptera:+Drosophilidae):+Current+and+pending+tactics.">Biological control of spotted-wing drosophila (Diptera: Drosophilidae): Current and pending tactics.</a> Journal of Integreated Pest Management. 10 (1), 13 (2019).</li><li>Wang, X. G., Lee, J. C., Daane, K. M., Hoelmer, K. A., Garcia, F. R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+control+of+spotted-wing+drosophila:+An+update+on+promising+agents.">Biological control of spotted-wing drosophila: An update on promising agents.</a> Drosophilia suzukii management. , 143-167 (2020).</li><li>Daane, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+exploration+of+parasitoids+of+Drosophila+suzukii+in+South+Korea+as+potential+classical+biological+agents.">First exploration of parasitoids of Drosophila suzukii in South Korea as potential classical biological agents.</a> Journal of Pest Science. 89 (3), 823-835 (2016).</li><li>Giorgini, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploration+for+native+parasitoids+of+Drosophila+suzukii+in+China+reveals+a+diversity+of+parasitoid+species+and+narrow+host+range+of+the+dominant+parasitoid.">Exploration for native parasitoids of Drosophila suzukii in China reveals a diversity of parasitoid species and narrow host range of the dominant parasitoid.</a> Journal of Pest Science. 92 (2), 509-522 (2019).</li><li>Girod, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+parasitoid+complex+of+D.+suzukii+and+other+fruit+feeding+Drosophila+species+in+Asia.">The parasitoid complex of D. suzukii and other fruit feeding Drosophila species in Asia.</a> Scientific Reports. 8 (1), 11839 (2018).</li><li>Kacsoh, B. Z., Schlenke, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+hemocyte+load+is+associated+with+increased+resistance+against+parasitoids+in+Drosophila+suzukii,+a+relative+of+D.+melanogaster.">High hemocyte load is associated with increased resistance against parasitoids in Drosophila suzukii, a relative of D. melanogaster.</a> PLoS ONE. 7 (4), 34721 (2012).</li><li>Buffington, M. L., Forshage, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Redescription+of+Ganaspis+brasiliensis+(Ihering,+1905),+new+combination+(Hymenoptera:+Figitidae),+a+natural+enemy+of+the+invasive+Drosophila+suzukii+(Matsumura,+1931)(Diptera:+Drosophilidae).">Redescription of Ganaspis brasiliensis (Ihering, 1905), new combination (Hymenoptera: Figitidae), a natural enemy of the invasive Drosophila suzukii (Matsumura, 1931)(Diptera: Drosophilidae).</a> Procedings of the Entomoogical Society of Washington. 118 (1), 1-13 (2016).</li><li>Biondi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+olfactory+responses+of+Asobara+japonica+(Hymenoptera:+Braconidae)towards+fruits+infested+by+the+invasive+spotted+wing+drosophila.">Innate olfactory responses of Asobara japonica (Hymenoptera: Braconidae)towards fruits infested by the invasive spotted wing drosophila.</a> Journal of Insect Behavior. 30 (5), 495-506 (2017).</li><li>Biondi, A., Wang, X. G., Daane, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+preference+of+three+Asian+larval+parasitoids+to+closely+related+Drosophila+species:+implications+for+biological+control+of+Drosophila+suzukii.">Host preference of three Asian larval parasitoids to closely related Drosophila species: implications for biological control of Drosophila suzukii.</a> Journal of Pest Science. 94 (2), 273-283 (2021).</li><li>Girod, P., Rossignaud, L., Haye, T., Turlings, T. C. J., Kenis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+Asian+parasitoids+in+larvae+of+Drosophila+suzukii+feeding+on+blueberry+and+artificial+diet.">Development of Asian parasitoids in larvae of Drosophila suzukii feeding on blueberry and artificial diet.</a> Journal of Applied Entomology. 142 (5), 483-494 (2018).</li><li>Wang, X. G., Nance, A. H., Jones, J. M. L., Hoelmer, K. A., Daane, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aspects+of+the+biology+and+reproductive+strategy+of+two+Asian+larval+parasitoids+evaluated+for+classical+biological+control+of+Drosophila+suzukii.">Aspects of the biology and reproductive strategy of two Asian larval parasitoids evaluated for classical biological control of Drosophila suzukii.</a> Biological Control. 121, 58-65 (2018).</li><li>Wang, X. G., Biondi, A., Daane, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+responses+of+three+candidate+Asian+larval+parasitoids+evaluated+for+classical+biological+control+of+Drosophila+suzukii.">Functional responses of three candidate Asian larval parasitoids evaluated for classical biological control of Drosophila suzukii.</a> Journal of Economic Entomology. 113 (1), 73-80 (2020).</li><li>Wang, X. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+Asobara+japonica+as+a+potential+biological+control+agent+for+the+spotted+wing+drosophila,+Drosophila+suzukii.">Assessment of Asobara japonica as a potential biological control agent for the spotted wing drosophila, Drosophila suzukii.</a> Entomologia Generalis. 41, 1-12 (2021).</li><li>Hougardy, E., Hogg, B. N., Wang, X. G., Daane, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+thermal+performances+of+two+Asian+larval+parasitoids+of+Drosophila+suzukii.">Comparison of thermal performances of two Asian larval parasitoids of Drosophila suzukii.</a> Biological Control. 136, 104000 (2019).</li><li>Wang, X. G., Hogg, B. N., Hougardy, E., Nance, A. H., Daane, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+competitive+outcomes+among+three+solitary+larval+endoparasitoids+as+candidate+agents+for+classical+biological+control+of+Drosophila+suzukii.">Potential competitive outcomes among three solitary larval endoparasitoids as candidate agents for classical biological control of Drosophila suzukii.</a> Biological Control. 130, 18-26 (2019).</li><li>Daane, K. M., Biondi, A., Wang, X. G., Hogg, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+host+ranges+of+three+Asian+larval+parasitoids+of+Drosophila+suzukii.">Potential host ranges of three Asian larval parasitoids of Drosophila suzukii.</a> Journal of Pest Science. 94 (4), 1171-1182 (2021).</li><li>Girod, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+specificity+of+Asian+parasitoids+for+potential+classical+biological+control+of+Drosophila+suzukii.">Host specificity of Asian parasitoids for potential classical biological control of Drosophila suzukii.</a> Journal of Pest Science. 91 (4), 1241-1250 (2018).</li><li>Seehausen, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+a+cryptic+parasitoid+species+reveals+its+suitability+as+a+biological+control+agent.">Evidence for a cryptic parasitoid species reveals its suitability as a biological control agent.</a> Scientific Reports. 10 (1), 19096 (2020).</li><li>Nomano, F. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+differentiation+of+Ganaspis+brasiliensis+(Hymenoptera:+Figitidae)+from+East+and+Southeast+Asia.">Genetic differentiation of Ganaspis brasiliensis (Hymenoptera: Figitidae) from East and Southeast Asia.</a> Applied Entomology and Zoology. 52 (3), 429-437 (2017).</li><li>Kasuya, N., Mitsui, H., Ideo, S., Watada, M., Kimura, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecological,+morphological+and+molecular+studies+on+Ganaspis+individuals+(Hymenoptera:+Figitidae)+attacking+Drosophila+suzukii+(Diptera:+Drosophilidae).">Ecological, morphological and molecular studies on Ganaspis individuals (Hymenoptera: Figitidae) attacking Drosophila suzukii (Diptera: Drosophilidae).</a> Applied Entomology and Zoology. 48 (1), 87-92 (2013).</li><li>Matsuura, A., Mitsui, H., Kimura, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+preliminary+study+on+distributions+and+oviposition+sites+of+Drosophila+suzukii+(Diptera:+Drosophilidae)+and+its+parasitoids+on+wild+cherry+tree+in+Tokyo,+central+Japan.">A preliminary study on distributions and oviposition sites of Drosophila suzukii (Diptera: Drosophilidae) and its parasitoids on wild cherry tree in Tokyo, central Japan.</a> Applied Entomology and Zoology. 53 (1), 47-53 (2018).</li><li>Abram, P. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+records+of+Leptopilina,+Ganaspis,+and+Asobara+species+associated+with+Drosophila+suzukii+in+North+America,+including+detections+of+L.+japonica+and+G.+brasiliensis.">New records of Leptopilina, Ganaspis, and Asobara species associated with Drosophila suzukii in North America, including detections of L. japonica and G. brasiliensis.</a> Journal of Hymenoptera Research. 78, 1-17 (2020).</li><li>Puppato, S., Grassi, A., Pedrazzoli, F., De Cristofaro, A., Ioriatti, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+report+of+Leptopilina+japonica+in+Europe.">First report of Leptopilina japonica in Europe.</a> Insects. 11 (9), 611 (2020).</li><li>Dalton, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+survival+of+Drosophila+suzukii+under+simulated+winter+conditions+of+the+Pacific+Northwest+and+seasonal+field+trapping+in+five+primary+regions+of+small+and+stone+fruit+production+in+the+United+States.">Laboratory survival of Drosophila suzukii under simulated winter conditions of the Pacific Northwest and seasonal field trapping in five primary regions of small and stone fruit production in the United States.</a> Pest Managagement Science. 67 (11), 1368-1374 (2011).</li></ol>

Långsiktig forskning och efterföljande fältutsläpp av ett biologiskt bekämpningsmedel är beroende av tillgången till effektiva och ekonomiska uppfödningstekniker. De beskrivna metoderna i denna studie har visat sig vara effektiva protokoll för både småskalig och storskalig uppfödning av Ganaspis brasiliensis. Det småskaliga uppfödningsprotokollet har utvecklats under flera år för att optimera mängden arbetskraft och minska specialutrustning som behövs för att upprätthålla parasitoid- och vä...

Infödd i Östasien har den fläckiga vingen drosophila, Drosophila suzukii (Matsumura) (Diptera: Drosophilidae), etablerat sig i stor utsträckning i Amerika, Europa och delar av Afrika 1,2. Flugan är extremt polyfagisk och kan använda olika odlade och vilda frukter med mjuka och tunna skinn i sina inhemska och invaderade regioner 1,2,3. Nuvarande förvaltningsstrategier för detta skadedjur är starkt beroende av den frekventa användningen av insekticider som riktar sig mot vuxna flugor i grödor när mottaglig frukt mognar. Upprepade sprayer används ofta, möjligen på grund av konsekvent spridning av reservoarflugpopulationer från icke-grödor och brist på effektiva naturliga fiender bosatta i de invaderade regionerna 1,4. Biologisk bekämpning, särskilt med hjälp av självförstärkande specialiserade parasitoider, kan hjälpa till att undertrycka flugpopulationer på landskapsnivå och spela en avgörande roll för hållbar områdesomfattande hantering av denna mycket mobila och polyfagiskaskadedjur 4,5,6.
Under det senaste decenniet har forskare fokuserat ansträngningar för att upptäcka samutvecklade parasitoider av Drosophila suzukii i flugans inhemska områden i Östasien 7,8,9, liksom effektiva men nyligen associerade parasitoider i flugans invaderade regioner i Amerika och Europa 4,5,6. I flugans nyligen invaderade regioner kan vanligt förekommande larval Drosophila parasitoider, såsom Asobara c.f. tabida (Nees) (Hymenoptera: Braconidae), Leptopilina boulardi (Barbotin et al.) och L. heterotoma (Thompson) (Hymenoptera: Figitidae), inte utvecklas från eller ha låga parasitismnivåer på D. suzukii på grund av flugans starka immunresistens10. Endast vissa kosmopolitiska och generalistiska puppasparoider som Pachycrepoideus vindemiae (Rondani) (Hymenoptera: Pteromalidae) och Trichopria drosophilae (Perkins) (Hymenoptera: Diapriidae) i Nordamerika och Europa, och Trichopria anastrephae Lima i Sydamerika kan lätt utvecklas från denna fluga4. Däremot har utforskningar i Östasien upptäckt ett antal larvparasitoider från D. suzukii 4,5,6. Bland dem är Asobara japonica Belokobylskij, Ganaspis brasiliensis Ihering och Leptopilina japonica Novković & Kimura de dominerande larvparasitoiderna 7,8,9,11. I synnerhet var de två figitiderna (L. japonica och G. brasiliensis) de viktigaste parasitoiderna som främst hittades i färska frukter infekterade av D. suzukii och/eller andra närbesläktade drosofilider i naturlig vegetation 7,8,9. Dessa tre asiatiska larvparasitoider importerades till karantänanläggningar i USA och Europa och utvärderades för deras relativa effektivitet 12,13,14,15,16,17, klimatanpassningsförmåga18, potentiella interspecifika konkurrensinteraktioner19 och, viktigast av allt, värdspecificitet 8,20,21 ,22.
Karantänutvärderingar visade att Ganaspis brasiliensis var mer värdspecifik för Drosophila suzukii än andra testade asiatiska larvparasitoider, även om den sannolikt består av olika biotyper eller kryptiska arter med varierande värdspecificitet 8,21,22,23,24. Nomano et al.22 grupperade Ganaspis-individer från olika geografiska regioner i fem genetiska grupper (namngivna som G1-G5) baserat på molekylära analyser av det mitokondriella cytokromoxidas I-genfragmentet. G2- och G4-grupperna rapporteras endast från ett fåtal sydasiatiska tropiska platser, och G5-gruppen rapporterades från Asien och andra regioner (t.ex. Argentina, Brasilien, Hawaii och Mexiko) från okända värdar (Buffington, personlig observation). Fältsamlingar av vilda frukter infekterade av D. suzukii i Sydkorea7, Kina8 och Japan 9,23,25 hittade G1 ensam eller en blandning av exemplar som representerar grupperna G1 och G3. De två grupperna verkar vara sympatriska och samexistera på samma värdväxter bebodda av D. suzukii och andra närbesläktade värdflugor. Icke desto mindre har vissa skillnader observerats mellan de två grupperna, där G1 till synes har en högre grad av värd- eller värdhabitatspecifikitet för D. suzukii än G3, även om de båda attackerar ett antal närbesläktade arter i karantäntesterna21,22. Ytterligare detaljerade molekylära analyser kan hjälpa till att bestämma artens status, särskilt för G1- och G3-grupperna. Denna studie hänvisar till dem som G1 G. brasiliensis och G3 G. brasiliensis. Några tidiga studier namngav också G1 G. brasiliensis som G. jfr brasiliensis 14,21,22. G1 G. brasiliensis har nyligen godkänts för fältfrisättning mot D. suzukii i USA och Italien (flera andra europeiska länder överväger för närvarande också att introducera den), medan G3 G. brasiliensis kan komma i fråga för fältutsättning inom en snar framtid. Nyligen genomförda undersökningar fann också adventiva populationer av både L. japonica och G1 G. brasiliensis i British Columbia, Kanada26, och Washington State, USA (Beers et al., opublicerade data) och adventiva L. japonica -populationer i Trento -provinsen, Italien27.
Med tanke på det betydande intresset för utveckling av biologiska bekämpningsprogram för Drosophila suzukii-hantering och den betydande biologiska kontrollpotentialen för adventiva och avsiktliga introduktioner av Ganaspis brasiliensis, finns det ett behov av att utveckla effektiva uppfödningsmetoder för denna larval parasitoid för framtida långsiktig forskning och / eller fältutsättning. Detta protokoll och tillhörande videoartikel beskriver två uppsättningar uppfödningsmetoder för denna parasitoid: (1) småskalig laboratorieuppfödning i kolvar med en blandning av värdfrukt (blåbär) och konstgjord kost för odling av D. suzukii. Metoderna utvecklades med hjälp av G3-material som ursprungligen samlats in från Kunming, Kina8. (2) Massuppfödning för fältutsättning i stora burar med värdfrukt (blåbär) för odling av D. suzukii. Den genetiska grupp som användes för den storskaliga uppfödningen var G1-beståndet med ursprung i Tokyo, Japan 9,22. Andra skalor av uppfödningsmetoder, såsom användning av injektionsflaskor eller små behållare för båda grupperna, diskuteras också kortfattat.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Active dry yeast</td>
			<td>Fleischmanns Yeast, Cincinatti, OH, USA</td>
			<td>None</td>
			<td>Used to cover fruit to reduce mold growth and enhance the frui attraction to the flies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacteriological agar</td>
			<td>Merk Life Science S.r.l., Milan, Italy</td>
			<td>A1296 - 5KG</td>
			<td>Used to prepare the Standard Drosophila Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bleach solution</td>
			<td>Clorox Company, Oakland, CA, USA</td>
			<td>None</td>
			<td>Used to disinfect flesh fruit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blue stopper</td>
			<td>Azer Scientific, Morgantown, PA, USA</td>
			<td>ES3837</td>
			<td>Used for sealing the tube while allowing ventilation for insects</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blueberries</td>
			<td>Grocery Store, Newark, DE, USA</td>
			<td>None</td>
			<td>Provided as host fruit for the flies (various other fruit can also be used)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BugDorm insect rearing cage (W24.5 x D24.5 x H63.0 cm)</td>
			<td>Mega View Science Co. Ltd., Taichung, Taiwan</td>
			<td>4E3030</td>
			<td>Used for rearing parasitoids (parasitism cage)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BugDorm insect rearing cage (W32.5 x D32.5 x H32.5 cm)</td>
			<td>Mega View Science Co. Ltd., Taichung, Taiwan</td>
			<td>4E4590</td>
			<td>Used for rearing flies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BugDorm insect rearing cage (W32.5 x D32.5 x H32.5 cm)</td>
			<td>Mega View Science Co. Ltd., Taichung, Taiwan</td>
			<td>4E4545</td>
			<td>Used for rearing parasitoids (eclosion cage)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken wire (0.64 cm, 19 gauge)</td>
			<td>Everbilt, OH, USA</td>
			<td>308231EB</td>
			<td>Used to lift up the fruit to allow maximum parasitoid oviposition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cornmeal</td>
			<td>Grocery Store, Trento, TN, Italy</td>
			<td>None</td>
			<td>Used to prepare the Standard Drosophila Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental cotton roll (1 x 3.8 cm)</td>
			<td>Gima S.p.A., Gessate, MI, Italy</td>
			<td>35000</td>
			<td>Used for providing water to the parasitoids within the storage container</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drosophila diet</td>
			<td>Frontier Scientific, Newark, DE, USA</td>
			<td>TF1003</td>
			<td>Custom diet used to rear flies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drosophila vial narrow, Polystirene (2.5 x 9.5 cm)</td>
			<td>VWR International, LLC., Radnor, PA, US</td>
			<td>75813-160</td>
			<td>Used for providing water to the parasitoids within the cage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drosophila vial plugs, Cellulose acetate (2.5 cm)</td>
			<td>VWR International, LLC., Radnor, PA, US</td>
			<td>89168-886</td>
			<td>Used for providing water to the parasitoids within the cage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erlenmeyer flask (250 mL)</td>
			<td>Carolina Biological, Burlington, NC, USA</td>
			<td>731029</td>
			<td>Used for rearing flies and parasitoids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon-style centrifuge tube (50 mL)</td>
			<td>VWR International, LLC., Radnor, PA, US</td>
			<td>VWRI525-0611</td>
			<td>Modified to ship adult parasitoids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foam stopper</td>
			<td>Jaece Industries, North Tanawanda, NY, USA</td>
			<td>L800-C</td>
			<td>Used for sealing the flasks while allowing ventilation for insects</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Honey</td>
			<td>Grocery Store, Newark, DE, USA</td>
			<td>None</td>
			<td>Provided as food for parasitoids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Identi-Plug plastic foam stopper</td>
			<td>Fisher Scientific Company, L.L.C., Pittsburg, PA, US</td>
			<td>14-127-40E</td>
			<td>Used as feeder for parasitoids and to seal the storage container</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Industrial paper towel</td>
			<td>Grocery Store, Newark, DE, USA</td>
			<td>None</td>
			<td>Provided as a pupation substrate for pupae and mitigated moisture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micron mesh fabric (250 mL)</td>
			<td>Industrial Netting, Maple Grove, MN, USA</td>
			<td>WN0250-72</td>
			<td>Used to make ventilation lid for insects</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nutritional yeast (flakes)</td>
			<td>Grocery Store, Trento, TN, Italy</td>
			<td>None</td>
			<td>Used to prepare the Standard Drosophila Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper coaster (10.2 cm)</td>
			<td>Hoffmaster, WI, USA</td>
			<td>35NG26</td>
			<td>Porvided as pupation substrate for flies and parsitized pupae</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic cup (&#216; 13.3 cm, 800 mL)</td>
			<td>Berry Superfos, Taastrup, Denmark</td>
			<td>Unipak 5134</td>
			<td>Modified to store adult parasitoids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic lid (&#216; 13.3 cm)</td>
			<td>Berry Superfos, Taastrup, Denmark</td>
			<td>PP 2830</td>
			<td>Modified to store adult parasitoids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propionic acid</td>
			<td>Merk Life Science S.r.l., Milan, Italy</td>
			<td>P1386 - 1L</td>
			<td>Used to prepare the Standard Drosophila Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saccharose</td>
			<td>Grocery Store, Trento, TN, Italy</td>
			<td>None</td>
			<td>Used to prepare the Standard Drosophila Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soup cup with lid (475 mL)</td>
			<td>StackMan, Vietnam</td>
			<td>DC1648</td>
			<td>Used for parasitized larvae to pupate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soybean flour</td>
			<td>Grocery Store, Trento, TN, Italy</td>
			<td>None</td>
			<td>Used to prepare the Standard Drosophila Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>White felt washer (0.64 cm thick, 5 mm ID x 20 mm OD)</td>
			<td>Quiklok, Lincoln, NH, US</td>
			<td>WFW/.25 x 5 x 20 mm</td>
			<td>Used as feeding ring for parasitoids</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

methods for rearing the parasitoid ganaspis brasiliensis, a promising biological control agent for the invasive drosophila suzukii

Infödd i Östasien har den fläckiga vingen drosophila, Drosophila suzukii (Matsumura) (Diptera: Drosophilidae), etablerat sig i stor utsträckning i Amerika, Europa och delar av Afrika under det senaste decenniet och blivit ett förödande skadedjur av olika mjukhudade frukter i dess invaderade regioner. Biologisk bekämpning, särskilt med hjälp av självförstärkande och specialiserade parasitoider, förväntas vara ett genomförbart alternativ för hållbar områdesomfattande hantering av denna mycket rörliga och polyfagiska skadedjur. Ganaspis brasiliensis Ihering (Hymenoptera: Figitidae) är en larvparasitoid som är utbredd i Östasien och har visat sig vara en av de mest effektiva parasitoiderna av D. suzukii.
Efter rigorösa utvärderingar före introduktion av dess effektivitet och potentiella icke-målrisker har en av de mer värdspecifika genetiska grupperna av denna art (G1 G. brasiliensis) nyligen godkänts för introduktion och fältutsättning i USA och Italien. En annan genetisk grupp (G3 G. brasiliensis), som också var vanligt förekommande för att attackera D. suzukii i Östasien, kan komma i fråga för introduktion inom en snar framtid. Det finns för närvarande ett enormt intresse för att föda upp G. brasiliensis för forskning eller för massproduktion för fältfrisättning mot D. suzukii. Detta protokoll och tillhörande videoartikel beskriver effektiva uppfödningsmetoder för denna parasitoid, både i liten skala för forskning och i stor skala för massproduktion och fältutsläpp. Dessa metoder kan gynna ytterligare långsiktig forskning och användning av denna asiatisk-infödda parasitoid som ett lovande biologiskt bekämpningsmedel för detta globala invasiva skadedjur.

Figur 4 visar representativa resultat av den småskaliga laboratorieuppfödningen av G3 Ganaspis brasiliensis med två olika parasitoiddensiteter (sex eller 10 par) och två olika exponeringstider (5 eller 10 dagar) vid karantänanläggningen för USDA-ARS Beneficial Insects Introduction Unit (Newark, Delaware). Det fanns 14 replikat för varje kombination av parasitoiddensitet och exponeringstid. Totalt producerade de 64 kolvarna 4 018 getingar (71,7 ± 4,9 avkommor per kolv) med 4...

Watch this Scientific Journal Video about Methods for Rearing the Parasitoid Ganaspis brasiliensis, a Promising Biological Control Agent for the Invasive Drosophila suzukii at JoVE.com

Methods for Rearing the Parasitoid Ganaspis brasiliensis, a Promising Biological Control Agent for the Invasive Drosophila suzukii

Ganaspis brasiliensis - en larval parasitoid av Drosophila suzukii (en global invasiv fruktgröda skadedjur) - har godkänts eller övervägs för introduktion i Europa och USA för biologisk bekämpning av denna skadedjur. Denna artikel innehåller protokoll för både småskalig och storskalig uppfödning av denna parasitoid.

Metoder för uppfödning av parasitoiden Ganaspis brasiliensis, ett lovande biologiskt bekämpningsmedel för invasiv Drosophila suzukii

Native to East Asia, the spotted-wing drosophila, Drosophila suzukii (Matsumura) (Diptera: Drosophilidae), has established widely in the Americas, Europe, ...

Långsiktig forskning och användning av ett biokontrollmedel beror på tillgången på effektiva och ekonomiska uppfödningstekniker, och detta protokoll har visat sig vara effektivt för uppfödning av denna parasitoid. Det finns för närvarande ett enormt intresse för att föda upp denna parasitoid för forskning eller fältutsättning, och protokollet kommer att gynna framtida långsiktig forskning och användning av detta lovande biokontrollmedel. Första användare kan behöva förstå en del grundläggande biologi hos de inblandade insekterna genom att läsa relevanta referenser i artikeln och vissa metoder för metoderna.För att göra värddieten, förbered först den flytande delen av kosten som beskrivs i manuskriptet. Tillsätt sedan 25 till 30 gram mosade blåbär till en tom 250-ml kolv. Häll sedan vätskan i kolven med vätskan som bara täcker toppen av de mosade blåbären.Därefter, för att uppfostra värden Drosophila suzuki, skär först en bit absorberande pappershandduk och vrid den i mitten. Placera sedan den vridna mittdelen av pappershandduken i dietkolven. För att behålla fukt, använd destillerat vatten för att blöta pappershandduken och kosten.Sedan, för att överföra sexuellt mogna vuxna flugor, ta försiktigt bort proppen på en flugkolonikolv och invertera den i dietkolven. Efter en vecka av denna exponering, håll flugorna i en miljökammare i tre veckor för flugauppkomst. För att utsätta värdlarven för parasitoider, ta först bort de vuxna flugorna och pappershandduken från kolven och lämna flugägg och larver.För att fungera som ett pupationssubstrat för larverna, vik en ny absorberande pappershandduk och sätt in den i kolven. Aspirera sedan sex kvinnliga och manliga par av parasitoiden G3 Ganaspis brasiliensis i kolven och stryk ett tunt lager honung på botten av skumproppen. För att samla och lagra parasitoiderna, ta bort de vuxna efter fem dagar.Förvara sedan kolven i miljökammaren i 35 dagar under de förhållanden som nämnts tidigare. Med framväxten av vuxna getingar, aspirera dem tre gånger per vecka. För att hålla getingarna, placera först en pappershandduk fuktad men inte mättad med destillerat vatten i botten av en 2,5 x 9,5 kvadratcentimeter Drosophila-injektionsflaska.Överför sedan cirka 60 getingar till injektionsflaskan och markera uppkomstdatumet. Förvara injektionsflaskan i miljökammaren. Två gånger i veckan, strecka ett tunt lager honung på botten av skumproppen på flaskorna.Ordna först storskalig uppfödning av Drosophila suzuki genom att placera 1 500 till 2 000 sexuellt mogna vuxna flugor med ett könsförhållande på 50:50 i en stor, stickad, nättäckt bur. Lägg sedan en tallrik med vattendränkt bomull och fyra till sex petriskålar med vanligt Drosophila-medium i buret. Två gånger i veckan, byt ut de exponerade petriskålarna med färska.Placera varje infekterad petriskål utan lock i en 800 milliliter plastkopp och täck koppen med ett fint nät. Inkubera sedan kopparna vid 23 grader Celsius och 75% relativ luftfuktighet i 12 till 15 dagar. Efter inkubation, överför nykläckt vuxen Drosophila suzuki till en uppfödningsbur.Börja sedan förbereda värdlarverna genom att skölja blåbär i kallt vatten i en minut och blötlägg frukterna i ett handfat fyllt med en blekmedellösning, utspädd till 5% i tre minuter. Fyll sedan nio centimeter petriskålar med de tvättade blåbären. På sena eftermiddagstimmarna lägger du petriskålarna i uppfödningsburet och lämnar dem över natten.Nästa morgon, tryck försiktigt på petriskålarna för att lossa flugor från frukterna och ta bort frukterna från uppfödningsburet. Förbered under tiden en parasitismbur och en getingbur för parasitoiden G1 Ganaspis brasiliensis. Båda burarna ska ha en tunn sträng under taket för att hänga upp en eller flera matare.I varje bur, suspendera en Drosophila-injektionsflaska som innehåller vatten och försegla med en cellulosaacetatplugg upp och ner från taket var femte till sjunde dag, beroende på den relativa fuktigheten. Omedelbart efter att ha tagit ut angripna blåbär från Drosophila suzuki-buret, lägg dem i parasitismburet med 1 500 till 2 000 Ganaspis brasiliensis getingar i två till tre dagar. Samla sedan frukterna i en 800 ml plastkopp med absorberande papper i botten.Inkubera den öppna koppen i uppkomst- eller eclosionsburet vid 21 grader Celsius och 65% relativ luftfuktighet i minst 28 dagar. Under den andra och tredje veckan av inkubation, kontrollera buret varje vecka för tidig värdeneklosion. För att underlätta successiv parasitoiduppsamling, ta bort de vuxna flugorna.Vid slutet av den fjärde veckan av inkubation, ge en matare och en vattenkälla till buret. Samla cirka 10 till 15% av de vuxna getingarna och överför dem till parasitismburet för att ersätta gamla och oproduktiva getingar. Från de återstående getingarna i eclosionsburet, förvara upp till 700 vuxna i ett könsförhållande på 50:50 med en 800 ml plastkopp som innehåller ett två milliliter rör fyllt med vatten och förseglat med en tand bomullsrulle längst ner i koppen.Förvara koppen med ett markant uppkomsttillstånd i en miljökammare i upp till en månad. För frakt av parasitoider, placera cirka 200 vuxna i ett 50 ml koniskt rör. Lägg sedan alla rör i en isolerande fraktbehållare tillsammans med ispaket.Detta protokoll resulterade i framgångsrik småskalig uppfödning av G3 Ganaspis brasiliensis, ett parasitoidmedel, mot jordbruksskadegöraren Drosophila suzuki i laboratoriet. Avkommaproduktionen förblev opåverkad av skillnader i parasitoiddensitet och exponeringstid. Storskalig generering av G1 Ganaspis brasiliensis kunde också uppnås, med produktion som började fem veckor efter den första exponeringen för värden Drosophila suzuki.Från vecka 8 till vecka 22 blev parasitoidproduktionen proportionell mot mängden frukt som utsattes för dem. Det är kritiskt viktigt att upprätthålla en lämplig uppfödningstemperatur, kontrollera luftfuktigheten och alltid ge mat till vuxna insekter. Metoderna kan förbättras ytterligare genom att optimera uppfödningstätheten hos värd och parasitoid för att maximera reproduktionen av getingar och genom att undersöka möjligheten att föda upp denna parasitoid på alternativa värdar.

Research

JoVE Journal

Biology

Methods for Rearing the Parasitoid Ganaspis brasiliensis, a Promising Biological Control Agent for the Invasive Drosophila suzukii

Protocol for Mosquito Rearing (A. gambiae)

Protocol for Mosquito Rearing A. gambiae

Protokoll för Mosquito Uppfödning (A. gambiae)

This protocol describes mosquito rearing in the insectary. The insectary rooms are maintained at 28&deg;C and ~80% humidity, with a 12 hr. day/night ...

Labeling hESCs and hMSCs with Iron Oxide Nanoparticles for Non-Invasive in vivo Tracking with MR Imaging

Märkning hESCs och hMSCs med nanopartiklar av järnoxid för icke-invasiv in vivo-spårning med MR

In recent years, stem cell research has led to a better understanding of developmental biology, various diseases and its potential impact on regenerative ...

Labeling Stem Cells with Fluorescent Dyes for non-invasive Detection with Optical Imaging

Märkning stamceller med fluorescerande färger för icke-invasiv Detection med optisk avbildning

Optical imaging (OI) is an easy, fast and inexpensive tool for in vivo monitoring of new stem cell based therapies. The technique is based on ex vivo ...

Electrophysiological Methods for Recording Synaptic Potentials from the NMJ of Drosophila Larvae

Elektrofysiologiska metoder för inspelning Synaptic Potentials från NMJ av Drosophila Larver

In this video, we describe the electrophysiological methods for recording synaptic transmission at the neuromuscular junction (NMJ) of Drosophila larva. ...

Electrophysiological Recording in the Drosophila Embryo

Electrophysiological Recording in the Drosophila Embryo

Elektrofysiologiska Inspelning i Drosophila Embryo

Drosophila is a premier genetic model for the study of both embryonic development and functional neuroscience. Traditionally, these fields are quite ...

Visualizing the Beating Heart in Drosophila

Visualizing the Beating Heart in Drosophila

Visualisera bultande hjärta i Drosophila</em

The Drosophila heart has recently emerged as a good model system for examining the genetic, cellular, and molecular mechanisms underlying function in ...

Methods for the Study of the Zebrafish Maxillary Barbel

Metoder för studier av Zebrafish Maxillary Barbel

Barbels are skin sensory appendages found in fishes, reptiles and amphibians.  The zebrafish, Danio rerio, develops two pairs of barbels- a short nasal ...

An Optimized Protocol for Rearing Fopius arisanus, a Parasitoid of Tephritid Fruit Flies

An Optimized Protocol for Rearing Fopius arisanus, a Parasitoid of Tephritid Fruit Flies

Ett optimerat protokoll för uppfödning Fopius arisanus Flugor ett parasitod av Tephritid frukt

Fopius arisanus (Sonan) is an important parasitoid of Tephritid fruit flies for at least two reasons. First, it is the one of only three opiine ...

Blastomere Explants to Test for Cell Fate Commitment During Embryonic Development

Blastomer Explantat att testa Cell Fate engagemang under embryonal utveckling

Fate maps, constructed from lineage tracing all of the cells of an embryo, reveal  which tissues descend from each cell of the embryo.  Although fate maps ...

Autonomously Bioluminescent Mammalian Cells for Continuous and Real-time Monitoring of Cytotoxicity

Autonomt Bioluminescent däggdjursceller för kontinuerlig och övervakning i realtid av cytotoxicitet

Mammalian  cell-based in vitro assays have been  widely employed as alternatives to animal testing for toxicological studies but  have been limited due to ...